Антитела к стрептококку: Антистрептолизин О

Содержание

Сдать анализ на АСЛ-О (АСЛО, Антистрептолизин–О, ASO)

Метод определения Иммунотурбидиметрия.

Исследуемый материал Сыворотка крови

Доступен выезд на дом

Онлайн-регистрация

Синонимы: Антистрептолизин О; АСЛО, АСЛ О. 

ASO; ASLO; AntiStrep; Antistreptolysin O Titer.

Краткая характеристика определяемого аналита Антистрептолизин–О 

Маркёр наличия стрептококковой инфекции в организме. АСЛ-О представляет собой антитела к антигену (стрептолизину) бета-гемолитического стрептококка группы А. Является лабораторным критерием ревматизма. 

С какой целью определяют уровень АСЛ-О в крови 

Исследование АСЛО (антител к стрептолизину О бета-гемолитического стрептококка группы А) в сыворотке крови применяют в диагностике осложнений, которые могут быть связаны с недавней стрептококковой инфекцией, таких как ревматизм, гломерулонефрит, миокардит.  

Что может повлиять на результат теста «АСЛ-О» 

Повышение АСЛО свидетельствует о сенсибилизации организма к стрептококковым антигенам. В период реконвалесценции показатель снижается по сравнению с острым периодом, поэтому может использоваться для наблюдения за динамикой течения, оценки степени активности ревматического процесса. 

Максимальную диагностическую и прогностическую ценность имеет серийное исследование (с интервалом около одной недели). Однократное исследование на АСЛ-О имеет низкую информативность. АСЛ-О применяется для дифференциальной диагностики ревматизма и ревматоидного артрита (во втором случае степень повышения АСЛ-О значительно меньше). Титр АСЛ-О может быть повышен и у здоровых носителей стрептококка.

«Здоровым людям витамин D нужно контролировать при сонливости и апатии». Ревматологи ответили на вопросы

На вопросы читателей портала «Здоровые люди» и TUT.BY о диагностике и лечении ревматических заболеваний ответили Ирина Чижевская, главный внештатный детский кардиоревматолог Минздрава, заведующая кафедрой педиатрии БелМАПО, к. м. н., и Наталья Мартусевич, главный внештатный ревматолог Минздрава, доцент кафедры кардиологии и внутренних болезней БГМУ, к. м. н. Начало онлайн-конференции тут.

Ирина Чижевская и Наталья Мартусевич. Фото: портал «Здоровые люди»

Удаление миндалин не избавляет от стрептококка

— У ребенка шести лет на протяжении последних двух лет повышен антистрептолизин-О (сейчас — 406, варьировался от 370 до 450). УЗИ сердца показало асимметрию створок аортального клапана без нарушения гемодинамики. С-реактивный белок, ревматоидный фактор, креатинфосфокиназа и лактатдегидрогеназа в норме. Немного понижен витамин D — 27. С чем связан повышенный более чем в два раза АСЛ-О и нужно ли какое-то дополнительное обследование?

Ирина Чижевская: «Повышение АСЛ-О выше нормы говорит о том, что у ребенка был контакт со стрептококком. Поскольку на протяжении двух лет цифры показателя примерно на одном уровне, значит, инфекция была давно. С таким уровнем АСЛ-О делать ничего не нужно. Если он будет нарастать в динамике в 2−3 раза, тогда необходимо обратиться к кардиоревматологу, чтобы определить, не развился ли у ребенка ревматизм или другие осложнения. Асимметрия створок аортального клапана не является признаком ревматизма, это признак дисплазии соединительной ткани сердца. Витамин Д не имеет отношения к антистрептолизину О и асимметрии створок аортального клапана. Дополнительные обследования не требуются.

Для спокойствия можно сдать мазок из зева на бета-гемолитический стрептококк. При его наличии назначается антибактериальная терапия».

— Парню 17 лет. После перенесенной ангины в 6 лет в анализе крови показатель АСЛ-О от 1000 до 2154ме/мл., ревмофактор менее 10, СРБ 1,7. Курсы бициллина, ретарпена, удаление миндалин состояние не изменили — показатель снижается временно и в норму не приходил. Сердце, почки в порядке. После курсов антибиотиков начинал больше болеть ОРИ. В итоге просто оставили ребенка в покое и раз в год делаем УЗИ сердца. Есть ли другие методы (кроме антибиотиков) борьбы с таким уровнем АСЛ-О и стоит ли это делать?

Ирина Чижевская: «Мы лечим заболевание, а не анализы! АСЛ-О — это антитела к стрептококку. Удаление миндалин не избавляет нас от стрептококка, так как он локализуется в лимфоидной ткани, которая есть во всем организме. Принимать решение об удалении миндалин необходимо в случае декомпенсированного хронического тонзиллита, когда имеются рубцовые изменения на миндалинах, в их лакунах постоянно присутствуют гнойные пробки, отмечаются частые обострения тонзиллита. У вас цифры АСЛ-О держатся на одном уровне, поэтому не вижу смысла в продолжении терапии бициллином. Правильно, что оставили ребенка в покое, просто продолжайте контролировать сердце, делая УЗИ раз в год. Сегодня уже известно, что АСЛ-О повышается не только по причине стрептококка, но и по причине микст-инфекции, которая держит иммунную систему в напряжении.

По поводу других методов борьбы со стрептококком (но не с уровнем АСЛ-О) могу предложить местное использование бактериофагов — стрептококкового или поливалентного (против нескольких микробов). Например, „Секстафаг“ — бактериофаг против шести микробов: стафилококки, стрептококки, патогенные кишечные и синегнойные бактерии, протей и клебсиелла».

— Моему сыну 14 лет. Пару лет назад начал сильно болеть тазобедренный сустав, не мог ходить. Пролежал месяц в больнице. В этом году начал болеть уже другой сустав. Сдали анализы, по словам врача, отклонение незначительное. Назначений никаких нет. Что посоветуете?

Ирина Чижевская: «Нужно углубленно обследовать ребенка. Как минимум сделать рентген и УЗИ тазобедренных суставов, а если будут показания — и МРТ. Поэтому обязательно сходите к детскому ревматологу».

Фото: pixabay.com

— Дочери 19 лет. Последние 5 лет периодические жалуется на боль в основании запястья кисти одной руки. Обращения за помощью к хирургам/ортопедам результата не дают (рентген не назначали). Стоит ли обратиться к ревматологу? С какими анализами приходить? У дедушки по маминой линии есть проблемы ревматологического характера.

Ирина Чижевская

: «Конечно, вам необходимо обратиться к ревматологу с учетом такого длительного периода боли в суставе. Тем более что в семье есть отягощенная наследственность. Нужно провести общеклинический анализ крови, биохимический анализ с определением С-реактивного белка, ревматоидного фактора, сделать рентген и УЗИ лучезапястных суставов. Далее врач определит тактику».

После пункции с глюкокортикоидами сустав приходит в норму

Мой ребенок в 2,5 года переболел скрытой формой скарлатины — мой вывод. Через несколько недель начал жаловаться на боли в коленных суставах. И так продолжается до 12 лет. У ребенка постоянно холодные руки и ноги, анализы крови и мазки из зева ничего не показали. Патологий сердца нет. Где можно получить консультацию и полное обследование? Делают ли в Минске диагностическую пункцию сустава?

Ирина Чижевская: «Консультацию детского кардиоревматолога можно получить в поликлинике по месту жительства. Если специалиста в поликлинике нет, вас должны направить в консультативный кабинет 2-й или 4-й городских детских клинических больниц (в зависимости от территориального прикрепления).

Диагностическую пункцию в Минске делают в условиях стационара при наличии показаний на базе 2-й и 4-й ГДКБ. Возможно, вам для начала необходимо сделать УЗИ суставов или МРТ (при необходимости), чтобы посмотреть, есть ли там избыточное скопление синовиальной жидкости. При отсутствии выпота в полость сустава пункцию, как правило, не проводят. Часто дети могут жаловаться на боли в суставах по причине банального плоскостопия. Поэтому необходима консультация специалиста».

Девочке 9 лет. В середине сентября опухло колено, было горячее, но не болело. Был назначен ибупрофен, затем диклофенак, сделано УЗИ: предположительно внутри жидкость, но когда сделали прокол, жидкости внутри не оказалось. Во время прокола был введен препарат «Ребоспан» суставно 1,0 мл. По результатам крови (иммуноглобулин А 0,9г/л, иммуноглобулин G 16,8г/л, иммуноглобулин М 2,3г/л) был поставлен диагноз «инфекционный артрит». Белки и РФ — в норме. Опухоль сошла, но небольшая припухлость все же есть, левое и правое колени отличаются. На колено не жалуется. Норма ли, что колено чуть припухшее? Какие анализы еще необходимо сдать? Что делать, чтобы не было рецидива?

«Судя по описанию заболевания, у девочки был острый артрит, а какой он природы, надо уточнить с помощью дополнительных методов исследования. Инфекционный артрит ставится на основании выделения из полости сустава возбудителя инфекции, а не на основании определения общих иммуноглобулинов основных классов (А, М, G). Артрит может быть посттравматическим, реактивным, ревматоидным. Для уточнения диагноза обычно проводят анализ крови на хламидии, микоплазму, боррелии, иерсинии и прочие инфекции, провоцирующие развитие артрита. Для исключения травматических повреждений коленного сустава проводят МРТ.

То, что при пункции сустава жидкости не оказалось, не говорит о ее отсутствии в полости сустава, просто ее было недостаточно для забора анализа либо были затруднения при проведении самой манипуляции, поскольку коленный сустав анатомически имеет много заворотов (карманов).

Поскольку отечность сустава сохраняется, можно говорить о том, что проблема осталась. Надо повторить УЗИ суставов для уточнения состояния синовиальной оболочки и околосуставных структур. Возможно, воспалительный процесс сохраняется, но имеет невысокую активность, что требует продолжения лечения.

Если говорить об остром артрите, то после пункции с введением с противовоспалительной целью глюкокортикоидов сустав очень быстро приходит в норму и больше не рецидивирует. Если восстановления не произошло, то мы говорим, что такой артрит — хронический и требует активного лечения.

Для того чтобы не было рецидивов артрита, необходимо избегать травм, переохлаждений, контактов с инфекционными больными, а также ограничить (но не исключить) нагрузку на данный сустав на некоторое время. Например, если был артрит суставов нижних конечностей, то рекомендуется ограничить бег, прыжки, в том числе на батуте, езду на самокате. Полностью обездвиживать сустав не надо, иначе это может привести к развитию контрактуры сустава».

Нехватка витамина D влияет на активность ревматоидного артрита

Заболела после родов псориатическим артритом, болею 3 года. Принимала метотрексат подкожно 15 мл, мелоксикам. Планирую вторую беременность, целый год анализы были в норме, ничего не беспокоило. Сейчас врач перевел на сульфасалазин и метилпреднизолон. Через сколько месяцев можно планировать зачатие ребенка? Могут ли быть осложнения после родов и риск рождения больного ребенка?

Наталья Мартусевич: «Планировать зачатие ребенка можно через 12 месяцев с момента прекращения приема метотрексата. В течение этого времени он полностью выводится из организма. Осложнения после родов, риск рождения больного ребенка, как правило, не выше общепопуляционного уровня».

— Мне 25 лет, примерно два года назад у меня начал быстро прогрессировать сколиоз, начали выпадать волосы, слоиться ногти, хрустеть и щелкать суставы. По результатам исследования оказалось, что у меня острый дефицит витамина D — 17. Назначили лечение препаратом вит Д. Но я забеременела и лечение отменилось, но на 11-й неделе произошел спонтанный выкидыш по неизвестной причине. Сейчас у меня дефицит кальция в крови — 1,9. Все это время я отмечала появление синяков на теле без особых ушибов, слишком долго не останавливалась кровь после взятия анализов, слабость и жажда. Мог ли длительный дефицит витамина Д спровоцировать быстропрогрессирующий сколиоз, снижение кальция в крови? Могли ли данные симптомы быть спровоцированы их дефицитом? На данный момент у меня S- образный сколиоз I-II ст., остеохондроз и обызвествление реберных хрящей.

Наталья Мартусевич: «Дефицит витамина D может спровоцировать изменение минеральной плотности костной ткани. Изменение осанки, формирование сколиоза, как правило, не характерны для дефицита витамина D. В то время как формирование кифоза может быть проявлением изменения минеральной плотности костной ткани и иметь отношение к низкому уровню кальция и витамина D.

Одной из причин выкидыша и плохой свертываемости крови может быть наличие врожденной тромбофилии или антифосфолипидного синдрома (АФС). Как правило, гинекологи в случае развития выкидыша назначают обследование на генетические маркеры тромбофилии и наличие АФС. Связан ли низкий уровень витамина D и дефицит кальция с нарушением свертывания крови, покажет комплексное обследование, которое целесообразно начинать у терапевта и акушера-гинеколога. Также необходимо выполнить денситометрию (определение плотности костной ткани). При изменении минеральной плотности костной ткани нужно провести полноценное обследование для исключения причины остеопороза. В данной ситуации советую в первую очередь пройти обследование у эндокринолога. При установлении причины низкого уровня витамина D и кальция возможна коррекция осевого скелета. Имея такое небольшое количество данных, мне сложно сформировать комплексную картину и предположить причину ваших изменений. Целесообразно обратиться к терапевту, он назначит необходимое обследование и направит к специалистам».

— Влияет ли нехватка витамина D на течение ревматологических болезней, их активность? Нужно ли контролировать его уровень у ревматоидных больных и просто здоровых людей? В каких случаях принимать лекарственные препараты витамина D, а когда можно обойтись рыбьим жиром?

Наталья Мартусевич: «Нехватка витамина D влияет на активность ревматоидного артрита и псориатического артрита. Его уровень нужно контролировать у пациентов с ревматическими заболеваниями, а у здоровых людей — при наличии сонливости, слабости, апатии. Если есть незначительный комплексный дефицит жирорастворимых витаминов, то можно принимать и рыбий жир. В случае изолированного дефицита витамина D целесообразен его прием — в виде жирорастворимых капель или в таблетированной форме. Выбор лекарственной формы зависит от возраста, наличия/отсутствия остеопороза. В настоящее время в Беларуси зарегистрирован препарат „Девит“ (витамин D в большой дозе), который применяется как с профилактической целью (1 раз в месяц), так и с лечебной».

Ревматоидный фактор может быть нормой в возрасте

Фото: Дарья Бурякина, TUT.BY

— По результатам биохимии крови ревматоидный фактор составил 9 ед., через полгода уже 16 ед. Хирург сказал, это возрастное, неопасно, но я сомневаюсь.

Наталья Мартусевич: «Ревматоидный фактор (РФ) не является специфическим маркером ревматоидного артрита. Несомненно, что при этом заболевании он встречается значительно чаще, но также может быть и при аутоиммунном тиреоидите, хроническом гепатите, наличии вирусной инфекции (вирусе Эпштейна-Барр), туберкулезе, а также быть проявлением нормы при увеличении возраста пациента. Более специфичным для ревматических заболеваний является иммуноглобулин М ревматоидный фактор. Обращать внимание на этот показатель имеет смысл тогда, когда выявляется реально высокий уровень РФ. 16 ед. может быть вариантом нормы в соответствии с возрастом, а может быть проявлением сопутствующих заболеваний».

— В биохимии увеличен ревматоидный фактор: 161,7, позже — 186. По ларингологии, гинекологии все в норме. На УЗИ сосудов ног обнаружена киста Бейкера правого колена, которая пока себя никак не проявляла. Возможна ли связь или нужны еще обследования?

Наталья Мартусевич: «РФ — неспецифический маркер, он может быть нормой у пожилых людей или проявлением других заболеваний. Если у вас нет вышеназванных заболеваний, но при этом имеется стойкий болевой синдром в суставах без припухания и РФ растет, имеет смысл провести иммунологическое исследование крови и посмотреть уровень антицитруллиновых антител».

— Почему не введено обязательно обследование на ревматоидный фактор по аналогии с флюорографией?

Наталья Мартусевич: «Это нецелесообразно, поскольку РФ не говорит о наличии конкретного заболевания».

— Что такое ревмопробы и для чего они нужны?

Наталья Мартусевич: «Такое понятие отсутствует. Наличие изменений в анализах крови определяется строго индивидуально терапевтом или ревматологом при подозрении на то или иное заболевание. Более того, ряд заболеваний выставляется при абсолютно нормальных анализах крови».

Могут ли поставить диагноз «псориатический артрит» и назначить прием сульфасалазина без ревмопроб?

Наталья Мартусевич: «Нет понятия ревмопробы. В ревматологии для диагностики ряда заболеваний используют лабораторные тесты: С- реактивный белок, уровень ревматоидного фактора, СОЭ, антинуклеарные антитела и многие другие исследования. Назначать их или нет, решает врач. В ревматологии для диагностики каждого из заболеваний используют специально разработанные классификационные критерии. В частности, для диагностики псориатического артрита применяют критерии CASPAR».

Биохимический анализ крови показал: КФК 675,95; АСТ 45,91; АЛТ 47,75; коэффициент атерогенности 4,65 при холестерине 5,2 (триглиц. 2,1 ЛПВП 0,92 ЛПНП 3,33.С — реактивный белок 5; ревматоидный фактор 7. Есть проблемы с суставами, шейный и поясничный остеохондроз.

Наталья Мартусевич: «Причина повышения креатинфосфокиназы (КФК) может быть связана с банальной мышечной нагрузкой. Вам нужно посмотреть этот показатель в динамике. Первоначально обратитесь к врачу-терапевту».

Фактор риска — работа с вибрирующей техникой

— Мне 38 лет. Боль в локтях после работы с молотком, в коленях после копания или перемещения груза. При вставании пощелкивает в коленях, больше в правом. Оно же при разгибании иногда плохо держит стопу, она может смотреть чуть левее или правее. К какому врачу обратиться и с чем это может быть связано?

Наталья Мартусевич: «На первом этапе имеет смысл обратиться к травматологу-ортопеду для исключения травматического повреждения менисков или внутренних связок коленного сустава. Если этого нет, с учетом того, что вы плохо держите стопу, на втором этапе целесообразно обследование у невролога, поскольку проблема может быть связана с поясничным отделом позвоночника и наличием грыжи, которая приведет к ослаблению стопы.

В отношении локтевого сустава: возможно развитие эпикондилита или остеоартрита локтевых суставов, который может формироваться на фоне длительного контакта с вибрирующей техникой. Следует обратиться к ревматологу».

— Страдаю ревматоидным артритом с 2015 г., принимаю метотрексат 7,5. Сейчас определили жировую инфильтрацию печени, возрастную макулярную дегенерацию глаза. Как лечить?

Наталья Мартусевич: «Метотрексат в такой дозе не вызывает жировую инфильтрацию печени. Как правило, это связано с избыточной массой тела. Поэтому, если вы сбросите вес, то сможете спокойно принимать лекарство в этой дозе. Доза для лечения ревматоидного артрита в настоящее время — 20−25 мг в неделю. Поэтому ваша доза, по сути, гомеопатическая. Если же вам не удастся похудеть, то нужно чуть более часто проверять показатели функции печени, в частности, уровней АЛТ, АСТ. При их превышении в 3 и более раза прием метотрексата отменяется и должна быть назначена другая базисная терапия с учетом активности и длительности заболевания».

— Мне 38 лет. Есть редкие ревматические боли в тазобедренном суставе «на погоду» уже около 10 лет, снимаю капсулами диклофенака в течение пары дней. Четыре года назад травмировал мениск в колене, на МРТ выявили артроз в коленном суставе. Что делать для профилактики дальнейшего развития артроза в колене (разрыв мениска горизонтальный) и в тазобедренном суставе?

