Перекись водорода для лечения ран: Почему перекись водорода признана не эффективной?

Почему перекись водорода признана не эффективной?

3% раствор перекиси водорода, используемый многими при небольших повреждениях кожи, в действительности не обладает антисептическим действием и не помогает заживлять раны.

В медицинской литературе отсутствуют доказательства эффективности 3% раствора перекиси водорода в процессе заживления ран. Вот более концентрированный раствор (от 30% и выше) окажет обеззараживающее действие, но тогда вы заработаете себе еще и химический ожог.

Также существует миф о том, что перекись водорода способна обезвредить болезнетворные микроорганизмы и бактерии. На самом деле есть доказательства, что определенные микроорганизмы содержат в себе белок каталазы, которая блокирует действие Н2О2. Даже в самой инструкции к 3% раствору перекиси водорода написано, что «при применении препарата происходит лишь временное уменьшение количества микроорганизмов».

Полезна перекись водорода будет лишь для механической обработки раны от загрязнений, но с тем же успехом рану можно промыть под проточной водой. Глубокие раны уж точно не стоит промывать раствором перекиси, так как кислород, выделяемый перекисью, может попасть в сосуды и закрыть проток крови.

Но не стоит считать перекись водорода полностью бесполезной. Она вполне применима в прочих медицинских целях, к примеру, для очистки инструментов. Но вот научных подтверждений того, что перекись защитит рану от инфицирования и поможет быстрее затянуться, к сожалению нет.

Все с детства знают о бактерицидных свойствах спиртового раствора йода и бриллиантового зеленого («зеленки»). И это не миф, они действительно эффективны. Но в западных странах постепенно отказываются от использования йода и зеленки, ведь за последние годы были изобретены более удобные в использовании антисептические средства.

В странах, где хорошо развита система здравоохранения, распространены антисептики содержащие йод. К таким средствам относится 10% раствор повидон-йода. Эти средства менее агрессивны, чем спиртовой раствор йода, поэтому не так сильно раздражают поврежденное место.

Рассмотрим некоторые средства, предотвращающие заражение ран микробами.

Повидон-йод — антисептическое и обеззараживающее средство. Препарат применяется при лечении бактериальных, грибковых и вирусных инфекций кожи, а также помогает заживлению ран.

Этанол (спирт) – достаточно агрессивное антисептическое средство, которое считается малотоксичным веществом. При нанесении на поврежденную кожу или кожу ребенка, этанол может всасываться в кровь и даже вызывать интоксикацию у детей. Поэтому лучше этанол использовать в крайнем случае, если ничего другого под рукой нет. Антисептическое действие спирта наступает уже через 30 секунд, однако не имеет длительного действия.

После испарения дезинфицирующее действие спирта на бактерии заканчивается. При этом не любой раствор спирта обладает достаточным антисептическим эффектом. Идеальным антисептиком является 70% раствор этилового спирта. Препараты, содержащие меньшие концентрации этанола не имеют выраженного антисептического действия.

Хлоргексидин 0,05% раствор — универсальное дезинфицирующее средство широкого спектра действия. В отличие от остальных антисептических средств, именно хлоргексидин эффективен в присутствии гноя в поврежденном месте. Препарат можно применять и детям, и беременным, что говорит о его высокой степени безопасности.

Мирамистин – довольно популярный в Украине антисептик. Однако его необходимо использовать с осторожностью, так как препарат не имеет достаточных клинических исследований.

Всемирной организацией здравоохранения рекомендуются к применению Повидон-йод (10%), хлоргексидин (0,05%) и этанол (70%) . Данные препараты присутствуют в Национальном перечне основных лекарственных средств.

Помните, что перед обработкой каким либо из вышеперечисленных средств, рану необходимо промыть под чистой проточной водой. Будьте внимательны при выборе антисептического средства и при серьезных травмах обязательно обращайтесь за медицинской помощью.

Щиплет – значит работает. Или все же нет?

Поранились? Срочно бегите за зеленкой! Нет-нет, зеленка пачкается. Только йод, только хардкор! Или не только?

На самом деле, существует довольно много препаратов-антисептиков, «заточенных» под разные ситуации: от ухода за обширными ранами до обработки мелких порезов и царапин. В этой статье поговорим о том, с какой целью их стоит использовать, а с какой – нет.

Средства для очистки раны: перекись водорода, фурацилин и марганцовка

Эти антисептики применяют для промывания раны сразу после того, как вы порезались и поцарапались. Промывать этими растворами можно раны и на коже, и на слизистых оболочках. Однако здесь есть определенные тонкости.

Перекись водорода можно использовать для промывки ран только в виде 3% раствора. Если концентрация перекиси больше, то можно запросто получить ожог. Перекись водорода отлично борется с бактериями, а пена, которая «поднимается» в ране, вымывает твердые частички грязи. Кстати: чтобы эффект был лучше, перекись на ранку лучше лить струей, а не наносить ваткой или марлей. Хранить открытую перекись нужно в холодильнике, она будет работать еще месяц.

Раствор фурацилина в воде – отличное средство для обработки ран, в которые попала грязь. Если промыть ранку тонкой струей раствора, то можно не только «вымыть» из нее грязь, но и избежать нагноения. Правда, раствор фурацилина еще придется приготовить: растворить 10 таблеток в 1 литре горячей воды, и остудить. Если хранить раствор в банке из темного стекла вдали от солнечного света, раствором можно пользоваться 2 недели.

«Марганцовка» должна быть слабо-розового цвета. Чем ярче раствор, тем он концентрированнее. Если переборщить с розовым цветом, можно сжечь кожу и тем самым увеличить раневую поверхность. Слабый раствор подойдет для промывания свежих и нагноившихся ран на коже и слизистой. Правда, долго хранить его нельзя: для промывания ранок подойдет только свежая марганцовка.

Антисептики для первичной обработки очищенной ранки – хлоргексидин, спирт и мирамистин

Хлоргексидин – «волшебное» средство против бактерий, вирусов, простейших и грибов. Несколько миллилитров хлоргексидина, пролитого на очищенную перекисью водорода ранку, наверняка помогут избежать нагноения.

Мирамистин подойдет тем, кому нагноения избежать все-таки не удалось. Если развести 3-4 чайные ложки мирамистина в стакане воды, этим средством можно смело промывать нагноившиеся ранки.

Спиртом (40-70% раствором) стоит обработать края промытой перекисью и залитой хлоргексидином ранки. Саму ранку и слизистые спиртом «заливать» нельзя – это приведет к ожогу.

«Красящие» антисептики: йод, зеленка и фукорцин

Красящие антисептики действительно разноцветные, но объединяют их не только по этому принципу. И йод, и зеленка, и фукорцин предназначены строго для обработки краев ранки.

Царапину и порез заливать красящими антисептиками нельзя – вместо того, чтобы ускорить заживление, они «добавят» к ранке сильный ожог. Эти препараты нужны только для того, чтобы обеззаразить и подсушить края раны.

Пользоваться йодом, зеленкой и фукорцином стоит ровно до того момента, пока ранка не стала подживать. Дальше организм справится сам. Если эти красители нечаянно попадут на свежий рубец, это, напротив, замедлит восстановление кожи.

Важно: спиртовой раствор йода, который продают во всех аптеках, не так уж безобиден, как принято считать. Людям, страдающим болезнями щитовидной железы, дерматитами и заболеваниями почек, пользоваться йодом не рекомендуется.

Отсюда вывод: в домашней аптечке стоит иметь средство всех трех типов: что-нибудь для промывания ранки, ее первичной обработки, а также для дезинфекции краев. Не забывайте: у каждого антисептика есть свои особенности, поэтому использовать средство не по назначению (например, заливать зеленкой свежую ранку) уж точно не стоит. 

Как правильно пользоваться антисептиками — инструкция

Грядущее лето – самый популярный сезон для открытых ран – порезов, ссадин, заноз. Для эффективного лечения подобных травм требуются особые лекарства, которые называются антисептики. Вот о них и поговорим.

Если требуется обработать рану, первым делом думаешь о йоде. И тут нас подстерегает первая ошибка. Не стоит лить йод прямо на рану, иначе химического ожога не избежать. Требуется аккуратно обработать края раны и 2-3 см кожи вокруг неё.

Если покупаете йод в виде карандаша, покупайте по экземпляру на каждого члена семьи, поскольку он предназначен для индивидуального пользования.

Зеленка больше подходит для обработки ран у маленьких детей, поскольку обладает меньшим раздражающим эффектом. Но её также как и йод нельзя лить прямо на рану во избежание ожога.

Перекись водорода единодушно признаётся врачами как самое лучшее антисептическое средство. Она бесцветна, не обжигает рану, не раздражает кожу и годится для промывания ран. Правда, бытует мнение, что раны, обработанные перекисью будут заживать медленнее.

Раствор хлоргексидина хорош тем, что не имеет цвета и запаха. Но важной особенностью этого препарата является то, что он действует только в момент нанесения на рану. Это значит, что раствором требуется смочить бинт и прикладывать к ране на пару минут несколько раз в день.

Фукорцин может сравниться с зелёнкой не только эффективностью, но и стойкостью окраса. Малинового, кстати. Правда существует и в бесцветном виде в форме жидкости Кастеллани. Главное не обмазываться препаратом в больших количествах, иначе содержащийся в нём фенол может нанести вред здоровью.

Ну и самое простое, кондовое средство – водка или спиртовая настойка. Применять, если никаких других средств нет в наличии. Будет очень больно и малоэффективно. И всё же лучше, чем ничего. Главное не лить спирт прямо на рану с целью «промывки». Это закончится очень плохо – скорее всего ожогом.

Важно помнить, что никакие антисептики не избавляют от опасности заразиться столбняком через рану. Поэтому, если у вас нет прививки от столбняка, стоит обратиться к врачу, повредив кожу на улице. 

Наши клиники в Санкт-Петербурге

Антисептические средства. Какие препараты нельзя наносить прямо на рану | Здоровая жизнь | Здоровье

Особенности:

Антисептики обычно используются при лечении инфицированных ран, поражений слизистых оболочек, для обеззараживания медицинских инструментов и в ряде других ситуаций.

Наиболее частые побочные эффекты: аллергические реакции.

Основные противопоказания: индивидуальная непереносимость.

Важная информация для пациента:

Спиртовые растворы антисептиков (йод, зелёнка) не следует лить непосредственно в рану. Они вызывают неприятные ощущения и могут оказывать повреждающее действие, замедляя заживление. Промывать раны можно бетадином, мирамистином, перекисью водорода или хлоргексидином.

Действующее вещество: Повидон-йод

Торговое название препарата:

Бетадин (раствор) (Эгис)

Особенности препарата, о которых важно знать пациенту

Эффективен в отношении бактерий, грибков, вирусов. В форме раствора используется для лечения и профилактики раневых инфекций в хирургии, травматологии, стоматологии, лечения различных инфекций. Раствор можно наносить прямо на рану, он легко смывается с кожи и одежды, не оставляя пятен и следов.

Действующее вещество: Хлоргексидин

Торговое название препарата:

Хлоргексидин (раствор) (разные производители)

Особенности препарата, о которых важно знать пациенту

Антисептическое средство, которое очищает и дезинфицирует кожу, не вызывая её повреждения.

Применяется для обработки ран, ожогов, дезинфекции кожи, профилактики венерических заболеваний. Используется в стоматологии.

Действующее вещество: Бриллиантовый зелёный

Торговое название препарата:

Бриллиантового зелёного раствор спиртовой (разные производители)

Леккер-Бз (Леккер)

Особенности препарата, о которых важно знать пациенту

Антисептическое средство для обработки свежих ран после травм и операций, ссадин, гнойничков на коже. Сразу после применения может возникать жжение.

«Леккер-Бз» представляет собой устройство, похожее на маркер. При его использовании меньше вероятность запачкать руки и одежду, чем при применении классической зелёнки.

Действующее вещество: Перекись водорода

Торговое название препарата:

Перекись водорода раствор 3% (разные производители)

Пв‑Леккер (Леккер)

Особенности препарата, о которых важно знать пациенту

При контакте перекиси водорода с повреждённой кожей или слизистыми оболочками высвобождается активный кислород, происходит активное пено­образование. При этом рана механически очищается, а число микроорганизмов временно сокращается. Обработка раны перекисью водорода также способствует тромбообразованию и остановке кровотечения из мелких сосудов.

Иногда может вызывать раздражение кожи.

Средства для лечения ушибов, ран и ожогов

Особенности:

Средства для самостоятельной обработки и лечения о­жогов и ранок, как правило, содержат антибактериальны­е и/или заживляющие вещества. Такие препараты о­бладают разными механизмами действия. Они могут уменьшать площадь синяков, снимать неприятные о­щущения, ускорять в­осстановление повреждённых тканей.

Наиболее частые побочные эффекты: аллергические реакции.

Основные противопоказания: индивидуальная непереносимость.

Важная информация для пациента: Большинство местных средств предназначено для лечения небольших порезов, ссадин, ушибов или ожогов лёгкой степени. В более серьёзных ситуациях нужна обязательная срочная консультация врача и лечение в условиях медицинского учреждения. ! Средства для уменьшения неприятных ощущений после ожогов, ушибов и синяков часто применяются совместно с обезболивающими препаратами. ! Длительность применения данных средств зависит от ситуации. Необходимо обращать внимание на состояние ушибленных мест, ранок и кожи. Если восстановление затягивается, усиливается отёк или появилось нагноение, необходимо показаться врачу.

Действующее вещество: Живица сосновая

Торговое название препарата:

Биопин 5% (мазь) (Биопин Фарма)

Особенности препарата, о которых важно знать пациенту

Оказывает противомикробное, противовоспалительное, ранозаживляющее, иммуномодулирующее действие. Активизирует компоненты антиоксидантной системы клетки. Применяется при чистых и инфицированных ожогах всех степеней, трофических язвах, длительно незаживающих посттравматических ранах без гнойного процесса, пролежнях с небольшим количеством раневого отделяемого, атопическом дерматите, трещинах ладоней и подошвенной поверхности стоп, герпесе в начальной стадии, экземе и некоторых других кожных заболеваниях.

При повышенной индивидуальной чувствительности может вызывать покраснение, жжение и зуд.

Действующее вещество: салициловая, бензойная и яблочная кислоты

Торговое название препарата:

Ацербин (Монтевит)

Особенности препарата, о которых важно знать пациенту

Австрийский антисептический спрей, можно обрабатывать раны, ссадины, ожоги, нагноения, опрелости и укусы насекомых. Создаёт в ране оптимальную РН-среду, обеззараживает благодаря бензойной и салициловой кислотам, способствует заживлению из-за свойств яблочной кислоты. ! Наносят наружно. После хирургической обработки ран и ожогов (при необходимости) раствор наносят непосредственно на раневую поверхность, затем накладывают стерильную марлевую повязку. Либо раствор наносят на перевязочный материал, а затем на рану 2-3 раза в день. Когда рана начинает затягиваться, наносят 1 раз в день.