Наталья Мартусевич: «Сделать акцент на лечебную физкультуру в положении лежа, посещать бассейн 2−3 раза в неделю, заняться коррекцией ортопедических нарушений, если есть поперечное или продольное плоскостопие, носить ортез (наколенник), который будет фиксировать коленный сустав при перемещении».

Мне 38 лет. Испытываю невыносимую боль в тазобедренном суставе при ходьбе. Сделала снимок, хирург сказал, что никакой патологии не видно. Как такое может быть, что хожу уже с явно выраженной хромотой, а ничего нет? По ступенькам вообще подняться сложно. Куда обратиться?

Наталья Мартусевич: «Принципиальную роль играет продолжительность болевого синдрома. Если боль длится в течение 1−3 месяцев, то одной из причин может быть развитие асептического некроза, который первоначально на рентгенограмме тазобедренного сустава выявить невозможно. Золотым стандартом для постановки этого диагноза является МРТ тазобедренных суставов. Вторым фактором столь выраженного болевого синдрома может быть проблема в поясничном отделе позвоночника, которую выявляет врач-невролог, как правило, после МРТ поясничного отдела позвоночника. Третий возможный вариант — развитие сакроилиита (воспаление сустава в месте перехода позвоночника в таз). Для него характерны боли в ночное время. Данный диагноз подтверждают воспалительные изменения в анализах крови (повышенный С-реактивный белок) и выполнение МРТ в специальном режиме с двойным подавлением жировой ткани».

— В 2011 мне диагностировали ревматоидный артрит и синдром Шегрена. Почему в Беларуси нет организованной помощи таким больным и приходится очередному ревматологу заново рассказывать свою историю?

Наталья Мартусевич: «В Беларуси помощь пациентам с ревматоидным артритом и болезнью Шегрена осуществляется согласно протоколам на областном и при необходимости на республиканском уровнях».

Определение анти-стрептококковых антител | MedLabTeh

Определение анти-стрептококковых антител

13 июня, 2012 admin

При проведении исследований пациента с подозрением на ревматизм, или для дифференциальной диагностики ревматизма и других заболеваний, необходимо проводить одновременное исследование  антистрептолизина-О (АСЛ-О) и антигиалуронидазы (АГУ).  У 95%   больных ревматизмом обнаруживается повышение как минимум одного из этих показателей. Определение активности гиалуронидазы позволит точно оценить защитные резервы организма пациента,  агрессивность его штамма стрептококка, и грамотно спланировать лечение пациента.

Нельзя не остановиться на новом направлении в профилактике ревматизма и его рецидивов.

К факторам риска относятся:

  • наличие ревматизма у родственников первой степени родства;

  • женский пол;

  • возраст 7-15;

  • у женщин пред- и климактерический период;

  • перенесенная острая стрептококковая инфекция;

  • частные носоглоточный инфекции.

Такие пациенты нуждаются в обследовании для определения АСЛ-О и АГУ.

При выявлении в семье больного ревматизмом или носителя стрептококковой инфекции, необходимо проведение обследования всех членов семьи, и одновременное лечение всех выявленных носителей стрептококка.  Если будет упущен хотя бы один носитель, он инфицирует всю семью снова, как только те окончат курс лечения, что сделает проведенную терапию бесполезной.

При обследовании 108 пациентов, у которых были выявлены анти-стрептококковые антитела, было установлено, что АСЛ-О было положительным у 45% больных, а АГУ у 91%. В тоже время, что очень важно, 55% пациентов были положительны только по АГУ! Это означает, что при использовании только АСЛ-О больше половины пациентов со стрептококковой инфекцией не выявляется вообще. Или иными словами, положительный тест на АСЛ-О точно говорит о наличии инфекции, но отрицательный тест на АСЛ-О не позволяет ее исключить.

Поэтому в лаборатории «MedLabTeh» для полноценной и достоверной диагностики патогенной стрептококковой инфекции считают, что необходимо выполнение всех трех тестов:

  • АСЛ-О латексным

  • АСЛ-О гемолитическим методом

  • Определение антител к гиалуронидазе

Комментирование и размещение ссылок запрещено.

АСЛ-О (АСЛО, Антистрептолизин–О) — цена анализа в Днипро в ИНВИТРО

Исследуемый материал Сыворотка крови

Метод определения Иммунотурбидиметрия.

Антистрептолизин о (АСЛ-О) – антитела, которые вырабатывают клетки иммунной системы, в результате реакции на стрептоизин-О, появляющийся после начала болезни, вызываемой стрептококками.

В большинстве случаев заболевания, которые вызваны стрептококками, не опасны для человека и заканчиваются выздоровлением пациента. Однако, в некоторых случаях имеются тяжелые осложнения на сердце, почки, нервную систему, суставы, которые развиваются через несколько недель и даже месяцев после болезни. Поэтому врачи серьезно относятся к стрептококковой инфекции и назначают лечение антибиотиками.

Уровень данных антител повышается в крови через 1-3 недели после того, как стрептококк попадает в организм, а не одновременно с началом проблемы. Постепенное понижение содержания титра антител проходит на протяжении 6-12 месяцев.

Анализ крови асло дает возможность врачу определить эффективность терапии и в случае необходимости произвести коррекцию.

Норма у мужчин и у женщин составляет меньше 200 Ед/мл. Для детей до 14 лет этот показатель меньше 150 Ед/мл.

Материалом для исследования является венозная кровь, для анализа используется сыворотка крови.

Показаниями сдать анализ на асло после осмотра являются:

  • диагностика хронической инфекции,
  • гипертермия неясной этиологии,
  • гнойно-воспалительные заболевания,
  • контроль эффективности уничтожения стафилококка,
  • осложнения стрептококковой инфекции,
  • острая ревматическая лихорадка.

При расшифровке результатов необходимо учитывать, что повышенный уровень антистрептолизина обнаруживается и у здоровых людей, которые являются носителем стрептококка.

Тест на АСЛ-О вы можете сдать в лаборатории ИНВИТРО, которая по доступным ценам выполнит качественно и быстро данное исследование.

Ревматологический профиль — причины, диагностика и лечение

Фото: Shutterstock/FOTODOM

  • Врачи
  • Статья обновлена: 18 июня 2020

Ревматологический профиль – набор специфических анализов крови, необходимых для выявления заболеваний суставов и соединительной ткани. Назначается при подозрении на ревматические болезни.

Зачем нужно делать ревматологический профиль?

Ревматологический профиль рекомендован людям, испытывающим дискомфорт и боли в суставах и позволяет выявить природу артритов, оценить динамику развития заболевания.

Какие существуют показания для ревматологического профиля?

  • заболевания суставов;
  • ревматоидный артрит;
  • реактивный артрит;
  • остеоартроз;
  • остеохондроз;
  • системная красная волчанка;
  • ревматизм.

Что обозначают показатели ревматологического профиля?

1) С-реактивный белок (СРБ) — чувствительный элемент крови, быстрее других реагирующий на повреждения тканей. Наличие реактивного белка в сыворотке крови – признак воспалительного процесса, травмы, проникновения в организм чужеродных микроорганизмов – бактерий, паразитов, грибов. Чем острее воспалительный процесс, активнее заболевание, тем выше С-реактивный белок в сыворотке крови.

Нормальные значения С-реактивного белка: 0—5 мг/л.

2) АСЛ-О (АСЛО, Антистрептолизин–О) — антитела к стрептококку, которые образуются в организме после контакта с возбудителем . Наиболее высокие показатели АСЛ-О бывают при ревматизме.

Нормальные значения АСЛ-О: < 200 Ед/мл.

3) Ревматоидный фактор (РФ) — антитела к собственным иммуноглобулинам класса G, которые в значительных количествах присутствуют в сыворотке крови людей, страдающих ревматоидным артритом, системной красной волчанкой, также они появляются при любом остром воспалительном процессе.

Нормальные значения ревматоидного фактора: до 30 МЕд/мл.

4) Антинуклеарные антитела (антиядерные антитела, АЯА) — антитела класса IgG к собственным ядерным антигенам, обнаружение которых в сыворотке крови, говорит о таких заболеваниях, как системная красная волчанка, узелковый периартериит, дерматомиозит.

Нормальные значения антинуклеарных антител: их нет.

Какая нужна подготовка к исследованию?

За сутки до взятия крови необходимо исключить прием алкоголя, за 1 час — курение. Взятие крови желательно производить натощак в утренние часы. Между последним приемом пищи и взятием крови должно пройти не менее 12 часов. Сок, чай, кофе не допускаются. Можно пить воду. Необходимо исключить повышенные психоэмоциональные и физические нагрузки.

Какие сроки исполнения анализа?

1 день.

Анализ крови на ревмопробы в Красногорске | «Андреевские больницы

Ревмопробы – комплекс иммунологических исследований крови, включающий анализы, с помощью которых можно определить аутоиммунные системные заболевания (артриты, системную красную волчанку, подагру, хронический гломерулонефрит и другие), онкологические заболевания любой стадии, любые процессы воспалительного характера.

Разновидности анализа

  1. Исследование для определения уровня ревматоидного фактора.
  2. Исследование крови для определения антистрептолизина-О.
  3. Исследование крови на уровень С-реактивного белка.
  4. Биохимия крови на белок и уровень мочевой кислоты, а также ее производных.
  5. Исследование на наличие в крови циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК).

Исследование на ревматоидный фактор

Увеличение уровня ревматоидного фактора в крови чаще всего свидетельствует о развитии ревматоидного артрита, может наблюдаться также при инфекционном мононуклеозе, гепатите, системной красной волчанке и любых других острых воспалительных процессах. Определение наличия специфических антител производится с помощью одного из серологических методов (ИФА, РИГА, РИФ, РСК).

Исследование на антистрептолизин-О

С помощью серологического анализа можно выявить антитела к стрептококкам, которые образуются в организме при любом контакте с этим возбудителем. Положительный результат свидетельствует о гломерулонефрите, тонзиллите, скарлатине, ангине, рожистом воспалении.

Исследование на изменение уровня С-реактивного белка

Повышение уровня белка является первым признаком первичного остро возникшего воспалительного процесса. Показатели уровня этой белковой фракции медики отслеживают для определения эффективности проводимой терапии.

Исследование уровня белка плазмы крови

Повышение белка плазмы крови происходит за счет образования антител к различным возбудителям инфекции. Повышение количества белка косвенно подтверждает воспалительный процесс, присутствующий в организме.

Определение уровня мочевой кислоты и ее производных

Повышение уровня мочевой кислоты, креатинина, креатина, мочевины свидетельствует о поражении паренхимы почек или развитии подагры.

Определение наличия в крови ЦИК

Комплекс антиген-антитело образуется как результат защитной реакции организма, а именно иммунной системы, которая блокирует инфекционные или аутоантигены с помощью антител. Со временем происходит разрушение антигенов антителами, и остатки комплекса выводятся. При хронических и аутоиммунных воспалительных процессах уровень ЦИК резко увеличивается.

Область применения исследования

Проведение исследований выполняется отдельно или как часть полного обследования для выявления острых, хронических и аутоиммунных воспалительных процессов. Они назначаются в следующих случаях:

  • Для первичной постановки диагноза.
  • Для дифференциальной диагностики заболеваний со схожими симптомами.
  • Для прогноза течения заболевания.
  • Для подбора и оценки эффективности метода терапии.

Подготовка к исследованию

  • За сутки исключить физические нагрузки и прием препаратов, способных повлиять на результат.
  • Перед исследованием исключить прием жирной еды и алкогольных напитков.
  • В течение двух часов перед анализом не курить, не пить соков, чая и кофе (особенно с сахаром).
  • За 15-20 минут надо успокоиться, посидеть или полежать.
  • При определении мочевой кислоты за несколько дней до забора крови необходима безбелковая диета.

Противопоказания

Противопоказаний к сдаче анализа нет.

Скарлатина – опасное бактериальное заболевание у детей — Into-Sana

Скарлатина — это инфекционное заболевание, которое вызывается ß-гемолитическим стрептококком. Характеризуется сочетанием общей интоксикации, лихорадки, воспалением миндалин и мелкоточечной сыпью.

Болезнь возникает чаще всего у детей, после выздоровления у них формируется пожизненный иммунитет. Повторные случаи наблюдаются редко (2-4 %).

Причины возникновения скарлатины

Скарлатина похожа по механизму развития на острый тонзиллит (ангину) и рожистое воспаление кожи. Их возбудителем является гемолитический стрептококк группы А. Существует 46 различных штаммов стрептококка, и каждый на фоне сниженного иммунитета способен вызвать скарлатину.

Ребенок инфицируется тремя путями:

  • Воздушно-капельный. Наиболее распространенный – 97% от всех случаев. Бактерии попадают в организм пациента при вдыхании аэрозоля с возбудителем, который выделяется больными во время кашля или чихания.
  • Контактный путь. Стрептококк передается через предметы быта и ухода (игрушки, полотенца, перевязочный материал и т.д.).
  • Алиментарный (пищевой). Ребенок заражается через продукты питания. Источником может стать любой человек, болеющий стрептококковой инфекцией, а также латентный носитель. При попадании в дыхательные пути возбудитель выделяет продукты своей жизнедеятельности и агрессивные вещества, с помощью которых прикрепляется к слизистой оболочке. К последним относят стрептолизин S и О, липотейхоевую, гиалуроновую кислоты, стрептокиназу, липопротеиназы и т.д. Но главным источником тяжести болезни является эритрогенный токсин Дика, который оказывает цитотоксическое, пирогенное воздействие на организм, подавляет иммунный ответ, усиливает проницаемость мембран клеток, то есть вызывает лихорадку, некроз, отек, иммуносупрессию и аллергизацию. При этом поражаются сердечно-сосудистая, нервная, эндокринная системы, кожа и другие органы.

У переболевших скарлатиной в дальнейшем возникает нечувствительность к токсину Дика, поэтому болезнь для них не заразна.

Виды скарлатины

Скарлатина имеет разные варианты развития, которые зависят от механизма передачи. В большинстве случаев реализуется воздушно-капельный путь, поэтому возникает фарингеальная форма. Стрептококк попадает в слизистую оболочку верхних дыхательных путей, где запускается патогенез болезни со всеми характерными проявлениями.

В редкостных случаях инфицирование осуществляется через раневую поверхность, легкие и пищеварительную систему. Здесь имеет место экстрафарингеальная форма.

В зависимости от степени тяжести выделяют следующие виды скарлатины:

  • Легкая форма. Основные проявления заболевания длятся 4-5 суток. Температура повышается до 38,5 градусов. Элементы сыпи, интоксикация и воспалительные явления на миндалинах (катаральный тонзиллит) выражены незначительно.
  • Средняя форма. Симптомы сохраняются 7-8 суток. Наблюдается фебрильная волнообразная лихорадка (до 39,5 градусов), выраженные явления интоксикации (слабость, отсутствие аппетита, головная боль, рвота), резкое увеличение переднешейных лимфатических узлов. Мелкоточечные высыпания распространяются на большую площадь, а тонзиллит переходит в гнойную форму (фолликулярная, лакунарная ангина). Присоединяется тахикардия – 130-140 уд/мин.
  • Тяжелая форма. Характеризуется гиперпиретической лихорадкой (39,5- 41 градус). Пациент возбужден или заторможен, имеют место многократная рвота, анорексия, судороги, потеря сознания. Высыпания приобретают геморрагический характер, иногда с участками некроза. Зев ярко гиперемирован, миндалины гипертрофированы до 3 степени, рыхлые, покрыты серовато-желтым налетом с гнилостным запахом, при отторжении наслоений образуются глубокие кровоточащие язвы. Развивается картина инфекционно-токсического шока, когда частота сердечных сокращений поднимается к 150-160 за минуту, а давление падает.
  • Септическая форма. Крайне тяжелый вариант скарлатины. Возникают явления генерализации инфекции: некроз слизистой миндалин и зева, гнойное воспаление лимфоузлов и окружающей их ткани.
  • Симптомы скарлатины

    Все симптомы скарлатины можно сгруппировать в синдромы.

    Катаральный. Для него характерны воспалительные изменения слизистой оболочки миндалин и ротоглотки. При этом у детей наблюдается кашель, боль в горле, а покраснение зева имеет резко очерченный характер, за что этот симптом назвали «пылающим зевом». Язык у больных обложен налетом, но на четвертые сутки обретает красно-зернистую поверхность. В таком виде он сохраняется 7-8 дней и носит название «малиновый язык».

    Сыпь (экзантема) – важный признак, который позволяет отличить скарлатину от ангины. Она имеет вид мелких точек на гиперемированной коже. Локализуется преимущественно на внутренних поверхностях бедер, нижней части живота и подмышечных впадинах. Пациент также жалуется на зуд, поэтому можно обнаружить следы расчесывания на коже.

    Существуют отличительные признаки высыпания при скарлатине:

    • Симптом Пастиа. Экзантема локализуется особенно интенсивно в складках кожи (локтевая ямка, места контакта с одеждой). Симптом Филатова. Сыпь не распространяется на носогубной треугольник.
    • Симптом щипка. При легком пощипывании кожи появляются новые элементы высыпки.
    • Белый дермографизм. Если провести по коже тонким предметом, то появится белая полоса.
    • Через 6-7 дней от начала болезни экзантема исчезает, а на месте высыпаний появляются участки шелушения. На стопах и кистях они напоминают небольшие пластинки, а на туловище визуализируются отрубевидное обильное шелушение.

      Интоксикационный синдром сопровождается общей слабостью, подъемом температуры, нарушением сна, пищеварения и т.д.

      Диагностика скарлатины

      Диагностика включает в себя детальный разбор жалоб, осмотр всей поверхности тела и слизистых оболочек, а также комплекс параклинических исследований.

      Общий анализ крови. Позволяет выявить повышение количества нейтрофилов и эозинофилов. При скарлатине наблюдается увеличение числа незрелых форм нейтрофилов (палочки, миелоциты, метамиелоциты), что указывает на инфекционный процесс бактериального генеза.

      Взятие образца слизи из ротоглотки. Мазок берут для бактериологического исследования с целью выявления ß-гемолитического стрептококка группы А.

      Для более точного и быстрого определения проводится серология – совокупность лабораторных методов исследования, позволяющих обнаружить антитела к тому или иному возбудителю. Любой чужеродный белок, попадающий в организм, вызывает его ответную реакцию. Выделяются антитела, которые можно определить количественно. При скарлатине исследуют уровень антистрептолизина О – белка, который связывается с токсинами стрептококка. Диагностическое значение имеет нарастание титра антител в динамике.

      Методы лечения скарлатины

      Скарлатину у ребенка необходимо лечить медикаментозно. При этом соблюдается строгий постельный режим. Лечение важно начать вовремя, чтобы избежать возможных осложнений.

      Применяют следующие группы препаратов:

      • Антибиотики.
      • Дезинтоксикационная терапия. Применяется для выведения продуктов распада бактерий и токсинов. С этой целью ребенку необходимо обильное питье и введение глюкозо-солевых растворов.
      • Жаропонижающие средства. Эти средства нужно давать только при подъеме температуры выше 38 градусов и по назначению врача.
      • Антигистаминные препараты. Минимизируют действие гистамина, уменьшая зуд.
      • Через 3-4 дня от начала болезни детям назначают физиотерапию.
      • Последствия скарлатины

        Благодаря применению антибиотиков такие ранние осложнения, как сепсис, гнойный лимфаденит, аденофлегмона или мастоидит встречаются очень редко. Они имеют место у детей с ослабленным иммунитетом или на фоне неадекватного лечения.

        В клинической практике также наблюдаются синусит (воспаление околоносовых пазух) и отит (поражение уха).

        К поздним осложнениям относят миокардит и нефрит. Они являются результатом инфекционно-аллергического процесса, когда собственные ткани поражаются выработанными антителами к стрептококку. Это объясняется схожестью их структуры к возбудителю.

        Миокардит проявляется в восстановительный период. У ребенка наблюдается незначительное увеличение температуры тела, слабость, тахикардия, лабильный пульс. Давление понижается, а на кардиограмме можно увидеть нарушение сердечного ритма.

        Нефрит возникает на 12-16 день от начала болезни. Часто он не имеет никаких симптомов, определяются лишь лабораторные изменения в моче и крови.

        Иногда в процесс вовлекаются суставы. Это осложнение характерно больше для мальчиков. Артрит или синовит возникают через две недели после выздоровления. Ребенок жалуется на боль в суставах и покраснение кожи над ними.

        Особое внимание родителям необходимо обратить на отдаленные последствия после скарлатины. К ним относят гломерулонефрит, ревматическую болезнь сердца и хорею Сиденгама. Здесь также имеет место аутоиммунное воспаление.

        При обнаружении у ребенка симптомов скарлатины стоит немедленно обратиться за медицинской помощью. В клинике Into-Sana Вы сможете поручить здоровье малыша опытным врачам.

Какова роль тестирования на стрептококковые антитела в диагностике скарлатины?

Автор

Bahman Sotoodian, MD Врач-резидент, отделение дерматологии, факультет медицины и стоматологии Университета Альберты, Канада

Раскрытие: Ничего не разглашать.

Соавтор (ы)

Джагги Рао, доктор медицины, FRCPC Клинический профессор медицины, Отделение дерматологии и кожных наук, директор программы резидентуры по дерматологии, Медицинский и стоматологический факультет Университета Альберты, Канада

Джагги Рао, доктор медицины, FRCPC является членом следующие медицинские общества: Американская академия дерматологии, Американское общество дерматологической хирургии, Американское общество лазерной медицины и хирургии, Канадская дерматологическая ассоциация, Канадская медицинская ассоциация, Канадская ассоциация медицинской защиты, Тихоокеанская дерматологическая ассоциация, Королевский колледж врачей и хирургов Канады

Раскрытие информации: нечего раскрывать.

Главный редактор

Уильям Д. Джеймс, доктор медицины Пол Р. Гросс, профессор дерматологии, заместитель председателя, директор программы резидентуры, факультет дерматологии, Медицинская школа Университета Пенсильвании

Уильям Д. Джеймс, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Американских Академия дерматологии, Общество следственной дерматологии

Раскрытие информации: Полученный доход в размере 250 долларов США или выше от: Elsevier; WebMD.

Дополнительные участники

Эдвард Дж. Забавски, младший, DO Медицинская и хирургическая дерматология

Эдвард Дж. Забавски, младший, DO является членом следующих медицинских обществ: Американская остеопатическая ассоциация, Дерматологическое общество Новой Англии

Раскрытие: Ничего не разглашать.

Благодарности

Джерри Балентин, профессор DO и заведующий кафедрой неотложной медицины, Колледж остеопатической медицины Нью-Йоркского технологического института; Исполнительный вице-президент больницы Святого Варнавы

Jerry Balentine, DO, является членом следующих медицинских обществ: Американского колледжа врачей неотложной помощи, Американского колледжа врачей неотложной помощи, Американского колледжа врачей, Американской остеопатической ассоциации и Нью-Йоркской медицинской академии

Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

Питер Блумфилд, MD, MPH Клинический инструктор, Отделение неотложной медицины, Olive View-UCLA Medical Center

Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

Памела Л. Дайн, доктор медицины Профессор клинической медицины / неотложной медицины, Калифорнийский университет, Лос-Анджелес, медицинская школа Дэвида Геффена; Лечащий врач отделения неотложной медицины, Olive View-UCLA Medical Center

Памела Л. Дайн, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Американской академии неотложной медицины, Американского колледжа врачей неотложной помощи и Общества академической неотложной медицины

Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

Крейг Элметс, доктор медицины Профессор и заведующий кафедрой дерматологии, директор UAB Центр исследования кожных заболеваний Университета Алабамы в Медицинской школе Бирмингема

Крейг Элметс, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Американской академии дерматологии, Американской ассоциации иммунологов, Американского колледжа врачей, Американской федерации медицинских исследований и Общества исследовательской дерматологии

Раскрытие информации: Отсутствие акций Palomar Medical Technologies; Гонорар Astellas Consulting Членство в экспертной комиссии; Заработная плата медицинского общества Массачусетса; Грант Abbott Laboratories / исследовательские фонды Независимый подрядчик; Современная заработная плата; Биоген Грант / исследовательские фонды Независимый подрядчик; Clinuvel Независимый подрядчик; Фармацевтический грант Covan Basilea / исследовательские фонды Независимый подрядчик; ISDIN Нет Консультации; Грант TenX BIopharma / исследовательские фонды Независимый подрядчик

Даниэль П. Ломбарди, DO доцент клинической практики, Нью-Йоркский колледж остеопатической медицины; Лечащий врач, заместитель директора отделения и программный директор, отделение неотложной медицины, больница Святого Варнавы

Дэниел П. Ломбарди, доктор медицинских наук, является членом следующих медицинских обществ: Американского колледжа врачей скорой помощи, Американского колледжа врачей неотложной остеопатии и Американской остеопатической ассоциации

.

Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

Роберт О’Коннор, доктор медицины, магистр здравоохранения Профессор и заведующий кафедрой неотложной медицины, Система здравоохранения Университета Вирджинии

Роберт О’Коннор, доктор медицины, магистр здравоохранения является членом следующих медицинских обществ: Американской академии неотложной медицины, Американского колледжа врачей неотложной помощи, Американского колледжа врачей, Американской кардиологической ассоциации, Американской медицинской ассоциации, Медицинского общества штата Делавэр, Национальная ассоциация врачей скорой медицинской помощи, Общество академической неотложной медицины и Общество медицины дикой природы

Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

Джозеф А. Саломон III, доктор медицины Доцент и обслуживающий персонал, Медицинские центры Трумэна, Медицинская школа Университета Миссури в Канзас-Сити; Медицинский директор EMS, Канзас-Сити, Миссури,

Джозеф А. Саломон III, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Американской академии экстренной медицины, Национальной ассоциации врачей скорой медицинской помощи и Общества академической неотложной медицины

Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

Франсиско Талавера, фармацевт, доктор философии Адъюнкт-профессор, Фармацевтический колледж Медицинского центра Университета Небраски; Главный редактор Medscape Drug Reference

Раскрытие информации: Medscape Reference Salary Employment

Ричард П. Винсон, доктор медицины Ассистент клинического профессора, кафедра дерматологии, Центр медицинских наук Техасского технологического университета, Медицинская школа Пола Л. Фостера; Консультант, Дерматология Маунтин-Вью, PA

Ричард П. Винсон, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Американской академии дерматологии, Ассоциации военных дерматологов, Техасского дерматологического общества и Техасской медицинской ассоциации

.

Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

Эрик Л. Вайс, доктор медицины, DTM & H Медицинский директор, Управление непрерывности обслуживания и планирования на случай стихийных бедствий, директор по стипендии, Стипендия по медицине стихийных бедствий Медицинского центра Стэнфордского университета, председатель SUMC и LPCH Целевая группа по биотерроризму и обеспечению готовности к чрезвычайным ситуациям, младший клинический прогрессор, Департамент Хирургия (неотложная медицина), Медицинский центр Стэнфордского университета

Эрик Л. Вайс, доктор медицины, DTM & H является членом следующих медицинских обществ: Американского колледжа врачей скорой помощи, Американского колледжа медицины труда и окружающей среды, Американской медицинской ассоциации, Американского общества тропической медицины и гигиены, Врачи за социальную ответственность, Юго-восточный хирургический Конгресс, Южная ассоциация онкологии, Южное клиническое неврологическое общество и Общество дикой медицины

Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

Гарри Уилкс, MBBS, FACEM Директор отделения неотложной медицины, больница Calvary, Канберра, ACT; Адъюнкт-профессор, Университет Эдит Коуэн, Западная Австралия,

Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

Мэри Л. Виндл, PharmD Адъюнкт-профессор, Фармацевтический колледж Медицинского центра Университета Небраски; Главный редактор Medscape Drug Reference

Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

Грейс М. Янг, доктор медицины Доцент кафедры педиатрии, Медицинский центр Университета Мэриленда

Грейс М. Янг, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Американской академии педиатрии и Американского колледжа врачей неотложной помощи

Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

Идентификация поверхностных антигенов Streptococcus pyogenes, распознаваемых объединенным иммуноглобулином человека

  • O’Loughlin, R.E. et al. Эпидемиология инвазивной стрептококковой инфекции группы А и потенциальные последствия вакцинации: США, 2000–2004 гг. Clin. Заразить. Дис. 45, 853–862 (2007).

    Артикул Google ученый

  • Lamagni, T. L. et al. Эпидемиология тяжелой болезни Streptococcus pyogenes в Европе.J. Clin. Microbiol. 46, 2359–2367 (2008).

    Артикул Google ученый

  • Linner, A., Darenberg, J., Sjolin, J., Henriques-Normark, B. & Norrby-Teglund, A. Клиническая эффективность полиспецифической внутривенной иммуноглобулиновой терапии у пациентов с синдромом стрептококкового токсического шока: сравнительные наблюдения изучать. Clin. Заразить. Дис. 59, 851–857 (2014).

    CAS Статья Google ученый

  • Карапетис, Дж.R. et al. Эффективность клиндамицина и внутривенного иммуноглобулина и риск заболевания при контакте с инвазивными стрептококковыми инфекциями группы А. Clin. Заразить. Дис. 59 (2014).

  • Даренберг, Дж. И др. Внутривенная терапия иммуноглобулином G при синдроме токсического стрептококкового шока: европейское рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое исследование. Clin. Заразить. Дис. 37, 333–340 (2003).

    CAS Статья Google ученый

  • Фараг, Н., Махран, Л., Абу-Айша, К. и Эль-Азизи, М. Оценка эффективности поликлонального внутривенного иммуноглобулина G (ВВИГ) против инфекционности клинических изолятов метициллин-устойчивого Staphylococcus aureus (MRSA) в vitro и in vivo . Евро. J. Clin. Microbiol. Заразить. Дис. 32. С. 1149–1160 (2013).

    CAS Статья Google ученый

  • Гаглани, М. Дж., Бейкер, К. Дж. И Эдвардс, М.S. Вклад антител в опосредованное нейтрофилами уничтожение Enterococcus faecalis . J. Clin. Иммунол. 17, 478–484 (1997).

    CAS Статья Google ученый

  • Срискандан, С., Фергюсон, М., Эллиот, В., Фолкнер, Л. и Коэн, Дж. Внутривенный иммуноглобулин человека для экспериментального стрептококкового токсического шока: бактериальный клиренс и модуляция воспаления. J. Antimicrob. Chemother. 58, 117–124 (2006).

    CAS Статья Google ученый

  • Басма, Х.и другие. Опсонические антитела к поверхностному белку М стрептококков группы А в объединенных нормальных иммуноглобулинах (ВВИГ): потенциальное влияние на клиническую эффективность терапии ВВИГ при тяжелых инвазивных стрептококковых инфекциях группы А. Заразить. Иммун. 66, 2279–2283 (1998).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • Schrage, B., Duan, G. W., Yang, L. P., Fraser, J. D. & Proft, T. Различные препараты внутривенного иммуноглобулина различаются по своей эффективности для нейтрализации стрептококковых суперантигенов: значение для лечения синдрома токсического шока стрептококка.Clin. Заразить. Дис. 43, 743–746 (2006).

    Артикул Google ученый

  • Родригес-Ортега, М. Дж. И др. Характеристика и идентификация белков-кандидатов на вакцину посредством анализа поверхностного протеома Streptococcus группы А. Nat. Biotechnol. 24. С. 191–197 (2006).

    CAS Статья Google ученый

  • Северин А. и др. Протеомный анализ и идентификация Streptococcus pyogenes поверхностно-ассоциированных белков.J. Bacteriol. 189. С. 1514–1522 (2007).

    CAS Статья Google ученый

  • Джи, Ю. Д., Карлсон, Б., Кондагунта, А. и Клири, П. П. Интраназальная иммунизация С5а-пептидазой предотвращает колонизацию носоглотки у мышей стрептококками группы А. Заразить. Иммун. 65, 2080–2087 (1997).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • Галлотта, М.и другие. SpyAD, подрабатывающий белок Streptococcus группы A, способствующий делению бактерий и адгезии клеток-хозяев. Заразить. Иммун. 82, 2890–2901 (2014).

    Артикул Google ученый

  • Лемос, Дж. А., Берн, Р. А. и Кастро, А. С. Молекулярное клонирование, очистка и иммунологические ответы рекомбинантов GroEL и DnaK из Streptococcus pyogenes . ФЭМС Иммунол. Med. Microbiol. 28. С. 121–128 (2000).

    CAS Статья Google ученый

  • Тернер, К.E. et al. Появление новой высоко успешной клада стрептококков группы А генотипа emm89 в Соединенном Королевстве. MBio 6, 10.1128 / mBio.00622-15 (2015).

  • Shea, P. R. et al. Типы генов Streptococcus emm группы A в глоточных изолятах, Онтарио, Канада, 2002–2010 гг. Emerg. Заразить. Дис. 17, 2010–2017 (2011).

    Артикул Google ученый

  • Берес, С. Б. и Массер, Дж. М. Вклад экзогенных генетических элементов в метагеном Streptococcus группы А.PLoS One 2, 10.1371 / journal.pone.0000800 (2007).

  • Sanderson-Smith, M. et al. Систематическая и функциональная классификация Streptococcus pyogenes , служащая новым инструментом для молекулярного типирования и разработки вакцин. J. Infect. Дис. 210. С. 1325–1338 (2014).

    CAS Статья Google ученый

  • Левин, Дж. К. и Весселс, М. Р. Идентификация csrR / csrS , генетического локуса, который регулирует синтез капсулы гиалуроновой кислоты в Streptococcus группы А.Мол. Microbiol. 30, 209–219 (1998).

    CAS Статья Google ученый

  • Eriksson, BK, Andersson, J., Holm, SE & Norgren, M. Инвазивные стрептококковые инфекции группы A: изоляты T1M1, экспрессирующие пирогенные экзотоксины A и B в сочетании с избирательным отсутствием токсин-нейтрализующих антител, связаны с повышенным риском синдрома стрептококкового токсического шока. J. Infect. Дис. 180, 410–418 (1999).

    CAS Статья Google ученый

  • Миллер Л.С. и Чо, Дж. С. Иммунитет против золотистого стафилококка кожных инфекций. Nat. Rev. Immunol. 11. С. 505–518 (2011).

    CAS Статья Google ученый

  • Fritzer, A. et al. Новые консервативные стрептококковые белки группы А, идентифицированные с помощью антигеномной технологии как вакцины-кандидаты для вакцины на основе не-М-белков. Заразить. Иммун. 78, 4051–4067 (2010).

    CAS Статья Google ученый

  • Коул, Дж.N. et al. Анализ поверхности и иммунная реактивность основных белков, связанных с клеточной стенкой стрептококка группы А. Заразить. Иммун. 73, 3137–3146 (2005).

    CAS Статья Google ученый

  • Bombaci, M. et al. Профилирование белкового массива сывороток пациентов с тиком выявляет широкий диапазон и усиленный иммунный ответ против антигенов стрептококков группы А. PLoS One 4, 10.1371 / journal.pone.0006332 (2009).

  • Бисвас, И., Germon, P., McDade, K. & Scott, J. R. Генерация и поверхностная локализация интактного М-белка у Streptococcus pyogenes зависят от sagA. Заразить. Иммун. 69, 7029–7038 (2001).

    CAS Статья Google ученый

  • Turner, C.E. et al. Молекулярный анализ вспышки смертельного послеродового сепсиса, вызванного Streptococcus pyogenes . J. Clin. Microbiol. 51, 2089–2095 (2013).

    CAS Статья Google ученый

  • Ох, H., Сиано Б. и Даймонд С. Протокол выделения нейтрофилов. J. Vis. Exp. 17, 10.3791 / 745 (2008).

  • Lancefield, R.C. Персистенция типоспецифических антител у человека после инфицирования стрептококками группы А. J. Exp. Med. 110, 271–292 (1959).

    CAS Статья Google ученый

  • Джонс, К. Ф. и Фишетти, В. А. Важность местоположения связывания антител с белком М6 для опсонизации и фагоцитоза стрептококков М6 группы А.J. Exp. Med. 167, 1114–1123 (1988).

    CAS Статья Google ученый

  • Абдул-Салам, В. Б. и др. Протеомный анализ тканей легких пациентов с легочной артериальной гипертензией. Тираж 122, 2058–2067 (2010).

    CAS Статья Google ученый

  • Консорциум, T. U. Деятельность Universal Protein Resource (UniProt). Nucleic Acids Research 42, 191–198 (2014).

    Артикул Google ученый

  • Сумби П. и др. Эволюционное происхождение и появление очень успешного клона Streptococcus серотипа M1 группы A включало несколько событий горизонтального переноса генов. J. Infect. Дис. 192, 771–782 (2005).

    CAS Статья Google ученый

  • Антител к стрептококковым бактериям, связанным с обсессивно-компульсивным расстройством у мышей — ScienceDaily

    Новое исследование, проведенное учеными Центра инфекций и иммунитета Школы общественного здравоохранения Колумбийского университета им. Мейлмана, показывает, что у детей обсессивно-компульсивное расстройство (ОКР), Туретт Синдром и / или тиковое расстройство могут развиться из-за несоответствующего иммунного ответа на бактерии, вызывающие обычные инфекции горла.

    Результаты мышиной модели, опубликованные в сети Nature Publishing Group в выпуске Molecular Psychiatry на этой неделе, подтверждают мнение о том, что это состояние является отдельным заболеванием, и представляют собой ключевой прогресс в отслеживании пути, ведущего от обычной инфекции в детстве к появлению на поверхности психического синдрома. Это исследование позволяет по-новому выявлять детей из группы риска аутоиммунных заболеваний головного мозга и предлагает возможные пути лечения.

    ОКР и тиковые расстройства затрагивают значительную часть населения.Более 25% взрослых и более 3% детей проявляют некоторые признаки этих расстройств. До сих пор ученым не удавалось убедительно задокументировать связь между появлением антител, направленных против бета-гемолитического стрептококка группы А (GABHS), в периферической крови и началом поведенческих и моторных аспектов расстройства. В результате стратегии лечения были ограничены устранением симптомов, а не причин.

    Стрептококковые бактерии горла, или GABHS, как известно, вызывают аутоиммунные расстройства, такие как хорея Сиденхама, с такими симптомами, как лихорадка и неконтролируемые тики лица или конечностей у восприимчивых людей, что побудило некоторых ученых подозревать, что GABHS может играть роль в синдроме известные как педиатрические аутоиммунные нейропсихиатрические расстройства, связанные со стрептококковыми инфекциями (PANDAS), быстро развивающаяся и эпизодическая форма ОКР и тиковых расстройств, наблюдаемых у некоторых детей.Последнее исследование исследователей CII подтверждает гипотезу о том, что некоторые психоневрологические синдромы могут быть вызваны прямым действием GABHS-ассоциированных антител на мозг. Могут ли факторы окружающей среды, кроме БГСА, вызывать подобные эффекты, пока неизвестно.

    Используя мышиную модель PANDAS, Мэди Хорниг, доктор медицинских наук, доцент кафедры эпидемиологии Школы общественного здравоохранения им. Мэйлмана Колумбийского университета, и ее коллеги продемонстрировали эту предполагаемую связь между антителами к БГСА и психиатрическими симптомами расстройства.Иммунизируя мышей инактивированной формой бактерий, исследователи CII обнаружили, что мыши демонстрировали повторяющееся поведение, напоминающее детей с PANDAS. Инъекция антител от иммунизированных мышей в кровоток неиммунизированных мышей воспроизводила это поведение.