Как обрабатывать перекисью водорода раны у детей

 

Перекись водорода – популярное дезинфицирующее, антисептическое и кровоостанавливающее средство. Используется для обработки и промывания различных ран, ссадин и царапин очень давно, но до сих пор не всегда верно.

 

Медицинский трёхпроцентный раствор перекиси не токсичен и не вызывает побочных эффектов, поэтому его применение возможно и у младенцев.

Важно

Для применения у маленьких детей перекись не следует разводить, чтобы сохранить её свойства.

Большим плюсом является отсутствие жжения при обработке раны перекисью. Хотя в очень редких случаях особо чувствительные дети пугаются шипения и ощущение лопающихся пузырьков путают с жжением.

Действие перекиси заключается в том, что при попадании на кожу вещество распадается, высвобождая большое количество атомарного кислорода (в этот момент жидкость шипит и пузырится), убивающего практически все контактирующие с ним микроорганизмы.

Факт

Аллергическая реакция на перекись водорода – единичный случай.

 

Как правильно обрабатывать раны перекисью

Если рана неглубокая (лёгкая царапина или ссадина), перекись водорода можно поливать непосредственно на повреждённый участок кожи.

А вот в случае открытых ран, глубоких порезов, проколов, ран большого размера обработка должна быть щадящей. Стерильный марлевый тампон необходимо хорошо смочить перекисью и при помощи пинцета, прикладывая тампон к ране, намочить всю повреждённую поверхность.

Напомним, что при контакте перекиси водорода с тканями организма образуются пузырьки. При поливе раствором открытой, глубокой раны есть вероятность попадания этих пузырьков в кровоток, что может создать реальную угрозу жизни.

 

Отрицательные эффекты использования перекиси водорода

Оказывается, раны, обработанные перекисью, заживают медленнее, так как вещество пересушивает ткани и нарушает естественные процессы их восстановления. Пересушенные раны определяются по изменённому цвету и зуду.

 

Альтернатива перекиси водорода

Казалось бы небольшой недостаток перекиси водорода – пересушивание тканей – стал веской причиной для многих медиков отказаться от её использования. В качестве более безопасного и не менее эффективного метода предлагается:

• промывать рану проточной водой с мылом (желательно детским — у него более правильный pH),
• обсушить рану марлевой салфеткой,
• продезинфицировать.

Далее используйте заживляющие мази, которые увлажняют ткани, помогая природным процессам (в аптеках предлагаются специальные заживляющие мази или гомеопатические «Арника» и «Календула»).

Совет

В качестве безопасного и не вызывающего жжения антисептика можно использовать фурацилин. Одна таблетка растворяется в 100 мл тёплой кипячёной воды.

 

Что ещё почитать:

Заноза у ребёнка: правильные и неправильные способы её удаления

виды, классификация — журнал «Катрен Стиль»

Подробная инструкция по разным видам медицинских антисептиков для обработки ран: какие бывают антисептики, как они работают и как правильно подобрать препарат для разных типов повреждений

Настало лето — время активного отдыха, дач и огородов. Время ссадин и ран, а значит, и высокого спроса на антисептики. В России зарегистрировано более 250 торговых наименований антисептических средств в виде мазей, растворов, спреев и присыпок. Давайте разберемся, какие препараты относятся к антисептикам в медицине, чем они отличаются друг от друга и какие из них можно советовать для каждой домашней аптечки.

Прежде всего, отметим, что фармацевт самостоятельно подбирает средство только для наружного применения, а выбор антисептика для слизистых оболочек носоглотки, желудочно-кишечного тракта, дыхательных и мочевыводящих путей, а также для половых органов остается за врачом. Также напомним, что многие антисептики нельзя наносить на травмированную кожу. Вот два основных момента, которые необходимо учитывать при продаже и беседе с клиентом. Механизм действия антисептиков может быть различным, в зависимости от основного действующего компонента.

Классификация антисептиков

Галоиды (галогены и галогенсодержащие соединения)

Соединения хлора или йода (антиформин, йодоформ, йодинол, раствор Люголя, хлорамин Б, хлоргексидин). Бактерицидное действие основано на том, что при соприкосновении с органическими субстратами эти средства выделяют активные галогены — хлор и йод, которые разрушают белки микроорганизмов. Из-за высокой бактерицидной активности широко применяются как в лечебных учреждениях, так и в домашних условиях.

Окислители (перекись водорода, перманганат калия, гидроперит).

Соприкасаясь с тканями, высвобождают активный кислород, который создает неблагоприятные условия для развития анаэробных и гнилостных микробов. Используются ограниченно в связи с умеренной бактерицидной активностью и коротким сроком хранения.

Кислоты (салициловая, борная).

Сдвиг рН в кислую сторону приводит к денатурации белка протоплазмы бактериальной клетки. Салициловая кислота обладает слабым антисептическим действием, а борная имеет большое количество побочных эффектов, связанных с токсичностью. В настоящее время в качестве антисептиков антисептиков для обработки кожи практически не используются..

Щелочи (нашатырный спирт, натрия тетраборат).

В настоящее время препараты как антисептики практически не используются из‑за невысокой антисептической активности.

Альдегиды (формалин, лизоформ).

Проникая внутрь микробной клетки, вступают в связь с аминогруппами белков, что ведет к гибели клеток. Этим же эффектом объясняется сильное раздражающее действие на слизистые и кожу человека. В настоящее время используются больше для дезинфекции поверхностей в медучреждениях.

Спирты (этиловый).

Обезвоживают ткани и необратимо коагулируют белки микроорганизмов. Используются достаточно широко, обладают выраженным антисептическим эффектом. В 2006 году ВОЗ объявила, что антисептики на основе спиртов являются золотым стандартом для обработки кожи рук.

Катионные антисептики (бензилдиметил-миристоиламино-пропиламмоний).

Активное вещество воздействует на мембраны микроорганизмов, приводя к их гибели. Обладает очень широким спектром противомикробного действия, стимулирует иммунитет, ускоряет процесс заживления ран. Широко применяется в хирургии, акушерстве, гинекологии, травматологии, противоожоговой терапии, оториноларингологии и других областях медицины.

Соли тяжелых металлов (препараты ртути, серебра, меди, цинка, свинца).

Противомикробное действие связано с блокированием сульфгидрильных групп ферментов микроорганизмов. Применяются ограниченно в связи с токсичностью.

Красители (метиленовый синий, бриллиантовый зеленый, фукорцин).

Обладают активностью в отношении грамположительных бактерий и кокков. Метиленовый синий обладает очень слабым антисептическим действием и практически не используется.

Растительные антибактериальные препараты (урзалин, настойка календулы, иманин и другие).

Слабые антисептические свойства. Используются редко.

Все эти вещества имеют разные степень активности, противомикробный спектр и токсичность. Чтобы понять, как правильно выбрать антисептик, необходимо руководствоваться всеми этими характеристиками в соответствии с поставленной целью: первичная обработка раны, обработка нагноившихся ран либо обработка поврежденных слизистых или неповрежденной кожи/слизистых. Выбирая, каким антисептиком обработать ту или иную рану, обязательно нужно ориентироваться и на инструкцию, чтобы избежать побочных эффектов, а также определить необходимую в конкретном случае дозировку. Рассмотрим более подробно наиболее популярные антисептики.

Спирт этиловый

При концентрации от 40 до 70 % проявляет свои дезинфицирующие свойства, выше 70 % — дубильные. В продаже доступен в виде спиртосодержащих салфеток и спиртовых растворов. На слизистые оболочки не наносится, так как вызывает химический ожог. Спиртом этиловым обрабатываются только края предварительно промытой раны. Не рекомендован к применению у детей, так как даже при наружном нанесении может всасываться в системный кровоток и угнетать дыхательный центр.

Перекись водорода

Для обработки ран используется только 3 %-ный раствор (более высокая концентрация может вызвать химический ожог). Используется также в качестве кровеостанавливающего средства. Перекись водорода — это отличное средство для первичной обработки раны (промывания), так как обладает большой очистительной способностью — с образующейся пеной механически удаляются частицы грязи и поврежденные клетки. Можно обрабатывать раны как на поверхности кожи, так и на слизистых оболочках. Перекись водорода, как правило, не применяют при заживающих ранах, так как это удлиняет период полного заживления. Также она не применяется при глубоких ранах и не вводится в полости тела. При хранении на свету теряет свои активные свойства. Открытая упаковка хранится около месяца, закрытая — 2 года.

Йод/повидон-йод

Используется в спиртовом растворе (так называемая «настойка йода») или в растворе Люголя. Йодом обрабатывают только края раны, чтобы не вызвать ожог мягких тканей. Большим преимуществом йода является его широкий спектр антимикробной активности: он убивает все основные патогены и, при длительном воздействии, даже споры — наиболее устойчивые формы микроорганизмов. Противопоказано применение больших количеств йода при повышенной чувствительности к нему, гиперфункции щитовидной железы, образованиях щитовидной железы, дерматитах, заболеваниях почек. Не желательно нанесение на слизистые, особенно у детей.

Хлоргексидина биглюконат

Относится к группе галоидов. Обычно используется в концентрации 0,5–4,0 %. В более низких концентрациях бактерицидная активность хлоргексидина снижается, поэтому как антисептик в таком случае используется только в спиртовом растворе. Хлоргексидин обладает бактериостатическим, фунгицидным, противовирусным свойствами. Однако 1‑процентный хлоргексидин в отношении грибов и микобактерий туберкулеза имеет более слабое действие по сравнению с повидон-йодом. Препарат можно использовать для первичной обработки травмированных участков кожи, а также для ускорения заживления гнойных ран и для обработки поврежденных слизистых. В большинстве случаев хорошо переносится. Возрастных ограничений по применению нет — хороший вариант антисептика для детей. Не рекомендуется применять вместе с препаратами йода (часто раздражение кожи).

Бензилдиметил-миристоиламино-пропиламмоний

Применяется в виде раствора для промывания ран или мази для нанесения на гнойные раны. Проявляет активность в отношении вирусов, бактерий, грибов, простейших, но при этом практически не действует на мембраны клеток человека, в отличие от хлоргексидина. Обладает антисептическим, иммуностимулирующим и ранозаживляющим действием. Иммуностимулирующее действие связано со способностью препарата увеличивать активность фагоцитов и макрофагов. Положительное влияние на заживление ран объясняется тем, что активное вещество абсорбирует гной и жидкость, выделяющиеся при воспалении ран. При этом средство не раздражает здоровые ткани и не мешает росту новых тканей. Основное показание к применению — профилактика нагноения и лечение гнойных ран. Возможно нанесение на слизистые оболочки. Возможно применение для обработки ран детям старше 3 лет.

Калия перманганат (марганцовка)

В настоящее время применяется в основном в условиях стационара. В аптеке антисептик продается в виде порошка для приготовления раствора. Марганцовку используют для промывания ран кожи и слизистых. Подходит для первичной обработки и для обработки нагноившихся ран (обладает очистительными свойствами за счет активного кислорода), особенно когда есть опасность попадания в рану анаэробных микроорганизмов. Перед промыванием раны нужно каждый раз готовить свежий раствор.

Раствор бриллиантового зеленого

Любимая всеми «зеленка». Выпускается в виде спиртовых растворов и карандашей. Обладает умеренным антисептическим действием, эффективна против грамположительных бактерий. Раствором обрабатывают только края ран, не заходя на поврежденные ткани. Имеет подсушивающее действие. Применяется до того периода, как в ране начинает появляться свежая грануляционная ткань, поскольку длительное применение препятствует адекватному затягиванию краев раны. Возможно применение в качестве детского антисептика.

Фукорцин

Красящий антисептик. Комбинация фуксина, борной кислоты, фенола, ацетона, резорцина и этанола. Показания к применению фукорцина — грибковые и гнойничковые заболевания кожи, ссадины, трещины и т. п. Наносится на края ран. Имеет меньшее подсушивающее действие, чем зеленка и йод. В лечении ран применяется гораздо реже. Нежелательно применение у детей из‑за входящих в состав борной кислоты и фенола, обладающих большим количеством побочных эффектов. При нанесении на кожу борная кислота легко проникает в кровь (особенно у детей) и поступает во внутренние органы и ткани, накапливаясь там. Поэтому при длительном применении может вызвать интоксикацию. Это свойство заставило резко ограничить применение борной кислоты, особенно в детском возрасте. Фенол также обладает способностью легко проникать через кожу и приводить к интоксикации внутренних органов.

Октенидин (октенидина дигидрохлорид)

Катионное поверхностно-активное вещество, обладающее антимикробной активностью в отношении грамположительных и грамотрицательных бактерий, вирусов, а также в отношении дрожжеподобных грибов и дерматофитов (грибов, питающихся кератином и вызывающих дерматомикозы). Похож по своему действию на четвертичные аммониевые соединения (ЧАС). Поврежденная поверхность обрабатывается полностью. Может применяться на слизистых. Антисептик не имеет возрастных ограничений, применяется для детей. В настоящее время является препаратом выбора в Европе в качестве антисептика в связи со своим широким спектром действия и максимальной скоростью достижения эффекта.

Таблица 1.
Сравнительная характеристика основных антисептических средств

Антисептик	Для обработки кожи	Для обработки ран	Для слизистых оболочек	Применимость для детей
Спирт этиловый	+	_	_	-
Перекись водорода	+	+	+	+
Йод	+	_	— / +	— / +
Хлоргексидин	+	+	+	+
Калия перманганат	+	_	_	+
Бриллиантовый зеленый	+	_	_	+
Фукорцин	+	_	_	_
Бензилдиметил-миристоиламино-пропиламмоний	+	+	+	+
Октенидин	+	+	+	+

В каждой аптечке

Итак, какие же средства может рекомендовать работник аптеки покупателю для домашней аптечки? Прежде всего, это бензилдиметил-миристоиламино-пропиламмоний и октенидин, как наиболее универсальные и безопасные средства. Именно эти препараты являются препаратами выбора и должны быть рекомендованы в первую очередь. Также достаточно универсален и хлоргексидин, который используют на неповрежденных тканях и для обработки ран, в том числе и слизистых. Что же касается растворов бриллиантового зеленого и йода — необходимо информировать покупателя о том, что эти антисептики подходят только для обработки краев раны и не должны применяться на слизистых оболочках. Таким образом, среди всего списка антисептиков, представленных на фармацевтическом рынке достаточно небольшое количество препаратов имеет универсальные возможности применения.