    «Эти данные показывают, что одних антител достаточно, чтобы вызвать этот поведенческий синдром», — сказал д-р Хорниг. «Наши результаты, полученные на этой модели на животных, подтверждают и могут объяснить результаты Сведо и его коллег по лечению детей с PANDAS с помощью плазмафереза ​​или внутривенного иммуноглобулина (IVIg).Они также могут иметь значение для понимания, предотвращения или лечения других расстройств, потенциально связанных с аутоиммунитетом, включая расстройства аутистического спектра, настроение, внимание, обучение и пищевые расстройства ».

    «Эта работа является убедительным подтверждением связи между воздействием инфекции, развитием аутоиммунного ответа и началом повторяющегося поведения и дефицита внимания, обучения и социального взаимодействия», — говорит директор CII У. Ян Липкин, доктор медицины, Джон Сноу, профессор эпидемиологии и профессор неврологии и патологии Колумбийского университета.«Дальнейшие исследования этой запускаемой стрептококком аутоиммунной мышиной модели PANDAS будут способствовать открытию более эффективных вмешательств для этих инвалидизирующих расстройств и направят разработку надежных стратегий профилактики».

    Доктор Сьюзан Сведо, старший научный сотрудник NIMH, которая была лидером в исследованиях PANDAS, комментирует работу в этом выпуске Molecular Psychiatry, где работа авторов также представлена ​​на обложке журнала.

    Оценка постстрептококкового заболевания — Американский семейный врач

    1.Wessels MR. Стрептококковые и энтерококковые инфекции. В: Kasper DL, et al., Eds. Принципы внутренней медицины Харрисона. 16-е изд. Нью-Йорк: McGraw-Hill, 2005: 823–31 ….

    2. Bisno AL. Стрептококковые инфекции группы А и острый ревматизм. N Engl J Med . 1991; 325: 783–93.

    3. Бисно AL, Стивенс Д.Л. Стрептококковые инфекции кожи и мягких тканей. N Engl J Med . 1996. 334: 240–5.

    4. Бисно AL, Гербер М.А., Гвалтни Дж. М. младший, Каплан Э.Л., Schwartz RH.Диагностика и лечение стрептококкового фарингита группы А: практическое руководство. Clin Infect Dis . 1997; 25: 574–83.

    5. Vendemia F, Джезуальдо Л, Щена ФП, Д’Амико Дж. Эпидемиология первичного гломерулонефрита у пожилых людей. Отчет Итальянского регистра почечной биопсии. Дж Нефрол . 2001; 14: 340–52.

    6. Дель Мар CB, Гласзиу П.П., Спинкс А.Б. Антибиотики при ангине. Кокрановская база данных Syst Rev . 2005; (1): CD000023.

    7. Гордис Л. Фактическое исчезновение ревматической лихорадки в Соединенных Штатах: уроки роста и падения болезней. Тираж . 1985; 72: 1155–62.

    8. Дель Мар CB, Гласзиу П.П., Спинкс А.Б. Антибиотики при ангине. Кокрановская база данных Syst Rev . 2004; (4): CD000023.

    9. Кейси Дж. Р., Pichichero ME. Мета-анализ лечения цефалоспорином и пенициллином стрептококкового тонзиллофарингита группы А у детей. Педиатрия . 2004. 113: 866–82.

    10. Veasy LG, Тани Л.Ю., Hill HR. Сохранение острой ревматической лихорадки в межгорной зоне США. Дж. Педиатр . 1994; 124: 9–16.

    11. Каплан ЭЛ. Ревматическая лихорадка. В: Kasper DL, et al., Eds. Принципы внутренней медицины Харрисона. 16-е изд. Нью-Йорк: Макгроу-Хилл, 2005: 1977–1977.

    12. Солер-Солер Дж., Гальве Э. Мировая перспектива клапанной болезни. Сердце . 2000; 83: 721–5.

    13. Veasy LG, Wiedmeier SE, Орсмонд Г.С., Руттенберг HD, Бучек М.М., Рот SJ, и другие. Возрождение острой ревматической лихорадки в межгорной зоне США. N Engl J Med . 1987; 316: 421–7.

    14. Бессен Д., Джонс К.Ф., Фишетти В.А. Доказательства двух различных классов стрептококкового белка М и их связи с ревматической лихорадкой. J Exp Med . 1989. 169: 269–83.

    15. Красная книга: Отчет Комитета по инфекционным болезням за 2003 год. 26-е изд. Elk Grove Village, III .: Американская академия педиатрии, 2003: 573–83.

    16. Специальная группа авторов Комитета по ревматической лихорадке, эндокардиту и болезни Кавасаки Совета по сердечно-сосудистым заболеваниям у молодых Американской кардиологической ассоциации. Рекомендации по диагностике ревматической лихорадки. Критерии Джонса, обновление 1992 г. [опубликованное исправление появляется в JAMA 1993; 269: 476]. ЯМА . 1992; 268: 2069–73.

    17. Иларио М.О., Terreri MT. Ревматическая лихорадка и постстрептококковый артрит. Best Practices Clin Rheumatol . 2002; 16: 481–94.

    18. Иларио М.О., Андраде JL, Гаспарян А.Б., Carvalho AC, Андраде CT, Лен CA. Значение эхокардиографии в диагностике и последующем наблюдении за ревматическим кардитом у детей и подростков: проспективное исследование в течение 2 лет. Дж. Ревматол .2000. 27: 1082–6.

    19. Свенсон Дж. М., Фишер Д.Р., Миллер С.А., Бойл Г.Дж., Ettedgui JA, Бирман Л.Б. По-прежнему ли важны рентгенограммы грудной клетки и электрокардиограммы для оценки новых педиатрических пациентов с сердечными шумами или болью в груди? Педиатрия . 1997; 99: 1–3.

    20. Естественное течение ревматической лихорадки и ревматической болезни сердца. Десятилетний отчет о совместном клиническом исследовании АКТГ, кортизона и аспирина. Тираж . 1965; 32: 457–76.

    21. Бехера М. Подкожные узелки при острой ревматической лихорадке — анализ многовековых изречений. Индийское сердце J . 1993; 45: 463–7.

    22. Шаффер FM, Агарвал Р, Хелм Дж, Джингелл Р.Л., Роланд Дж. М., О’Нил К.М. Постстрептококковый реактивный артрит и немой кардит: описание случая и обзор литературы. Педиатрия . 1994; 93: 837–9.

    23.Арнольд М.Х., Тиндаль А. Постстрептококковый реактивный артрит. Энн Рум Дис . 1989. 48: 686–8.

    24. Гибофски А, Zabriskie JB. Ревматическая лихорадка: новый взгляд на старую болезнь. Bull Rheum Dis . 1993; 42: 5–7.

    25. Берди Н., Хоскинг М, Клалоу МК, Даффи СМ, Аллен У, Petty RE. Острая ревматическая лихорадка и постстрептококковый реактивный артрит: практика диагностики и лечения педиатрических узких специалистов в Канаде. Дж. Ревматол . 2001; 28: 1681–8.

    26. Маки С.Л., Кит А. Постстрептококковый реактивный артрит: что это такое и откуда мы знаем ?. Ревматология (Оксфорд) . 2004. 43: 949–54.

    27. Giedd JN, Рапопорт JL, Гарви М.А., Перлмуттер С, Swedo SE. МРТ-оценка детей с обсессивно-компульсивным расстройством или тиками, связанными со стрептококковой инфекцией. Ам Дж. Психиатрия . 2000; 157: 281–3.

    28. Swedo SE, Леонард Х.Л., Кисслинг LS. Размышления о психоневрологических расстройствах, опосредованных антинейрональными антителами. Педиатрия . 1994; 93: 323–6.

    29. Swedo SE, Леонард Х.Л., Миттлман ББ, Аллен AJ, Рапопорт JL, Dow SP, и другие. Выявление детей с детскими аутоиммунными психоневрологическими расстройствами, связанными со стрептококковыми инфекциями, по маркеру, ассоциированному с ревматической лихорадкой. Ам Дж. Психиатрия . 1997. 154: 110–2.

    30. Nordstrand A, Норгрен М, Holm SE. Патогенетический механизм острого постстрептококкового гломерулонефрита. Scand J Infect Dis . 1999; 31: 523–37.

    31. Конинг С, Верхаген А.П., van Suijlekom-Smit LW, Моррис А, Батлер СС, van der Wouden JC. Вмешательства при импетиго. Кокрановская база данных Syst Rev . 2004; (4): CD003261.

    32. Брэди Х.Р., О’Мира Ю.М., Бреннер Б.М. Клубочковые заболевания. В: Kasper DL, et al., Eds. Принципы внутренней медицины Харрисона. 16-е изд. Нью-Йорк: Макгроу-Хилл, 2005: 1674–94.

    33. Sieck JO, Авад М, Саур Дж, Али Х, Куниби W, Мерсер Э. Сопутствующий постстрептококковый кардит и гломерулонефрит: серийная эхокардиографическая диагностика и последующее наблюдение. Eur Heart J . 1992; 13: 1720–3.

    34. Couser WG.Гломерулонефрит. Ланцет . 1999; 353: 1509–15.

    35. Виджаякумар М. Острый и серповидный гломерулонефрит. Индиан Дж. Педиатр . 2002; 69: 1071–5.

    36. Батсон Б.Н., Балига Р. Постстрептококковая гипертоническая энцефалопатия с нормальным анализом мочи. Педиатр Нефрол . 2003; 18: 73.

    37. Столлерман Г.Х. Ревматическая лихорадка. Ланцет . 1997; 349: 935–42.

    Низкие уровни антител против прикрепленных к клеточной стенке белков Streptococcus pyogenes предрасполагают к тяжелому инвазивному заболеванию | Журнал инфекционных болезней

    Аннотация

    Образцы сыворотки в острой фазе от 70 пациентов с инвазивным заболеванием, вызванным стрептококками группы A (GAS), были проанализированы на предмет антител IgG к 6 недавно охарактеризованным факторам вирулентности GAS (SclA, SclB, GRAB, MtsA, EndoS и IdeS) и SpeB.Уровни антител против прикрепленных к клеточной стенке GAS-антигенов SclA, SclB и GRAB были значительно ниже у пациентов с тяжелым инвазивным заболеванием (синдром стрептококкового токсического шока [STSS] и / или некротический фасциит [NF]; n = 35) по сравнению с с уровнями у пациентов с нетяжелой ГАЗ-бактериемией ( n = 35). Среди пациентов с тяжелым инвазивным заболеванием значительно более низкие уровни антител против GRAB были обнаружены у пациентов с STSS ( n = 10), чем у пациентов с NF ( n = 17).Уровни антител против SpeB у пациентов с тяжелой бактериемией были аналогичны таковым у пациентов с нетяжелой бактериемией, а уровни у пациентов с STSS были такими же, как у пациентов с NF. Данные показывают, что иммунитет к белкам, прикрепленным к клеточной стенке, может играть роль в защите от тяжелого инвазивного заболевания и что антитела против GRAB могут иметь значение в патогенезе STSS.

    Человеческие инфекции, вызванные Streptococcus pyogenes или стрептококком группы A (GAS), могут варьироваться от относительно безобидных инфекций, таких как импетиго или фаринготонзиллит, до тяжелого инвазивного заболевания, осложненного шоком и полиорганной недостаточностью, такого как синдром стрептококкового токсического шока (STSS). ) или некротический фасциит (НФ).В конце 1980-х годов во всем мире наблюдался заметный рост распространенности серьезных инвазивных ГАЗ-болезней, и эта частота сохранилась [1–5]. Причина возобновления инвазивных инфекций ГАЗ до сих пор неизвестна. Однако это, вероятно, связано с появлением более вирулентных штаммов и отсутствием защитного иммунитета у населения.

    Недавно был охарактеризован ряд новых потенциальных факторов вирулентности ГАЗ. Было показано, что прикрепленный к клеточной стенке GRAB связывает ингибитор протеиназ человека α2-макроглобулин [6].Защищая компоненты бактериальной поверхности от протеолитической атаки, GRAB может действовать как фактор вирулентности. SclA и SclB — это два родственных белка, прикрепленных к клеточной стенке, которые содержат большие области, подобные человеческому коллагену [7–11]. NH 2 -концы как SclA, так и SclB гипервариабельны, тогда как коллагеноподобные области более консервативны между белками из разных штаммов. Как SclA [7], так и SclB [10], как было показано, увеличивают прилипание стрептококков к клеткам человека. Для трансмембранного притока ионов металлов, таких как Zn, Fe и Cu, ГАЗ зависит от ассоциированного с мембраной белкового комплекса.Липопротеиновый компонент комплекса, MtsA, необходим для достаточного поглощения ионов металлов [12] и для нормального роста бактерий in vitro [13]. EndoS и IdeS представляют собой 2 секретируемых фермента GAS, которые обладают специфическим действием на IgG [14–16]. EndoS удаляет гликановую составляющую из IgG и, таким образом, может изменять функциональность опсонизирующего антитела. Это приводит к увеличению выживаемости бактерий в крови человека ex vivo из-за нарушения связывания рецептора Fc [17]. IdeS — это секретируемая цистеиновая протеиназа, которая расщепляет IgG в шарнирной области с высокой степенью специфичности.Было показано, что IdeS расщепляет опсонизирующие антитела IgG, связанные со стрептококковыми поверхностными структурами, тем самым ингибируя Fc-опосредованное уничтожение GAS фагоцитарными клетками [16, 18].

    Все описанные новые белки GAS обладают функциями, которые могут влиять на вирулентность, и экспериментальные данные показали, что они влияют на прилипание, размножение и выживаемость бактерий. В настоящем исследовании специфический иммунитет к этим антигенам, а также к хорошо охарактеризованной цистеиновой протеиназе GAS (SpeB) был исследован у пациентов с инвазивным заболеванием GAS.

    Предметы, материалы и методы

    Пациенты и образцы сыворотки. Образцы сыворотки были получены от пациентов и здоровых людей в Швеции и Нидерландах. Шведские пациенты ( n = 34) лечились от бактериемии ГАЗ в Клинике инфекционных заболеваний, Университетская больница Лунда, Лунд, Швеция, с 1990 по 2002 год. Пациенты из Нидерландов ( n = 36) входили в группу общенациональная программа эпиднадзора проводилась с 1994 по 1997 год и была описана в другом месте [19].Средний и средний возраст пациентов составлял 50 лет (диапазон от 0 до 82 лет), а соотношение мужчин и женщин составляло 34:36; все значения были одинаковыми для шведских и голландских пациентов. Четыре человека были моложе 15 лет. ГАЗ был изолирован из обычно стерильного участка у всех пациентов; 64 изолята были получены из посевов крови и 6 были получены при инфекции глубоких тканей. Пациенты были разделены на группы в зависимости от наличия у них тяжелых или нетяжелых инвазивных инфекций, что определялось на основании клинического течения [20].Тяжелая инфекция, определяемая как бактериемия, осложненная STSS ( n = 10), NF ( n = 17) или STSS с NF ( n = 8), наблюдалась у 35 пациентов. У пациентов с нетяжелой инфекцией ( n = 35) не было признаков гипотензии, органной недостаточности или поражения глубоких тканей. Средний возраст составлял 49 и 51 год, а соотношение мужчин и женщин составляло 16:19 и 18:17 в группах пациентов с тяжелой и нетяжелой инфекцией, соответственно. Обширная история болезни была доступна у 58 пациентов.Считалось, что пятнадцать из них страдают хроническим заболеванием, которое может повлиять на их иммунный статус. К ним относятся сахарный диабет ( n = 4), ревматоидный артрит ( n = 3), текущее злокачественное заболевание ( n = 3), внутривенное употребление наркотиков ( n = 3) и хроническое употребление кортикостероидов ( n = 2). Образцы сыворотки были получены до 10-го дня (среднее и медиана, 3,6-й день) после появления симптомов заболевания и хранили при -70 ° C до анализа.Кроме того, контрольные образцы сыворотки крови здоровых людей были получены от 40 голландских и 40 шведских доноров крови. Средний и средний возраст доноров крови составлял 41 и 42 года соответственно (диапазон от 19 до 69 лет), а соотношение мужчин и женщин составляло 42:38. Настоящее исследование было одобрено Комитетом по этике исследований Лундского университета.

    Микробиология. Серотип M шведских стрептококковых штаммов определяли путем секвенирования продуктов ген-специфической полимеразной цепной реакции (ПЦР) emm (типирование emm ).Для ПЦР-амплификации генов emm матричную ДНК получали кипячением бактерий S. pyogenes в стерильной воде. Клеточный дебрис удаляли центрифугированием, и 5 мкл кипяченого лизата использовали с emm-специфическими праймерами (праймер 1, 5′-TATT (C / G) GCTTAGAAAATTAA-3 ‘; праймер 2, 5′-GCAAGTTCTTCAGCTTGTTT- 3’ ), как описано в [21]. Последовательности, полученные из продуктов ПЦР, специфичных для emm , были подвергнуты поиску гомологии в базе данных последовательностей emm в Центре по контролю и профилактике заболеваний (доступно по адресу: http: // www.cdc.gov/ncidod/biotech/strep/strepindex.html). Изоляты из Нидерландов были проанализированы на серотип М, как описано в другом месте [19].

    Белки и пептиды. Белки, использованные в настоящем исследовании, кратко описаны в таблице 1. Предсказанный зрелый GRAB был получен путем клонирования grab из штамма KTL3 серотипа M1 GAS [6] в вектор pET11d (Amersham-Pharmacia Biotech). Полученную плазмиду вводили в Escherichia coli (BL21; Amersham-Pharmacia Biotech), и трансформанты выращивали при 37 ° C до OD 620 нм 0.5, с последующей индукцией 0,5 ммоль / л изопропил-β-d-тиогалактопиранозида. Бактерии собирали центрифугированием через 3 часа, ресуспендировали в 20 ммоль / л Трис-HCl (pH 8,0), обрабатывали ультразвуком и повторно центрифугировали при 8000 g. Лизат подвергали ионообменной хроматографии с использованием колонки monoQ (Amersham-Pharmacia Biotech) в системе жидкостной хроматографии на быстрых белках (Amersham-Pharmacia Biotech). Клонирование и рекомбинантная экспрессия IdeS описаны в другом месте [16]. Для получения IdeS, не обладающего ферментативной активностью, каталитический остаток цистеина 94 был заменен глицином с использованием набора Transformer Site-Directed Mutagenesis Kit (Clontech) в соответствии с инструкциями производителя [18].Слитый белок глутатион S -трансфераза (GST) -IdeS C94G очищали на глутатион-сефарозе (Amersham-Pharmacia Biotech) в соответствии со стандартными протоколами. Полноразмерный зрелый EndoS и большой фрагмент SclB экспрессировались в E. coli с использованием системы GST Gene Fusion и очищались, как описано в других источниках [10, 15]. MtsA экспрессировался и очищался с помощью той же методики, но был модифицирован для отсутствия N-концевого цистеина зрелого белка и, таким образом, также липидной части [12].SpeB очищали из культурального супернатанта штамма M1 S. pyogenes , выращенного в среде C [22] с добавлением 0,5 ммоль / л дитиотреитола, как описано в другом месте [23]. Чистота белков, использованных в настоящем исследовании, составляла> 95% по данным SDS-PAGE. Антиген SclA был получен в виде синтетического пептида длиной 21 ак (GDRGETGAQGPVGPQGEKGET). Эта последовательность охватывает область в COOH-концевой половине коллагеноподобных повторов, которая очень похожа между белками SclA, полученными из разных S.pyogenes [8]. Синтез пептидов выполняли в Центре биомолекулярных ресурсов (Лундский университет, Лунд, Швеция).

    ELISA. Планшеты для микротитрования (Maxisorb; NUNC) покрывали в течение ночи при 4 ° C антигенами GAS в буфере для покрытия (0,05 моль / л NaHCO 3 [pH 9,6]). Белки разводили до следующих концентраций: SclA до 2 мкг / мл, SclB до 0,5 мкг / мл, GRAB до 0,5 мкг / мл, MtsA до 0,5 мкг / мл, EndoS до 0,75 мкг / мл, IdeS до 0,4 мкг / мл, и SpeB до 0.5 мкг / мл. Планшеты промывали PBST (0,05% твин в PBS) и блокировали 2% бычьим сывороточным альбумином (Sigma) в PBST (PBSTA). Фиксированное разведение образцов сыворотки пациентов и здоровых людей в PBSTA добавляли в лунки в двух экземплярах. Использовали следующие разведения сыворотки: 1: 250 для SclA, SclB и MtsA; 1: 500 для GRAB; и 1: 1000 для EndoS, IdeS и SpeB. Используемые концентрации антигена и разведения сыворотки были признаны оптимальными с использованием шахматного титрования. Связанные антитела выявляли путем инкубации с конъюгированным с пероксидом хрена вторичным антителом против человеческого IgG, разведенным 1: 3000 в PBSTA (Bio-Rad).Все инкубации проводили в течение 1 ч при 37 ° C с последующей стадией промывки. Раствор субстрата, 0,1% (мас. / Об.) Диаммоний-2,2-азино-бис- (3-этил-2,3-дигидробензтиазолин) -6-сульфонат, 0,012% (об. / Об.) H 2 O 2 в 100 ммоль / л лимонной кислоты и 100 ммоль / л NaH. 2 PO 4 (pH 4,5) были добавлены, и оптическая плотность при 415 нм была определена через 15 минут. Бланк без сыворотки был включен в четырех повторах на каждый планшет, и эти значения оптической плотности вычитались из значений, полученных с использованием образцов сыворотки.Индекс ELISA рассчитывали путем деления среднего значения оптической плотности для каждого образца сыворотки на среднее значение оптической плотности для стандартного положительного образца сыворотки в четырех повторностях на каждом планшете. Ежедневная вариация каждого ELISA составляла 2,2% –14,2% и была выражена как коэффициент вариации на основе образцов, взятых в 8 различных случаях.

    Статистическая оценка. Сравнение между группами, в которых количество наблюдений было <40 в любой группе, проводилось с использованием непараметрического критерия Манна-Уитни U .В противном случае использовался двухвыборочный тест z , предполагающий неравные дисперсии. P <0,05 считалось статистически значимым.

    Результаты

    Пациенты и характеристики штаммов. Было обследовано 70 пациентов с инвазивной инфекцией ГАЗ из 2 различных географических областей, Нидерландов и южной части Швеции. Тридцать пять пациентов имели относительно доброкачественное течение бактериемии GAS без нарушений кровообращения или органной недостаточности, а у 35 пациентов была тяжелая инфекция, которая соответствовала критериям STSS и / или NF.Штамм GAS был изолирован из обычно стерильного участка от каждого из пациентов. Из них 57 штаммов были доступны для анализа. Штаммы серотипов M1, M28 и M3 были выделены у 17 (30%), 13 (23%) и 9 (16%) из 57 пациентов соответственно. Распределение Мсеротипов среди пациентов с тяжелой и нетяжелой инфекцией представлено в таблице 2. Из 57 штаммов 26 были выделены от пациентов с тяжелой инвазивной инфекцией. В этой группе серотип M1 представлял 12 (46%) штаммов.Серотипы M28 и M3 были выделены каждый из 4 (15%) пациентов. Доля различных серотипов М была сходной между штаммами от шведских и голландских пациентов (данные не показаны).

    Серологические испытания. Уровни антител IgG против прикрепленных к клеточной стенке (фигура 1A) и секретируемых (фигура 1B) стрептококковых антигенов были определены в образцах сыворотки от 80 здоровых доноров крови. Все образцы сыворотки крови доноров показали определяемые уровни антител против всех исследованных стрептококковых антигенов.Однако были значительные различия во всех анализах, за исключением ELISA против SclA. Невозможно выявить паттерн с высоким или низким уровнем антител против всех или нескольких антигенов на индивидуальной основе. Кроме того, не было различий в уровнях антител против любого из антигенов между шведской ( n = 40) и голландской ( n = 40) группами доноров крови (данные не показаны).

    Пациенты с инвазивной инфекцией GAS показали значительно более высокие уровни антител в острой фазе против всех изученных антигенов, за исключением EndoS, по сравнению с донорами крови (таблица 3).Самые высокие уровни антител в группе пациентов наблюдались среди пациентов с иммунодефицитным состоянием (таблица 3), у которых были обнаружены значительно более высокие уровни антител против всех 7 антигенов GAS, по сравнению с пациентами без основного заболевания.

    Уровни антител против различных антигенов сравнивали между пациентами с нетяжелой и тяжелой инфекцией ГАЗ. Из 4 антигенов, прикрепленных к клеточной стенке, значительно более низкие уровни антител ( P <0,05) были обнаружены против SclA, SclB и GRAB в образцах сыворотки острой фазы от пациентов с тяжелой инфекцией (рисунок 2A).Уровни антител против MtsA также были ниже в группе пациентов с тяжелым заболеванием, хотя и не значительно ниже ( P = 0,05). Напротив, не было значительных различий между группами пациентов при анализе антител против секретируемых антигенов EndoS, IdeS и SpeB (рисунок 2B).

    У пациентов с тяжелым течением ГАЗ-инфекции развились STSS, NF или и то, и другое. Сравнивались уровни антител у пациентов с STSS без NF ( n = 10) и у пациентов с NF без шока ( n = 17), и для всех исследованных антигенов более низкие уровни антител были обнаружены в первой группе. .Однако значительно более низкие уровни были обнаружены только для антител против GRAB (рис. 3A и 3B). 8 пациентов, у которых был STSS в сочетании с некрозом мягких тканей, были исключены из этого статистического анализа.

    Обсуждение

    Для настоящего исследования был выбран ряд недавно охарактеризованных белков GAS. Гены, кодирующие эти белки, присутствуют во всех или почти во всех изолятах GAS, но было показано, что экспрессия белков in vitro варьируется. Согласно данным о последовательностях секретируемые ферменты EndoS, IdeS и SpeB консервативны между изолятами GAS из разных серотипов M.Подобно нескольким другим белкам, прикрепленным к клеточной стенке, SclA, SclB и GRAB имеют более гетерогенную структуру с вариабельными NH 2 -концами и повторяющимися областями разного размера. Однако большие области SclB и GRAB гомологичны между штаммами, что оправдывает выбор всего GRAB и большого фрагмента SclB в качестве антигенов. В экспериментах с SclA, которые демонстрируют более ограниченную идентичность между различными изолятами GAS, использовали 21-мерный пептид, сконструированный из наиболее консервативной части молекулы.Ранее было показано, что антитела против SclA не перекрестно реагируют с SclB, и наоборот, хотя оба белка содержат большие области коллагеноподобных повторов [10]. MtsA, который связан с мембраной бактериальной клетки через NH 2 -концевую липидную связь, является консервативным между штаммами GAS и демонстрирует обширную гомологию с родственными белками у других видов. Таким образом, обнаружение специфического IgG против этой молекулы может отражать перекрестную реактивность с пермеазами других бактериальных металлов.

    В настоящем исследовании изучали уровни сывороточных IgG-антител в острой фазе против 6 недавно описанных факторов вирулентности GAS. Кроме того, был включен SpeB, поскольку он считается важным фактором вирулентности. Эта протеиназа экспрессируется во всех штаммах GAS, и серологические данные были доступны из других исследований [19, 24–26]. Определяемые уровни антител против всех исследованных антигенов GAS были обнаружены во всех образцах сыворотки здоровых людей (рисунок 1). Это, вероятно, отражает обычное воздействие GAS в общей популяции и подтверждает повсеместное присутствие этих антигенов в различных изолятах GAS.Таким образом, при сравнении образцов сыворотки здоровых шведских людей с образцами здоровых голландцев не было различий в уровнях антител против 7 изученных стрептококковых антигенов. Однако экспрессия in vivo специфических стрептококковых антигенов и их иммуногенность, вероятно, изменчивы, поскольку среди отдельных доноров крови наблюдалась значительная гетерогенность уровней антител против различных антигенов. Аналогичные индивидуальные различия в уровнях антител наблюдались у 30 взрослых пациентов с острой фазой ГАЗ-фаринготонзиллита, но в целом не было различий в уровнях специфических антител между донорами крови и пациентами с фаринготонзиллитом (P.Окессон и Б. Кристенсон, неопубликованные данные). Во всех анализах у 4 детей младше 15 лет были выявлены уровни антител, аналогичные показателям взрослых пациентов, и поэтому они были включены в настоящее исследование. Распределение различных штаммов серотипа М среди изолятов культур крови от шведских и голландских пациентов также было сходным. Взятые вместе, образцы сыворотки и бактериальные штаммы пациентов из Швеции и пациентов из Нидерландов были сопоставимы, и поэтому они не были разделены в настоящем исследовании.Более того, более высокая распространенность серотипа M1, наблюдаемая у пациентов с осложненной бактериемией ГАЗ, согласуется с данными ряда других исследований [27, 28].

    Когда уровни антител в острой фазе у пациентов с тяжелым заболеванием (STSS и / или NF) сравнивались с уровнями у пациентов с неосложненным течением ГАС-бактериемии, в группе пациентов были обнаружены более низкие уровни антител против антигенов, прикрепленных к клеточной стенке. при тяжелом течении болезни (рисунок 2). Индексы ELISA для SclA, SclB и GRAB были значительно ниже ( P <.05) среди пациентов с тяжелым заболеванием, хотя значимых различий для MtsA не было ( P = 0,050). Предыдущие исследования показали, что низкий ответ антител против белка M1, прикрепленного к клеточной стенке, наблюдался у пациентов с бактериемией GAS, по сравнению с таковой у здоровых людей [24], и у пациентов со смертельным сепсисом, по сравнению с таковым у пациентов с тонзиллит [25]. Низкий ответ антител против SclA, SclB и GRAB предполагает, что иммунитет против компонентов клеточной стенки GAS имеет важное значение для исхода инвазивного заболевания GAS.С другой стороны, уровни антител против секретируемых антигенов EndoS, IdeS и SpeB не различались между двумя группами пациентов. Данные для SpeB контрастируют с данными двух предыдущих исследований [25, 26], которые продемонстрировали, что низкие уровни антител против SpeB являются фактором риска развития осложненной ГАЗ-бактериемии, включая STSS. Однако данные двух других исследований [19, 24] показали аналогичные уровни анти-SpeB у пациентов с тяжелой и нетяжелой бактериемией, соответственно, что согласуется с результатами, представленными здесь.В настоящем исследовании нет данных об абсолютной концентрации специфических сывороточных антител или о точном уровне бактериемии. Можно утверждать, что низкий уровень антител против белков, прикрепленных к клеточной стенке, обнаруживаемый у пациентов с тяжелым заболеванием, связан с абсорбцией антител большим количеством циркулирующих стрептококковых организмов. Однако данные предыдущих серологических исследований пациентов с эндокардитом Staphylococcus aureus , у которых наблюдается устойчиво высокий уровень бактериемии даже во время соответствующей антибактериальной терапии, не подтверждают это предположение.Таким образом, у пациентов с эндокардитом были обнаружены более высокие уровни антител IgG к капсулярному полисахариду S. aureus , поверхностному антигену, и липазе S. aureus , секретируемому ферменту, чем у пациентов с неосложненным низким уровнем S. aureus. бактериемия [29, 30].

    В предыдущем определении STSS некроз мягких тканей, включая NF, мог быть 1 признаком, необходимым для соответствия критериям для определенного случая STSS [20]. Однако в том же согласованном документе другое инвазивное ГАЗ-заболевание может включать очаговые инфекции, такие как НФ, с бактериемией или без нее, но без шока.Поскольку эти пациенты с НФ кажутся клинически разными, можно предположить, что в них участвуют и другие патогенные факторы. Таким образом, мы отдельно исследовали пациентов с СТСС без НФ и пациентов с НФ без шока. Когда уровни антител были измерены в этих 2 группах, значительно более низкий уровень против GRAB был обнаружен у пациентов с STSS без NF. Эти данные показывают, что низкие уровни антител IgG против GRAB могут быть фактором риска развития STSS у пациентов с ГАЗ-бактериемией. Функция GRAB тесно связана с регуляцией протеолиза и его контролем на бактериальной поверхности [31].Действие GRAB in vivo, возможно, может привести к изменению протеолитических механизмов, включая комплемент, контактную и коагуляционную системы, что влияет на тяжесть заболевания.

    В отличие от большинства предыдущих исследований [19, 24–26], настоящее исследование показало, что уровни антител против всех исследованных антигенов были значительно выше в образцах сыворотки острой фазы от пациентов с инвазивным ГАЗ, чем в образцах от здоровых доноров крови. (таблица 3). Сходный результат был отмечен в более раннем исследовании, в котором средний уровень IgG против SpeB среди пациентов с бактериемией GAS был выше, чем среди пациентов с тонзиллитом [25].Подгрупповой анализ представленных данных показал, что пациенты с основным иммунодефицитным состоянием имели более высокие уровни антител против всех изученных антигенов GAS по сравнению с пациентами, которые были здоровы до стрептококковой инфекции (таблица 3). Гипотетически это можно объяснить более частым возникновением стрептококковых инфекций кожи и слизистых оболочек, наблюдаемых, например, среди пациентов с диабетом, наркоманов и пациентов с ревматоидным артритом, хотя в настоящих данных не было таких данных из истории болезни.Можно также утверждать, что усиленный иммунный ответ IgG мог уже иметь место в течение 10 дней после начала инфекции. Однако эта возможность не была подтверждена, когда серологические данные были нанесены на график в зависимости от времени взятия пробы сыворотки по отношению к началу инфекции (данные не показаны), а средний и средний отбор образцов сыворотки были получены только через 3,6 дня после начала инфекции. Взятые вместе, результаты показывают, что пациенты, у которых развивается инвазивное ГАЗ-заболевание, обычно ранее подвергались воздействию ГАЗ, что отражается уже существующим иммунным ответом.Это показывает, что не только иммунный статус, но и другие факторы хозяина должны играть роль в определении предрасположенности к инвазивному ГАЗ-заболеванию. Например, недавнее исследование показало, что STSS и NF связаны со специфическими гаплотипами HLA класса II [32].

    В заключение, у пациентов с тяжелой инвазивной инфекцией GAS были обнаружены значительно более низкие уровни ранее существовавших антител IgG против 3 недавно описанных антигенов GAS, прикрепленных к клеточной стенке (SclA, SclB и GRAB), чем у пациентов с нетяжелой инвазивной инфекцией GAS.Кроме того, пациенты, у которых развился STSS без NF, показали значительно более низкие уровни антител против GRAB по сравнению с пациентами с NF без шока. Эти данные подчеркивают патогенное значение взаимодействий между поверхностными белками GAS и молекулами человека-хозяина.

    Благодарность

    Благодарим Кристину Хьельм-Бебакуа за отличную техническую помощь.

    Список литературы

    1 ..

    Синдром стрептококкового токсического шока, ассоциированный с некротическим фасциитом

    ,

    Annu Rev Med

    ,

    2000

    , vol.

    51

    (стр.

    271

    88

    ) 2.,. ,.

    Возрождение стрептококковых заболеваний группы А с комментарием к синдрому стафилококкового токсического шока

    ,

    Возникающие инфекции

    ,

    1998

    Нью-Йорк

    Academic Press

    (стр.

    185

    218

    ) 3.,,, и другие.

    Эпидемиологический анализ инвазивных и неинвазивных изолятов стрептококков группы A в Гонконге

    ,

    J Clin Microbiol

    ,

    2003

    , vol.

    41

    (стр.

    937

    42

    ) 4.,,, Et al.

    Клинико-эпидемиологические особенности стрептококковой пневмонии группы А в Онтарио, Канада

    ,

    Arch Intern Med

    ,

    2003

    , vol.

    163

    (стр.

    467

    72

    ) 5.,,, Et al.

    Тяжелые стрептококковые инфекции мягких тканей группы А в Онтарио: 1992–1996

    ,

    Clin Infect Dis

    ,

    2002

    , vol.

    34

    (стр.

    454

    60

    ) 6.,,.

    Белок GRAB Streptococcus pyogenes регулирует протеолиз на поверхности бактериальных клеток путем связывания α 2 -макроглобулин

    ,

    J Biol Chem

    ,

    1999

    , vol.

    274

    (стр.

    15336

    44

    ) 7.,,, Et al.

    Идентификация и характеристика гена scl , кодирующего фактор вирулентности внеклеточного белка стрептококка группы А, сходный с человеческим коллагеном

    ,

    Infect Immun

    ,

    2000

    , vol.

    68

    (стр.

    6542

    53

    ) 8.,,.

    SclA, новый коллагеноподобный поверхностный белок Streptococcus pyogenes

    ,

    Infect Immun

    ,

    2000

    , vol.

    68

    (стр.

    6370

    7

    ) 9.,,, Et al.

    Идентификация и характеристика второго внеклеточного коллагеноподобного белка, продуцируемого стрептококками группы А: контроль продукции на уровне трансляции

    ,

    Infect Immun

    ,

    2001

    , vol.

    69

    (стр.

    1729

    38

    ) 10.,.

    Уникальная регуляция SclB — нового коллагеноподобного поверхностного белка Streptococcus pyogenes

    ,

    Mol Microbiol

    ,

    2001

    , vol.

    40

    (стр.

    1427

    38

    ) 11 ..

    Streptococcus pyogenes sclB кодирует предполагаемый гипервариабельный поверхностный белок с коллагеноподобной повторяющейся структурой

    ,

    Microbiology

    ,

    2001

    , vol.

    147

    (стр.

    419

    29

    ) 12.,,.

    Идентификация и характеристика переносчика ABC Streptococcus pyogenes с множественной специфичностью к катионам металлов

    ,

    Mol Microbiol

    ,

    1999

    , vol.

    34

    (стр.

    596

    606

    ) 13.,,.

    Регулятор PerR участвует в реакции на окислительный стресс и гомеостазе железа и необходим для полной вирулентности Streptococcus pyogenes

    ,

    Infect Immun

    ,

    2002

    , vol.

    70

    (стр.

    4968

    76

    ) 14.,.

    EndoS, новый секретируемый белок из Streptococcus pyogenes с эндогликозидазной активностью в отношении человеческого IgG

    ,

    EMBO J

    ,

    2001

    , vol.

    20

    (стр.

    3046

    55

    ) 15.,.

    Влияние SpeB и EndoS из Streptococcus pyogenes на иммуноглобулины человека

    ,

    Infect Immun

    ,

    2001

    , vol.

    69

    (стр.

    7187

    9

    ) 16.,,.

    IdeS, новая стрептококковая цистеиновая протеиназа с уникальной специфичностью к иммуноглобулину G

    ,

    EMBO J

    ,

    2002

    , vol.

    21

    (стр.

    1607

    15

    ) 17.,,,,,.

    EndoS и SpeB из Streptococcus pyogenes ингибируют опсонофагоцитоз, опосредованный иммуноглобулином

    ,

    Infect Immun

    ,

    2002

    , vol.

    70

    (стр.

    6646

    51

    ) 18.,,,.

    Mac / IdeS, цистеиновая протеиназа Streptococcus pyogenes , защищает патоген от фагоцитарного уничтожения

    ,

    Nat Med

    ,

    2002

    , vol.

    8

    (стр.

    1044

    5

    ) 19.,,, Et al.

    Инвазивная стрептококковая инфекция группы A в Нидерландах: доказательства защитной роли антител к экзотоксину A

    ,

    J Infect Dis

    ,

    2000

    , vol.

    181

    (стр.

    631

    8

    ) 20.

    Определение синдрома токсического шока, вызванного стрептококками группы А. Обоснование и согласованное определение. Рабочая группа по тяжелым стрептококковым инфекциям

    ,

    JAMA

    ,

    1993

    , vol.