Источники

1. Харкевич Д. А. Фармакология. М. Геотар Медицина. 2010.
2. Блатун Л. А. Мирамистин в комплексной программе борьбы с госпитальной инфекцией в хирургическом стационаре // Мирамистин: применение в хирургии, травматологии и комбустиологии: сборник трудов / под ред. Ю. С. Кривошеина. М., 2006.
3. Carolin Fromm-Dornieden, Горовцов А. В., Nadine Schӓfer, Ewa K. Stuermer. Сравнение скорости подавления роста E. COLI, STAPHYLOCOCCUSAUREUS и PSEUDOMONASAERUGINOSA современными антисептиками с целью их применения для инфицированных ран // Фундаментальные исследования. — 2013. — № 10–2.

Названа последовательность самостоятельной обработки ран после пореза

©Shutterstock / Fotodom

Самостоятельная обработка раны после пореза является одним из этапов оказания помощи, пишет argumenti.ru.

Начинать следует с осмотра раны и промывания. Правильно это сделают медики, но иногда требуется действовать оперативно до прибытия врача. Осмотр особенно важен, если порез нанесён каким-то инородным и не совсем стерильным предметом типа осколка стекла. В этом случае нужно попытаться удалить видимую грязь, частички осколков с помощью пинцета, затем промыть порез перекисью водорода. Это поможет продезинфицировать рану. В случае отсутствия перекиси водорода можно промыть мыльным раствором, а после чистой водой.

Затем необходимо остановить кровь. При глубоком порезе лучше использовать жгут. Затягивать его нужно до того момента, пока кровь не остановилась. Примерно через каждые полчаса жгут необходимо ослаблять. Врачи обращают внимание, что такие меры необходимо применять только при повреждении крупных сосудов. В других случаях надо просто наложить повязку.

Далее следует обработка раны. После снятия жгута или повязки её также нужно промыть перекисью водорода или фурацилином.

Следующий этап — обработка йодом или зелёнкой. Медики поясняют, что спиртовой раствор йода или бриллиантовой зелени необходимо нанести вокруг раны. Очень важно, чтобы эти препараты не попали на края, а тем более на рану. В противном случае это может замедлить регенерацию тканей и серьёзно затруднит процесс лечения.

Саму рану необходимо обрабатывать мазями с антибиотиками. Однако наносить мазь нужно осторожно и маленькими дозами потому, что большое количество спровоцирует размягчение краёв пореза, а это затруднит и замедлит лечение. После обработки раны необходимо наложить повязку. В качестве повязки следует использовать кусочек смоченной перекисью водорода чистой и прочной бумаги, поверх которой  наложить бинт.

Ранее сообщалось, что томские врачи впервые в РФ применили новый метод лучевой терапии рака. Новая методика на основе In-Vivo дозиметрии для каждой фракции облучения значительно снижает лучевые нагрузки на здоровые органы.

Ранение | Инфекция | Профилактика

Это часто задаваемый вопрос школьных спортивных тренеров. Некоторые порезы и ссадины могут не иметь признаков инфекции. Другие могли быть инфицированы в течение некоторого времени и нуждаться в какой-либо медицинской помощи. Умение распознавать признаки и симптомы инфекции может помочь тренерам, родителям и студентам-спортсменам предотвратить инфицирование ран и знать, что делать, когда это происходит.

Признаки инфекции могут включать:

• покраснение
• опухоль
• жар (повышенная температура в месте раны)
• боль и болезненность
• образование гноя
  

Если инфекция усугубляется, обратитесь к врачу. поставщик медицинских услуг для оценки.Симптомы могут включать:

• усиленный отек
• красные полосы, отходящие от раны
• неприятный запах или увеличивающееся количество вытекающего гноя и жидкости
• лихорадка, озноб, тошнота или рвота
• увеличение лимфатических узлов по всему телу
  

Мыло и вода могут сыграть важную роль в предотвращении инфекции.

Чтобы промыть рану:

1. Вымойте руки.

2. Как можно скорее очистите место раны.

• Протрите рану влажной бумажной салфеткой или тканью с мылом.
• Протрите рану от середины к внешней стороне. Это отодвигает мусор от центра раны.
• Убедитесь, что на ране нет мусора и грязи.
• Хорошо промойте рану водой и промокните полотенцем

3. Накройте рану стерильной повязкой. При желании вы можете использовать безрецептурную мазь с антибиотиком.

4. Ежедневно очищайте и осматривайте рану на наличие признаков инфекции.

Пероксид водорода можно рассматривать как средство первой линии. Это может помочь и повредить.

Перекись водорода можно использовать для первичной очистки раны, например, для очистки небольших царапин или ссадин. Его пузырьковое действие помогает удалить мусор, который может застрять в ране. Но его нельзя использовать при больших открытых ранах или глубоких порезах, а также в течение длительного времени.

Перекись водорода убивает бактерии, будь то «хорошие» целебные бактерии или «плохие» бактерии, вызывающие инфекцию. Использование перекиси водорода в течение длительного времени может убить «хорошие» целебные бактерии и подавить новый рост тканей, замедляя процесс заживления.

В случае инфицирования раны обработайте ее, пока инфекция не усугубилась или не распространилась. Если инфекция начинает ухудшаться, обратитесь к врачу для обследования и лечения. Могут быть назначены антибиотики или другое лечение.

Пока рана заживает, мойте руки до и после прикосновения к пораженному участку. Держите рану чистой и закрытой, чтобы предотвратить попадание мусора, грязи или бактерий в кожный покров. Безрецептурная мазь с антибиотиком для ран может быть достаточным средством лечения раны без ухудшения симптомов.

Простой порез может стать опасным без надлежащего ухода. Инфекция может распространиться по всему телу и стать устойчивой к лекарствам. Так обстоит дело с устойчивой к метициллину, также известной как MRSA, формой стафилококковой инфекции, устойчивой к лекарствам, используемым для ее лечения.

Инфекции могут быстро распространиться через тесные помещения раздевалки и скамейки, если не соблюдаются надлежащие правила гигиены и профилактики. Чтобы предотвратить заражение, держите рану чистой и закрытой.Ежедневно смотрите на него, чтобы убедиться, что он заживает без инфекции.

Делитесь комментариями или вопросами по этой информации. Электронная почта [email protected]

От небольших порезов до серьезных ран — Основы здоровья от клиники Кливленда

Знаете ли вы, как лучше всего лечить обычные травмы, такие как порезы, царапины и легкие ожоги? Как насчет того, чтобы знать, когда позвонить за медицинской помощью при более серьезной ране?

Клиника Кливленда — некоммерческий академический медицинский центр.Реклама на нашем сайте помогает поддерживать нашу миссию. Мы не поддерживаем продукты или услуги, не принадлежащие Cleveland Clinic. Политика

Когда дело доходит до правильного обращения с травмами, есть много фактов, смешанных с фольклором. Практикующая медсестра Эван Миниор, CNP, развенчивает три самых распространенных мифа ниже.

Миф: всегда нужно очищать раны медицинским спиртом или перекисью водорода

Факт: Антисептики действительно могут убивать вредные бактерии, но они также могут повредить окружающие здоровые ткани.По словам Миньора, новая ткань особенно восприимчива к агрессивным антисептикам, потому что она более чувствительна, чем зрелая кожа.

«Когда дело доходит до чистки поверхностных ран, лучше всего подойдет старомодное мыло и вода», — говорит он.

Лучшая практика: При свежих ранах как можно скорее промойте рану большим количеством теплой мыльной воды. Также можно принять душ и пропустить через рану обильное количество теплой мыльной воды.

Миф

: держать рану сухой — лучший способ ее заживить

Факт: «Люди думают, что промывание ран может привести к инфекции, но это не так», — сказал г-н.- говорит Миниор. «Лучший способ предотвратить инфекцию — это чаще смывать ее. Решением проблемы загрязнения является разбавление».

Лучшая практика: При незначительных ранах промывайте пораженное место большим количеством теплой мыльной воды не реже одного раза в день. При более сложных ранах, например пролежни, врач может попросить вас промывать рану два-три раза в день, чтобы предотвратить инфекцию.

Миф: вы должны постоянно закрывать раны

Факт: Бинты — полезный инструмент для поддержания чистоты раны.Они также помогают поддерживать влажную среду, способствующую заживлению. Но это не значит, что вы должны надевать повязку и не снимать ее, — говорит г-н Миниор.

Лучшая практика: Снимайте повязку или повязку не реже одного раза в день, чтобы очищать рану. После промывания и очистки раны наложите новую повязку.

Когда обращаться к врачу или в больницу для ухода за раной

Обычно вы можете лечить раны дома без медицинского вмешательства. Но не всегда.Следующие более серьезные сценарии обычно требуют медицинской помощи.

Обратитесь в отделение неотложной помощи больницы, если рана:

• Очень глубокая или обнажает кости, органы или кровеносные сосуды
• Существенное кровотечение даже после того, как вы приложили давление

Обратитесь за помощью в центр неотложной помощи или в отделение неотложной помощи, если:

Как можно скорее обратитесь к врачу, если:

• Ваши симптомы ухудшаются. (Это может включать усиливающуюся боль, новое или усиливающееся покраснение или выделения или жар.)
• Ваша рана не заживает. (Обратитесь к врачу, если болезнь не заживала более 30 дней.)

Если врач обработал вашу рану, но ваше состояние не улучшилось за 90 дней, вам следует подумать о том, чтобы получить второе мнение, возможно, у хирурга, — говорит г-н Миниор.

Как часто следует использовать перекись водорода для лечения ран?

Категория: Здоровье Опубликовано: 4 апреля 2013 г.

Перекись водорода никогда не следует использовать для лечения ран, потому что она приносит больше вреда, чем пользы.Public Domain Image, источник: Кристофер С. Бэрд.

Перекись водорода никогда не следует использовать для лечения ран, так как она приносит больше вреда, чем пользы. На самом деле, для лечения ран нельзя использовать антисептики. Хотя химические вещества с высокой реакционной способностью, такие как перекись водорода, действительно убивают некоторые бактерии, они наносят больший ущерб здоровым клеткам, которые пытаются заживить рану. Этот факт известен современной науке почти 100 лет. Во время Первой мировой войны военные врачи следили за медицинским фольклором и лечили солдатские раны антисептиками, но тем не менее солдаты все еще умирали от инфекции с угрожающей скоростью.Биолог Александр Флеминг подошел к проблеме с научной точки зрения. Согласно биографии Флеминга, написанной Беверли Берч, Флеминг обнаружил, что те, чьи раны были обработаны антисептиками, имели на более высокий, показатель смертности и на более медленное время заживления, чем на , чем те, чьи раны не лечили вообще. Удивленный этим открытием, Флеминг провел контролируемый лабораторный эксперимент, который подтвердил, что антисептики вредны. В годы, последовавшие за Первой мировой войной, ученые занялись поиском лекарства, которое убивало бы инфекционные бактерии, не нанося вреда здоровым клеткам пациента или естественной иммунной системе.Спустя десятилетие после окончания Первой мировой войны Александр Флеминг обнаружил, что пенициллин, сок, выделяемый плесенью, избирательно убивает бактерии. Благодаря работе Флеминга и других ученых пенициллин превратился в мощное лекарство. Началась эра современных антибиотиков. Поскольку антибиотики убивают бактерии, не повреждая клетки организма, их можно принимать внутрь и достигать бактерий под поверхностью кожи. Таким образом, антибиотики оказались полезными не только для лечения поверхностных ран, но и для лечения внутренних заболеваний, вызванных такими бактериями, как ангина, сифилис, гангреж и туберкулез.

Если рана серьезная, пострадавшему следует обратиться за профессиональной медицинской помощью, так как на рану может потребоваться наложение швов. Если рана достаточно небольшая, чтобы ее можно было обработать в домашних условиях, ни в коем случае нельзя наносить на нее антисептики, такие как перекись водорода, медицинский спирт, Purell, йод, соль или разрыхлитель. Хотя антисептики эффективно убивают бактерии с небольшим вредом при нанесении на внешнюю поверхность здоровой кожи, они приносят больше вреда, чем пользы при нанесении на раны. Вместо этого небольшие раны следует прижать до остановки кровотечения, осторожно промыть водой, обработать мазью с антибиотиком, такой как неоспорин или полиспорин, а затем наложить повязку, чтобы не допустить попадания грязи.В клинике Майо говорится: «После того, как вы очистите рану, нанесите тонкий слой крема с антибиотиком или мази, такой как неоспорин или полиспорин, чтобы поверхность оставалась влажной. Эти продукты не ускоряют заживление раны, но могут препятствовать инфицированию. и помочь естественному процессу заживления вашего тела «. A.D.A.M. Медицинская энциклопедия, спонсируемая Национальным институтом здоровья, советует: «Наносите антибактериальную мазь и чистую повязку, которая не будет прилипать к ране».

Темы: мазь с антибиотиком, антибиотики, антисептик, перекись водорода, лечение ран, ран

Страница не найдена

Необходимые файлы cookie

Эти файлы cookie нельзя отключить, поскольку они необходимы для работы веб-сайта.Они помогают нам понять, какие разделы нашего веб-сайта посещаются наиболее часто, и предоставляют информацию, которую можно использовать, чтобы сделать его еще лучше. Они настроены для аналитики веб-сайта и в ответ на действия, совершаемые на веб-сайте, такие как запрос услуги, установка параметров конфиденциальности, вход в систему и заполнение форм. Эти файлы cookie не хранят личную информацию. Скорее, они собирают информацию о том, как все посетители используют этот веб-сайт.

Файлы cookie данных

Чтобы обеспечить лучший опыт просмотра и настроить отображаемую вам информацию, могут использоваться различные типы данных.Эти данные могут собираться вашим веб-браузером, или файлы cookie могут использоваться для сбора данных, чтобы обеспечить более персонализированный опыт. Собранные данные могут включать собственные данные о вашей деятельности на нашем веб-сайте, данные наших партнеров или третьих лиц. Ваши данные никогда не будут проданы третьим лицам и будут использоваться только нами и нашими прямыми партнерами. Мы можем использовать файлы cookie для сбора информации, которая может быть передана нашим партнерам. Эта информация может использоваться с другими данными для создания особых впечатлений, улучшения нашего веб-сайта и расширения имеющейся у нас информации о людях, которые используют наш веб-сайт.

Файлы cookie для таргетинга и рекламной аналитики

Эти файлы cookie показывают, как зрители взаимодействуют с этим сайтом. Они могут использоваться организациями, с которыми мы сотрудничаем, для построения профиля интересов зрителей, чтобы можно было делиться с ними информацией, которая является наиболее важной для каждого зрителя.

Файлы cookie для разных устройств и повторной идентификации

Эти файлы cookie позволяют нам понять, как зрители используют этот веб-сайт на нескольких устройствах, таких как мобильный телефон, компьютер или смарт-телевизор.Они связывают действия зрителей на нескольких устройствах, чтобы можно было делиться с ними информацией, которая является наиболее важной для каждого зрителя.