    269

    (стр.

    390

    1

    ) 21.,,,.

    Обзор последовательностей гена emm и типов Т-антигенов из изолятов системной инфекции Streptococcus pyogenes , собранных в Сан-Франциско, Калифорния; Атланта, Джорджия; и Коннектикут в 1994 и 1995 гг.

    ,

    J Clin Microbiol

    ,

    1997

    , vol.

    35

    (стр.

    1231

    5

    ) 22.,,,,.

    Выделение и характеристика эритрогенных токсинов V.Сообщение: идентичность эритрогенного токсина типа B и предшественника стрептококковой протеиназы

    ,

    Zentralbl Bakteriol Mikrobiol Hyg [A]

    ,

    1983

    , vol.

    255

    (стр.

    221

    33

    ) 23.,.

    Стрептококковая цистеиновая протеиназа высвобождает биологически активные фрагменты поверхностных белков стрептококков

    ,

    J Biol Chem

    ,

    1995

    , vol.

    270

    (стр.

    9862

    7

    ) 24.,,, Et al.

    Факторы риска в патогенезе инвазивных стрептококковых инфекций группы А: роль защитного гуморального иммунитета

    ,

    Infect Immun

    ,

    1999

    , vol.

    67

    (стр.

    1871

    7

    ) 25.,,,.

    Аспекты патогенеза серьезных стрептококковых инфекций группы А в Швеции 1988–1989

    ,

    J Infect Dis

    ,

    1992

    , vol.

    166

    (стр.

    31

    7

    ) 26.,,,.

    Инвазивные стрептококковые инфекции группы A: изоляты T1M1, экспрессирующие пирогенные экзотоксины A и B в сочетании с избирательным отсутствием токсин-нейтрализующих антител, связаны с повышенным риском синдрома токсического шока стрептококка

    ,

    J Infect Dis

    ,

    1999

    , vol.

    180

    (стр.

    410

    8

    ) 27.,,,.

    Серотипы Streptococcus pyogenes , присутствовавшие в Великобритании в 1980–1990 гг., И их связь с заболеванием

    ,

    J Med Microbiol

    ,

    1993

    , vol.

    39

    (стр.

    165

    78

    ) 28.,,.

    Изменение эпидемиологии стрептококковой инфекции группы А в США

    ,

    Lancet

    ,

    1990

    , vol.

    336

    (стр.

    1167

    71

    ) 29.,,.

    Новый серологический тест на инфекцию Staphylococcus aureus : антитела IgG к липазе S. aureus с использованием иммуноферментного анализа

    ,

    J Infect Dis

    ,

    1985

    , vol.

    152

    (стр.

    286

    92

    ) 30.,,,.

    Диагностика эндокардита Staphylococcus aureus путем выявления антител против S. aureus капсульного полисахарида типов 5 и 8

    ,

    J Infect Dis

    ,

    1991

    , vol.

    163

    (стр.

    530

    3

    ) 31.,.

    Протеолиз и его регуляция на поверхности Streptococcus pyogenes

    ,

    Mol Microbiol

    ,

    2002

    , vol.

    43

    (стр.

    537

    44

    ) 32.,,, Et al.

    Иммуногенетическая и молекулярная основа различий в исходах стрептококковых инфекций группы А

    ,

    Nat Med

    ,

    2002

    , vol.

    8

    (стр.

    1398

    404

    )

    Рисунки и таблицы

    Рисунок 1.

    Уровни антител IgG к стрептококковым антигенам группы А (GAS) в образцах сыворотки здоровых людей в Швеции ( n = 40) и Голландии ( n = 40). Каждая точка представляет собой индекс ELISA для отдельного контрольного образца сыворотки. Уровни представлены для 4 прикрепленных к клеточной стенке белков (A) и для 3 секретируемых белков GAS (B) .

    Рисунок 1.

    Уровни антител IgG против стрептококковых антигенов группы А (GAS) в образцах сыворотки здоровых людей в Швеции ( n = 40) и Голландии ( n = 40).Каждая точка представляет собой индекс ELISA для отдельного контрольного образца сыворотки. Уровни представлены для 4 прикрепленных к клеточной стенке белков (A) и для 3 секретируемых белков GAS (B) .

    Рисунок 2.

    Уровни антител IgG в острой фазе у пациентов с нетяжелым и тяжелым инвазивным стрептококковым (ГАЗ) заболеванием группы А. Уровни в отношении прикрепленных к клеточной стенке белков (A) и секретируемых белков GAS (B) выражены в виде индексов ELISA.Белые прямоугольники представляют пациентов с нетяжелой ГАЗ-бактериемией ( n = 35), а серые прямоугольники представляют пациентов с тяжелой инвазивной инфекцией ( n = 35). Среднее значение, а также 25-й и 75-й процентили отмечены прямоугольниками. Горизонтальные линии вне рамок представляют 10-й и 90-й процентили. Статистические расчеты значений P были выполнены с помощью теста Манна-Уитни U .

    Рисунок 2.

    Уровни антител IgG в острой фазе у пациентов с нетяжелой и тяжелой инвазивной стрептококковой болезнью группы А (ГАЗ).Уровни в отношении прикрепленных к клеточной стенке белков (A) и секретируемых белков GAS (B) выражены в виде индексов ELISA. Белые прямоугольники представляют пациентов с нетяжелой ГАЗ-бактериемией ( n = 35), а серые прямоугольники представляют пациентов с тяжелой инвазивной инфекцией ( n = 35). Среднее значение, а также 25-й и 75-й процентили отмечены прямоугольниками. Горизонтальные линии вне рамок представляют 10-й и 90-й процентили. Статистические расчеты значений P были выполнены с помощью теста Манна-Уитни U .

    Рисунок 3.

    Уровни антител IgG в острой фазе у пациентов с тяжелой инвазивной стрептококковой болезнью группы А. Белые прямоугольники представляют пациентов с синдромом стрептококкового токсического шока без некротического фасциита (НФ) ( n = 10), а серые прямоугольники представляют пациентов с НФ без шока. Уровни в отношении прикрепленных к клеточной стенке белков (A) и секретируемых белков GAS (B) выражены в виде индексов ELISA. Среднее значение, а также 25-й и 75-й процентили отмечены прямоугольниками.Горизонтальные линии вне рамок представляют 10-й и 90-й процентили. Статистические расчеты значений P были выполнены с использованием теста Манна-Уитни U .

    Рисунок 3.

    Уровни антител IgG в острой фазе у пациентов с тяжелой инвазивной стрептококковой болезнью группы А (ГАЗ). Белые прямоугольники представляют пациентов с синдромом стрептококкового токсического шока без некротического фасциита (НФ) ( n = 10), а серые прямоугольники представляют пациентов с НФ без шока.Уровни в отношении прикрепленных к клеточной стенке белков (A) и секретируемых белков GAS (B) выражены в виде индексов ELISA. Среднее значение, а также 25-й и 75-й процентили отмечены прямоугольниками. Горизонтальные линии вне рамок представляют 10-й и 90-й процентили. Статистические расчеты значений P были выполнены с использованием теста Манна-Уитни U .

    Таблица 1.

    Стрептококковые антигены группы А, использованные в настоящем исследовании.

    Таблица 1.

    Стрептококковые антигены группы А, использованные в настоящем исследовании.

    Таблица 2.

    Распределение штаммов стрептококков группы А различных серотипов М у пациентов с инвазивной инфекцией.

    Таблица 2.

    Распределение штаммов стрептококков группы А различных серотипов М у пациентов с инвазивной инфекцией.

    Таблица 3.

    Средние показатели ELISA против стрептококковых (GAS) антигенов группы А у доноров крови и у пациентов с инвазивной GAS-инфекцией.

    Таблица 3.

    Средние показатели ELISA против стрептококковых (GAS) антигенов группы А у доноров крови и у пациентов с инвазивной GAS-инфекцией.

    © 2004 Американским обществом инфекционных болезней

    Streptococcus Group A anti-Streptococcus Group A

    Streptococcus Group A anti-Streptococcus Group A

    Эти веб-сайты используют файлы cookie. Продолжая просматривать сайт, вы соглашаетесь на использование файлов cookie.

    США ($) Великобритания (£) Европа (€)

      • Вы просматриваете магазин в США. Хотите пойти в магазин Europe?

    Похоже, в вашем браузере отключен JavaScript.
    Вы должны включить JavaScript в вашем браузере, чтобы использовать функциональные возможности этого веб-сайта.

    • Дома
    • Антитела к стрептококкам группы А

    Аффинно очищенные кроличьи поликлональные антитела к стрептококкам группы A

    Синонимы Поликлональные антитела к стрептококкам группы A, антитела против Streptococcus группы A, антитела к Streptococcus A, антитела к Strep A
    Специфичность Стрептококк группы А
    Перекрестная реактивность Будет определено конечным пользователем
    Приложения Оптимизировано для пользователей
    Иммуноген Антитело к стрептококкам группы А было индуцировано у кролика с использованием стрептококков группы А в качестве иммуногена.
    Информация об анализе Подходящая пара антител, доступных для антител группы A Streptococcus: 70-XR83

    Характеристики

    Хост Кролик
    Форма и буфер Очищенное антитело DEAE, поставляемое в буфере PBS, pH 7,2, с 0,1% NaN3.
    Концентрация Зависит от партии — спрашивайте, есть ли у вас особые требования

    Хранение и безопасность

    Хранение Хранить при 4 ° C для кратковременного хранения.Аликвотируйте и храните при -20 ° C для длительного хранения. Избегайте повторяющихся циклов замораживания / оттаивания.
    Информация о биологической опасности Этот продукт содержит азид натрия в качестве консерванта. Хотя количество азида натрия очень мало, необходимо соблюдать осторожность при обращении с ним.

    Общая информация

    Биологическое значение Streptococcus — это род сферических грамположительных бактерий, принадлежащих к типу Firmicutes и группе молочнокислых бактерий.Бактерия стрептококка группы А (Streptococcus pyogenes, или GAS) представляет собой форму бета-гемолитических бактерий Streptococcus, ответственных за большинство случаев стрептококковых заболеваний. Несколько факторов вирулентности вносят вклад в патогенез ГАЗ, такие как М-белок, гемолизины и внеклеточные ферменты.

    Список литературы

    Добавить бумагу Вы упомянули этот продукт?

    Извините, но на данный момент нет ссылок на этот продукт.

    Обзоры

    Вы должны войти в систему, чтобы написать отзыв. Пожалуйста авторизуйтесь здесь

    Извините, на данный момент нет отзывов об этом продукте

    границ | Антитела, реактивные к комменсальному Streptococcus mitis, демонстрируют перекрестную реактивность с вирулентным Streptococcus pneumoniae серотипа

    Введение

    Streptococcus pneumoniae — это грамположительный вид бактерий, который обитает в носоглотке и полости рта человека и вызывает широкий спектр заболеваний, включая пневмонию, менингит и сепсис (1).С другой стороны, Streptococcus mitis , комменсал, который проявляет генетическое и экологическое сходство с S. pneumoniae , является одним из наиболее распространенных представителей микробиоты полости рта и редко вызывает заболевание (2). Клинико-эпидемиологические исследования показывают, что S. pneumoniae является четвертой по частоте причиной смертельных инфекций и вызывает смерть более миллиона детей в возрасте до 5 лет во всем мире (3, 4). Кроме того, люди с ослабленным иммунитетом и пожилые люди очень чувствительны к S.pneumoniae инфекций (3, 5). Хотя современные пневмококковые вакцины, как конъюгированные (PCV7, 10 и 13), так и неконъюгированные (PPSV23), снижают частоту заболеваний, они не могут обеспечить защитный иммунитет против всех серотипов S. pneumoniae (более 90) (6 , 7). Недавние сообщения, показывающие замещение невакцинными серотипами, вызывают серьезную озабоченность (7). Следовательно, необходимы новые профилактические стратегии для разработки более совершенных вакцин, которые могли бы обеспечить долгосрочную защиту от всех серотипов пневмококка.

    Понимание иммунитета хозяина к пневмококковой инфекции имеет решающее значение для определения иммунных мишеней для разработки вакцины. Несколько исследований с участием мышей модели S. pneumoniae показали, что обе ветви адаптивного иммунитета (антитела и Т-клетки) играют важную роль в создании защитного иммунитета к инфекции (8–14). На мышиной модели колонизации носоглотки S. pneumoniae было показано, что мыши, дефицитные по CD4 + Т-клеткам или IL-17, обладали пониженной способностью избавляться от стрептококкового носительства по сравнению с контрольными мышами (12).Напротив, защитный иммунитет к сепсису после предыдущей колонизации обеспечивается иммунитетом, опосредованным антителами (IgG и IgA) (14). Это говорит о том, что тип защитного иммунного ответа против пневмококковых инфекций в значительной степени зависит от очага инфекции. Используя мышиную модель колонизации носоглотки S. pneumoniae EF3030 с последующей инфекцией легких, Wilson et al. недавно показали, что индуцированная колонизацией защита у мышей, дефицитных по В-клеткам, CD4 + Т-клеткам или IL-17, нарушена, что позволяет предположить, что иммунитет к S.pneumoniae требует как гуморального, так и клеточного иммунитета (13). Это также было подтверждено исследованиями контролируемой инфекции человека с пневмококком. После экспериментальной колонизации добровольцы защищались от последующей повторной колонизации тем же штаммом, представившим повышенные пневмококковые антитела, а также CD4 + Т-клетки (8). С другой стороны, как хозяин реагирует на S. mitis , плохо изучено. Антитела IgA слюны, реактивные к антигенам S. mitis , были зарегистрированы у детей грудного возраста (15–17).Наше недавнее исследование показало, что человеческие CD4 + Т-клетки, которые экспрессируют IL-17 (клетки Th27) и реагируют с S. mitis , также отвечают на пневмококковые белки при совместном культивировании с антигенпрезентирующими клетками, пульсирующими с S. pneumoniae ( 18).

    Доступные в настоящее время пневмококковые вакцины обеспечивают иммунитет, опосредованный серотип-специфическими реакциями антител, который имеет ограничения, поскольку эта защита ограничена только 7–23 серотипами. Кроме того, капсульные полисахаридные вакцины лучше защищают от инвазивных пневмококковых заболеваний, чем неинвазивные заболевания, такие как средний отит (5, 6).Новым подходом к преодолению этих ограничений и обеспечению более широкого охвата серотипом могло бы стать использование иммунной перекрестной реактивности между комменсальными и патогенными микробами. Сообщалось, что антитела, вырабатываемые против комменсальных микробов, перекрестно реагируют с патогенами (18–20). Хотя в нескольких исследованиях изучалась серологическая перекрестная реактивность полисахаридных антигенов между S. mitis и S. pneumoniae , остается неясным, являются ли антитела специфичными к S.mitis перекрестно реагирует с белками пневмококка (21–23). В этом исследовании мы предположили, что антитела, вырабатываемые против S. mitis и S. pneumoniae , проявляют перекрестную реактивность с белками S. pneumoniae и S. mitis соответственно. Чтобы проверить эту гипотезу, мы исследовали способность антител, продуцируемых против S. mitis или S. pneumoniae , перекрестно реагировать с S. pneumoniae и S. mitis и попытались идентифицировать антигены пневмококкового белка, которые реагируют антитела.Наши результаты проливают свет на опосредованную антителами перекрестную реактивность между S. mitis и S. pneumoniae . Это может иметь значение для разработки эффективных стратегий профилактики пневмококковых инфекций. Вакцины на основе S. mitis могут индуцировать выработку антител, реактивных к белкам S. pneumoniae , что приводит к серотип-независимой защите от пневмококков.

    Материалы и методы

    Бактериальные штаммы, культура и лизис

    Streptococcus mitis использовался штамм CCUG31611 (типовой штамм, эквивалентный NCTC12261), тогда как S.pneumoniae включали TIGR4, D39 и BHN418 (6B). Штамм BHN418 6B был использован в экспериментальных исследованиях пневмококкового носительства человека (EHPC) (8). Все штаммы хранили при -80 ° C в триптиказо-соевом бульоне (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ, США) и 15% глицерине. Перед использованием исходные культуры разводили 1:10 с последующим выращиванием при 37 ° C до оптической плотности (OD) 0,5 при 600 нм в инкубаторе с 5% CO 2 . Бактериальные клетки собирали центрифугированием при 5000 g в течение 10 минут при 4 ° C и промывали в не содержащем эндотоксина Dulbecco’s-PBS (Sigma-Aldrich, St.Луис, Миссури, США) для дальнейшей обработки. Для лизирования бактериальных клеток использовали набор Precellys Lysing Kit и гомогенизатор (Precellys 24, Bertin Instruments) в соответствии с инструкциями производителя. Вкратце, бактериальные клетки, растворенные в холодном PBS, выливали в пробирку Precellys Lysing, предварительно заполненную высококачественными стеклянными шариками (0,5 мм), и гомогенизировали для разрушения бактериальных клеток (гомогенизатор Precellys 24; программа 2). После гомогенизации лизат бактериальных клеток центрифугировали при 1000 g в течение 5 минут при 4 ° C, и супернатант собирали и хранили при -80 ° C для дальнейшего использования.Общий белок в клеточном лизате определяли количественно с использованием набора для анализа белков BCA (ThermoFischer Scientific).

    Повышение уровня антисыворотки

    Streptococcus mitis Антисыворотка была получена от свободных от конкретных патогенов новозеландских белых кроликов (ProteoGenix, Франция). Кроликов подкожно иммунизировали 10 × 10 6 колониеобразующих единиц (КОЕ) убитого ультрафиолетом штамма S. mitis (CCUG31611) дважды с интервалом в 2 недели, и антисыворотку собирали на 28 день после заражения. первая иммунизация.Мы также приобрели кроличью антисыворотку, выращенную против целых клеток серотипов S. pneumoniae ; (1) Тип сыворотки 2 против 1, 2, 4, 5, 11, 18, 20, 22 и 33 серотипов (SSI Diagnostica, Дания) и (2) объединенная антисыворотка против S. pneumoniae 3, 4, 6, 9, 14, 18, 19 и 23 поверхностных антигенов (Meridian Life Sciences, TN, США) для конкретных экспериментов. Образцы плазмы до и после инокуляции от людей-добровольцев, интраназально инокулированных S. pneumoniae , были получены от сотрудничества EHPC в Ливерпульской школе тропической медицины, Ливерпуль, Великобритания (24).Вкратце, 13 здоровым людям в возрасте 18–50 лет были привиты 8 × 10 4 КОЕ на 100 мкл S. pneumoniae 6B (BHN418) per naris , что в конечном итоге привело к развитию пневмококкового носительства, как описано ранее. (24). Образцы плазмы собирали на исходном уровне и на 21 день после инокуляции и хранили при -80 ° C (24). Лица, естественным образом колонизировавшие пневмококком на исходном уровне или находящиеся в регулярном контакте с людьми из группы риска, были исключены. Следует отметить, что от участников было получено как информированное, так и письменное согласие.Этические разрешения были получены от Комитета по этике исследований Национальной службы здравоохранения (12 / NW / 0873).

    Вестерн-блоттинг и анализ иммуноингибирования

    SDS-PAGE-разделенных белков переносили из градиентных гелей (4–20%) на нитроцеллюлозные мембраны с использованием постоянного напряжения 100 В в течение 2 часов с использованием модуля вестерн-блоттинга BioRad Midi-PROTEAN в соответствии с инструкциями производителя (BioRad, CA, СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ). Мембраны были заблокированы блокирующим раствором [забуференный трис физиологический раствор (TBS) (pH 7.4), содержащий 0,1% Tween 20 (Sigma-Aldrich) и 5% BSA] в течение 1 ч при комнатной температуре, трижды промывали TBS-Tween и инкубировали в течение ночи с антисывороткой при 4 ° C. После инкубации мембраны промывали и, наконец, инкубировали с АР-конъюгированными вторичными антителами козы против кроличьего или против человеческого IgG, а затем проявляли с субстратом (4-хлор-1-нафтолом). Следует отметить, что время воздействия было одинаковым для мембран, обработанных образцами сыворотки / плазмы до и после инокуляции. Для анализа иммуноингибирования лизаты из S.mitis CCUG31611 и S. pneumoniae 6B были иммобилизованы на гранулах CNBr-активированной сефарозы 4B в соответствии с инструкциями производителя (GE Healthcare, Германия). После блокирования 0,2 М глицином (pH 8) шарики промывали и использовали для абсорбции кроличьих антител против S. mitis . После абсорбции неабсорбированные сывороточные антитела использовали для проведения иммуноблоттинга.

    ELISA

    ИФА цельноклеточных бактерий проводили для измерения уровней антител.Вкратце, каждую лунку 96-луночного планшета (Maxisorb, Nunc, Thermo Scientific) покрывали в течение ночи 100 мкл бактериальной суспензии (OD 600 0,5), которую промывали и затем фиксировали 10% формалином. Планшет промывали четыре раза (200 мкл PBS + 0,05% твин) перед добавлением 100 мкл блокирующего буфера (PBS + 0,05% твин + 1% BSA) и инкубацией в течение 1 ч при 37 ° C. Последовательно разведенные образцы плазмы добавляли в лунки в двух экземплярах, инкубировали в течение 2 часов при комнатной температуре перед добавлением вторичных антител анти-IgG / HRP, разведенных 1: 10 000, с последующей инкубацией в течение 2 часов при комнатной температуре, промыванием и добавлением 100 мкл. субстрата TMB (ThermoFisher Scientific, Рокфорд, Иллинойс, США) в каждую лунку.Затем планшеты инкубировали в темноте при комнатной температуре в течение 15 мин, после чего в каждую лунку добавляли стоп-раствор (ThermoFisher Scientific, Рокфорд, Иллинойс, США), чтобы остановить реакцию, и измеряли поглощение путем считывания данных с планшетов при 450 нм. с использованием многорежимного ридера для визуализации клеток (BioTek ™ Cytation ™ 3; ThermoFischer Scientific). Для оценки были построены кривые титрования для каждого измерения и применены пороговые значения для преобразования активности сыворотки в титры. Для оценки титров отсечки были помещены в OD 450 = 0.4 для гипериммунной сыворотки кроликов и OD 450 = 0,2 для сыворотки человека, поскольку эти значения находились в пределах линейных частей кривых титрования. В качестве примера кривая титрования ELISA представлена ​​на рисунке S2 в дополнительных материалах.

    Продукция и сверхэкспрессия рекомбинантных белков

    клонов E. coli для экспрессии рекомбинантных белков S. pneumoniae TIGR4 были созданы в Институте Джона Крейга Вентера, США, тогда как клоны экспрессии для S.Рекомбинантные белки штамма mitis были сконструированы на кафедре биологии полости рта Университета Осло, Норвегия. Стратегию клонирования шлюза использовали для создания клонов экспрессии для продукции рекомбинантных белков. Вкратце, гены-мишени S. mitis амплифицировали с использованием олигонуклеотидных праймеров, перечисленных в таблице S1 дополнительных материалов. Гены S. pneumoniae и S. mitis , клонированные во входном клоне pDONR221, были перенесены в вектор-получатель T02, который кодирует гексагистидиновую метку на амино-конце, как описано ранее (25).Последовательность клонированных вставок проверяли перед трансформацией вектора-получателя T02 в штамм экспрессии BLR E.coli (DE3). Для сверхэкспрессии рекомбинантных белков замороженный исходный материал экспрессионных клонов E. coli BLR (DE3) инокулировали в 1 мл 2 × YT среды в глубокие 96-луночные блоки ампициллином (100 мкг / мл) и тетрациклином (12,5 мкг). / мл). Бактериальные культуры инкубировали при 37 ° C со встряхиванием при 800 об / мин. При достижении OD 600 0.7–0.9, экспрессию белка индуцировали добавлением изопропил-β-d-1-тиогалактопиранозида (IPTG) в конечной концентрации 1 мМ, и инкубация продолжалась в течение ночи при 25 ° C при 900 об / мин. Затем ночные культуры собирали центрифугированием при 3500 об / мин при 4 ° C в течение 20 минут. Осадки ресуспендировали в 90 мкл буфера для лизиса с низким содержанием соли (50 мМ Трис, 100 мМ NaCl, 10 мМ имидазол, pH 7,3), 1 мМ DTT, 1 мкл лизоназы (Novagen) и 200 мкМ протеазы аминоэтилбензолсульфонилфторида гидрохлорида (AEBSF). ингибитор и инкубируют 20 мин при комнатной температуре.Для завершения процесса лизиса добавляли 10 мкл поп-культуры (Novagen) и инкубировали в течение 30 мин при комнатной температуре. Бактериальный лизат обрабатывали на геле Nu-PAGE (Invitrogen Nu-PAGE 12% Bis-Tris gel) для проверки экспрессии и размера белков.

    Очистка микрочипа протеина и тестирование с использованием антисыворотки

    Хелатные слайды с Cu ++ высокой плотности (MicroSurfaces, Inc., Энглвуд, Нью-Джерси, США) использовали для очистки на чипе рекомбинантных белков, меченных гекса-His, как описано ранее (26).Перед печатью слайды инкубировали при комнатной температуре в камере влажности в течение 30 мин. Лизаты клеток разбавляли 1:20 в буфере для печати PBST (10 мМ фосфатный буфер, 2,7 мМ KCl, 140 мМ NaCl, 0,05% Tween 20, pH 7,4) и вручную печатали на чипах с помощью инструмента Microcaster array (Whatman). Слайды сушили в камере с влажностью 70% при комнатной температуре. Напечатанные слайды собирали в инкубационной камере с быстрой рамкой (Whatman) и блокировали блокирующим буфером (RayBiotech) в течение 30 мин при комнатной температуре.Антисыворотку очищали лизатом E. coli и коктейлем ингибиторов протеазы путем инкубации и вращения. Блокирующий буфер удаляли, очищенные и разбавленные 1: 100–1: 1000 антисыворотки в блокирующем буфере добавляли на предметные стекла и инкубировали в течение 1 часа. После инкубации сгруппированные слайды промывали 1 мл PBST четыре раза, инкубируя в течение 2 минут между каждой промывкой. Козье антикроличье антитело, конъюгированное с Alexa-647, также очищали лизатом клеток E. coli и наносили на предметное стекло, а вторичное антитело на матрице инкубировали в течение 1 часа.Матрицы промывали PBST четыре раза по 2 мин при каждой промывке. Сборку матрицы удаляли, предметное стекло матрицы помещали в промывочную пробирку на 30 мл и промывали PBST в течение 15 мин. Затем предметные стекла ополаскивали водой и сушили центрифугированием. Для обнаружения иммобилизованных рекомбинантных белков конъюгированные с Alexa-555 антитела против гекса-His-метки (ThermoFisher Scientific) очищали лизатом E.coli , разбавленным до 1: 1000 в блокирующем буфере, наносили на предметное стекло и инкубировали в течение 1 часа. .После инкубации предметные стекла были промыты и высушены, как описано ранее. Слайды сканировали с помощью Genepix 4000B и количественно оценивали с помощью Genepix Pro 4.0.

    Очистка белка PsaA

    S. mitis и S. pneumoniae

    Белок PsaA S. mitis и S. pneumoniae очищали с использованием Dynabeads TALON, который использует аффинную хроматографию с иммобилизованным металлом на основе кобальта. Клоны экспрессии E. coli BLR (DE3), содержащие ген PsaA из S.mitis и S. pneumoniae выращивали в 50 мл среды 2 × YT с добавлением ампициллина (100 мкг / мл) и тетрациклина (12,5 мкг / мл). Экспрессию белка индуцировали IPTG при OD 600 0,6 с последующей инкубацией при 25 ° C в течение 4 часов при 200 об / мин. Клетки собирали центрифугированием, и осадок клеток хранили в течение ночи при -80 ° C. Для лизиса клеток осадки ресуспендировали в реагенте для экстракции полного бактериального белка B-PER (ThermoFisher Scientific). Супернатант собирали центрифугированием клеточных лизатов при 16000 g в течение 20 мин и подвергали очистке белка His-tag с использованием Dynabeads TALON (Dynal biotech) в соответствии с инструкциями производителя.Очищенные белки анализировали гель-электрофорезом в SDS-PAGE, и реактивность по отношению к кроличьей антисыворотке S. mitis и S. pneumoniae оценивали с помощью вестерн-блоттинга.

    Статистический анализ

    Тесты Wilcoxon Signed Rank были применены с использованием SigmaPlot v13, Systat Software Inc., Лондон, Великобритания. p Значения <0,05 считались значимыми.

    Результаты

    IgG-антитела, специфичные к

    S. mitis Перекрестная реакция с различными S.pneumoniae Серотипы

    Для оценки реактивности антител, индуцированных против S. mitis , с пневмококковыми антигенами, мы использовали антисыворотку от кроликов, которые получили штамм типа S. mitis (кролик 1 и кролик-2), и провели SDS-PAGE и иммуноблоттинг. Мы обнаружили повышенное связывание антител IgG из антисыворотки S. mitis (кролик-1 и кролик-2) по сравнению с предварительно иммунизированной сывороткой с белками из серотипов S. pneumoniae (6B, TIGR4 и D39), как показано несколькими более сильными полосами (Рисунки 1A, B).Большинство наиболее сильных полос присутствовало на уровне молекулярной массы 50 кДа для всех серотипов S. pneumoniae (Фигуры 1A, B). Интересно, что четкая и толстая полоса с молекулярной массой от 50 до 75 кДа была обнаружена на дорожке, принимающей пневмококковый белок 6B, но отсутствовала на всех других дорожках, включая ту, которая содержала белков S. mitis (рис. 1А). Следует отметить, что мы не обнаружили каких-либо заметных полос при исследовании связывания антител IgA с белками пневмококка (данные не показаны).Получив данные иммуноблоттинга о перекрестной реактивности антисыворотки против S. mitis , мы попытались изучить титр кроличьих IgG-антител против S. mitis , реактивных к пневмококковым белкам. Мы обнаружили повышенный титр антител IgG, реактивных к S. pneumoniae и S. mitis по сравнению с антителами от неиммунизированных кроликов (Рисунок 2; nota bene , поскольку использовались титры, меньшие числа указывают на более высокую концентрацию антител, пожалуйста см. легенду).Чтобы дополнительно подтвердить перекрестную реактивность между S. mitis и S. pneumoniae , мы провели анализ иммуноингибирования путем инкубации кроличьей сыворотки против S. mitis с иммобилизованными S. pneumoniae 6B или S. mitis . лизаты. После иммуноблоттинга антисыворотка S. mitis , инкубированная с S. pneumoniae 6B или S. mitis , показала значительное ингибирование полос для S. mitis и S. pneumoniae по сравнению с антисывороткой без поглощения антител (фиг. 3).Подобные результаты были получены, когда мы искали титр специфичных для бактерий IgG в антисыворотках при различных инкубациях (рис. 3). В целом, эти данные показывают, что антитела IgG, специфичные к S. mitis , перекрестно реагируют с S. pneumoniae .

    Рисунок 1 . Реактивность кроличьей антисыворотки против Streptococcus mitis штаммами Streptococcus pneumoniae (6B, TIGR4 и D39) с помощью SDS-PAGE в градиентных гелях и иммуноблоттинга.На каждую дорожку загружали 50 мкг белка указанных видов бактерий. Сыворотки до и после инокуляции разводили 1: 1000. (A, B) Антисыворотка кролика-1 и кролика-2, которые были иммунизированы S. mitis CCUG31611. Эксперимент проводился дважды. Сокращения: PRE — сыворотки перед инокуляцией; POST, сыворотки после инокуляции.

    Рисунок 2 . Уровни Streptococcus pneumoniae -реактивных антител IgG от кроликов до или после иммунизации Streptococcus mitis .Титр антител IgG определяли с помощью цельноклеточного ELISA. Использовали антисыворотки кролика-1 и кролика-2, иммунизированных S. mitis CCUG31611. Образцы сыворотки были серийно разбавлены, и значения OD преобразованы в титры с пороговым значением OD 0,40 (см. Материалы и методы; низкие числа указывают на высокую концентрацию антител, например, 0,002 = 1/500 и 0,004 = 1/250). . Столбики показывают средние значения двух повторов. Сокращения: PRE — сыворотки перед инокуляцией; POST, сыворотки после инокуляции.

    Рисунок 3 . Иммуноингибирование перекрестной реактивности IgG между Streptococcus mitis и Streptococcus pneumoniae . Для SDS-PAGE лунки загружали 50 мкг белка из штаммов S. mitis CCUG31611 и S. pneumoniae . После блоттинга необработанную кроличью антисыворотку S. mitis или ту же антисыворотку, предварительно инкубированную с иммобилизованными лизатами S. mitis или S. pneumoniae 6B, использовали для определения иммунореактивности.Уровни S. mitis или S. pneumoniae -реактивных антител IgG в тех же антисывороточных препаратах. Уровни антител IgG определяли с помощью цельноклеточного ELISA. Значения OD были преобразованы в титры с пороговым значением OD 0,40 (см. Легенду к рисунку 2). Столбики показывают средние значения двух повторов.

    Повышенная реактивность антисыворотки против

    S. pneumoniae S. mitis

    Чтобы понять, специфичны ли антитела к S.pneumoniae может, в свою очередь, перекрестно реагировать с S. mitis , мы использовали кроличью антисыворотку, полученную против S. pneumoniae , чтобы исследовать реактивность антисывороточных антител IgG с белками S. mitis . Наши результаты продемонстрировали усиленный характер связывания антител IgG к S. pneumoniae со штаммами S. mitis и S. pneumoniae , особенно 6B и TIGR4, по сравнению с контрольными антителами от неиммунизированных кроликов (рис. 4A).Однако картина связывания после инокуляции для S. mitis имела некоторые отличия по сравнению с S. pneumoniae 6B и TIGR4 (фиг. 4A). Точно так же уровни антител против S. pneumoniae в титре IgG, реактивного к S. mitis , увеличивались по сравнению с уровнями антител в предварительно иммунизированной сыворотке (фиг. 4B). Чтобы подтвердить эти результаты на кроликах на людях, мы использовали образцы плазмы 13 здоровых взрослых людей, интраназально инокулированных S. pneumoniae 6B, которые в конечном итоге приобрели пневмококковое носительство (24).Наши эксперименты с цельноклеточным ИФА показали, что антитела IgG в плазме от людей, инокулированных S. pneumoniae , проявляют повышенную реактивность к S. mitis и S. pneumoniae 6B по сравнению с образцами до инокуляции (рис. 5). Взятые вместе, эти данные показывают, что перекрестная реактивность обеспечивается пневмококковыми антителами против антигенов S. mitis .

    Рисунок 4 . Реактивность кроличьей антисыворотки повышена против Streptococcus pneumoniae и Streptococcus mitis . (A) Реактивность кроличьей антисыворотки против пула серотипов S. pneumoniae (1, 2, 4, 5, 11, 18, 20, 22 и 33) с S. mitis и Штаммы S. pneumoniae (6B, TIGR4 и D39) с использованием SDS-PAGE и иммуноблоттинга. На каждую дорожку загружали по 50 мкг белка каждого вида бактерий. Сыворотки до и после инокуляции разводили 1: 1000. (B) Уровни до и после иммунизации S. mitis -реактивных антител IgG от S.pneumoniae — иммунизированный кролик. Титр антител IgG определяли путем преобразования значений OD в титры с пороговым значением OD 0,40 (см. Легенду к Фигуре 2). Столбики показывают средние значения двух повторов. Сокращения: PRE — сыворотки перед инокуляцией; POST, сыворотки после инокуляции.

    Рисунок 5 . Уровни Streptococcus mitis — и Streptococcus pneumoniae -реактивных антител IgG, выделенных из S. pneumoniae 6B-инокулированных взрослых.Пробы плазмы до и после инокуляции были собраны у 13 человек, инокулированных S. pneumoniae 6B. Серийно разведенные образцы плазмы добавляли в лунки в двух экземплярах. Значения OD были преобразованы в титры с пороговым значением 0,20 (см. Легенду к рисунку 2). Показаны уровни титров антител IgG против штаммов S. mitis и S. pneumoniae . Значения OD показаны для каждого субъекта в моменты времени до и после заражения. (A) Уровни IgG до и после заражения до S.mitis и S. pneumoniae 6B. (B) Уровни IgG до и после заражения для S. mitis и S. pneumoniae 6B связаны для каждого субъекта. Знаковый ранговый тест Вилкоксона, * p <0,05; *** р <0,001. Сокращения: PRE - сыворотки перед инокуляцией; POST, сыворотки после инокуляции.

    Идентификация пневмококковых белков, перекрестно реагирующих с

    S. mitis Antisera

    Было показано, что поверхностные белки пневмококков индуцируют ответы хозяина на S.pneumoniae , что подчеркивает потенциал этих белков как сильнодействующих кандидатов в вакцины (6, 7). Наши данные вестерн-блоттинга показывают, что некоторые из наиболее заметных полос, которые возникли в результате реакции между белками S. pneumoniae / S. mitis и антителами IgG против S. mitis , имели молекулярную массу около 50 кДа (рисунок 1). Чтобы идентифицировать некоторые бактериальные белки, которые перекрестно реагируют с антителами IgG к S. mitis против , мы выбрали панель из 30 предсказанных внеклеточных и мембранных белков с молекулярной массой около 50 кДа (таблица 1) и проанализировали их, используя: микрочип высокого качества протеина.Включена карта массива, которая показывает положение белков S. pneumoniae TIGR4, напечатанных и иммобилизованных на хелатных слайдах с высокой плотностью Cu ++ (таблица S2 в дополнительных материалах). Иммобилизованные белки на микрочипах визуализировали с использованием конъюгированного с Alexa-555 антитела против His-tag. Анализ данных выявил три различных пневмококковых белка с соотношением сигналов ( F образец / F E. coli )> 1,5 — холин-связывающий белок D (CbpD; SP2201), белок деления клеток (FtsH; SP0013), и марганцевый переносчик ABC или марганец-связывающий липопротеин адгезии (PsaA; SP1650) — после обработки антисывороткой (IgG) против S.mitis (рисунок 6; таблица 2). Мальтозу / мальтодекстрин-связывающий белок (SP2108) был идентифицирован с использованием антисыворотки против S. pneumoniae , но не с помощью антисыворотки против S. mitis (фигура 6А). S. pneumoniae PsaA, в частности, представляет собой белок с иммуногенной активностью, который исследовался в нескольких исследованиях в качестве потенциальной вакцины против пневмококковых инфекций (27–29). Таким образом, мы клонировали и экспрессировали S. mitis PsaA в E. coli , чтобы проверить его перекрестную реактивность с антителами, индуцированными против S.mitis и S. pneumoniae . Наш вестерн-блоттинг выявил более сильное связывание кроличьей антисыворотки S. mitis и S. pneumoniae с PsaA по сравнению с сывороткой до инокуляции (фигура 6B). Был предоставлен исходный иммуноблот (рисунок S1 в дополнительных материалах). Таким образом, мы идентифицировали три общих белка, CbpD, FtsH и PsaA, происходящие из S. pneumoniae , реактивных к антисывороткам, индуцированным против S. mitis или S. pneumoniae .Мы также обнаружили, что очищенный PsaA из S. mitis реагировал с антисывороткой против S. mitis , что свидетельствует о сходных перекрестных реакциях на белковые антигены из S. mitis и S. pneumoniae .