Совместное использование файлов cookie данных

Сторонние организации используют информацию из этих файлов cookie. Они отслеживают интересы зрителя на нескольких веб-сайтах, так что конкретный маркетинг может быть направлен зрителю на основе интересов.

Влияние перекиси водорода на заживление ран у мышей в связи с окислительным повреждением

Abstract

Установлено, что низкие концентрации перекиси водорода (H ₂ O ₂ ) образуются в ранах и необходимы для оптимального заживления.Но в то же время есть свидетельства того, что чрезмерное окислительное повреждение коррелирует с плохо заживающими ранами. В этой статье мы стремимся определить, может ли местное применение H ₂ O ₂ модулировать заживление ран и связаны ли его эффекты с окислительным повреждением. На модели эксцизионной раны у мышей C57BL / 6 было обнаружено, что H ₂ O ₂ усиливает ангиогенез и закрытие раны при 10 мМ, но замедляет закрытие раны при 166 мМ. Задержка закрытия также была связана с уменьшением образования соединительной ткани, увеличением MMP-8 и стойкой инфильтрацией нейтрофилов.Было обнаружено, что ранение увеличивает окислительное повреждение липидов, измеренное с помощью изопростанов F ₂ , и повреждение нитрационного белка, измеренное с помощью 3-нитротирозина. Однако обработка H ₂ O ₂ не приводила к значительному увеличению окислительного и нитративного повреждения даже при концентрациях, которые замедляют заживление ран. Следовательно, вредное воздействие H ₂ O ₂ может не включать окислительное повреждение изученных молекул-мишеней.

Образец цитирования: Loo AEK, Wong YT, Ho R, Wasser M, Du T, Ng WT, et al.(2012) Влияние перекиси водорода на заживление ран у мышей в связи с окислительным повреждением. PLoS ONE 7 (11): e49215. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0049215

Редактор: Хуан Састре, Университет Валенсии, Испания

Поступила: 17.08.2012; Одобрена: 4 октября 2012 г .; Опубликовано: 13 ноября 2012 г.

Авторские права: © 2012 Loo et al. Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Финансирование: Эта работа финансировалась Сингапурским национальным советом по медицинским исследованиям (NMRC 1205/2009, http://www.nmrc.gov.sg/) и Центром столетия Тан Чин Туан (http: // www. tanfoundation.com.sg). Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Введение

Различные группы показали, что H ₂ O ₂ играет важную роль в заживлении ран.Было показано, что нефагоциты продуцируют H ₂ O ₂ после ранения, который может привлекать нейтрофилы [1], а также способствовать реиннервации периферических сенсорных аксонов [2] в модели заживления ран у рыбок данио. H ₂ O ₂ и O ₂ ^.- также были обнаружены в ранах мышей [3], [4]. Сообщалось, что удаление H ₂ O ₂ из-за сверхэкспрессии каталазы у мышей задерживает закрытие ран и замедляет ангиогенез [3].

Неудивительно, что были предположения, что применение низких уровней H ₂ O ₂ может быть полезным для заживления ран [5]. Было обнаружено, что повязки с коллагеновой пленкой, содержащие глюкозооксидазу, способствуют заживлению ран на модели диабета у крыс, по-видимому, за счет увеличения уровней активных форм кислорода (АФК) в ранах [6]. Глюкозооксидаза — это фермент, который окисляет глюкозу до глюконовой кислоты с образованием H ₂ O ₂ в качестве побочного продукта.Мед медицинского качества, который, как утверждается, способствует заживлению хронических ран [7], также содержит H ₂ O ₂ , возможно, опять же под действием глюкозооксидазы [8].

С другой стороны, считается, что чрезмерное количество АФК участвует в патогенезе хронических ран [9]. АФК могут вызывать повреждение, реагируя с нуклеиновыми кислотами, белками и липидами, вызывая потерю функции и повреждение тканей. Поскольку АФК, включая H ₂ O ₂ , по своей природе являются повреждающими, возможно, низкие концентрации H ₂ O ₂ будут способствовать заживлению, действуя как сигнальная молекула, в то время как высокие концентрации будут замедлять заживление, вызывая окислительное повреждение.Хотя эта гипотеза звучит привлекательно и просто, она никогда не подвергалась тщательной проверке. Фактически, влияние окислительного повреждения на заживление ран полностью не исследовано.

Хотя известно, что АФК образуются после ранения, мало что известно об изменениях окислительного повреждения во время заживления ран. Клинические исследования показали, что жидкости из хронической раны имеют более высокие уровни изопростанов F ₂ , установленного маркера перекисного окисления липидов, чем жидкости из острой раны [10].Окисление белков, измеряемое по карбонилам белка, также измерялось в жидкостях раны, но не было никакой разницы в абсолютном содержании карбонилов белка в экссудате острой и хронической раны. Однако было обнаружено, что жидкости хронической раны имеют более низкое содержание белка, таким образом, нормализованное содержание карбонила белка в хронической ране оказалось на 15% выше [11]. Это подчеркивает серьезные методологические проблемы, связанные с измерением окислительного повреждения раневой жидкости, поскольку ее состав может значительно варьироваться в зависимости от состояния гидратации пациента.Эти исследования раневых жидкостей также не дают ответа на фундаментальный вопрос о том, вызывает ли рана окислительное повреждение.

Используя вещества, реагирующие с тиобарбитуровой кислотой (TBARS) в качестве биомаркера перекисного окисления липидов, ранние исследования фактически обнаружили снижение перекисного окисления липидов в ранах по сравнению с неповрежденной кожей [12], [13]. Однако следует отметить, что измерение TBARS является плохим маркером перекисного окисления липидов и подвержено артефактам [14]. Другие авторы показали увеличение окислительного повреждения между ранами на моделях мышей дикого типа и с дефицитом пероксиредоксина-VI, но об уровнях окислительного повреждения в неповрежденной коже не сообщалось [9], [15].

В настоящем исследовании мы преследуем две основные цели. Во-первых, мы стремились измерить изменения окислительного повреждения с течением времени на модели полной иссеченной раны. Во-вторых, мы модулировали уровень ROS путем местного нанесения H ₂ O ₂ , чтобы определить, может ли чрезмерное окислительное повреждение способствовать плохому заживлению ран. Три биомаркера окислительного повреждения, а именно изопростаны F ₂ , белковые карбонилы и 3-нитротирозин, были использованы для определения изменений уровня окислительного повреждения.

Материалы и методы

Материалы

Буфер для анализа радиоиммунопреципитации (RIPA) был приобретен у Cell Signaling Technology (Danvers, MA, USA). Крысиный анти-ММР-8 (Кат. №: 2145-1) был приобретен в Epitomics (Burlingame, CA, USA). Кроличьи анти-CD31 (№ по каталогу: ab28364) и кроличьи анти-ММР-9 (№ по каталогу: ab38898) были приобретены в Abcam (Кембридж, Великобритания). Крысиные моноклональные антитела против F4 / 80 и 7/4 мыши были приобретены у Serotec (Роли, Северная Каролина, США). Крысиные антитела против TIMP-1 (№ по каталогу: MAB980) были приобретены в R&D systems (Миннеаполис, Миннесота, США).Среда для крепления против выцветания Prolong-gold с DAPI была приобретена у Life Technologies. Смесь ингибиторов фосфатазы, PhosSTOP, и смесь ингибиторов протеазы, Complete mini-EDTA, были приобретены у Roche (Базель, Швейцария). Набор Vectorstain peroxidase Avidin biotin complex (ABC) был приобретен в Vector Labs (Burlingame, CA, USA). В качестве гематоксилина использовали мгновенный гематоксилин Shandon, закупленный у Thermofisher (Уолтем, Массачусетс, США). Козье вторичное антитело против кролика, конъюгированное с пероксидазой хрена (Cat 0031460), конъюгированное с пероксидазой хрена вторичное антитело козы против мыши (Cat 0031430), субстрат усиленной хемилюминесценции и N, O-бис (триметилсилил) трифторацетамид + 1% триметилхлорсилан MCS (BSTFA + TSTFA + TMC) были получены от Pierce Chemicals (Рокфорд, Иллинойс, США).Набор для определения окисления белков оксиблотом, набор для ELISA с 3-нитротирозином и набор для твердофазного твердофазного анализа для обнаружения CXCL1, CXCL5, CCL2 и CCL3 мыши были приобретены у Millipore (Биллерика, Массачусетс, США). Все остальные химические вещества были приобретены у Sigma-aldrich (Сент-Луис, Миссури, США).

Обработка животных и иссечение раны Модель

Восьминедельных мышей C57 / BL6 были получены из центра по уходу за лабораторными животными NUS. Метод создания иссеченной раны и последующего мониторинга был одобрен Комитетом по уходу и использованию животных NUS (NUS 095/09).Животных кормили стандартной диетой и содержали в помещении, свободном от определенных патогенов. Перед ранением мышей акклиматизировали в течение недели. Процедура проводилась под наркозом, индуцированным изофлураном. Были созданы четыре полные иссеченные раны с помощью 5-миллиметрового кожного перфоратора. Затем размер ран сразу же отслеживали на кусочке стерильного прозрачного пластикового листа. Затем в рану осторожно добавляли 15 мкл PBS или H ₂ O ₂ , разведенных в PBS (рис. 1A).Мышей выдерживали под анестезией еще 5 мин, чтобы позволить H ₂ O ₂ впитаться в рану. Затем на шею надевали ошейник елизаветинской мыши, чтобы мыши не кусали или не зализывали раны. Мышей также содержали поодиночке, чтобы они не кусали и не зализывали друг другу раны. 0,1 мг / кг бупренорфина вводили подкожно сразу после ранения, а также каждые 24 часа в течение 4 дней после ранения для облегчения боли.

Рисунок 1.Низкие концентрации H ₂ O ₂ способствовали закрытию раны, но высокие концентрации его задерживали закрытие раны.

(A) На каждой мыши были созданы четыре полные иссеченные раны, и 15 мкл H ₂ O ₂ было добавлено в полость раны, как показано. Левая панель представляет собой репрезентативное изображение полученных ран. На правой панели показано, как H ₂ O ₂ наносится на раны. (B) Влияние различных концентраций H ₂ O ₂ на скорость заживления ран.Размер ран у 6-8 мышей контролировали в течение 6 и 10 дней соответственно, прежде чем они были подвергнуты эвтаназии. Показанный график представляет собой среднее значение ± S.E.M. объединенных результатов. Для анализа размера раны использовали однофакторный дисперсионный анализ. Различия между 166 мМ H ₂ O ₂ и контролем (p <0,05) или 10 мМ H ₂ O ₂ (p <0,01) были статистически значимыми на 6-й день. Различия между 10 мМ H ₂ O ₂ и контроль (p <0,05) были статистически значимыми на 8 и 10 день.Различия между 10 мМ и 166 мМ H ₂ O ₂ также были статистически значимыми на 8-й день (p <0,05), но не на 10-й день.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0049215.g001

Для мониторинга размера раны мышей анестезировали и измеряли размер раны путем нанесения на кусок стерильного прозрачного пластикового листа, как описано в предыдущем разделе. Затем на рану повторно наносили PBS или H ₂ O ₂ . Для сбора ткани мышей умерщвляли удушением CO ₂ и удаляли раневые ткани с помощью 10-миллиметрового кожного перфоратора.Ткани обрабатывали в зависимости от проводимых анализов.

Подготовка гистологических срезов

Свежевырезанные образцы раны были разделены пополам и обработаны либо для парафина, либо для криосрезов. Образцы для парафиновых срезов фиксировали сразу после сбора в 10% забуференном фосфатом формалине (pH 7,4). Образцы обычно обезвоживались, очищались и помещались в парафин. Парафиновые срезы толщиной 5 мкм готовили на липких предметных стеклах.Свеже собранные образцы ран для криосрезов заливали компаундом с оптимальной температурой резания (OCT) и замораживали с использованием суспензии сухого льда и изопентана. Криосрезы толщиной 6–8 мкм готовили на липких предметных стеклах.

Трихромное пятно по Массону

Парафиновые срезы депарафинизировали, регидратировали и окрашивали с использованием набора для окрашивания трихромом Массона-Голднера в соответствии с инструкциями производителя. Микрофотографии были сделаны с объективом с 20-кратным увеличением и освещением в ярком поле с использованием микроскопа Olympus BX 51.Изображение всей области раны было получено путем объединения нескольких полей вместе с помощью Adobe Photoshop CS5. Количество зеленых пикселей в neodermis определяли количественно и выражали как долю размера области раны. Неодерма — это новообразованная грануляционная ткань под гиперпролиферирующим эпидермисом и / или струпом, лишенная волосяных фолликулов.

Чтобы количественно определить количество зеленых пикселей, мы разработали специальное программное обеспечение для сегментации цветного изображения, которое было реализовано в виде подключаемого модуля ImageJ.Программное обеспечение можно бесплатно загрузить по адресу http://web.bii.a-star.edu.sg/archive/colseg/. Описание программного обеспечения и руководство пользователя приведены в дополнительной информации (Руководство S1).

Иммуногистохимическое окрашивание CD31

CD31 окрашивали иммуногистохимическим методом. Парафиновые срезы депарафинизировали и регидратировали. Срезы кипятили в 10 мМ натрийцитратном буфере pH 6,0 в течение 15 мин. Затем образцы обрабатывали с помощью набора для амплификации пероксидазы ABC с некоторыми изменениями из протокола производителя.Срезы блокировали 1,5% козьей сывороткой в ​​трис-буферном физиологическом растворе (TBS) в течение ночи при 4 ° C. После блокировки срезы инкубировали с кроличьими поликлональными анти-CD31, разведенными в 1,5% козьей сыворотке при разведении 1-50 в течение 1 часа. Затем предметные стекла промывали TBS перед инкубацией с биотинилированным вторичным антителом против кролика в разведении 1-200 в течение 1 часа. Затем предметные стекла промывали и инкубировали с реагентом кассеты авидин-биотин в течение 30 мин. Активность пероксидазы окрашивали диаминобензидином с использованием DAB + в соответствии с протоколом производителя в течение 30 мин с последующей промывкой в ​​TBS и контрастным окрашиванием гематоксилином.Слайды были обезвожены, очищены и закреплены с помощью монтажной среды DPX.

Микрофотографии срезов были сделаны с объективом с 20-кратным увеличением и освещением в ярком поле с использованием микроскопа Olympus BX 51. Изображение всей области раны было получено путем объединения нескольких полей вместе с помощью Adobe Photoshop CS5. Количество кровеносных сосудов в неодерме подсчитывали и нормализовали по площади поперечного сечения каждой секции. Подсчет проводился вслепую двумя сотрудниками лаборатории, и результаты являются средними для обоих подсчетов.Средняя разница между подсчетами каждого пользователя от среднего составляет 14,8%.

Иммунофлуоресцентное окрашивание

Замороженные срезы фиксировали в 4% параформальдегиде в течение 20 мин. Срезы блокировали усилителем сигнала Image-iT FX на 2 часа. Затем их инкубировали с первичными антителами, антимышиным F4 / 80 или анти-7/4, в течение 2 часов при комнатной температуре и 1-1000 в TBS. В качестве вторичного антитела использовали козье антитело против крысы Alexa Fluor 594 при разведении 1-1000 в TBS в течение 30 минут при комнатной температуре.Слайды были закреплены на среде, препятствующей выцветанию, содержащей DAPI, и оставлены для отверждения на плоской поверхности в темноте в течение ночи. Слайды визуализировали и фотографировали с помощью микроскопа Olympus BX 51 с постоянной выдержкой. Изображение всей неодермы было получено путем объединения нескольких полей вместе с помощью Adobe Photoshop CS5. Анализ изображения проводился с помощью ImageJ (NIH). Сначала изображения были разделены на каналы RGB. Коррекция фона проводилась с использованием катящегося шарика радиусом 50 пикселей.Затем измеряли интенсивность флуоресценции неодермы. Отрицательные контроли без инкубации первичных антител не показали флуоресцентного окрашивания.

Экстракция белка

Ткани раны для анализа белка замораживали в сухом льду сразу после сбора и хранили при -80 ° C до анализа. Для экстракции белка две ткани раны (приблизительно 100 мг) животного разрезали на мелкие кусочки и добавляли 500 мкл ледяного буфера RIPA с смесью ингибиторов протеазы и фосфатазы.Образцы обрабатывали ультразвуком с помощью ультразвукового датчика высокой интенсивности (Sonics Vibra-Cell, Newtown, CT, USA), а затем центрифугировали в течение 10 минут при 10 000 g, 4 ° C. Супернатант собирали и использовали для вестерн-блоттинга, ELISA с 3-нитротирозином, анализа мультиплексных цитокинов и анализа карбонила белка.

Вестерн-блоттинг

Тридцать микрограмм белка подвергали электрофорезу в 10% SDS-полиакриламидном геле для анализа ERK1 / 2, p38 MAPK, MMP-8, MMP-9 и TIMP-1. Гели переносили влажным переносом на нитроцеллюлозные мембраны.Мембраны блокировали 5% обезжиренным молоком в TBST в течение 1 ч при комнатной температуре перед инкубацией с антителами в течение ночи при 4 ° C. Разведения для всех антител составляли 1-1000, за исключением p-ERK1 / 2, который был разведен 1-2000. Блоты визуализировали методом хемилюминесценции с использованием системы визуализации Chemidoc XRS (Bio-Rad, Милан, Италия). Денситометрию проводили с помощью ImageJ.

3-нитротирозин ELISA

Анализ проводился согласно инструкции производителя. На лунку загружали 300 мкг белка.Стандартная кривая была построена в GraphPad Prism путем подгонки к пятипараметрическому логистическому уравнению. Уровни 3-нитротирозина в образцах определяли с помощью функции интерполяции в программном обеспечении.

Мультиплексный анализ цитокинов

Анализ проводился в соответствии с инструкциями производителя. На лунку загружали 75 мкг белка. Анализ проводился на системе Millipore Milliplex, а результаты анализировались с помощью аналитического программного обеспечения Milliplex.

F

₂ -Извлечение и анализ изопростанов

Ткани раны для анализа изопростана F ₂ замораживали в сухом льду сразу после сбора и хранили при -80 ° C до анализа.Изопростаны F ₂ анализировали с использованием ранее опубликованных методов с небольшими модификациями [16], [17]. Липиды были извлечены из 2 цельных ран (приблизительно 100 мг). Раны гомогенизировали в 0,5 мл PBS (pH 7,4) и 1 мл смеси органических растворителей Folch (CHCl ₃ : метанол, 2-1 об. / Об., + 0,005% BHT) при 4 ° C. После центрифугирования при 2300 g в течение 10 мин нижний органический слой осторожно переносили в стеклянный сосуд и сушили под потоком N ₂ .Высушенный липидный экстракт ресуспендировали в 0,25 мл деионизированной воды и добавляли 0,25 мл 1 М КОН (в чистом метаноле) для гидролиза липидов. Тяжелый изотоп F _{2 внутренние стандарты} -изопростана и арахидоновой кислоты (0,5 нг IPF _2a — VI-d ₄ , 0,25 нг 8-изо-PGF _2a -d ₄ , 0,5 нг IPF _2a -IV-d ₄ и 1,0 мкг арахидоновой кислоты-d ₈ в 20 мкл этанола).

N ₂ газ вводили в каждую пробирку с образцом, которую затем закрывали для предотвращения дальнейшего окисления.Гидролиз проводили в течение ночи при комнатной температуре в темноте. После гидролиза добавляли 1 мл деионизированной воды и 1 мл 40 мМ уксусной кислоты. PH образцов доводили до 4,5 с помощью 6 M HCl.

Колонки MAX (смешанный ионный обмен, Waters) 60 мг предварительно кондиционировали 2 мл метанола, а затем 2 мл 40 мМ муравьиной кислоты (pH 4,5). Затем в колонку загружали липидный экстракт и колонку промывали 2 мл метанола: 20 мМ муравьиной кислоты, pH 4,0 (3–7). В колонку вводили 2 мл гексана, а затем еще 2 мл смеси ацетон: гексан (3∶7).Наконец, арахидоновую кислоту и изопростаны F ₂ элюировали из колонки для SPE 1,8 мл смеси ацетон: метанол (4-1), собирали и сушили в атмосфере газа N ₂ .

Образцы дериватизировали 12,5 мкл DIPEA (10% об. Ацетонитрила) и 25 мкл PFBBr (10% об. Ацетонитрила) при комнатной температуре в течение 30 мин и сушили в атмосфере азота. К высушенным образцам добавляли 12,5 мкл ацетонитрила и 25 мкл BSTFA + TMCS и реакционные смеси инкубировали при комнатной температуре в течение 1 ч силилирования, а затем сушили.Дериватизированные образцы восстанавливали в 30 мкл изооктана и инкубировали при комнатной температуре в течение 2 минут перед анализом методом ГХ-МС.

Дериватизированные образцы анализировали с помощью масс-селективного (МС) детектора Hewlett-Packard 5973N (Agilent Technologies), сопряженного с газовым хроматографом (ГХ) Hewlett-Packard 6890 (Agilent Technologies), оснащенного автоматическим пробоотборником и компьютерной рабочей станцией. Порт инжекции и интерфейс ГХ-МС поддерживали при 270 и 300 ° C соответственно. Масс-спектрометр использовался в режиме отрицательной химической ионизации (NCI) с источником ионов и квадруполем при 150 и 106 ° C, соответственно, и скорость потока метана была установлена ​​на 2 мл / мин.Хроматографическое разделение проводили на капиллярной колонке из плавленого кремнезема (30 м × 0,2 мм внутренний диаметр), покрытой сшитым 5% фенилметилсилоксаном (толщина пленки 0,33 мкм) (Agilent Technologies). Газ-носитель, гелий, был установлен на расход 1 мл / мин. Дериватизированные образцы (1 мкл) вводили без разделения в порт ввода ГХ. Температуру колонки поддерживали на уровне 180 ° C в течение 0,75 мин, затем повышали до 275 ° C со скоростью 40 ° C / мин, а затем поддерживали при 275 ° C в течение 9 минут. Наконец, температуру повышали до 300 ° C со скоростью 40 ° C / мин и выдерживали в течение 10 минут.Мониторинг выбранных ионов был выполнен для мониторинга карбоксилат-иона (M-181: потеря пентафторбензила, CH ₂ C ₆ F ₅ ) на ионах m / z 569 для 8-изо-PGF _2α и при m / z 573 для меченных дейтерием (8-iso-PGF _2α -d ₄ и IPF _2α -VI-d ₄ ) внутренних стандартов. Количественное определение было достигнуто путем соотнесения площади пика всех F ₂ -IsoP с суммой пиков внутреннего стандарта двух различных F ₂ -IsoP (8-iso-PGF _2α -d ₄ и IPF _2α -VI-d ₄ ).Сообщенные значения представляют собой сумму 8-изо-PGF _2α , IPF _2α -VI и IPF _2α -IV.

Арахидонат также был проанализирован с помощью GC-MS-NCI с использованием того же прибора и условий колонки, как описано выше, за исключением следующего: гелий был установлен на скорость потока 1 мл / мин и дериватизированные образцы (1 мкл) вводились без разделения порт ввода ГХ. Температуру колонки поддерживали на уровне 180 ° C в течение 0,75 мин, затем повышали до 310 ° C со скоростью 40 ° C / мин, а затем выдерживали в течение 8 минут.Ионы-мишени и квалификаторы были выбраны для выбранного режима ионного мониторинга ГХ-МС для мониторинга карбоксилат-иона (M-181: потеря пентафторбензила, CH ₂ C ₆ F ₅ ) при ионах m / z 303 для арахидонат и m / z 311 для меченного дейтерием внутреннего стандарта арахидоновой кислоты-d8. Количественное определение было достигнуто путем соотнесения площади пика общего арахидоната с пиком внутреннего стандарта. Время удерживания для 8-изо-PGF _2α , IPF _2α -VI, IPF _2α -IV и арахидоновой кислоты составляло 11.3, 11,3, 11,50 и 5,2 мин соответственно.

Белок Определение карбонила

Карбонилы белков определяли с помощью набора для окисления белков OxyBlot. После гомогенизации ткани 25 мкл лизата ткани смешивали с 10 мкл 12% SDS и 20 мкл 20 мМ 2,4-динитрофенилгидразина (DNPH). После 15 мин инкубации при комнатной температуре добавляли 15 мкл нейтрализующего раствора (2 М Трис, 30% глицерин). Затем объем, эквивалентный 3,8 мкг белка, загружали в устройство для слот-блоттинга (Bio-Rad, Hercules, США) и переносили на нитроцеллюлозную мембрану под вакуумом.Мембраны блокировали 5% обезжиренным молоком в TBST в течение 1 часа перед зондированием антителом против DNPH (1–150) и конъюгированным с HRP антителом против IgG кролика (1–300) в течение 1 часа каждое. Блоты визуализировали с помощью хемилюминесценции с использованием системы визуализации Chemidoc XRS.

Результаты

10 мМ H

₂ O ₂ Способствует закрытию раны, но 166 мМ замедляет ее

Было обнаружено, что местное нанесение H ₂ O ₂ в концентрации 166 мМ замедляет заживление ран (рис. 1B) по сравнению с контрольными мышами.Эта концентрация доставит 2,5 мкмоль H ₂ O ₂ на рану. Фармакологически эта концентрация также эквивалентна 0,5% раствору H ₂ O ₂ , что аналогично концентрациям, обычно используемым для дезинфекции (от 0,5 до 3%). Несмотря на то, что H ₂ O ₂ при 166 мМ первоначально задерживало закрытие раны, скорость закрытия раны увеличивалась во время последней части процесса заживления, и не было различий в размере раны на 8-й и 10-й день по сравнению с контрольными мышами. .H ₂ O ₂ при 10 мМ немного увеличивал скорость закрытия раны (рис. 1B) по сравнению с контрольными мышами.

Похоже, что местное нанесение H ₂ O ₂ в концентрации 166 мМ задерживало начальный процесс заживления у мышей. Поэтому мы решили подробно изучить процесс заживления на 6-й день после ранения, что находится в середине процесса заживления. Образование соединительной ткани измеряли с помощью окрашивания трихромом Массона [18]. Окрашивание трихромом Массона по-разному окрашивает соединительные ткани, преимущественно коллаген, поскольку они менее пористые по сравнению с другими тканевыми компонентами.Ангиогенез оценивали с использованием иммуногистохимического окрашивания CD31, маркера клеточной поверхности эндотелиальных клеток.

Раны, обработанные 166 мМ H ₂ O ₂ , показали снижение образования соединительной ткани, о чем свидетельствует уменьшение количества участков, окрашенных в зеленый цвет, по сравнению с контролем. 10 мМ H ₂ O ₂ не влияли на образование соединительной ткани (рис. 2). 166 мМ H ₂ O ₂ не влияли на ангиогенез, но 10 мМ H ₂ O ₂ сильно стимулировали его (фиг. 3).Эти результаты иммуноокрашивания соединительной ткани и CD31 соответствовали нашему наблюдению, согласно которому 166 мМ H ₂ O ₂ задерживали закрытие раны, но 10 мМ H ₂ O ₂ способствовали этому.

Рисунок 2. Высокие концентрации H ₂ O ₂ замедляют образование соединительной ткани.

Парафиновые срезы ран на 6 день окрашивали трихромом Массона-Голднера, как описано в материалах и методе. Соединительные ткани окрашиваются в зеленый цвет.Фибрин, струп и цитоплазма окрашиваются в красный цвет. Ядра окрашены в темно-коричневый цвет. Показаны репрезентативные изображения для контрольных (A, D) ран, обработанных 10 мМ (B, E) и 166 мМ (C, F). Изображения A-C имеют 100-кратное увеличение, а D-F — 200-кратное увеличение. (G) Количественная оценка доли пикселей, окрашенных в зеленый цвет. Количество окрашенных в зеленый цвет пикселей в неодерме при 100-кратном увеличении определяли количественно с использованием специального программного обеспечения. Количественно определенная площадь обведена пунктирной линией. Результаты были проанализированы с использованием однофакторного дисперсионного анализа с последующим многократным сравнением теста Даннета с контролем.Показанный график представляет собой среднее значение ± S.E.M. n = 6–7, *** p <0,001.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0049215.g002

Рис. 3. Низкие концентрации H ₂ O ₂ увеличивают ангиогенез раны.

Парафиновые срезы ран на 6-й день окрашивали на CD31 с использованием иммуногистохимического метода. Показаны репрезентативные микрофотографии (A) контроля, (B) 166 мМ H ₂ O ₂ и (C) 10 мМ H ₂ O ₂ обработанных ран.(D) Количество коричневых просветоподобных структур в неодермисе подсчитывали одним слепым методом и анализировали с использованием однофакторного дисперсионного анализа с последующим множественным сравнительным тестом Даннета с контролем. Показанный график представляет собой среднее значение ± S.E.M, n = 6–7, *** p <0,001.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0049215.g003

H

₂ O ₂ Повышает уровень MMP-8 в ранах

Повышенное содержание MMP-8 и 9 наблюдается при хронических ранах [26].Поэтому мы предположили, что H ₂ O ₂ может повышать уровни MMP-8 и 9 в ранах и, возможно, приводить к уменьшению отложения соединительной ткани. Уровни MMP-8 и 9 в ранах измеряли с помощью вестерн-блоттинга (фиг. 4).

Рисунок 4. Высокие концентрации H ₂ O ₂ увеличивают уровни MMP-8 в ранах.

Вестерн-блоттинг лизата тканей раны, собранного через 6 дней после ранения. Каждая дорожка представляет собой образец от другого животного.(A) Репрезентативный блот MMP-8. (B) Денситометрический анализ MMP-8, нормализованный относительно α-тубулина, повторно зондированный с их соответствующего блота. Результаты являются средними ± S.E.M. (n = 4) и были проанализированы с использованием однофакторного дисперсионного анализа с последующим множественным сравнением Тьюки среди всех столбцов. ** p <0,01 (C) Репрезентативный блот MMP-9. (D) Денситометрический анализ MMP-9, нормализованный относительно α-тубулина, повторно зондированный из их соответствующего блота. Результаты являются средними ± S.E.M. (n = 4), значения p для одностороннего дисперсионного анализа p = 0,13.

https: // doi.org / 10.1371 / journal.pone.0049215.g004

Вестерн-блоттинг ММР-8 имел сильно иммунореактивную полосу около 57 кДа, что соответствует активированной форме ММП-8, полученной из полиморфно-ядерных клеток. Слабая иммунореактивность наблюдалась также при 21 кДа, о котором ранее сообщалось, что это деградированный фрагмент MMP-8 [19]. Слабая иммунореактивность наблюдалась также в полосах 45 и 55 кДа, которые могли быть MMP-8, полученным из неполиморфно-ядерных клеток [20].

Анализ результатов денситометрии полосы 57 кДа показан на рисунке 4B.Было обнаружено, что местное применение 166 мМ H ₂ O ₂ увеличивало уровни белка активированной ММР-8 в ранах, но 10 мМ не влияли на уровни белка ММП-8 (p <0,01). Денситометрический анализ был также проведен для фрагмента 21 кДа, и было обнаружено, что он следует той же тенденции, что и иммунореактивная полоса при 57 кДа, что указывает на то, что степень деградации пропорциональна количеству MMP-8 (данные не показаны).

Мышиный pro-MMP-9 отображается как полоса размером 105 кДа на SDS-PAGE, в то время как активированная MMP-9 имеет размер 97 кДа [21].Мы наблюдали полосы с сильной иммунореактивностью с молекулярной массой, которые соответствуют зимогену, но не расщепленным активным формам. Было обнаружено, что H ₂ O ₂ увеличивает уровни про-ММР-9, но это повышение не было статистически значимым. p -значение для одностороннего дисперсионного анализа было 0,1329.

Также измеряли влияние H ₂ O ₂ на уровни тканевого ингибитора металлопротеиназы 1 (ТИМП-1) (фигура S1). Две полосы наблюдались при приблизительно 28 кДа, что могло быть связано с различными гликозилированными изоформами [22].По результатам денситометрического анализа было обнаружено, что H ₂ O ₂ не вызывает каких-либо изменений уровней TIMP-1, независимо от используемой концентрации.

Высокие концентрации H

₂ O ₂ Повышение инфильтрации нейтрофилов

Эффект H ₂ O ₂ на инфильтрацию нейтрофилов и макрофагов также оценивали с использованием иммунофлуоресцентного окрашивания (фиг. 5). У контрольных мышей мы наблюдали сильное иммунофлуоресцентное окрашивание нейтрофилов на 1-й день после ранения, которое уменьшалось по мере заживления раны, что было аналогично тенденциям, описанным в литературе [23].Однако раны, обработанные 166 мМ H ₂ O ₂ , показали более сильное иммунофлуоресцентное окрашивание на 1 и 6 день по сравнению с контрольными ранами. Это указывает на то, что H ₂ O ₂ вызывал большую инфильтрацию нейтрофилов, которая также сохранялась в течение более длительного периода времени. С другой стороны, не было изменений в инфильтрации нейтрофилов в ранах, обработанных 10 мМ H ₂ O ₂ (Рисунок S2). Обе концентрации H ₂ O ₂ не влияли на инфильтрацию макрофагов (Рисунок S3).

Рисунок 5. 166 мМ H ₂ O ₂ увеличенная нейтрофильная инфильтрация в 1-й и 6-й день ран.

Интенсивность флуоресценции неодермы определяли количественно с помощью ImageJ. Количественно определенная площадь обведена пунктирной линией. Показанные результаты представляют собой среднее значение ± S.E.M, n = 6-7. Показан репрезентативный раздел каждого лечения. ES — Эшар; HE — гиперпролиферирующий эпидермис; НД — неодерма. * P <0,05.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0049215.g005

Высокие концентрации H

₂ O ₂ Повышение фосфорилирования ERK1 / 2 и p38

Ранее мы обнаружили, что H ₂ O ₂ может улучшать заживление ран, активируя путь MAPK на модели царапин кератиноцитов [24]. Поэтому мы приступили к исследованию, влияет ли H ₂ O ₂ на путь MAPK в этой модели заживления ран in vivo . Вестерн-блоттинг, сравнивающий неповрежденную кожу с тканями края раны, показал, что ранение активирует передачу сигналов ERK1 / 2 и p38, и через 30 мин после ранения наблюдалось увеличение фосфорилирования.(Рисунок 6). Также было замечено, что обработка 166 мМ H ₂ O ₂ дополнительно увеличивает уровень фосфорилирования. Однако сигнал фосфорилирования ослабел через 4 часа после ранения, и никакой разницы в фосфорилировании не наблюдалось между кожей, контрольными ранами и обработанными ранами H ₂ O ₂ (фигура S4). Это контрастирует с постоянным (не менее 8 часов) сигналом ERK1 / 2 и p38, который мы наблюдали в кератиноцитах, обработанных H ₂ O ₂ в культуре клеток [24].

Рисунок 6. Ранение увеличивает фосфорилирование ERK1 / 2 и p38, которое может быть дополнительно увеличено обработкой 166 мМ H ₂ O ₂ .

(A) Репрезентативные блоты лизата тканей раны, собранные через 30 мин после ранения. Кожа обозначает кожу нераненых животных, тогда как контроль относится к ранам, обработанным PBS. (B) Плотность фосфорилированных ERK и pan-ERK и (C) фосфорилированных p38 и pan p38 нормализовали относительно α-тубулина, повторно зондированного из их соответствующего блота.Показанные результаты представляют собой среднее значение ± S.E.M. (n = 4). Результаты денситометрии были проанализированы с помощью однофакторного дисперсионного анализа, и критерий значимости для всех столбцов был определен с использованием апостериорного критерия Тьюки. Только сравнение между обработанными 166 мМ ранами и кожей было статистически значимым как для B, так и для C. ** p <0,01.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0049215.g006

166 мМ H

₂ O ₂ Отсрочка заживления без увеличения окислительного повреждения

Из наших результатов видно, что 166 мМ H ₂ O ₂ замедляет заживление ран, создавая более протеолитическую среду.Однако имеется мало информации о том, может ли H ₂ O ₂ в высоких концентрациях, таких как 166 мМ, вызывать окислительное повреждение ран. Уровни изопростанов F ₂ в ранах использовали в качестве надежного индикатора перекисного окисления липидов [25]. Уровни изопростанов F ₂ обычно нормализованы относительно арахидоновой кислоты, жирной кислоты-предшественника изопростанов. Однако такая нормализация может быть спорной [26], поэтому мы решили показать уровни F ₂ -isoprostanes и без нормализации против арахидоновой кислоты.Общие уровни изопростанов типа III, IV и VI были суммированы и выражены в расчете на единицу арахидоновой кислоты (фиг. 7A) и на единицу веса ткани (фиг. 7B).

Рис. 7. Ранение увеличивает перекисное окисление липидов и нитратное повреждение, но не карбонилирование белка.

Уровни F _{2 Уровни} -изопростанов в коже и ранах сравнивали путем нормализации относительно арахидоновой кислоты (A) или веса ткани (B). Показанные результаты представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего, n = 5. Раны сравнивали с кожей, используя однофакторный дисперсионный анализ с апостериорным тестом Даннета.Звездочки обозначают уровень значимости по сравнению с кожей. Контроль и H ₂ O ₂ ран также сравнивали друг с другом с использованием двухфакторного дисперсионного анализа, но различия не были статистически значимыми. (C) Уровни арахидоновой кислоты в коже и тканях ран. Показанные результаты представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего, n = 5. Раны сравнивали с кожей, используя однофакторный дисперсионный анализ с апостериорным тестом Даннета. Звездочки обозначают уровень значимости по сравнению с кожей. Контроль и H ₂ O ₂ ран также сравнивали друг с другом с использованием двухфакторного дисперсионного анализа, но различия не были статистически значимыми.(D) Уровни карбонилов белка в ранах сравнивали с неповрежденной кожей и выражали как кратное изменение. Показанные результаты представляют собой среднее кратное изменение ± S.E.M. Не наблюдали разницы в уровнях карбонила белка в контрольных ранах и в обработанных 166 мМ H ₂ O ₂ ранах. (E) Сравнение уровня 3-нитротирозина в коже и ранах. Показанные результаты представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего, n = 5. Уровни 3-нитротирозина в коже сравнивали с контрольными ранами или ранами, обработанными H ₂ O ₂ , и анализировали с помощью однофакторного дисперсионного анализа ANOVA с последующим апостериорным тестом Даннета.Уровни 3-нитротирозина были значительно выше на 6-й день после ранения. Уровни 3-нитротирозина в контроле и ранах, обработанных 166 мМ H ₂ O ₂ , также сравнивали с использованием двухфакторного дисперсионного анализа, и различия не были статистически значимыми. * p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0049215.g007

Как показано на Фигуре 7A, в ране значительно повысились уровни F ₂ -изопростанов через 1 день после ранения как для контроля, так и для H ₂ O ₂ обработанных ран.Повышение содержания изопростанов F ₂ в день 6 H ₂ O ₂ и в день 10 контрольных ран также было статистически значимым по сравнению с неповрежденной кожей. Хотя увеличение изопростанов F ₂ для других временных точек не было статистически значимым, следует отметить, что их 95% доверительные интервалы (не показаны) не перекрываются с доверительными интервалами для интактной кожи. Следовательно, повышение уровня изопростанов F ₂ на 3 и 6 день все еще может быть биологически важным.Уровни изопростанов F ₂ в контроле и ран, обработанных H ₂ O ₂ , также сравнивали с использованием двухфакторного дисперсионного анализа, но различия не были статистически значимыми. Это указывает на то, что нанесенный H ₂ O ₂ не вызывал дополнительного перекисного окисления липидов.

Мы также показали уровень изопростанов F ₂ , нормализованный по массе ткани, вместо арахидоновой кислоты. Результаты показали аналогичную тенденцию к уровням изопростанов F ₂ , нормализованных относительно арахидоновой кислоты, но с большей стандартной ошибкой для всех точек данных (фиг. 7B).Это означает, что нормализация по арахидоновой кислоте может быть важна для учета изменений в тканях. Интересно, что мы также обнаружили, что количество арахидоновой кислоты было выше в ранах по сравнению с неповрежденной кожей, причем разница была статистически значимой между неповрежденной кожей, контрольными ранами 3-го дня и 6-м днем ​​H ₂ O ₂ обработанных ран (Рисунок 7C ). Это повышает вероятность того, что увеличение количества F ₂ -изопростанов может быть затруднено увеличением его предшественника.Однако следует отметить, что увеличение содержания арахидоновой кислоты (увеличенное с 3 дня) отстает от увеличения F ₂ -изопростанов (увеличенное с 1 дня). Поэтому мы полагаем, что увеличение изопростанов F ₂ не может быть просто связано с повышением уровней исходного субстрата. Мы также сравнили уровни арахидоновой кислоты в контроле и ранах, обработанных H ₂ O ₂ , с использованием двухфакторного дисперсионного анализа и не обнаружили существенных различий.

АФК

также может вызывать окисление белков, что можно оценить путем измерения уровней присутствующих карбонилов белка [27].Для измерения карбонилов белка использовали метод слот-блоттинга, и плотность полос от ран сравнивали с плотностью неповрежденной кожи и выражали как кратное изменение (фигура 7D). Было обнаружено, что уровни карбонилов белка, присутствующие в ранах, были сопоставимы с уровнем в неповрежденной коже. 166 мМ H ₂ O ₂ также не вызывали какого-либо дальнейшего повышения уровней карбонилов белка по сравнению с контрольными ранами.

Мы также оценили уровень активных форм азота в ранах, измерив уровни 3-нитротирозина, биомаркера повреждения нитратом [28].Было также обнаружено, что рана увеличивает уровень 3-нитротирозина (рис. 7E). В отличие от изопростанов F ₂ , было обнаружено, что уровни 3-нитротирозина максимально увеличиваются на 6-й день вместо 1-го дня. H ₂ O ₂ также не увеличивает нитратное повреждение.

Обсуждение

Ранее сообщалось, что местное применение 50 мМ H ₂ O ₂ может способствовать закрытию раны в мышиной модели заживления ран одновременно с усилением ангиогенеза.Однако было обнаружено, что 3% H ₂ O ₂ (980 мМ) задерживает заживление [3]. 3% H ₂ O ₂ также было показано, замедляет заживление на модели заживления ран на свиньях вместе с уменьшением толщины дермы [29].

В наших результатах 10 мМ H ₂ O ₂ способствовали закрытию раны и ангиогенезу, тогда как 166 мМ H ₂ O ₂ (0,5%) вызывали уменьшение образования соединительной ткани и замедление закрытия ран. Однако в предыдущих исследованиях не изучалось влияние H ₂ O ₂ на уровень окислительного повреждения.В нашем исследовании мы обнаружили, что высокие концентрации H ₂ O ₂ замедляют заживление ран без увеличения окислительного и нитративного повреждения. Это означает, что H ₂ O ₂ может вызывать плохое заживление другими механизмами, помимо окисления этих биологических субстратов.

Мы обнаружили, что возможный механизм, с помощью которого H ₂ O ₂ может задерживать заживление, заключается в уменьшении образования соединительной ткани, возможно, за счет увеличения уровней ММП.Было высказано предположение, что чрезмерный протеолиз может быть причиной плохого заживления хронических ран [30], [31]. В нашем исследовании мы наблюдали статистически значимое увеличение уровней MMP-8 и меньшее, несущественное увеличение MMP-9 для ран, обработанных H ₂ O ₂ . MMP-8 является преобладающей коллагеназой в острых и хронических ранах [32], тогда как MMP-9 является наиболее распространенной желатиназой в хронических ранах [31]. MMP-8 расщепляет тройной спиральный коллаген на определенных участках, что приводит к автоденатурации коллагена до желатина, который в дальнейшем может расщепляться желатиназами, такими как MMP-9 [33], [34].Как и ожидалось, избыточная экспрессия MMP-8 или -9 приводит к плохому заживлению [35], [36]. Однако также было показано, что истощение MMP-8 или -9 задерживает заживление [37], [38]. Похоже, что MMP-8 и -9 должны присутствовать на оптимальном уровне в течение нужного периода времени для достижения эффективного заживления, и что местное применение H ₂ O ₂ может нарушить физиологический баланс.

ТИМП-1 образует комплекс 1-1 с металлопротеиназами, подавляя их активность [39].Было замечено, что хронические раны имеют тенденцию иметь более низкие уровни TIMP-1 и что это может быть причиной повышенного протеолиза в хронических ранах [31]. Однако мы не наблюдали различий в уровнях ТИМП-1 между ранами, обработанными разными концентрациями H ₂ O ₂ в нашей модели.

Существует несколько возможных причин повышенной инфильтрации нейтрофилов, наблюдаемой в ранах, обработанных 166 мМ H ₂ O ₂ . H ₂ O ₂ может действовать как хемоаттрактант для нейтрофилов.Было показано, что ранение у рыбок данио индуцирует продукцию H ₂ O ₂ , который, в свою очередь, привлекает нейтрофилы [1]. Мы показали, что H ₂ O ₂ увеличивает фосфорилирование ERK1 / 2, которое, как недавно было показано, играет важную роль в индуцированном H ₂ O ₂ хемотаксисе нейтрофилов [40]. Таким образом, кажется вероятным, что повторное нанесение хемоаттрактанта нейтрофилов на раны приведет к усилению воспаления.

Другой возможный механизм увеличения инфильтрации нейтрофилов — высвобождение молекул молекулярного паттерна, связанного с повреждениями (DAMP).Поврежденные клетки могут выделять различные молекулы, такие как ядерный белок HMGB1 и митохондриальную ДНК, которые не только привлекают нейтрофилы, но и активируют их [41]. Было показано, что H ₂ O ₂ вызывает высвобождение этих сигналов опасности макрофагами и моноцитами в моделях in vitro [42].

Также возможно, что H ₂ O ₂ может увеличивать продукцию хемокинов, которые могут привлекать нейтрофилы. Мы исследовали эту возможность, измеряя CXCL1 (KC), CXCL5 (LIX), CCL2 (MCP-1) и CCL3 (MIP-1α) с помощью мультиплексного метода ELISA, но обнаружили, что при ранении сильно увеличивается продукция этих хемокинов, H ₂ O ₂ не изменяет профили секреции (Рисунок S5).Однако недостатком этого метода является невозможность определения биоактивности этих хемокинов. Интересно, что MMP-8, как было показано, также расщепляет CXCL-8 и его мышиный гомолог CXCL5, и полученные фрагменты проявляют более сильные хемотатические свойства нейтрофилов [43]. Это может быть еще одним возможным механизмом повышенной инфильтрации нейтрофилов, которую мы наблюдали в ранах, обработанных H ₂ O ₂ .

Чрезмерная инфильтрация нейтрофилов может вызвать повреждение тканей, продуцируя ROS и различные протеазы.Поэтому было высказано предположение, что чрезмерная инфильтрация нейтрофилов может быть причиной плохого заживления ран [44]. Однако проблема кажется сложной. Например, было показано, что в ранах мышей с диабетом, лишенных лептина, наблюдается стойкая инфильтрация нейтрофилов. Системное введение лептина улучшает заживление и снижает инфильтрацию нейтрофилов, но не макрофагов у этих мышей [45]. С другой стороны, местное применение GM-CSF улучшило закрытие ран и неоваскуляризацию у мышей с индуцированным стрептозоцином диабетом, моделью диабета I типа.Однако это улучшенное заживление также было связано с увеличением инфильтрации нейтрофилов и макрофагов [46]. Истощение нейтрофилов по разным показателям ускоряет [47] или задерживает заживление [48] различными группами. Возможно, эффекты устойчивой нейтрофильной инфильтрации различаются в зависимости от модели заживления ран.

Интересно, что хотя мы наблюдали повышенную инфильтрацию нейтрофилов, мы не наблюдали повышенного окислительного повреждения с точки зрения перекисного окисления липидов и нитрования белков.Это означает, что нейтрофилы могли не продуцировать чрезмерное количество АФК или повышение АФК эффективно улучшалось системой эндогенной антиоксидантной защиты. С другой стороны, мы наблюдали повышенный уровень ММП-8, который преимущественно продуцируется нейтрофилами [19].

Мы ранее продемонстрировали, что H ₂ O ₂ индуцирует стойкое фосфорилирование ERK1 / 2 и p38 в модели культуры клеток кератиноцитов [24]. Мы также показали, что стойкое фосфорилирование ERK1 / 2 необходимо для его пролиферативного действия.Однако мы обнаружили, что H ₂ O ₂ не индуцирует стойкое фосфорилирование ERK1 / 2 и p38 в наших ранах in vivo . По-видимому, экзогенно примененный H ₂ O ₂ оказывает различное действие на клетки в условиях in vivo, и , in vitro, .

Насколько нам известно, это первое исследование, в котором систематически отслеживаются изменения уровней окислительного повреждения в процессе заживления. Уровни перекисного окисления липидов были максимальными через 1 день после ранения, но снижались и стабилизировались на протяжении всего периода заживления.Было обнаружено, что изопростаны F ₂ являются отличными маркерами окислительного повреждения при заживлении ран. Их уровни были низкими, но обнаруживались на неповрежденной коже, но увеличивались в 9 раз через 1 день после ранения. Также было замечено, что уровни арахидоновой кислоты также увеличиваются по мере заживления раны. Это согласуется с сообщениями о более высоких уровнях арахидоновой кислоты наряду с другими полиненасыщенными жирными кислотами в гипертрофических рубцах по сравнению с нормальной кожей [49]. Эти изменения могут быть связаны с изменениями биосинтеза жирных кислот в кератиноцитах и ​​фибробластах в ответ на сигналы воспаления и пролиферации.Они также могут быть связаны с изменениями клеточного состава ран, поскольку воспалительные клетки инфильтрируют раны, и разные типы клеток могут быть по-разному чувствительны к H ₂ O ₂ [50]. Потребуются дальнейшие исследования, чтобы определить причину изменения состава жирных кислот во время заживления ран.

Уровни нитратного повреждения были максимальными на 6-й день после ранения с увеличением в 2 раза. С другой стороны, нам не удалось обнаружить никаких изменений карбонила белка.Похоже, что изопростаны F ₂ являются более чувствительными и чувствительными биомаркерами окислительного повреждения, чем маркеры окисленных белков, поэтому мы рекомендуем использовать изопростаны F ₂ для использования в будущих исследованиях заживления ран.

В соответствии с предыдущими исследованиями мы обнаружили, что раны проявляют двухфазный ответ на местное нанесение H ₂ O ₂ , где более низкие концентрации его способствуют заживлению, а более высокие концентрации задерживают заживление.Однако задержка заживления не связана с повышенным перекисным окислением липидов, окислением белков или нитрационным стрессом, как измерено с помощью F ₂ -изопростанов, карбонилов белков и 3-нитротирозинов.

Дополнительная информация

Рисунок S1.

H ₂ O ₂ не влиял на уровни TIMP-1 в ранах. Ткани раны на 6 день лизировали и количество TIMP-1 измеряли с помощью вестерн-блоттинга. (A) Репрезентативный блот TIMP-1. (B) Денситометрический анализ обеих полос, нормализованных относительно α-тубулина.Показанные результаты представляют собой среднее значение ± S.E.M. (n = 4). Результаты были проанализированы с использованием однофакторного дисперсионного анализа, и различия не были значительными. (р = 0,35)

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0049215.s001

(TIF)

Рисунок S2.

166 мМ H ₂ O ₂ повышенная инфильтрация нейтрофилов, но 10 мМ H ₂ O ₂ нет. Представленные результаты являются средними ± S.E.M, n = 6–7. Показан репрезентативный раздел каждого лечения. ES — Эшар; HE — гиперпролиферирующий эпидермис; НД — неодермис.* р <0,05

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0049215.s002

(TIF)

Рисунок S4.

Фосфорилирование ERK и p38 ослабляется на 4 часа. (A) Репрезентативные блоты лизата тканей раны, собранные через 30 мин после ранения. Кожа обозначает кожу нераненых животных, тогда как контроль относится к ранам, обработанным PBS. (B) Плотность фосфорилированных ERK и pan-ERK и (C) фосфорилированных p38 и pan p38 нормализовали относительно α-тубулина. Показанные результаты представляют собой среднее значение ± S.Э.М. (n = 4). Результаты денситометрии были проанализированы с помощью однофакторного дисперсионного анализа и не были статистически значимыми.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0049215.s004

(TIF)

Рисунок S5.

Ранение увеличивает уровни хемокинов в ранах, но 166 мМ H ₂ O ₂ не увеличивает его. Ткани раны на 6-й день лизировали и анализировали с использованием метода матрицы суспензий на основе шариков. Кожа обозначала кожу, полученную от неповрежденных животных. (А) CXCL1 а.к.а. KC, (B) CXCL5, также известное как LIX, (C) CCL2, также известное как MCP-1 и (D) MIP-1α, сильно активировались после ранения, но на него не влияла обработка 166 мМ h3O2. Показанные результаты представляют собой среднее кратное изменение ± S.E.M. п = 5

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0049215.s005

(TIF)

Благодарности

Мы благодарим профессоров Фан Тоан Тханг и Сит Ким Пинг за содержательные обсуждения и доктора Тан Сун Ю за его помощь на начальном этапе проекта.

Вклад авторов

Задумал и спроектировал эксперименты: AEKL YTW. Проведены эксперименты: AEKL YTW RH. Проанализированы данные: AEKL YTW RH. Предоставленные реагенты / материалы / инструменты анализа: MW TD WTN. Написал статью: AEKL YTW BH.

Ссылки

1. 1. Niethammer P, Grabher C, Look AT, Mitchison TJ (2009) Градиент перекиси водорода в масштабе ткани обеспечивает быстрое обнаружение ран у рыбок данио. Nature 459: 996–999.
2. 2. Rieger S, Sagasti A (2011) Перекись водорода способствует вызванной травмой регенерации периферических сенсорных аксонов в коже рыбок данио.PLoS Biol 9: e1000621.
3. 3. Рой С., Ханна С., Наллу К., Хант Т.К., Сен С.К. (2006) Заживление кожных ран подлежит окислительно-восстановительному контролю. Мол Тер 13: 211–220.
4. 4. Охха Н., Рой С., Хе Дж., Бисвас С., Велаютам М. и др. (2008) Оценка окислительно-восстановительной среды в области раны и значение Rac2 в заживлении кожи. Free Radic Biol Med 44: 682–691.
5. 5. Schreml S, Landthaler M, Schaferling M, Babilas P (2011) Новая звезда на H (2) O (2) -зон заживления ран? Exp Dermatol 20: 229–231.
6. 6. Арул В., Масиламони Дж. Г., Джесудасон Е. П., Джаджи П. Дж., Инаятуллах М. и др .. (2011) Коллагеновые матрицы, содержащие глюкозооксидазу, для заживления кожных ран в моделях диабетических крыс: биохимическое исследование. J Biomater Appl.
7. 7. Benhanifia MB, Boukraa L, Hammoudi SM, Sulaiman SA, Manivannan L (2011) Последние патенты на местное применение меда при лечении ран и ожогов. Недавние открытия Pat Inflamm Allergy Drug Discov 5: 81–86.
8. 8. Kwakman PH, Te Velde AA, de Boer L, Vandenbroucke-Grauls CM, Zaat SA (2011) Два основных лекарственных меда имеют разные механизмы бактерицидной активности.PLoS One 6: e17709.
9. 9. Шафер М., Вернер С. (2008) Окислительный стресс при нормальном и поврежденном заживлении ран. Pharmacol Res 58: 165–171.
10. 10. Yeoh-Ellerton S, Stacey MC (2003) Уровни железа и 8-изопростана в острых и хронических ранах. J Invest Dermatol 121: 918–925.
11. 11. Мозли Р., Хилтон Дж. Р., Уоддингтон Р. Дж., Хардинг К. Г., Стивенс П. и др. (2004) Сравнение профилей биомаркеров оксидативного стресса в условиях острой и хронической раны.Заживление и регенерация ран 12: 419–429.
12. 12. Шукла А., Расик А.М., Патнаик Г.К. (1997) Истощение восстановленного глутатиона, аскорбиновой кислоты, витамина Е и ферментов антиоксидантной защиты в заживающей кожной ране. Free Radic Res 26: 93–101.
13. 13. Расик А.М., Шукла А. (2000) Антиоксидантный статус при отсроченном заживлении ран. Int J Exp Pathol 81: 257–263.
14. 14. Halliwell B, Gutteridge JMC (2007) Свободные радикалы в биологии и медицине. Оксфорд; Нью-Йорк: Издательство Оксфордского университета.851 с. п.
15. 15. Kmin A, Schafer M, Epp N, Bugnon P, Born-Berclaz C и др. (2007) Пероксиредоксин 6 необходим для целостности кровеносных сосудов в раненой коже. J Cell Biol 179: 747–760.
16. 16. Дженнер А., Рен М., Раджендран Р., Нинг П., Хуат Б.Т. и др. (2007) Добавка цинка ингибирует перекисное окисление липидов и развитие атеросклероза у кроликов, получавших диету с высоким содержанием холестерина. Free Radic Biol Med 42: 559–566.
17. 17. Lee CY, Huang SH, Jenner AM, Halliwell B (2008) Измерение F2-изопростанов, продуктов гидроксиэйкозатетраеновой кислоты и оксистеринов из одного образца плазмы.Free Radic Biol Med 44: 1314–1322.
18. 18. Goldner J (1938) Модификация техники трихрома Массона для рутинных лабораторных целей. Am J Pathol 14: 237–243.
19. 19. Hasty KA, Hibbs MS, Kang AH, Mainardi CL (1986) Секретированные формы нейтрофильной коллагеназы человека. J Biol Chem 261: 5645–5650.
20. 20. Hanemaaijer R, Sorsa T., Konttinen YT, Ding Y, Sutinen M, et al. (1997) Матриксная металлопротеиназа-8 экспрессируется в ревматоидных синовиальных фибробластах и ​​эндотелиальных клетках.Регулирование фактора некроза опухоли альфа и доксициклином. J Biol Chem 272: 31504–31509.
21. 21. Ван X, Юнг Дж., Асахи М., Чван В., Руссо Л. и др. (2000) Влияние нокаута гена матриксной металлопротеиназы-9 на морфологические и двигательные исходы после черепно-мозговой травмы. J Neurosci 20: 7037–7042.
22. 22. Kirk TZ, Mark ME, Chua CC, Chua BH, Mayes MD (1995) Миофибробласты из кожи склеродермии синтезируют повышенные уровни коллагена и тканевого ингибитора металлопротеиназы (TIMP-1) с двумя формами TIMP-1.J Biol Chem 270: 3423–3428.
23. 23. Agaiby AD, Dyson M (1999) Динамика иммуно-воспалительных клеток во время заживления кожных ран. J Anat 195 (Pt 4): 531–542.
24. 24. Loo AE, Ho R, Halliwell B (2011) Механизм миграции кератиноцитов, вызванной перекисью водорода, в модели царапины. Free Radic Biol Med 51: 884–892.
25. 25. Морроу Дж. Д., Хилл К. Э., Бурк Р. Ф., Наммор Т. М., Бадр К. Ф. и др. (1990) Ряд соединений, подобных простагландину F2, продуцируется in vivo у человека по нециклооксигеназному механизму, катализируемому свободными радикалами.Proc Natl Acad Sci U S A 87: 9383–9387.
26. 26. Halliwell B, Lee CY (2009) Использование изопростанов в качестве биомаркеров окислительного стресса: некоторые редко рассматриваемые вопросы. Антиоксидный окислительно-восстановительный сигнал 13: 145–156.
27. 27. Судзуки Ю.Дж., Карини М., Баттерфилд Д.А. (2010) Карбонилирование белков. Антиоксидный окислительно-восстановительный сигнал 12: 323–325.
28. 28. Beckman JS, Koppenol WH (1996) Оксид азота, супероксид и пероксинитрит: хорошее, плохое и уродливое. Am J Physiol 271: C1424–1437.
29. 29. Беннетт Л.Л., Розенблюм Р.С., Перлов С., Дэвидсон Дж. М., Бартон Р. М. и др. (2001) Сравнение in vivo местных агентов для заживления ран. Пласт Реконстр Сург 108: 675–687.
30. 30. Лобманн Р., Амброш А., Шульц Г., Вальдманн К., Шивек С. и др. (2002) Экспрессия матриксных металлопротеиназ и их ингибиторов в ранах диабетических и недиабетических пациентов. Диабетология 45: 1011–1016.
31. 31. Trengove NJ, Stacey MC, MacAuley S, Bennett N, Gibson J, et al.(1999) Анализ окружающей среды острой и хронической раны: роль протеаз и их ингибиторов. Регенерация восстановления ран 7: 442–452.
32. 32. Nwomeh BC, Liang HX, Cohen IK, Yager DR (1999) MMP-8 является преобладающей коллагеназой в заживляющих ранах и длительно незаживающих язвах. J Surg Res 81: 189–195.
33. 33. Миллер Э.Дж., Харрис ЭД-младший, Чанг Э., Финч Дж. Э. мл., Маккроскери П.А. и др. (1976) Расщепление коллагенов типа II и III коллагеназой млекопитающих: сайт расщепления и первичная структура в Nh3-концевой части меньшего фрагмента, высвобождаемого из обоих коллагенов.Биохимия 15: 787–792.
34. 34. Murphy G, McAlpine CG, Poll CT, Reynolds JJ (1985) Очистка и характеристика костной металлопротеиназы, которая разрушает желатин и коллаген типов IV и V. Biochim Biophys Acta 831: 49–58.
35. 35. Danielsen PL, Holst AV, Maltesen HR, Bassi MR, Holst PJ, et al. (2011) Сверхэкспрессия матричной металлопротеиназы-8 препятствует правильному восстановлению тканей. Хирургия 150: 897–906.
36. 36. Reiss MJ, Han YP, Garcia E, Goldberg M, Yu H и др.(2010) Матричная металлопротеиназа-9 задерживает заживление ран на мышиной модели ран. Хирургия 147: 295–302.
37. 37. Kyriakides TR, Wulsin D, Skokos EA, Fleckman P, Pirrone A, et al. (2009) У мышей, у которых отсутствует матриксная металлопротеиназа-9, наблюдается замедленное заживление ран, связанное с замедленной реэпителизацией и нарушенным фибриллогенезом коллагена. Матрица Биол 28: 65–73.
38. 38. Гутьеррес-Фернандес А., Инада М., Балбин М., Фуэйо А., Питиот А.С. и др. (2007) Усиленное воспаление замедляет заживление ран у мышей с дефицитом коллагеназы-2 (MMP-8).FASEB J 21: 2580–2591.
39. 39. Мерфи Г., Хубрехтс А., Кокетт М.И., Уильямсон Р.А., О’Ши М. и др. (1991) N-концевой домен тканевого ингибитора металлопротеиназ сохраняет активность ингибирования металлопротеиназ. Биохимия 30: 8097–8102.
40. 40. Yoo SK, Starnes TW, Deng Q, Huttenlocher A (2011) Lyn — это окислительно-восстановительный датчик, который опосредует привлечение лейкоцитов к ране in vivo. Природа 480: 109–112.
41. 41. Prince LR, Whyte MK, Sabroe I, Parker LC (2011) Роль TLR в активации нейтрофилов.Curr Opin Pharmacol 11: 397–403.
42. 42. Тан Д., Ши Й, Кан Р., Ли Т., Сяо В. и др. (2007) Перекись водорода стимулирует макрофаги и моноциты к активному высвобождению HMGB1. J Leukoc Biol 81: 741–747.
43. 43. Tester AM, Cox JH, Connor AR, Starr AE, Dean RA и др. (2007) Чувствительность к ЛПС и хемотаксис нейтрофилов in vivo требуют активности PMN MMP-8. PLoS One 2: e312.
44. 44. Брубакер А.Л., Шнайдер Д.Ф., Ковач Э.Дж. (2011) Нейтрофилы и естественные Т-клетки-киллеры как негативные регуляторы заживления ран.Эксперт Рев Дерматол 6: 5–8.
45. 45. Goren I, Kampfer H, Podda M, Pfeilschifter J, Frank S (2003) Лептин и воспаление ран у диабетических мышей ob / ob: дифференциальная регуляция притока нейтрофилов и макрофагов и потенциальная роль парши как приемника воспалительных клеток и медиаторов . Диабет 52: 2821–2832.
46. 46. Fang Y, Shen J, Yao M, Beagley KW, Hambly BD и др. (2009) Гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор улучшает заживление ран при диабете за счет активации провоспалительных цитокинов.Br J Dermatol 162: 478–486.
47. 47. Дови JV, He LK, DiPietro LA (2003) Ускоренное закрытие ран у мышей с истощением нейтрофилов. J Leukoc Biol 73: 448–455.
48. 48. Nishio N, Okawa Y, Sakurai H, Isobe K (2008) Истощение нейтрофилов задерживает заживление ран у старых мышей. Возраст (Дордр) 30: 11–19.
49. 49. Номура Т., Тераши Х., Омори М., Сакураи А., Сунагава Т. и др. (2007) Липидный анализ нормальной дермы и гипертрофических рубцов. Восстановление заживления ран 15: 833–837.
50. 50. Loo AE, Halliwell B (2012) Эффекты перекиси водорода в модели совместного культивирования кератиноцитов и фибробластов при заживлении ран. Biochem Biophys Res Commun 423: 253–258.

Почему перекись водорода шипит на резках?

Когда вы наносите перекись водорода на порез, эта белая шипучая пена на самом деле является признаком того, что раствор убивает не только здоровые клетки, но и бактерии.

Перекись водорода (h3O2), соединение, состоящее из двух атомов водорода и двух атомов кислорода, начинает распадаться, как только соприкасается с кровью, создавая жгучие шипения.Это связано с тем, что кровь и большинство живых клеток содержат фермент каталазу, который атакует перекись водорода и превращает ее в воду (h3O) и кислород (O2).

Перекись водорода используется в качестве антисептика с 1920-х годов, потому что она убивает клетки бактерий, разрушая их клеточные стенки. Этот процесс называется окислением, потому что атомы кислорода соединения невероятно реактивны и притягивают или крадут электроны. С меньшим количеством электронов стенки бактериальных клеток повреждаются или даже полностью разрушаются.

К сожалению, окисление перекиси водорода также разрушает здоровые клетки кожи. Вот почему многие врачи и дерматологи в настоящее время не рекомендуют использовать перекись водорода для очистки ран, поскольку было обнаружено, что она замедляет процесс заживления и, возможно, усугубляет рубцевание, убивая здоровые клетки, окружающие порез.

Несмотря на негативное воздействие на здоровые клетки, клетки нашего тела естественным образом вырабатывают перекись водорода, когда мы перерабатываем пищу и превращаем ее в энергию. Так как же клетка может производить что-то, что разрушает ее собственные стенки? Вот где вступает каталаза: когда клетка создает перекись водорода, она хранит его в специализированных органеллах клетки, называемых пероксисомами, которые содержат каталазу, разрушающую перекись водорода.Внутри пероксисомы перекись водорода разлагается и превращается в безвредную воду и газообразный кислород.

Каталаза присутствует в клетках почти всех живых организмов, поэтому в следующий раз, когда вы захотите развлечь детей забавным научным трюком, налейте перекись водорода на половину сырого картофеля и наблюдайте, как он шипит.

Есть вопросы? Отправьте нам электронное письмо, и мы его взломаем. Следуйте за Реми Мелиной на Twitter @RemyMelina

(PDF) Перекись водорода и заживление ран

8.Шактер Э., Бичем Э. Дж., Кови Дж. М. и др. Активированные нейтрофилы

вызывают длительное повреждение ДНК в соседних клетках. Carcino-

генезис 1988; 9: 2297–304.

9. Schraufstatter I, Hyslop PA, Jackson JH, Cochrane CG. Оксидант-

индуцировал повреждение ДНК клеток-мишеней. Дж. Клин Инвест 1988; 82:

1040–50.

10. Волк Т., Иоаннидис И., Хенсель М. и др. Повреждение эндотелия, вызванное

оксидом азота: синергизм с активными формами кислорода. Biochem

Biophys Res Commun 1995; 213: 196–203.

11. Ройкинд М., Домингес-Розалес Дж. А., Ньето Н., Гринвел П. Роль перекиси водорода

и окислительного стресса в реакциях заживления. Ячейка

Mol Life Sci 2002; 59: 1872–91.

12. Shigematsu M, Kitajima M, Ogawa K, et al. Действие растворов перекиси водорода

на искусственные имплантаты тазобедренного сустава. J Артропластика

2005; 20: 640–5.

13. Lineaweaver W., Howard R, Soucy D, et al. Актуальные противомикробные

токсичность. Arch Surg 1985; 120: 267–70.

14. Маккенна П.Дж., Лер Г.С., Лейст П., Веллинг РЭ. Антисептик эффективный —

с сохранением фибробластов. Ann Plast Surg 1991; 27: 265–8.

15. Kim JC. В: Унгер В., Шапиро Р., редакторы. Пероксид водорода.

Трансплантация волос. 4-е изд. Нью-Йорк: Деккер; 2004. с. 286.

16. Beehner M. Иммерсионное исследование в перекиси водорода. Волосы T Forum Int 2005;

15: 6.

17. Гинзбург А., Перес-Меза Д. Выживание фолликулярных единиц после 24

и 48 часов вне тела.9-й Ежегодный семинар по хирургии в Орландо

, 2003 г.

18. Перес Меза Д., Ливитт М., Марко Баруско. Использование аутологичных факторов роста

в качестве решения для хранения волосяных трансплантатов.

13-е Ежегодное Международное общество хирургии восстановления волос.

Сидней, Австралия, 2005.

19. Перес Меза Д., Нидбальски Р. Использование раствора кастодиола для сохранения волосяных трансплантатов

. 14-е ежегодное собрание ISHRS, Сан

Диего, Калифорния, 2006 г.

20. Певец А.Дж., Кларк Р.А. Заживление кожных ран. N Engl J Med

1999; 341: 738–46.

21. Мартин П. Заживление ран — стремление к идеальной регенерации кожи.

Наука 1997; 276: 75–81.

22. Роулат У. Заживление внутриутробных ран у 20-недельного плода человека.

Арка Вирхова Патол Анат Хистол 1979; 381: 353–61.

23. Longaker MT, Whitby DJ, Adzick NS, et al. Исследования плода

заживление ран, VI. Раны плода во втором и начале третьего триместра

демонстрируют быстрое отложение коллагена без образования рубцов.

J Pediatr Surg 1990; 25: 63–8.

24. Чин Г.С., Стельницки Э.Дж., Гиттес Г.К., Лонгакер М.Т. Характеристики

заживления ран плода. Нью-Йорк: Марсель Деккер Инк .; 2000.

с. 239–62.

25. Эрлих HP. Учет коллагена при рубцевании и регенеративном восстановлении

. Нью-Йорк: Марсель Деккер Инк .; 2000.

26. Krummel TM, Nelson JM, Diegelmann RF, et al. Реакция плода на травму

у кролика. J Pediatr Surg 1987; 22: 640–4.

27. Morykwas MJ, Ditesheim JA, Ledbetter MS, et al. Monodelphis

domesticus: модель раннего заживления ран. Ann

Plast Surg 1991; 27: 327–31.

28. Мартин П., Д’Суза Д., Мартин Дж. И др. Заживление ран в PU.1 null

Восстановление тканей мыши не зависит от воспалительных клеток.

Curr Biol 2003; 13: 1122–8.

29. Wilgus TA, Vodovotz Y, Vittandini E, et al. Уменьшение образования рубцов

в полнослойных ранах с помощью местного лечения целекоксибом —

мент.Восстановление заживления ран 2003; 11: 25–34.

30. Хенсон П.М., Джонстон Р. Б. Младший. Повреждение ткани при воспалении.

Окислители, протеиназы и катионные белки. Дж. Клин Инвест

1987; 79: 669–74.

31. Torrecillas G, Boyano-Adanez MC, Medina J, et al. Роль перекиси водорода

в сократительной реакции на ангиотензин II.

Mol Pharmacol 2001; 59: 104–12.

32. Перес-Меза Д. Заживление ран и реваскуляризация волосяного трансплантата.

Роль факторов роста.В: Трансплантация волос, Unger W,

Shapiro R., ред. 4-е издание. Нью-Йорк: Деккер; 2004. с. 287–94.

33. Barcellos-Hoff MH, Dix TA. Редокс-опосредованная активация латентного трансформирующего фактора роста-бета

1. Mol Endocrinol 1996;

10: 1077–83.

34. Park SK, Kim J, Seomun Y, et al. Пероксид водорода — новый

индуктор фактора роста соединительной ткани. Biochem Biophys Res

Commun 2001; 284: 966–71.

35.Гарсия-Тревихано Э. Р., Ирабуру М. Дж., Фонтана Л. и др. Трансформация фактора роста бета 1

индуцирует экспрессию мРНК коллагена альфа 1 (I) про-

по механизму

, зависимому от перекиси водорода / EBPbeta, в звездчатых клетках печени крыс. Гепатология 1999; 29: 960.

36. Чо М., Хант Т.К., Хуссейн М.З. Перекись водорода

стимулирует высвобождение фактора роста эндотелия сосудов макрофагами. Am J

Physiol Heart Circ Physiol 2001; 280: h3357–63.