    Таблица 1 . Список белков Streptococcus pneumoniae , выбранных для экспериментов на микрочипах белков.

    Рисунок 6 . Идентификация пневмококковых белков, перекрестно реагирующих с кроличьей антисывороткой Streptococcus mitis . (A) Иммуногенный скрининг очищенного на чипе микроматрицы белка Streptococcus pneumoniae TIGR4. Лизаты 30 рекомбинантных белков, сверхэкспрессированных в E. coli , были напечатаны на хелатированных поверхностных слайдах Cu ++ / PEG в трех экземплярах. Слайды зондировали антисывороткой S. mitis и S. pneumoniae для идентификации иммунореактивных пневмококковых антигенов. Пре- и постиммунная сыворотка кроликов, зараженных штаммом S. mitis , и постиммунная сыворотка кроликов, зараженных S.pneumoniae использовались на предметных стеклах. Значения были получены как отношение интенсивности флуоресценции пятна к интенсивности флуоресценции лизата клеток E. coli . E. coli , His-tag MBP; ~ 50% сходство с SP2108. Сокращения: PRE-SM, предварительная инокуляция S. mitis сыворотка; POST-SM, постинокуляция S. mitis сыворотка; POST-SP, сыворотка после инокуляции S. pneumoniae ; CbpD, холин-связывающий белок D; FtsH, белок деления клетки; PsaA, липопротеин адгезии, переносящий ABC марганца; MBP, мальтозо-связывающий белок. (B) Реактивность кроличьей антисыворотки против S. mitis IgG с S. pneumoniae TIGR4 и S. mitis PsaA с помощью SDS-PAGE в градиентных гелях и иммуноблоттинга. На каждую дорожку загружали 50 мкг белка указанных видов бактерий. Сыворотки до и после инокуляции разводили 1: 1000. Сокращения: M, S. mitis CCUG31611; P, S. pneumoniae TIGR4.

    Таблица 2 . Количественная оценка отношения сигналов флуоресценции очищенных на чипе белков Streptococcus pneumoniae , полученных путем отношения интенсивности флуоресценции пятна к интенсивности флуоресценции E.coli лизат.

    Обсуждение

    Целью этого исследования было изучить опосредованную антителами перекрестную реактивность между S. pneumoniae и комменсалом S. mitis и выявить общие перекрестно-реактивные белковые антигены с использованием нескольких экспериментальных подходов. Основные результаты исследования включают следующее: (1) кроличьи IgG-антитела, индуцированные S. mitis , перекрестно реагируют с S. pneumoniae ; (2) кроличьи антитела IgG к S. pneumoniae проявляют перекрестную реактивность с S.mitis ; (3) IgG-антитела от людей, инокулированных S. pneumoniae , демонстрируют повышенную реактивность к S. mitis ; и (4) антисыворотка, индуцированная против S. mitis , распознает специфические поверхностные белки S. pneumoniae и S. mitis .

    Наши результаты показали, что антисыворотка, полученная с помощью S. mitis у кроликов, перекрестно реагирует с серотипами S. pneumoniae (6B, TIGR4 разных серотипов и D39). Перекрестные реакции были зарегистрированы среди микробных белков с аналогичным эволюционным развитием и структурой, например.g., перекрестная реактивность антител между белками комменсала Neisseria lactamica и патогенного Neisseria meningitidis (20, 30). Предыдущие исследования предполагают, что S. mitis и S. pneumoniae имеют близкое генетическое родство с примерно 80% сходством генома, и что несколько пневмококковых белков повсеместно присутствуют в S. mitis (31, 32). Таким образом, понятно, почему многие белки S. mitis и S. pneumoniae реагируют на антисыворотку против S.mitis , как показано в этом исследовании. Эти результаты согласуются с исследованиями на людях, в которых было обнаружено, что антитела слюны (IgA) реагируют с S. mitis (15-17). Поскольку мы не обнаружили значительных различий между уровнями антител после инокуляции, реагирующими на штаммы S. mitis и S. pneumoniae , можно сделать вывод, что пневмококковые перекрестно-реактивные антигены и их способность связываться с S. mitis. антисывороток были аналогичными. Еще одним важным открытием нашего исследования является то, что антитела IgG от людей, инокулированных S.pneumoniae проявляют повышенную реактивность к S. mitis , а также к S. pneumoniae 6B, что продемонстрировано данными цельноклеточного ELISA. Это согласуется с предыдущими исследованиями, показавшими, что носительство S. pneumoniae способствует увеличению ответов IgG, специфичных к белку и капсульным антигенам S. pneumoniae 6B (8). В целом, эти результаты подтверждают концепцию, что естественный иммунитет против пневмококковых заболеваний может быть частично вызван колонизацией носоглотки и полости рта S.mitis , и это может иметь последствия для разработки более эффективных профилактических стратегий по сдерживанию инфекций для всех серотипов пневмококка.

    В анализе микроматрицы белков на чипе мы оценили 30 различных белков с молекулярной массой около 50 кДа, поскольку основные пневмококковые полосы в экспериментах по иммуноблоттингу были обнаружены в этом диапазоне. Мы идентифицировали три пневмококковых белка, которые показали реактивность с антителами (IgG) против S. mitis и S.пневмония . Эти белки включали CbpD, PsaA и FtsH, которые присутствуют у двух видов и демонстрируют сходство более чем на 90%. CbpD и PsaA представляют собой внеклеточные белки, которые принадлежат к семейству холин-связывающих белков (CBP) и, как было показано, вносят вклад в колонизацию носоглотки S. pneumoniae и лизис клеток, индуцированный компетентностью (27, 33). К настоящему времени несколько исследований пневмококковых инфекций, проведенных на животных моделях, продемонстрировали опосредованную антителами защиту, индуцированную членами CBP, такими как PspC и PsaA (27–29).Однако иммуногенный потенциал CbpD все еще неясен. Учитывая тот факт, что CbpD способствует колонизации носоглотки S. pneumoniae и имеет ~ 90% сходства со своим ортологом (SM12261_0760) у S. mitis , CbpD является перспективным иммуногенным кандидатом против серотипов S. pneumoniae , требует дальнейшего изучения для оценки его эффективности для создания защитного иммунитета, который не зависит от серотипов пневмококка. Было показано, что комбинированный состав вакцины, содержащей PsaA и PspA, предотвращает бактериальную колонизацию и средний отит на животных моделях (34, 35).Было бы интересно исследовать иммуногенный потенциал комбинации PsaA, FtsH и CbpD, которая может оказывать аддитивный защитный эффект, а также ограничивать возникновение аллельных вариаций в этих отдельных белках.

    В заключение, наши результаты показывают, что антитела, вырабатываемые против S. mitis и S. pneumoniae , перекрестно реагируют с белками S. pneumoniae и S. mitis соответственно. Эти данные согласуются с нашей гипотезой о том, что антитела вырабатывались против S.mitis и S. pneumoniae проявляют перекрестную реактивность с белками S. pneumoniae и S. mitis соответственно. Важно отметить, что реактивность специфических антител S. mitis к пневмококковым белкам обеспечивает платформу, на которой может быть проведена разработка серотип-независимой пневмококковой вакцины на основе белков с расширенным охватом. В будущих исследованиях необходимо оценить, есть ли ответы антител из-за колонизации носоглотки S.mitis создают перекрестную защиту от инфекций, вызываемых S. pneumoniae . Кроме того, стоит проверить влияние перекрестно-реактивных антигенов на обеспечение защиты от различных серотипов S. pneumoniae .

    Заявление об этике

    Образцы плазмы до и после инокуляции от людей-добровольцев, интраназально инокулированных Streptococcus pneumoniae , были получены от сотрудничества EHPC в Ливерпульской школе тропической медицины, Ливерпуль, Великобритания.Этические разрешения были получены от Комитета по этике исследований Национальной службы здравоохранения Великобритании (12 / NW / 0873).

    Авторские взносы

    SS разработал исследования, провел эксперименты, собрал и проанализировал данные и написал статью. РК разработал и провел эксперименты, собрал и проанализировал данные и написал статью. DF, EM и EG предоставили образцы сыворотки от человек, зараженных S. pneumoniae (6B). GR провела эксперименты и проанализировала данные. DF, DB и KS внесли свой вклад в разработку экспериментов и редактирование рукописи.К.К. разработал и провел эксперименты, собрал и проанализировал данные и отредактировал рукопись. FP разработала исследования, проанализировала данные и написала статью. Все авторы отредактировали и одобрили окончательный вариант рукописи.

    Заявление о конфликте интересов

    Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

    Благодарности

    Авторы выражают искреннюю благодарность Али-Оддину Наэми и Олаву Шреурсу за их техническую помощь.

    Финансирование

    Работа поддержана грантом Норвежского исследовательского совета (номер гранта — 241011). Исследования EHPC и сбор образцов были поддержаны Фондом Билла и Мелинды Гейтс (OPP1117728) и Советом по медицинским исследованиям (MR / M011569 / 1).

    Дополнительные материалы

    Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fimmu.2018.00747/full#supplementary-material.

    Список литературы

    2.Магер Д.Л., Ксименес-Файви Л.А., Хаффаджи А.Д., Сокранский С.С. Распределение отдельных видов бактерий на внутриротовых поверхностях. J Clin Periodontol (2003) 30: 644–54. DOI: 10.1034 / j.1600-051X.2003.00376.x

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    4. О’Брайен К.Л., Вольфсон Л.Дж., Ватт Дж. П., Хенкл Э., Делориа-Нолл М., МакКолл Н. и др. Бремя болезней, вызываемых Streptococcus pneumoniae , у детей младше 5 лет: глобальные оценки. Ланцет (2009) 374: 893–902.DOI: 10.1016 / S0140-6736 (09) 61204-6

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    5. Шигаева А., Рудник В., Грин К., Чен Д.К., Демчук В., Голд В.Л. и др. Инвазивное пневмококковое заболевание среди лиц с ослабленным иммунитетом: значение для программ вакцинации. Clin Infect Dis (2016) 62: 139–47. DOI: 10.1093 / cid / civ803

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    6. Дэниэлс С.С., Роджерс П.Д., Шелтон К.М. Обзор пневмококковых вакцин: текущие рекомендации по полисахаридным вакцинам и будущие белковые антигены. J Pediatr Pharmacol Ther (2016) 21: 27–35. DOI: 10.5863 / 1551-6776-21.1.27

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    7. Ли Й, Хилл А., Бейтелшиз М., Шао С., Ловелл Дж. Ф., Дэвидсон Б. А. и др. Направленная вакцинация против пневмококковой инфекции. Proc Natl Acad Sci U S A (2016) 113: 6898–903. DOI: 10.1073 / pnas.1603007113

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    8. Феррейра Д.М., Нил Д.Р., Бангерт М., Грицфельд Дж. Ф., Грин Н., Райт А. К. и др.Контролируемое инфицирование человека и повторное заражение с помощью Streptococcus pneumoniae показывает защитную эффективность носительства у здоровых взрослых. Am J Respir Crit Care Med (2013) 187: 855–64. DOI: 10.1164 / rccm.201212-2277OC

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    9. Райт А.К., Бангерт М., Грицфельд Дж.Ф., Феррейра Д.М., Джамбо К.С., Райт А.Д. и др. Экспериментальное носительство пневмококка человека усиливает ИЛ-17А-зависимую Т-клеточную защиту легких. PLoS Pathog (2013) 9: e1003274.DOI: 10.1371 / journal.ppat.1003274

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    11. Коэн Дж. М., Хандавилли С., Кемберлейн Э., Хьямс К., Баксендейл Х. Э., Браун Дж. С.. Защитный вклад против инвазивной Streptococcus pneumoniae пневмонии антител и ответов Th27-клеток на колонизацию носоглотки. PLoS One (2011) 6: e25558. DOI: 10.1371 / journal.pone.0025558

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    12.Коэн Дж. М., Чималапати С., де Фогель С., ван Белкум А., Баксендейл Х. Э., Браун Дж. С.. Вклад капсулы, липопротеинов и продолжительности колонизации в защитный иммунитет предшествующей Streptococcus pneumoniae носоглоточной колонизации. Vaccine (2012) 30: 4453–9. DOI: 10.1016 / j.vaccine.2012.04.080

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    13. Уилсон Р., Коэн Дж. М., Хосе Р. Дж., Де Фогель К., Баксендейл Х., Браун Дж. С.. Защита от инфекции легких Streptococcus pneumoniae после колонизации носоглотки требует как гуморального, так и клеточного иммунного ответа. Mucosal Immunol (2015) 8: 627–39. DOI: 10,1038 / mi.2014.95

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    14. Zhang Z, Clarke TB, Weiser JN. Клеточные эффекторы, опосредующие Th27-зависимый клиренс пневмококковой колонизации у мышей. J Clin Invest (2009) 119: 1899–909. DOI: 10.1172 / JCI36731

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    15. Ногейра RD, Sesso MLT, Borges MCL, Mattos-Graner RO, Smith DJ, Ferriani VPL.Ответы антител IgA слюны на Streptococcus mitis и Streptococcus mutans у недоношенных и доношенных новорожденных. Arch Oral Biol (2012) 57: 647–53. DOI: 10.1016 / j.archoralbio.2011.11.011

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    16. Borges MCL, Sesso MLT, Roberti LR, Oliveira MAHD, Nogueira RD, Geraldo-Martins VR, et al. Антитела в слюне к стрептококкам у недоношенных и доношенных детей: проспективное исследование. Arch Oral Biol (2015) 60: 116–25. DOI: 10.1016 / j.archoralbio.2014.08.003

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    17. Вирт К.А., Боуден Г.Х., Кирхерр Дж.Л., Ричмонд Д.А., Шеридан М.Дж., Коул М.Ф. Гуморальный иммунитет к комменсальным оральным бактериям у младенцев: доказательства того, что колонизация Streptococcus mitis biovar 1 индуцирует штамм-специфические антитела к иммуноглобулину А слюны. ISME J (2008) 2: 728–38. DOI: 10.1038 / ismej.2008.26

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    18.Engen SA, Rukke HV, Becattini S, Jarrossay D, Blix IJ, Petersen FC и др. Оральный комменсальный Streptococcus mitis демонстрирует смешанную сигнатуру Th-клеток памяти, которая аналогична Streptococcus pneumoniae и перекрестно реагирует с ней. PLoS One (2014) 9 (8): e104306. DOI: 10.1371 / journal.pone.0104306

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    19. Trama AM, Moody MA, Alam SM, Jaeger FH, Lockwood B, Parks R, et al. Антитела к gp41 оболочки ВИЧ-1 могут происходить из терминальных В-клеток подвздошной кишки, которые обладают перекрестной реактивностью с комменсальными бактериями. Клеточный микроб-хозяин (2014) 16: 215–26. DOI: 10.1016 / j.chom.2014.07.003

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    20. Troncoso G, Sanchez S, Moreda M, Criado MT, Ferreiros CM. Антигенная перекрестная реактивность между белками внешней мембраны видов Neisseria meningitidis и комменсальных видов Neisseria . FEMS Immunol Med Microbiol (2000) 27: 103–9. DOI: 10.1111 / j.1574-695X.2000.tb01419.x

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    21.Лунд Э. Антигенная связь между пневмококками и негемолитическими стрептококками. Acta Pathol Microbiol Scand (1950) 27: 110–8. DOI: 10.1111 / j.1699-0463.1950.tb05200.x

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    22. Ли CJ, Коидзуми К., Хенриксен Дж., Перч Б., Лин С.С., Иган В. Капсульные полисахариды негруппируемых стрептококков, которые перекрестно реагируют с пневмококками группы-19. J Immunol (1984) 133: 2706–11.

    Google Scholar

    23. Килиан М., Поулсен К., Бломквист Т., Ховарстайн Л.С., Бек-Томсен М., Теттелин Н. и др.Эволюция Streptococcus pneumoniae и его близких комменсальных родственников. PLoS One (2008) 3 (7): e2683. DOI: 10.1371 / journal.pone.0002683

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    24. Коллинз А.М., Райт А.Д., Мици Э., Грицфельд Дж.Ф., Хэнкок Калифорния, Пеннингтон С.Х. и др. Первое контрольное двойное слепое рандомизированное контролируемое испытание пневмококковой вакцины на людях. Am J Respir Crit Care Med (2015) 192: 853–8. DOI: 10.1164 / rccm.201503-0542OC

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    25.Квон К., Пипер Р., Шаллом С., Гроуз С., Квон Е., До Й и др. Корреляционный анализ характеристик белков, связанных с высокопроизводительной экспрессией в масштабе всего генома и растворимостью белков Streptococcus pneumoniae . Protein Expr Purif (2007) 55: 368–78. DOI: 10.1016 / j.pep.2007.06.006

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    26. Квон К., Гроуз К., Пипер Р., Пандья Г.А., Флейшманн Р.Д., Петерсон С.Н. Высококачественный протеиновый микрочип с использованием очистки протеина in situ. BMC Biotechnol (2009) 9:72. DOI: 10.1186 / 1472-6750-9-72

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    27. Раджам Дж., Андертон Дж. М., Карлон Дж. М., Сэмпсон Дж. С., Адес Е. В. Пневмококковый поверхностный адгезин A (PsaA): обзор. Crit Rev Microbiol (2008) 34 (3-4): 131–42. DOI: 10.1080 / 10408410802275352

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    28. Патон Дж. К., Эндрю П. У., Булнуа Дж. Дж., Митчелл Т. Дж. Молекулярный анализ патогенности Streptococcus pneumoniae — роль пневмококковых белков. Annu Rev Microbiol (1993) 47: 89–115. DOI: 10.1146 / annurev.mi.47.100193.000513

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    29. Огунний А.Д., Вудро М.К., Пулман Дж. Т., Патон Дж. Защита от Streptococcus pneumoniae , вызванная иммунизацией пневмолизином и CbpA. Infect Immun (2001) 69: 5997–6003. DOI: 10.1128 / IAI.69.10.5997-6003.2001

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    30. Troncoso G, Sanchez S, Criado MT, Ferreiros CM.Анализ антигенов Neisseria lactamica , предположительно участвующих в приобретении естественного иммунитета к Neisseria meningitidis . FEMS Immunol Med Microbiol (2002) 34: 9–15. DOI: 10.1111 / j.1574-695X.2002.tb00597.x

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    31. Мадхур А., Маурер П., Хакенбек Р. Белки клеточной поверхности в S. pneumoniae, S. mitis и S. oralis . Iran J Microbiol (2011) 3: 58–67.

    PubMed Аннотация | Google Scholar

    32. Денапайт Д., Брукнер Р., Нун М., Райхманн П., Генрих Б., Маурер П. и др. Геном Streptococcus mitis B6 — что такое комменсал? PLoS One (2010) 5: e9426. DOI: 10.1371 / journal.pone.0009426

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    33. Kausmally L, Johnsborg O, Lunde M, Knutsen E, Havarstein LS. Холин-связывающий белок D (CbpD) в Streptococcus pneumoniae необходим для лизиса клеток, индуцированного компетентностью. J Bacteriol (2005) 187: 4338–45. DOI: 10.1128 / JB.187.13.4338-4345.2005

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    34. Огунний А.Д., Фолланд Р.Л., Брилес Д.Е., Холлингсхед С.К., Патон Дж.С. Иммунизация мышей комбинациями белков вирулентности пневмококка вызывает усиленную защиту от заражения Streptococcus pneumoniae . Infect Immun (2000) 68: 3028–33. DOI: 10.1128 / IAI.68.5.3028-3033.2000

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    35.Briles DE, Ades E, Paton JC, Sampson JS, Carlone GM, Huebner RC и др. Интраназальная иммунизация мышей смесью пневмококковых белков PsaA и PspA обладает высокой защитой от носоглоточного носительства Streptococcus pneumoniae . Infect Immun (2000) 68: 796–800. DOI: 10.1128 / IAI.68.2.796-800.2000

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    .

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *