Более чувствительным методом выявления возбудителя туберкулеза является: Экзаменационные тестовые вопросы по фтизиатрии, 500 вопросов

Содержание

Централизованное тестирование Фтизиатрия — Docsity

Тема 1. Эпидемиология туберкулеза 1.1 Какой вид микобактерий наиболее часто вызывает развитие туберкулеза у людей? a. Бычий b. Мышиный c. Человеческий* d. Птичий e. Атипичные микобактерии 10. Что способствует возникновению туберкулеза? a. Курение табака b. Лечение кортикостероидными препаратами c. Злоупотребление алкоголем d. Беременность e. Все перечисленное верно* 1.11 Среди какой группы населения более высокая заболеваемость туберкулезом? a. Мужчины* b. Подростки c. Женщины d. Дети e. Пожилые люди 1.12 Среди каких слоев населения более высокая заболеваемость туберкулезом? a. Жители сельской местности b. Городские жители c. Военнослужащие d. Школьники e. Мигранты* 1.13 Какой эпидемиологический фактор является главным в развитии первичного туберкулеза? a. Суперинфекция МБТ b. Отсутствие вакцинации БЦЖ c. Дополнительное инфицирование от животных d. Первичное инфицирование МБТ* e. Сочетание туберкулезной и другой инфекции 1.14 У больных с какими заболеваниями чаще выявляется туберкулез? a. Сахарный диабет b. Язвенная болезнь желудка и 12-перстной кишки c. Алкоголизм d. Наркомания e. Все перечисленное верно* 1.15 Что характеризует эпидемиологическую ситуацию с туберкулезом a. Заболеваемость b. Болезненность c. Инфицированность d. Смертность e. Все перечисленное верно* 1.16 При какой заболеваемости туберкулез считается нераспространенным заболеванием? a. 100 на 100.000 b. 80 на 100.000 c. 50 на 100.000 d. 20 на 100.000* e. 10 на 100.000 1.17 Какой показатель характеризует резервуар туберкулезной инфекции? a. Заболеваемость b. Болезненность c. Инфицированность* d. Смертность e. Выявляемость 1.18 Какой эпидемиологический показатель определяется при массовой туберкулинодиагностике? 1.26 Риск заболеть туберкулезом повышается при всех перечисленных заболеваниях, кроме : a. Диабета, язвенной болезни желудка и 12-перстной кишки b. Пороков развития легких c. Злокачественных новообразований легких и других органов d. Первичных и вторичных иммунодефицитах, вызванных различными причинами e. Гипертонической болезни* 1.27 Наибольшую эпидемиологическую опасность представляет очаг туберкулезной инфекции, относящейся a. к первой группе* b. к пятой группе c. ко второй группе d. к третей группе e. к четвертой группе 1.28 Возбудитель туберкулеза устойчив к внешним воздействиям благодаря: a. Наличию жиро-восковой капсулы b. Усиленному размножению бактериальных тел c. Способности адаптироваться к изменяющимся условиям внешней среды d. Всем перечисленным факторам e. Факторам А и C* 1.29 При аэрогенном пути заражения защита аппарата дыхания внедрившейся инфекции осуществляется путем : a. Удаления возбудителя через бронхиальное дерево b. Отграничения и изоляции в легочной ткани скоплений возбудителя путем формирования воспалительной гранулемы c. Удаление возбудителя через органы внешней экскреции d. Удаления возбудителя из макроорганизма через лимфатическую систему легкого, кровеносную систему и органы внешней экскреции e. Все ответы верны* 1.3 Когда чаще развивается вторичная лекарственная устойчивость МБТ? a. При лечении одним препаратом* b. При спонтанных мутациях МБТ c. При вторичном иммунодефиците d. При наличии сопутствующих заболеваний e. При отсутствии витаминотерапии 1.30 Отличие течения инфекционного процесса в первичном периоде от его течения во вторичном периоде состоит в: a. Более высокой общей сенсибилизации органов и тканей к туберкулезной инфекции b. Большей наклонности к генерализации инфекционного процесса c. Более частом возникновении параспецифических реакций в тканях разных органов d. Всем перечисленным* 1.31 Ятрогенные случаи заражения туберкулезной инфекцией описаны у: a. пожилых (60-70 лет) b. молодых c. детей (до 2-3 лет)* 1.32 В высохшей мокроте микобактерии туберкулеза могут сохраняться: a. 10-12 месяцев* b. 16-18 месяцев c. 1-2 часа d. 3-4 минуты 1.33 Микобактериоз легких, вызванный заражением атипичным штаммом микобактерии, удается отличить от туберкулеза: a. По клиническому течению заболевания b. По рентгенологическим его проявлениям c. По характеру обнаруженного возбудителя * d. Все ответы правильны e. Не отличается 1.34 Заболевание туберкулезом в настоящее время чаще выявляются: a. у детей b. у подростков c. у лиц молодого возраста (до 40 лет)* d. у лиц среднего возраста (40-59 лет) e. у пожилых людей (60 лет и старше) 1.35 К социальным факторам, благоприятствующим распространению туберкулеза, относятся : a. неблагоприятные жилищно-бытовые условия b. материальная необеспеченность c. низкий интеллектуальный уровень d. беспорядочный образ жизни e. все перечисленное* 1.36 Чаще заболевают туберкулезом и умирают от него: a. мужчины* b. женщины c. одинаково часто и мужчины, и женщины 1.37 Причинами несвоевременного выявления туберкулеза являются: a. Дефекты в профилактической работе b. Неполноценное обследование в поликлинике и стационаре общего профиля c. Небрежное отношение больного к своему здоровью d. Незнание врачами общей сети «масок» туберкулеза (врачебные ошибки) e. Все перечисленное* 1.38 Патоморфоз туберкулеза — это: a. Уменьшение смертности от туберкулеза b. Снижение инфицированности населения туберкулезом a. 100 заболевших на 100 000 населения* b. 30-50 заболевших на 100 000 населения c. 20 заболевших на 100 000 населения 1.48 Комплекс профилактических мероприятий в очагах туберкулезной инфекции включает: a. Текущую дезинфекцию и заключительную дезинфекцию b. Санитарно-гигиеническое воспитание больных и членов их семьи, изоляцию детей от бактериовыделителей c. Вакцинацию и ревакцинацию БЦЖ неинфицированных лиц d. Регулярное обследование и проведение химиопрофилактики лицам, находящихся в контакте с бактериовыделителем e. Все перечисленное верно* 1.49 Критериями эпидемиологической опасности очага туберкулезной инфекции являются: a. Массивность бактериовыделения больным* b. Возраст больного c. Наличие детей в семье больного* d. Жилищные условия* e. Пол больного 1.5 Какой основной путь заражения человека туберкулезом? a. Алиментарный b. Контактный c. Трансмиссивный d. Внутриутробный e. Аэрогенный* 1.50 К понятию очага туберкулезной инфекции относят: a. учреждение, в котором работает больной b. членов семьи больного c. помещения, в котором проживает больной туберкулезом d. все перечисленное верно* e. обстановку, окружающую больного 1.51 Туберкулез — это : a. инфекционное заболевание, с преимущественным поражением лимфатических узлов b. инфекционное заболевание, вызываемое микобактерией туберкулеза, с преимущественным поражением легких* c. хроническое неспецифическое заболевание легких d. параспецифическое поражение трахеи и бронхов e. инфекционное заболевание, с преимущественным поражением трахеи 1.52 Один нелеченный бациллярный больной туберкулезом за год заражает (инфицирует) : a. около 20 человек b. около 10 человек* c. около 3-5 человек 1.53 Наибольшую опасность для окружающих представляет: a. больной с инфильтративным туберкулезом без распада, БК+ в мокроте определяется методом бактериоскопии* b. больной с инфильтративным туберкулезом в фазе распада, БК+ в мокроте определяется методом посева c. больной с фиброзно-кавернозным туберкулезом, БК+ в мокроте выявляется только методом посева 1. 54 Среди инфекционных заболеваний туберкулез, как причина, приведшая к летальному исходу, занимает : a. 1-е место* a. 5-е место b. 6-е место c. 8-е место 1.55 Среди каких слоев населения более высокая заболеваемость туберкулезом? a. Жители сельской местности b. Городские жители c. Военнослужащие d. Школьники e. Мигранты* 1.56 Микобактерии туберкулеза наиболее чувствительны: a. К высушиванию b. К ионизации воздуха c. К замораживанию d. К ультрафиолетовому излучению* e. К действию спиртов и щелочей 1.57 Перечислите лиц, подлежащих бактериоскопическому исследованию мокроты на микобактерии туберкулеза (МБТ) a. все лица, обратившиеся с жалобами к терапевту b. лица с продолжительным кашлем с выделением мокроты, а также с болями в грудной клетке, с температурой тела, слабостью* c. лица, прибывающие на постоянное место жительство в регион курации d. лица, обратившиеся в травмпункт стационара с переломами и ушибами грудной клетки 1.58 Какие факторы губительно действуют на МБТ? a. Ультрафиолетовые лучи b. Кипячение c. Хлорсодержащие вещества d. Автоклавирование e. Все перечисленное верно* 1.59 Что такое «пассивный» метод выявления туберкулеза a. выявление туберкулеза у населения из группы риска b. выявление туберкулеза у всего населения определенного региона c. выявление туберкулеза по обращаемости* d. выявление туберкулеза у детей и подростков e. выявление туберкулеза лучевым методом 1.6 О чем свидетельствует выявление первичных форм абдоминального туберкулеза среди детей территории b. 18 лет* c. 20 лет d. 25 лет e. 30 лет 1.73 Сколько существует групп очагов туберкулезной инфекции? a. 3 b. 4 c. 5* d. 8 e. 9 1.8 К какой группе относится очаг туберкулезной инфекции, в котором проживает вместе со своими детьми больной фиброзно-кавернозным туберкулезом легких с бактериовыделением? a. к первой* b. ко второй c. к четвертой 1.9 При развитии активного туберкулеза наибольшее значение придается: длительности контакта с источником туберкулезной инфекции входным путями инфекции состоянию резистентности организма человека* Тема 2. Методы обследования 2.1 Каковы критерии оценки реакции при пробе Манту с 2 ТЕ a. Качественная характеристика папулы. b. Реакция регионарных периферических лимфатических узлов. c. Пигментация после исчезновения папулы. d. Все перечисленное верно*. e. Размер папулы. 2.10 При каком минимальном размере папулы пробу Манту с 2 ТЕ у детей и подростков считают гиперергической a. 7 мм. b. 12 мм. c. 15 мм. d. 17 мм.* e. 21 мм. 2.100 Первичное туберкулезное инфицирование выявляется с помощью: a. Туберкулинодиагностики* b. Компьютерной томографии органов грудной клетки c. Магниторезонансной томографии органов грудной клетки d. УЗИ легких 2.101 К методам верификации туберкулеза относятся: a. Биохимический и иммунологический b. Пробное лечение и динамическое наблюдение c. Рентгенологический и радиоизотопный d. Бактериологический и цито-гистологический* 2.102 Оптимальный температурный режим для активного размножения микобактерий туберкулеза a. 20-25оС b. 37-38оС* c. 42-45оС d. 50-55оС 2.103 У больного с округлым периферическим образованием в легком при неуточненой этиологии процесса необходимо использовать: динамическое наблюдение пробное лечение с выбором препарата соответственно наиболее вероятной патологии *биопсию легкого гормональную терапию 171978 2. 104 2.104 Благодаря высокой специфичности Диаскинтест® позволяет: a. дифференцировать иммунные реакции, обусловленные инфекцией M.tuberculosis, поствакцинальный иммунитет (БЦЖ) и неспецифические реакции, возникающие при инфицировании непатогенными микобактериями* b. повысить неспецифическую резистентность организма c. сократить сроки оценки внутрикожного теста 2.105 В лаважной жидкости, полученной от больного туберкулезом органов дыхания, преобладают: a. лимфоциты* b. нейтрофилы c. альвеолярные макрофаги d. эозинофилы клетки бронхиального эпителия 2.106 В лаважной жидкости, полученной при бронхологическом обследовании здорового человека, определяются: a. лимфоциты b. нейтрофилы c. альвеолярные макрофаги* d. эпителиоидные клетки e. гигантские клетки 2.107 Диаскинтест® это: a. внутрикожный диагностический тест, основанный на использовании двух рекомбинантных белков (ESAT6/CFP10), которые отсутствуют у M.bovis BCG и большинства непатогенных микобактерий.* b. накожный скарификационный диагностический тест, основанный на использовании двух рекомбинантных белков (ESAT6/CFP10), которые отсутствуют у M. bovis BCG и большинства непатогенных микобактерий c. накожный скарификационный диагностический тест с использованием Альт-туберкулина d. внутрикожный диагностический тест с использованием Альт-туберкулина 2.108 Выявление заболевания туберкулезом у взрослых осуществляется всеми методами, кроме: c. инфильтративного туберкулеза легких d. кавернозного туберкулеза легких e. казеозной пневмонии* 2.116 Одной из основных целей ежегодной массовой туберкулинодиагостики является: a. выявление первичного инфицирования* b. выявление лиц с гиперергической реакцией у давно инфицированных c. отбор контингента для вакцинации БЦЖ d. отбор контингента для ревакцинации БЦЖ e. определение показателя инфицированности и ежегодного риска инфицирования 2.117 Основной метод рентгенологической диагностики заболеваний органов грудной клетки в пульмонологической клинике a. стационарная среднеформатная флюорография b. обзорная рентгенография в 2-х проекциях (прямая и боковая)* c. рентгеноскопия d. томография 2.118 Основным признаком первичного инфицирования микобактериями туберкулеза является: a. наличие стойкой гиперергической реакции на туберкулин b. наличие симптомов интоксикации c. «вираж» туберкулиновой пробы* d. наличие в легких очагах Гона e. положительная проба Манту в течении нескольких лет 2.119 Основным признаком первичного инфицирования микобактериями туберкулеза является: a. наличие стойкой гиперергической реакции на туберкулин b. наличие симптомов интоксикации c. «вираж» туберкулиновой пробы* d. наличие в легких очагах Гона e. положительная проба Манту в течении нескольких лет 2.12 У каких лиц основным методом выявления туберкулеза является исследование мокроты на МБТ a. Больные сахарным диабетом. b. Больные язвенной болезнью. c. Длительно принимающие иммунодепрессанты. d. Больные хроническим алкоголизмом. e. Больные с хроническими заболеваниями легких.* 2.120 Основным рентгенологическим методом обследования больного туберкулезом является: a. рентгеноскопия b. бронхография c. рентгенография* d. ангиография e. компьютерная томография 2.121 Какой из рентгенологических методов обследования необходимо выполнить у больного туберкулезом легких перед проведением хирургического лечения: a. рентгеноскопия b. бронхография c. флюорография d. ангиография e. компьютерная томография* 2.122 Патологический материал, полученный от больного туберкулезом при аспирационной катетеризационной биопсии подвергается: a. гистологическому и цитологическому исследованию b. цитологическому и биохимическому исследованию c. биохимическому и морфологическому исследованию d. бактериологическому и биохимическому исследованию e. цитологическому и бактериологическому исследованию * 2.123 Массовую туберкулинодиагностику среди детей следует проводить: a. 1 раз в 6 месяцев b. 1 раз в 1 год* c. 4 раза в 1 год d. 1 раз в 2 года e. 1 раз в 3 года 2.124 Патологический материал, полученный от больного тбуркулезом при аспирационной катетеризационной биопсии подвергается: a. гистологическому и цитологическому исследованию b. цитологическому и биохимическому исследованию c. биохимическому и морфологическому исследованию d. бактериологическому и биохимическому исследованию e. цитологическому и бактериологическому исследованию* 2. 125 При активном очаговом туберкулезе легких интенсивность очаговых теней чаще: a. малая и высокая b. средняя и высокая c. высокая d. малая и средняя* 2.126 При исследовании мокроты у больных с очаговым туберкулезом легких МБТ обнаруживаются чаще: a. при простой бактериоскопии b. при люминесцентной бактериоскопии c. при бактериологическом исследовании* d. при бактериоскопии с окраской по Ван-Гизону 2.127 При каких показателях папулы при постановке пробы Манту с 2ТЕ ППД-Л дети подлежат ревакцинации БЦЖ в 7 лет a. 17 мм и выше b. 12 мм и выше c. 5 мм и выше d. отрицательная проба* 2.128 При каких показателях папулы при постановке пробы Манту с 2ТЕ ППД-Л дети и подростки подлежат срочному углубленному обследованию на туберкулез a. 17 мм и выше* a. определения скрытой активности специфического процесса у детей и взрослых с наличием у них посттуберкулезными изменений b. проведения дифференциальной диагностики туберкулеза с другими заболеваниям c. выявления «виража» туберкулиновой чувствительности d. А и B* e. C и А 2.137 Проекция шестого сегмента (С6) правого легкого на обзорной рентгенограмме a. выше переднего отрезка 2 ребра b. в средней зоне легочного поля латерально (субкортикально) c. в средней зоне легочного поля медиально (ближе к корню)* d. ниже переднего отрезка 4 ребра (над диафрагмой) 2.138 Реакция на туберкулин при пробе Манту с 2 ТЕ при милиарном туберкулезе как правило: a. гиперергическая b. положительная c. сомнительная d. отрицательная* e. парадоксальная 2.139 Рентгенологические параметры очаговых теней крупных размеров a. до 3 мм b. от 3 до 6 мм c. от 6 до 10 мм* d. от 15 до 20 мм 2.14 Что является основным методом своевременного выявления туберкулеза легких у взрослых при массовом обследовании a. Флюорография.* b. Туберкулинодиагностика. c. Бактериоскопическое исследование мокроты на МБТ. d. Исследование бронхиального содержимого методом ПЦР. e. Бронхоскопия. 2.140 Самым опасным очагом туберкулезной инфекции является: a. бактериовыделитель с наличием в окружении его детей или лиц с асоциальным поведением* b. скудный бактериовыделитель при контакте только со взрослыми c. бактериовыделитель с факультативным выделением БК и при контакте только со взрослыми 2.141 Специфической морфологической реакцией для туберкулезного воспаления является скопление в очаге поражения: a. лимфоидных клеток b. нейтрофильных клеток c. моноцитов d. эпителиоидных клеток с включением гигантских клеток Пирогова- Лангханса* 2.142 Температурный режим, при котором происходит гибель микобактерий туберкулеза при 15-минутном воздействии a. –140оС b. 0оС c. +60оС d. +100оС* 2.143 Томография с назначением среза через корни легких и средостение в прямой проекции позволяет получить информацию: a. о состоянии внутригрудных лимфоузлов b. о состоянии просвета трахеи c. о состоянии просвета крупных бронхов d. о состоянии крупных сосудов, сердца e. все ответы верны* 2.144 Трансбронхиальная пункция лимфоузлов оказывается наиболее результативной при: туберкулеме легкого саркоидозе* гамартохондроме периферическом раке легкого эхинококкозе 2. 145 Снижение чувствительности к туберкулину может наблюдаться при: a. ВИЧ-инфекции b. саркоидозе c. при инфекционном мононуклеозе d. приеме глюкортикостероидов e. все перечисленное верно* 2.15 Какая реакция имеет наибольшую диагностическую ценность при пробе Коха a. Общая реакция. b. Местная реакция. c. Очаговая реакция.* d. Комплексная — местная и общая реакции. e. Все перечисленное верно. 2.16 Какие изменения в анализе крови характерны для активного туберкулеза легких a. Лейкоцитоз. b. Сдвиг лейкоцитарной формулы влево. c. Увеличение СОЭ. d. Все перечисленное верно. * e. Все перечисленное неверно. 2.17 Каковы противопоказания для пробы Манту с 2 ТЕ a. Кожные заболевания.* b. Положительная реакция на пробу Манту с 2 ТЕ в анамнезе. c. Перенесенный ранее туберкулез. d. Все перечисленное верно. e. Все перечисленное неверно. 2.18 Какое исследование позволяет верифицировать диагноз туберкулеза легких a. Бактериоскопическое или бактериологическое исследование бронхиального содержимого на МБТ. b. Исследование бронхиального содержимого методом ПЦР. 2.26 Что из анамнеза свидетельствует в пользу туберкулезной этиологии изменений в легких a. Острое начало заболевания. b. Быстрая положительная рентгенологическая динамика при антибиотико терапии. c. Некоторое клинико-рентгенологическое улучшение при лечении антибиотиками широкого спектра действия. * d. Все перечисленное верно. e. Все перечисленное неверно. 2.27 Что может быть причиной отрицательной реакции на пробу Манту с 2 ТЕ у больного туберкулезом легких a. Положительная анергия. b. Лечение противотуберкулезными препаратами. c. Прекращение бактериовыделения. d. Все перечисленное верно. e. Все перечисленное неверно. * 2.28 Что не определяется в корне легкого на рентгенограмме в норме a. Легочная артерия. b. Разветвления легочной артерии. c. Крупные вены. d. Просвет промежуточного бронха. e. Лимфатические узлы* 2.29 Что соответствует гиперергической реакции на пробу Манту с 2 ТЕ у взрослого a. Размер папулы более 21 мм. b. Везикула. c. Лимфангит. d. Регионарный лимфаденит. e. Все перечисленное верно.* 2.3 Какой из методов выявления возбудителя туберкулеза является более чувствительным a. Прямая бактериоскопия. b. Флотация + бактериоскопия. c. Люминисцентная бактериоскопия. d. Биологический. * e. Культуральный. 2.30 Что считают клиническим минимумом обследования пациента при подозрении на туберкулез a. Общий анализ крови. b. Проба Манту. c. Исследование мокроты на МБТ. d. Рентгенография легких. e. Все перечисленное верно. * 2.31 C какого рентгенологического метода начинают обследование больного с заболеванием легких a. Рентгенография.* b. Томография. c. Рентгеноскопия. d. Флюорография. e. Компьютерная томография. 2.32 Kакие элементы не входят в состав туберкулезной гранулемы a. Гигантские клетки Пирогова-Лангханса. b. Творожистый некроз. c. Эпителиоидные клетки. d. Лимфоциты. e. Эозинофилы. * 2.33 Какие иммунологические реакции наиболее важны для защиты человека от туберкулезной инфекции a. Антителообразование. b. Гиперчувствительность замедленного типа. * c. Развитие толерантности. d. Гиперчувствительность немедленного типа. e. Все перечисленное верно. 2.34 Какие профилактические лучевые исследования не рекомендуются a. Флюорографические осмотры у детей. b. Рентгеноскопия. c. Рентгенологические исследования беременных женщин. d. Все перечисленное верно.* e. Все перечисленное неверно. 2.35 Какой симптом не характерен для интоксикации при туберкулезе a. Повышенная температура тела. b. Слабость. c. Потливость. d. Головная боль.* e. Ухудшение аппетита. 2.36 Какую рентгенограмму в прямой проекции считают выполненной с повышением жесткости рентгеновского излучения a. Срединная тень гомогенна. b. Отчетливо видны 2 верхних грудных позвонка. c. Отчетливо видны 3 — 4 верхних грудных позвонка. d. Видно более 4-х верхних грудных позвонков.* e. Грудные позвонки не видны. 2.37 Спустя какой срок после введения 2 ТЕ оценивают пробу Манту a. 24 часа. b. 36 часов. c. 48 часов. d. 72 часа.* e. 96 часов. 2.38 Что приводит к повышению чувствительности к туберкулину a. Мононуклеоз. b. Коклюш. c. Очаги хронической инфекции. * 2.46 При каком минимальном размере папулы пробу Манту с 2 ТЕ считают положительной a. 2 мм. b. 3 мм. c. 4 мм. d. 5 мм. * e. 6 мм. 2.47 Какую задачу решает массовая постановка пробы Манту с 2 ТЕ a. Определение инфицированности МБТ. b. Выявление детей и подростков с повышенным риском заболевания туберкулезом. c. Выявление подлежащих ревакцинации БЦЖ. d. Раннее выявление туберкулеза у детей и подростков. e. Все перечисленное верно.* 2.48 Биологический вид микобактерий позволяет установить: a. прямая микроскопия после окраски по Цилю – Нельсону b. прямая микроскопия после окраски по Шпенглеру c. прямая микроскопия после флотации d. люминесцентная микроскопия e. культуральное исследование* 2.49 В РФ основными методами выявления туберкулеза легких у взрослых являются: a. клиническое обследование, рентгенография органов грудной клетки, микроскопия мокроты на МБТ * b. клиническое обследование, рентгенография органов грудной клетки, микроскопия мокроты на МБТ, туберкулинодиагностика c. клиническое обследование, рентгенография органов грудной клетки, фибробронхоскопия d. клиническое обследование, рентгенография органов грудной клетки, исследование мокроты методом ПЦР e. клиническое обследование, ультразвуковое исследование органов грудной клетки, микроскопия мокроты на МБТ 2.5 Чаще протекает инапперцептно и выявляется при массовой флюорографии населения: a. плеврит туберкулезной этиологии b. милиарный туберкулез c. туберкулема легких и очаговый туберкулез легких* d. инфильтративный туберкулез легких e. цирротический туберкулез легких 2.50 В чем преимущества системы BACTEC перед другими видами микробиологической диагностике. a. в высокой точности результатов исследования b. в быстром получении результатов исследования* c. низкой себестоимости исследования d. все перечисленное верно e. система BACTEC не имеет преимуществ перед другими видами микробиологической диагностики. 2.51 Выявить специфическую аллергию к МБТ позволяет: a. общий анализ крови b. рентгенография легких c. микроскопическое исследование бронхиального содержимого d. фибробронхоскопия e. проба Манту* 2.52 Для исследования чувствительности МБТ к противотуберкулезным препаратам необходимо получить чистую культуру микобактерий методом: a. прямой микроскопии с окраской по Цилю – Нельсону b. прямой микроскопии с окраской по Шпенглеру c. прямой микроскопии после флотации d. люминесцентной микроскопии e. посева* 2.53 Для обнаружения МБТ в диагностическом материале его нужно окрасить методом: a. Грамма b. Бойля – Мариота c. Ван – Гизона d. Вельтмана e. Циля – Нельсена* 2.54 Для чего используется система ТБ-Биочип a. для выявления кислотоустойчивых микроорганизмов в биологической жидкости. b. для выявления видовой принадлежности МБТ c. для определения лекарственной устойчивости МБТ* d. все перечисленное неверно e. все перечисленное верно 2.55 к какому виду диагностики относится система BACTEC a. имунологической диагностике b. микробиологической диагностике* c. цитологической диагностике d. ПЦР диагностике e. все перечисленное неверно. 2.56 Какова цель проведения микробиологического исследования мокроты у больного с подозрением на туберкулез a. определение наличия бактеривыделения и эпидемиологической опасности больного b. определение чувствительности к противотуберкулезным препаратам c. оценка проведенного лечения d. все перечисленное неверно * 2.57 Каковы преимущества ПЦР — диагностики ТБ перед другими микробиологическим методами a. высокая чувствительность b. высокая специфичность c. высокая скорость анализа d. все перечисленное правильно * 2.58 Какой материал может быть исследован с использованием микробиологических методов диагностики: e. краснухой 2.66 Поражение внутригрудных лимфатических узлов лучше выявляет: a. обзорная рентгенография органов грудной клетки в прямой проекции b. боковая рентгенография c. прицельная рентгенография d. компьютерная томография* e. магнитно-резонансная томография 67. При вторичном туберкулезе легких чаще поражены: a. VIII, IX сегменты b. I-II, VI сегменты* c. IV,V сегменты d. V, VI сегменты e. X, XI сегменты 2.68 При каком исследовании, возможно взятие материала для проведения микробиологического и культурального исследования a. фибротрахеобронхоскопия* b. сцинтиграфия c. эзофагография d. трахеография e. рентгеноскопия 2.69 При проведении исследования на наличие МБТ в мокроте для получения отрицательного результата производят a. 2-х кратное b. 3-х кратное* c. 5-ти кратное исследование мокроты 2.7 Какую форму туберкулеза легких считают поздно выявленной a. Диссеминированная. b. Очаговая. c. Инфильтративная. d. Туберкулема. e. Фиброзно-кавернозная.* 2.70 При проведении культуральных исследований, какую среду используют для культивирования МБТ: a. среду Эндо b. среду Левинштеина-Йенсона* c. среда Китт-Тароцци d. среда Сабуро e. мясо-пептонный бульон с глюкозой 2.71 При проведении микроскопии диагностического материала выявляют: a. кислотоустойчивые микроорганизмы* b. M. tuberculosis humanis c. M. africanum d. BCG e. М. leprae 2.72 Распад в легочной ткани лучше выявляет: a. обзорная рентгенография органов грудной клетки в прямой проекции b. боковая рентгенография c. прицельная рентгенография d. компьютерная томография* e. магнитно-резонансная томография 2.73 С какой целью проводят массовую туберкулинодиагностику a. с целью получения эпидемиологических и диагностических данных* b. с целью оценки получения данных в ограниченных группах населения c. с целью выявления лекарственно устойчивых форм туберкулеза d. все перечисленное верно 2.74 Свежие туберкулезные очаги в легочной ткани лучше выявляет: a. цифровая рентгенография в прямой проекции b. цифровая рентгенография в боковой проекции c. продольная томография d. компьютерная томография* e. магнитно-резонансная томография 2.75 Снижение чувствительности к туберкулину может быть обусловлено: a. мононуклеозом b. саркоидозом* c. хроническим очагами инфекции d. сахарным диабетом e. тиреотоксикозом 2.76 Больному с округлым периферическим образованием в легком при неуточненой этиологии необходимо выполнить: a. динамическое наблюдение b. пробное лечение с выбором препарата соответственно наиболее вероятной патологии c. биопсию легкого* d. гормональную терапию 2.77 Когда целесообразно проводить профилактическое флюорографическое исследование легких a. При обращении к врачу впервые за год всех курящих табак. b. При обследовании инфицированных ВИЧ. c. При ежегодном обследовании больного сахарным диабетом. d. При назначении иммунодепрессивной терапии. e. Все перечисленное верно. * 2.78 В верхнем отделе нижней доли легкого располагается: a. 9 сегмент b. 7 сегмент c. 8 сегмент d. 6 сегмент* e. 10 сегмент 2.87 Интенсивность свежих, недавно возникших, очаговых тенеобразований в легких туберкулезной этиологии a. высокая b. малая* c. различная d. средняя 2.88 Техника постановки внутрикожной диагностической пробы с препаратом ДИАСКИНТЕСТ® (aллерген туберкулезный рекомбинантный в стандартном разведении): a. не отличается от техники постановки реакции Манту* b. не отличается от техники постановки реакции Пирке c. не отличается от техники постановки пробы Коха d. не отличается от градуированной накожной пробы по методике Гринчара- Карпиловского 2.89 Казеозный некроз: a. специфичен только для туберкулеза и не встречается при других заболеваниях * b. как правило, наблюдается при туберкулезе, но может встречаться при другой патологии c. не является специфической тканевой реакцией для туберкулеза, встречается при раке d. не является специфической тканевой реакцией для туберкулеза, встречается при саркоидозе e. не является специфической тканевой реакцией для туберкулеза, встречается при пневмокoниозах 2.9 Учащиеся высших и средних учебных заведений должны проходить профилактическое флюорографическое обследование: a. 2 раза в год b. 1 раз в год* c. 1 раз в 2 года d. 1 раз в 3 года e. 1 раз в 2-3 года в зависимости от эпидемиологической ситуации в данном районе 2.90 Какова активность туберкулина в объеме 0,1 мл при массовой постановке пробы Манту у детей и подростков a. 1ТЕ b. 2ТЕ* c. 5ТЕ d. 10ТЕ 2.91 Какой метод введения туберкулина является общепринятым в настоящее время при массовой туберкулинодиагностике a. накожный b. внутрикожный* c. подкожный d. внутривенный 2.92 Клинически малосимптомно и без изменений, выявляемых с помощью физических методов исследования, протекает: a. очаговый туберкулез легких* b. инфильтративный туберкулез легких c. диссеминированный туберкулез легких d. фиброзно-кавернозный туберкулез e. цирротический туберкулез 2.93 Метод введения 50-100 ТЕ туберкулина при диагностической пробе Коха a. накожный b. внутрикожный c. подкожный* d. внутримышечный 2.94 Метод общедоступной и срочной лабораторной диагностики МБТ, выполнимый в любом лечебно-профилактическом учреждении a. бактериоскопия методом флотации b. прямая бактериоскопия* c. бактериологическое исследование d. люминисцентная бактериоскопия 2.95 Наиболее качественный и информативный способ получения патологического материала у больных с заболеваниями легких на МБТ и вторичную флору a. при естественном откашливании мокроты b. при целенаправленной бронхоскопии* c. при интратрахеальном смыве d. с помощью провоцирующих ингаляций 2. 96 Наиболее результативный метод лабораторной диагностики на МБТ a. люминисцентная бактериоскопия b. прямая бактериоскопия c. бактериологический метод с типированием возбудителя* d. бактериоскопия методом флотации 2.97 Наличие выраженной клинической симптоматики, как правило, более характерно для: a. очагового туберкулеза легких b. туберкулемы легких c. инфильтративного туберкулеза легких d. кавернозного туберкулеза легких e. казеозной пневмонии* 2.98 Обозначение в клиническом диагнозе локализации туберкулезного процесса в легких a. по долям и сегментам* b. по полям c. по ребрам d. по межреберьям 2.99 Одной из основных целей ежегодной массовой туберкулинодиагостики является: a. выявление первичного инфицирования* b. выявление лиц с гиперергической реакцией у давно инфицированных c. отбор контингента для вакцинации БЦЖ d. отбор контингента для ревакцинации БЦЖ e. определение показателя инфицированности и ежегодного риска инфицирования Профилактика туберкулеза 3.1Какой раздел входит в понятие профилактика туберкулеза? @- 1. 2 недели. @- 2. 1 месяц. @+ 3. 2 месяца. @- 4. 3 месяца. @- 5. 4 месяца. 3.10Какой метод введения вакцины БЦЖ используют в России? @- 1. Пероральный. @- 2. Накожный. @+ 3. Внутрикожный. @- 4. Подкожный. @- 5. Все перечисленное верно. 3.11Что определяет преимущества внутрикожной вакцинации БЦЖ? @- 1. Строгая дозировка. @- 2. Длительный иммунитет. @- 3. Экономичность. @+ 4. Все перечисленное верно. @- 5. Все перечисленное неверно. 3.12Когда проводят вакцинацию БЦЖ здоровым детям без предварительной туберкулинодиагностики? @- 1. В возрасте 2 — 3 дней. @+ 2. В возрасте 4 — 7 дней. @- 3. В возрасте 2 месяцев. @- 4. В возрасте 4 месяцев. @- 5. По эпидемиологическим показаниям. 3.13Когда проводят ревакцинацию БЦЖ? @- 1. В 2 года и далее каждые 5 — 7 лет. @- 2. Каждые 4 года детям и подросткам. @- 3. Каждые 5 лет детям и подросткам. @+ 4. В возрасте 7, 12, 17 лет и далее каждые 5 — 7 лет до 30-летнего возраста. @- 5. Только по эпидемиологическим показаниям. 3.14В чем проявляется эффективность противотуберкулезной вакцинации и ревакцинации? @- 1. Снижение заболеваемости. @- 2. Снижение смертности. @- 3. Менее тяжелое течение туберкулеза. @- 4. Снижение инфицированности МБТ. @+ 5. Все перечисленное верно. 3.15Какой размер поствакцинального рубчика свидетельствует о наличии прививочного иммунитета? @- 1. 1 — 2 мм. @- 2. 3 — 4 мм. @+ 3. 5 — 7 мм. @- 4. Все перечисленное верно. @- 5. Все перечисленное неверно. 3.16Как наблюдают за развитием противотуберкулезного иммунитета в течение первых 2 месяцев после вакцинации? @- 1. По изменению общего состояния. @- 2. По состоянию периферических лимфатических узлов. @+ 3. По местным прививочным реакциям. @- 4. По изменениям в гемограмме. @- 5. По реакции на пробу Манту с 2 ТЕ. 3.17Какой фактор имеет решающее значение для сохранения иммунитета к туберкулезу? @- 1. Наличие в организме остатков микробных тел и продуктов жизнедеятельности МБТ. @+ 2. Существование в организме живых МБТ и их L-форм. @- 3. Органная локализация посттуберкулезных изменений. @- 4. Все перечисленное верно. @- 5. Все перечисленное неверно. 3.18Как уничтожают неиспользованную вакцину БЦЖ? @- 1. Обработкой в муфельной печи. @- 2. Автоклавированием. @- 3. Путем слива в канализацию. @+ 4. Замачиванием в хлорамине. @- 5. Замачиванием в спирте. 3.19Что не является противопоказанием для использования вакцины БЦЖ? @- 1. Отсутствие или неправильное заполнение этикетки на ампуле. @- 2. Истекший срок годности. @- 3. Наличие трещин на ампуле. @- 4. Изменение цвета вакцины. @+ 5. Быстрое (менее 1 минуты) растворение вакцины в физрастворе. 3.20Что является противопоказанием к вакцинации БЦЖ новорожденного в роддоме? @- 1. Генерализованная БЦЖ-инфекция у других детей в семье. @- 2. Масса тела менее 2000 г. @- 3. Контакт с больной туберкулезом матерью. @- 4. Гемолитическая желтуха. @+ 5. Все перечисленное верно. 3.21Что является противопоказанием для ревакцинации БЦЖ? @- 1. Ревакцинация БЦЖ 5 лет назад. @- 2. Положительная анергия. @+ 3. Инфицированность МБТ. @- 4. Наличие рубца после предыдущей вакцинации. @- 5. Все перечисленное верно. @- 5. Все перечисленное верно. 3.30Кому показана химиопрофилактика для предупреждения заболевания туберкулезом? @- 1. Лицам из постоянного контакта с бактериовыделителем. @- 2. Лицам с виражом туберкулиновой реакции. @- 3. Лицам с гиперергическими реакциями на туберкулин. @- 4. Больным сахарным диабетом со следами ранее перенесенного туберкулеза. @+ 5. Все перечисленное верно. 3.31Как проводят химиопрофилактику детям и подросткам с виражом чувствительности к туберкулину? @+ 1. Однократно в течении 3 месяцев. @- 2. Однократно в течении 8 месяцев. @- 3. Однократно в течение 10 месяцев. @- 4. Однократно в течение 1 года. @- 5. В осенне-весеннее время по 2 месяца в течение 2 лет. 3.32как проводят химиопрофилактику лицам находящимся в постоянном контакте с бактериовыделителем? @+ 1. Один — два противотуберкулезных препарата в течение 2 — 3 месяцев 2 раза в год. @- 2. Один противотуберкулезный препарат в течение 1 месяца 2 — 3 раза в год. @- 3. Один противотуберкулезный препарат через день по 4 месяца 2 раза в год. @- 4. Два противотуберкулезных препарата в период ухудшения самочувствия. @- 5. Один противотуберкулезный препарат 2 раза в неделю в течение года. 3.33Какое мероприятие необходимо провести ребенку с виражом туберкулиновой реакции? @- 1. Наблюдение с целью своевременного выявления туберкулеза. @- 2. Комбинированное лечение противотуберкулезными препаратами. @- 3. Ревакцинацию БЦЖ. @+ 4. Химиопрофилактику в течение 3 месяцев. @- 5. Все перечисленное верно. 3.34Какой препарат предпочтительнее использовать для химиопрофилактики? @- 1. Стрептомицин. @+ 2. Изониазид. @- 3. Рифампицин. @- 4. ПАСК. @- 5. Тиоацетазон. 3.35Какова продолжительность курса химиопрофилактики у лиц, наблюдающихся в IV группе диспансера? @- 1. 2 — 3 дня. @- 2. 2 — 3 недели. @+ 3. 2 — 3 месяца. @- 4. 4 — 6 месяцев. @- 5. 1 — 1,5 года. 3.36Во сколько раз проведение химиопрофилактики снижает заболеваемость туберкулезом в группах риска? @- 1. В 2 — 3 раза. @+ 2. В 5 — 7 раз. @- 3. В 8 — 10 раз. @- 4. В 10 — 14 раз. @- 5. В 15 — 16 раз. 3.37Какие химические средства используют для дезинфекции в очаге туберкулезной инфекции? @- 1. Спирты. @- 2. Кислоты. @- 3. Щелочи. @+ 4. Хлоровыделяющие вещества. @- 5. Фенолы. 3.38Какой физический фактор быстрее убивает микобактерии и используется для дезинфекции? @- 1. Тепло. @+ 2. Ультрафиолетовые лучи. @- 3. Холод. @- 4. Ультразвук. @- 5. Электромагнитное поле. 3.39Какое действие привально в отношении мокроты, собранной больным туберкулезом в плевательницу? @- 1. Вылить в канализацию. @- 2. Закопать в землю. @+ 3. Прокипятить с 2 % раствором соды или замочить в хлорамине. @- 4. Все перечисленное верно. @- 5. Все перечисленное неверно. 3.40Что определяет эпидемиологическую опасность очага туберкулезной инфекции? @- 1. Массивность бактериовыделения. @- 2. Жилищные условия. @- 3. Соблюдение больным гигиенических правил. @- 4. Наличие в очаге детей, подростков и беременных женщин. @+ 5. Все перечисленное верно. 3.41Что относится к текущей дезинфекции в очаге туберкулезной инфекции? @- 3. Провести химиопрофилактику. @- 4. Провести ревакцинацию туберкулинотрицательным. @+ 5. Все перечисленное верно. 3.49Что должен сделать фтизиатр перед снятием с диспансерного учета ребенка из контакта? @- 1. Пробу Манту с 2 ТЕ. @- 2. Клиническое обследование. @- 3. Лабораторное обследование. @- 4. Рентгенологическое обследование. @+ 5. Все перечисленное верно. 3.50Подлежит ли наблюдению в лиспансере ребенок, инфицированный МБТ 2 года назад, без клинических, лабораторных и рентгенологических проявлений туберкулеза. @+ 1. Не подлежит. @- 2. Наблюдение в VI А группе. @- 3. Наблюдение в VI Б группе. @- 4. Наблюдение в IV группе. @- 5. Наблюдение в VII группе. 3.51Когда может быть допущен к работе больной туберкулезом, по роду своей профессии постоянно соприкасающийся с большими группами населения. @- 1. Через 1 месяц после прекращения бактериовыделения. @- 2. Через 3 месяца после прекращения бактериовыделения и закрытия полости распада. @- 3. По окончании основного курса химиотерапии. @+ 4. Не ранее 1 — 2 лет после эффективного курса противотуберкулезного лечения. @- 5. При снятии с учета противотуберкулезного диспансера. 3.52Что относится к социальной профилактике туберкулеза? @- 1. Повышение материального благосостояния. @- 2. Улучшение питания. @- 3. Улучшение жилищно-бытовых условий. @- 4. Борьба с алкоголизмом и наркоманией. @+ 5. Все перечисленное верно. 3.53В какой группе учета противотуберкулезного диспансера наблюдают больных фиброзно-кавернозным туберкулезом? @- 1. I А. @+ 2. I Б. @- 3. II. @- 4. III А. @- 5. III Б. 3.54В какой группе учета противотуберкулезного диспансера наблюдают здоровых из очага туберкулезной инфекции? @- 1. I. @- 2. III. @- 3. II. @+ 4. IV. @- 5. V. 3.55Какова врачебная тактика в отношении ребенка с первичным инфицированием при отсутствии клинических, лабораторных и рентгенологических признаков туберкулеза. @- 1. Наблюдение в противотуберкулезном диспансере не требуется. @+ 2. Наблюдение в VI А группе. @- 3. Наблюдение в VI Б группе. @- 4. Наблюдение в IV группе. @- 5. Наблюдение в VII группе. 3.56В какой группе учета противотуберкулезного диспансера наблюдают больных активным туберкулезом органов дыхания. @+ 1. I. @- 2. II. @- 3. III. @- 4. IV. @- 5. VII. 3.57В какой группе учета противотуберкулезного диспансера наблюдают лиц с остаточными изменениями после излеченного туберкулеза органов дыхания с повышенным риском его реактивации? @- 1. I. @- 2. II. @- 3. III. @- 4. IV. @+ 5. VII. 3.58.К социальным факторам, благоприятствующим распространению туберкулеза, относятся а)неблагоприятные жилищно-бытовые условия б)материальная необеспеченность в)низкий интеллектуальный уровень г)беспорядочный образ жизни V д)все перечисленное 3.59.Под очагом туберкулезной инфекции следует понимать а)больного, выделяющего БК б)жилище больного, выделяющего БК в)окружение больного, выделяющего БК V г)все перечисленное 3.60.Самым опасным очагом туберкулезной инфекции является V а)бактериовыделитель с наличием в окружении его детей или лиц с асоциальным поведением б)скудный бактериовыделитель при контакте только со взрослыми в)бактериовыделитель с факультативным выделением БК и при контакте только со взрослыми V в)больной человек г)все перечисленное 3. 71.Чаще других поражаются туберкулезом и могут явиться источником заражения человека следующие виды животных V а)крупный рогатый скот б)кошки и собаки в)птицы и крупный рогатый скот 3.72.Заражение человека туберкулезом чаще происходит а)аэрогенным и трансплацентарным путем V б)алиментарным и аэрогенным путем в)контактным и аэрогенным путем 3.73.Инфицированию и заболеванию туберкулезом при контакте с бактериовыделителем чаще подвергаются V а)дети первых двух лет жизни б)дети до 10-11 лет и подростки (12-16 лет) в)молодые люди до 39 лет г)лица среднего возраста 40-59 лет д)пожилые люди (60 лет и старше) 3.74.Наиболее защищенными в настоящее время от туберкулеза в силу естественной резистентности, а также благодаря профилактическим мероприятиям оказались а)дети и подростки V б)дети и лица среднего возраста (40-59 лет) в)дети и молодые люди (20-39 лет) г)дети и пожилые люди (60 лет и старше) 3.75.Заболевание туберкулезом в настоящее время чаще выявляются а)у детей б)у подростков V в)у лиц молодого возраста (до 40 лет) г)у лиц среднего возраста (40-59 лет) д)у пожилых людей (60 лет и старше) 3. 76.Чаще заболевают туберкулезом и умирают от него V а)мужчины б)женщины в)одинаково часто и мужчины, и женщины 3.77.В возрасте 70 лет и старше чаще заболевают туберкулезом и умирают от него а)мужчины V б)женщины в)одинаково часто и мужчины, и женщины 3.78.Высокая заболеваемость туберкулезом обнаруживается в настоящее время V а)у аборигенной этнической группы населения (малые народы Севера) и мигрирующего населения б)у постоянно живущего населения и аборигенной этнической группы в)у мигрирующего населения 3.79.Об инфицировании населения туберкулезом можно судить по перечисленным ниже критериям, исключая а)обнаружение при секреционном исследовании следов перенесенной ранее туберкулезной инфекции б)обнаружение на флюорограмме признаков перенесенного ранее туберкулеза в)положительная кожная проба с туберкулином V г)обнаружение БК в мокроте 3.80.При контакте с бактериовыделителем чаще заболевают туберкулезом а)вакцинированные БЦЖ б)инфицированные туберкулезом V в)не вакцинированные и не инфицированные 3. 81.»Суперинфекция» при туберкулеза — это V а)заболевание вследствие поступления инфекции извне в уже инфицированный организм б)заболевание, возникшее вследствие экзогенного инфицирования в)заболевание, наступившее вследствие длительного контакта с бактериовыделителем 3.82.»Эндогенная реинфекция» — это V а)активация ранее скрыто протекающего в организме очага туберкулезной инфекции б)возникновение очага туберкулезной инфекции во внутренних органах вследствие поступления инфекции в организм в)активация скрыто протекающего в организме очага туберкулезной инфекции вследствие нового поступления инфекции 3.83.Экзогенная реинфекция представляет наибольшую опасность для возрастной группы а)молодых людей (до 40 лет) б)среднего возраста (40-59 лет) V в)пожилых людей (60 лет и старше) 3.84.Очаг туберкулезной инфекции со скудным бактериовыделением (обнаружение БК только методом посева) не имеет существенного значения для инфицирования лиц ближайшего окружения V а)при высокой пораженности туберкулезом населения в данном районе б)при умеренной пораженности населения туберкулезом в)при малой пораженности населения туберкулезом в данном районе 3. 85.К высокой заболеваемости населения туберкулезом можно отнести выявление V а)100 заболевших на 100 000 населения б)30-50 заболевших на 100 000 населения в)20 заболевших на 100 000 населения 3.86.К умеренной заболеваемости населения туберкулезом следует отнести показатель при выявлении а)100 заболевших на 100 000 населения V б)30-50 заболевших на 100 000 населения в)20 заболевших на 100 000 населения 3.97.Основной метод выявления туберкулеза у подростков — это а)туберкулинодиагностика б)обследование по контакту в)флюорография V г)обследование по обращаемости 3.98.Массовую туберкулинодиагностику среди детей следует проводить а)1 раз в 6 месяцев V б)1 раз в 1 год в)4 раза в 1 год г)1 раз в два года 3.99.Флюорографическое обследование подростков должно проводиться а)1 раз в 1 год б)1 раз в 2 года в)2 раза в 1 год V г)в зависимости от эпидситуации и профориентации подростка 3.100.Систематическое флюорографическое обследование населения на туберкулез проводится а)с 10-летнего возраста б)с 12-летнего возраста в)с 15-летнего возраста г)с 18-летнего возраста V д)выбор возраста определяется эпидемической ситуацией 3. 101.К основным группам детей, подверженных риску заразиться туберкулезом, относятся все перечисленные, кроме а)невакцинированных БЦЖ б)недоношенных, часто и длительно болеющих детей в)живущих в очагах туберкулезной инфекции г)не имеющих послевакцинального знака V д)перенесших туберкулез 3.102Группами «риска» по туберкулезу для подростков являются все перечисленные, кроме а)перенесших ранее локальный туберкулез б)давно инфицированных в)из очагов туберкулезной инфекции г)курящих V д)работающих и занимающихся спортом 3.103.Выборочное обследование на туберкулез часто болеющих детей и подростков проводится а)врачом-терапевтом V б)фтизиатром в)врачами-специалистами 3.104.Противотуберкулезными мероприятиями, которые осуществляет общая педиатрическая сеть, являются все перечисленные, кроме а)массовой туберкулинодиагностики б)вакцинации БЦЖ и ревакцинации БЦЖ в)раннего выявления туберкулеза V г)дообследования детей из группы риска 3.105.Противотуберкулезными мероприятиями, осуществляемыми санитарно- эпидемиологической службой, являются а)планирование массовой туберкулинодиагностики и контроль за ее выполнением б)планирование вакцинации и ревакцинации БЦЖ в)контроль за правильностью хранения вакцины БЦЖ г)контроль за правильностью прививок БЦЖ V д)все перечисленное 3. 106.Основные мероприятия, составляющие работу противотуберкулезного диспансера, — это а)наблюдение за контингентом по группам учета б)ведение документации и отчетности в)амбулаторное лечение больных и проведение химиопрофилактики г)диагностика туберкулеза V д)все перечисленное 3.107.Группа диспансерного учета для детей, страдающих активным туберкулезом органов дыхания — это а)IIIа V б)I в)Vа г)IV 3.108.Группа диспансерного учета для детей, страдающих активным внелегочным туберкулезом — это а)O б)II в)I г)VI V д)Vа 3.109.Группа диспансерного учета для наблюдения за детьми с затихающим туберкулезом органов дыхания — это а)I V б)III в)IV г)Vб д)O 3.110.Группа диспансерного учета для наблюдения за детьми с затихающим внелегочным туберкулезом а)VIа V в)живые, но ослабленные микобактерии вакцинного штамма 3.122.Вакцина БЦЖ а)должна обладать иммуногенностью б)должна быть стабильна при хранении в)должна быть авирулентной V г)соответствовать всем перечисленным требованиям 3.123.Оптимальной температурой режима хранения вакцины БЦЖ а)+20°С б)+2°С V в)+4°С г)0°С д)+5°С 3. 124.Вакцины БЦЖ вводятся а)внутрь и интраназально б)внутримышечно в)накожно г)подкожно V д)внутрикожно 3.125.Место введения вакцины БЦЖ а)подлопаточная область б)область живота V в)верхняя треть плеча 3.126.После правильно проведенной вакцинации и ревакцинации БЦЖ на коже остается а)пятно V б)рубец в)звездчатый рубец г)келлоидный рубец 3.127.Оптимальный размер рубца а)1-3 мм б)3-5 мм V в)5-8 мм г)8-10 мм д)10-15 мм 3.128.Вакцинация БЦЖ проводится а)детям 1-14 лет V б)новорожденным в)подросткам 15-17 лет 3.129.Ревакцинация БЦЖ проводится всем перечисленным, кроме V а)новорожденных б)детей в)подростков г)взрослых 3.130.Вакцинация БЦЖ проводится V а)в роддоме б)в детском саду в)в поликлинике 3.131.Вакцинация БЦЖ недоношенным детям проводится а)в детском саду V б)в поликлинике в)в школе г)в роддоме 3.132.Ревакцинация БЦЖ детям проводится а)в роддоме V б)в школе в)в диспансере г)в детском саду 3.133.Ревакцинация БЦЖ подросткам осуществляется а)в диспансере V б)в школе (техникуме) в)в поликлинике г)в больнице 3. 134.Вакцинация БЦЖ проводится а)постовой медсестрой б)врачом-педиатром в)фтизиопедиатром V г)специально обученной медсестрой (вакцинатором) 3.135.Вакцинация БЦЖ здоровых новорожденных проводится а)на 5-7-й день жизни б)на 1-е сутки жизни V в)на 4-е сутки жизни г)на 10-12-й день жизни д)на 1-м месяце жизни 3.136.Ревакцинация БЦЖ обусловлена V а)угасанием иммунитета после вакцинации б)наличием контакта с больным туберкулезом в)отсутствием послевакцинального знака 3.137.Декретированными возрастами для проведения ревакцинации БЦЖ являются все перечисленные, кроме а)детей до 5 лет V б)на 2 месяца в)на 5 месяцев г)на 1 год 3.149.Послевакцинальный иммунитет формируется в течение а)2 лет V б)1 года в)5 лет 3.150.О распространенности туберкулеза свидетельствуют такие показатели а)как заболеваемость б)как болезненность в)как смертность г)как инфицированность V д)все перечисленное 3.151.Заболеваемость туберкулезом — это а)число больных туберкулезом в пересчете на 1000 жителей б)число больных туберкулезом в пересчете на 10 000 жителей в)процент больных, исчисленный к населению данной местности г)число больных туберкулезом, выявленных в данном году V д)число вновь выявленных больных туберкулезом в пересчете на 100 000 населения 3. 152.Показатель болезненности при туберкулезе — это V а)число больных туберкулезом, стоящих на учете на конец года, в пересчете на 100 000 жителей б)число больных активным туберкулезом на конец года в)удельный вес больных туберкулезом среди всех больных на данной территории г)число больных туберкулезом в пересчете на 1000 жителей 3.153.При анализе эффективности осмотров на туберкулез важны все перечисленные показатели, кроме а)процента охвата населения осмотрами на туберкулез б)частоты выявления больных активным туберкулезом в)структуры выявленного контингента больных г)удельного веса несвоевременного выявленных больных V д)выполнения плана обследования 3.154.Положительными сдвигами в структуре заболеваемости туберкулезом следует считать все перечисленные, кроме а)уменьшения удельного веса больных с БК+ и деструкцией б)отсутствия запущенных форм туберкулеза в)снижения показателя инфицированности V г)повышения удельного веса больных с очаговым туберкулезом 3.155.Бактериовыделитель — это а)больной активным туберкулезом, у которого микобактерии туберкулеза были обнаружены хотя бы один раз любым методом б)больной, выделявший микобактерии туберкулеза не менее 2 раз в)больной туберкулезом, выделяющий микобактерии всеми лабораторными методами исследования V г)все перечисленные варианты 3. 156.Показатель абациллирования контингентов — это V а)число абациллированных и снятых с учета в текущем году больных, умноженное на 100 и деленное на число больных с БК+ в учетном году б)процент больных с БК(-) ко всему контингенту больных в)число больных с БК(-) на 100 больных с БК(+) г)число больных, снятых с бациллярного учета 3.157.Клиническое излечение туберкулеза определяется по формуле а)(число больных, переведенных в неактивные группы)*100/(число больных активным туберкулезом (I+II гр.)) б)(число больных, снятых с учета)*100/(число больных в контингенте) в)(число больных III+VII гр. диспансерного учета)*100/(общее число больных туберкулезом) V г)(число больных, переведенных в III группу)/(1000 больных туберкулезом) 158.Увеличение показателей ранних рецидивов свидетельствует о всем перечисленном, кроме а)недостаточного лечения б)преждевременного перевода больных туберкулезом в III группу диспансерного наблюдения в)дефектов в наблюдении за больными туберкулезом в I и II группах диспансерного учета V г)характеристик макро- и микроорганизма 3. 159Временная утрата трудоспособности — это а)утрата трудоспособности на 2 месяца б)утрата трудоспособности на 4 месяца в)утрата трудоспособности на 6 месяцев г)утрата трудоспособности на 1 год V д)когда нарушение функции организма в результате болезни носят временный (обратимый) характер, и человек не теряет свою профессию и свою квалификацию 3.160.Стойкая утрата трудоспособности — это а)утрата трудоспособности на 6 месяцев б)утрата трудоспособности на 1 год в)утрата трудоспособности на 2 года V г)когда нарушение функции организма в результате болезни носят стойкий, необратимый или частичо обратимый характер, при этом человек прекращает работу или переходит на облегченные условия труда 3.161.Факт временной утраты трудоспособности устанавливает V а)лечащий врач б)главный врач в)ВТЭК г)заведующий отделением г)анабиоза 3.172.Изменения микобактерий туберкулеза происходят под влиянием а)вакцинации б)химиопрофилактики в)химиотерапии г)изменений внешней среды V д)всего перечисленного 3.173.Наиболее часто обнаруживают микобактерии во всех перечисленных видах материала, полученного от больного туберкулезом, кроме а)плевральной жидкости V б)промывных вод желудка и моче в)мокроты г)промывных вод бронхов 3. 174.Наиболее эффективен и достоверен в выявлении микобактерий метод исследования а)люминесцентная микроскопия V б)культуральный посев в)бактериоскопия г)биохимическое исследование д)все перечисленное 3.175.Палочка Коха может трансформироваться а)в риккетсии б)в вирусы V в)в L-формы и фильтрирующиеся вирусоподобные формы г)в кокки 3.176.Известно в настоящее время около а)5 видов атипичных микобактерий б)10 видов атипичных микобактерий в)20 видов атипичных микобактерий V г)40 видов атипичных микобактерий д)100 видов атипичных микобактерий 3.177.Атипичные микобактерии по отношению к организму человека могут проявлять а)патогенные свойства б)сапрофитные свойства в)непатогенные свойства г)вирулентные свойства V д)все перечисленные 3.178.Наиболее опасными для человека являются следующие группы атипичных микобактерий а)фотохромогенные б)нефотохромогенные V в)быстрорастущие г)скотохромогенные 3.179.Атипичные микобактерии обитают а)в почве б)среди животных в)в водоемах г)среди птиц V д)все ответы правильные 3. 180.Атипичные микобактерии могут вызывать у человека а)пневмонию б)лепру в)туберкулез г)бронхиты V д)микобактериозы 3.181.Для идентификации атипичных микобактерий наиболее достоверны а)биологические методы б)биохимические методы в)иммунологические методы V г)культуральные методы 3.182Возникновение заболевания туберкулезом предопределяют следующие условия, кроме а)контакта с возбудителем б)проникновения его в ткани V в)фагоцитоза возбудителя тканевыми или альвеолярными макрофагами с лизисом или выделением из организма г)фиксации в тех или иных органах с образованием в них очага воспаления 3.183.Ребенок при контакте с бактериовыделителем чаще взрослого инфицируется и заболевает туберкулезом вследствие а)постнатальной морфологической дифференциации тканей органов дыхания V б)не полностью сформировавшихся механизмов защиты легких в)высокой реактивности организма ребенка 3.184.Генетическая зависимость различной поражаемости и неодинакового течения туберкулеза в пределах одного биологического вида организма а)теоретически возможна, но не доказана б)невозможна V в)возможна и подтверждена как в лабораторных условиях, так и клинической практикой 3. 185.Следующая патология эндокринной системы отрицательно влияет на течение туберкулезного процесса а)тиреотоксикоз б)микседема в)кортико-адреналовая недостаточность — аддисонизм V г)диабет д)акромегалия а)альфа-глобулины V б)Т-лимфоциты в)В-лимфоциты 3.197.При аэрогенном пути заражения и незавершенном фагоцитозе макрофагами защита аппарата дыхания от внедрившейся инфекции осуществляется путем а)удаления возбудителя из макроорганизма через лимфатическую систему легкого, кровеносную систему и органы внешней экскреции б)удаления возбудителя через бронхиальное дерево в)отграничения и изоляция в легочной ткани скоплений возбудителя путем формирования воспалительной гранулемы V г)верны все ответы 3.198.При удалении возбудителя из организма человека его фиксация на путях элиминации и возникновения в них инфекционных очагов (лимфатическая система, кровеносная система, бронхиальная система, органы элиминации возбудителя во внешнюю среду — почки, кишечник и т.д.) а)в клинике не встречается б)допустима, но наблюдается редко V в)встречается часто 3. 199.При генерализованном туберкулез на секции (милиарный туберкулез, туберкулезный сепсис Ландузи) источник бациллемии а)легко обнаруживается б)обнаруживается V в)часто не обнаруживается 3.200.Иммунитет — это а)невосприимчивость к инфекционным заболеваниям б)устойчивость к воздействию внешних факторов V в)способ защиты от живых тел и веществ, несущих на себе признаки генетической чужеродности 3.201.Основными видами иммунитета являются все перечисленные, кроме а)врожденного иммунитета б)приобретенного иммунитета V в)естественной резистентности 3.202.Основными звеньями иммунитета являются все перечисленные, кроме а)клеточного звена б)гуморального звена V в)нейроэндокринного звена г)макрофагально-фагоцитарной системы 3.203.Противотуберкулезный иммунитет определяется следующими перечисленными факторами, кроме а)фагоцитоза б)повышенной чувствительности замедленного типа (ПЧЗТ) в)антителообразования г)иммунологической памяти V д)особенностей микобактерий туберкулеза 3.204.Основным типом аллергической реакции при туберкулезе является а)немедленный ответ б)поздний ответ V в)замедленный ответ 3. 205. Вакцинация (ревакцинация) БЦЖ вызывает у привитого ПЧЗТ, наличие которой устанавливается через год пробой Манту с 2 ТЕ по появлению инфильтрата диаметром: 1. до 2 мм 2. до 8 мм * 3. до 11 мм * 4. до 14 мм * 5. до 16 мм 3.206.Вакцины БЦЖ вводят: 1. В подкожную клетчатку 2. Внутрикожно * 3. Внутримышечно 4. В дозе 0,05 мг в объеме 0,1 мл * 5. В дозе 0,1 мг в объеме 0,1 мл 6. В дозе 0,5 мг в объеме 0,5 мл 3.207.Первичную вакцинацию БЦЖ проводят детям в возрасте: 1. 3-4 дня * 2. 1 года 3. До 3 лет 4. До 5 лет 5. В любом возрасте 3.208 При определении показаний к ревакцинации БЦЖ интервал между постановкой Манту и введением вакцины не должен превышать: 1. 1-2 дня 2. 2-3 дня 3. 4-5 дней 4. 5 дней 5. 1 нед 6. 2 нед * 7. 3 нед 8. 1 мес 3.209.С целью профилактики туберкулеза у людей вводится вакцина БЦЖ: 1. Перорально 2. Внутримышечно 3. Подкожно 4. Накожно 5. Внутрикожно * @- 3. 20 %. @- 4. 30 %. @- 5. 50 %. 4.5.С какой целью проводят пробу Коха? @- 1. Для определения чувствительности к туберкулину. @- 2. Для отличия поствакцинальной аллергии от инфекционной. @- 3. Для определения напряженности поствакцинального иммунитета. @+ 4. Для определения активности туберкулезного процесса. @- 5. Все перечисленное верно. 4.6.Что такое туберкулезная интоксикация как клиническая форма туберкулеза? @- 1. Функциональные расстройства у больного туберкулезом. @- 2. Функциональные расстройства при увеличении внутригрудных лимфатических узлов на фоне виража туберкулиновой реакции. @+ 3. Функциональные расстройства на фоне виража туберкулиновой реакции, без видимых локальных изменений в органах дыхания. @- 4. Все перечисленное верно. @- 5. Все перечисленное неверно. 4.7. Какая форма туберкулеза легких относится к первичному периоду туберкулезной инфекции? @- 1. Очаговый туберкулез. @- 2. Инфильтративный туберкулез. @- 3. Туберкулема. @- 4. Все перечисленное верно. @+ 5. Все перечисленное неверно. 4.8.Где чаще локализуется морфологический субстрат туберкулезного воспаления у больных с диагнозом туберкулезной интоксикации? @- 1. Печень. @+ 2. Лимфатические узлы. @- 3. Легкие. @- 4. Почки. @- 5. Сердце. 4.9.При какой форме туберкулеза рентгенологические изменения в органах дыхания отсутсвуют? @+ 1. Туберкулезная интоксикация. @- 2. Туберкулез внутригрудных лимфатических узлов. @- 3. Первичный туберкулезный комплекс. @- 4. Очаговый туберкулез. @- 5. Туберкулезный плеврит. 4.10.При какой форме туберкулеза тень в легком сливается с тенью расширенного средостения? @- 1. Инфильтративный туберкулез. @- 2. Туберкулез внутригрудных лимфатических узлов. @+ 3. Первичный туберкулезный комплекс. @- 4. Очаговый туберкулез. @- 5. Казеозная пневмония. 4.11.При какой форме туберкулеза на рентгенограмме расширена тень корня легкого, нарушена его форма и структура? @- 1. Инфильтративный туберкулез. @+ 2. Туберкулез внутригрудных лимфатических узлов. @- 3. Туберкулезная интоксикация. @- 4. Диссеминированный туберкулез. @- 5. Туберкулема. 4.12.Перифокальное воспаление каких лимфатических узлов чаще выявляется на прямой рентгенограмме легких? @- 1. Паратрахеальных. @- 2. Трахеобронхиальных. @- 3. Аортальных. @+ 4. Бронхопульмональных. @- 5. Бифуркационных. 4.13.Какой метод исследования лучше выявляет увеличение внутригрудных лимфатических узлов? @- 1. Обзорная рентгенография. @- 2. Боковая рентгенография. @- 3. Прицельная рентгенография. @+ 4. Компьютерная томография. @- 5. Бронхоскопия. 4.14.Какова причина формирования больших остаточных изменений после первичного туберкулеза? @- 1. Поздняя диагностика. @- 2. Отсутсвие лечения. @- 3. Неадекватное лечение. @+ 4. Все перечисленное верно. @- 5. Все перечисленное неверно. 4.15.Какое осложнение первичного туберкулеза легких наиболее угрожает жизни? @- 1. Ателектаз. @- 2. Плеврит. @- 3. Лимфонодулобронхиальный свищ. @+ 4. Менингит. @- 5. Лимфогенная и бронхогенная диссеминация. 4.16.Через какое время от начала первичного туберкулеза обычно диагностируются признаки кальцинации? @- 1. 1 — 2 месяца. @- 2. 3 — 4 месяца. @- 3. 5 — 6 месяцев.

🧬 Что нужно знать про тесты на туберкулез

Всероссийское общество фтизиатров утвердило несколько возможных вариантов тестирования, включая не только пробу Манту, но и тестирование с использованием Диаскин-теста и Т-теста. Результаты каждого из этих тестов будут признаваться достаточными для приема ребенка в детский сад, — сообщается на официальном сайте Минздрава.

Медицинский директор, педиатр GMS Clinic Олег Тогоев дал свой комментарий информационному порталу «Здоровые дети».

Манту — не единственный официальный скрининг. Родители могут самостоятельно принимать решения о способе тестирования ребенка.

Что это за тесты и чем они отличаются?

Реакция Манту (туберкулиновая проба) является на сегодняшний день в России основным методом профилактического обследования детей на инфицирование туберкулезом.

  • Реакция Манту — это ответ организма на введение туберкулина (несмотря на название, саму туберкулезную палочку препарат не содержит). После введения в кожу препарата возникает небольшое специфическое воспаление — «пуговка». Измеряя линейкой ее диаметр, можно оценить напряженность иммунитета к туберкулезной палочке.
    Измерение проводят через 72 часа после введения препарата.
  • Тест делается один раз в год, начиная с года и до 16 лет.
  • Мочить место пробы можно.

Диаскин-тест — это способ диагностики туберкулеза путем введения препарата под кожу ребенка. Он позволяет определить наличие или отсутствие микобактерий туберкулеза в организме ребенка. Диаскин-тест является более чувствительным тестом, поскольку в его состав входят белки, вызывающие иммунную реакцию в организме только на микобактерии, вызывающие туберкулез.

  • Тест по сравнению с реакцией Манту позволяет определить не только наличие возбудителя, но и активность микобактерий, вызывающих само заболевание.
  • Сегодня этот тест делается в случаях, если проба Манту — положительная.
  • Мочить место введения препарата можно.

Т-спот — тест на туберкулез, который проводится путём забора крови ребёнка и ее последующего исследования.

  • «T» обозначает T-лимфоциты (клетки крови, на основе ответа которых производится исследование).
  • «SPOT» (от англ. — «пятно»). В результате лабораторного опыта образуются пятна, каждое из которых маркирует Т-лимфоцит. Этот способ определения носительства туберкулеза позволяет исключить ложноположительные реакции на носительство микобактерии туберкулеза.

Олег Тогоев, педиатр, медицинский директор GMS Clinic прокомментировал: «Скажу в первую очередь, что дети обязательно должны проходить один из утвержденных скринингов на туберкулез, потому что это заболевание, к несчастью, существует, и оно контагиозно (то есть, заразно — прим. ред.). Моя рекомендация — диаскин-тест, как наиболее оптимальный скрининг на туберкулез. Его основное преимущество в том, что он редко (в 10 случаев из 100) бывает ложноположительным. То есть, если уж диаскин-тест положителен, то на это можно смело опираться, искать и подтверждать туберкулезную инфекцию другими методами — есть большая вероятность что-то найти.

Что касается пробы Манту, то количество ложноположительных реакций (то есть, специфичность теста) составляет 35 случаев на 100 проб. Таким образом, 35 человек из 100 с положительной пробой Манту отправятся к фтизиатру зазря. Единственный минус — это сегодняшняя дороговизна диаскина, он стоит в несколько раз дороже туберкулина для пробы Манту. Видимо, из-за этого он не может применяться массово. Т-тест — ещё „сырой“ вариант. Я, например, почти ничего и не слышал о нем. Его специфичность, чувствительность мне неизвестны. Он может быть хорош для контроля лечения туберкулезной инфекции, для диагностики видов туберкулезных бактерий, для различных узких задач, но он может быть плох для скрининга. Так же, как ПЦР: за ее открытие получена Нобелевская премия, благодаря этому методу были и еще будут сделаны невероятные открытия, это современно, это отлично, но этот метод вообще не годится для массового скрининга на туберкулез — вот такой парадокс. Поэтому старая добрая проба Манту, которой уже почти 100 лет, до сих пор своей актуальности не потеряла, просто нужно правильно и грамотно интерпретировать ее результаты».

Источник: healthy-kids.ru

Туберкулез дезинфекция помещения

Туберкулез – это хроническая инфекционная болезнь, вызываемая микобактериями туберкулеза. Чаще встречается туберкулез органов дыхания; среди внелегочных поражений преобладает туберкулез органов мочеполовой системы, глаз, периферических лимфатических узлов, костей и суставов.

Источники заражения туберкулезом.

Возбудителем туберкулеза у человека являются преимущественно микобактерии человеческого вида (реже бычьего и совсем редко – птичьего), весьма устойчивые к воздействию факторов окружающей среды. Под влиянием различных факторов микобактерии туберкулеза способны превращаться в ультрамелкие фильтрующиеся частицы и в гигантские ветвистые формы. Попадая в благоприятные условия, микобактерии туберкулеза вновь могут приобретать типичную форму. Чаще возбудители туберкулеза попадают в организм через органы дыхания (воздушно-капельным или воздушно-пылевым путем), реже – через желудочно-кишечный тракт и поврежденную кожу.

Основным источником инфицирования являются больные люди (как правило, больные туберкулезом легких, в мокроте которых содержатся микобактерии), выделяющие микобактерии туберкулеза, а также больные туберкулезом животные, главным образом крупный рогатый скот, куры. Больные животные выделяют микобактерии с молоком, мокротой, калом, мочой. Заражение может происходить при употреблении в пищу полученных от больных животных и птиц молока, мяса, яиц. Наиболее опасны в эпидемиологическом отношении больные туберкулезом люди с обильным постоянным бактериовыделением. Один такой больной, не соблюдающий правила личной гигиены, способен за год инфицировать до 10 – 12 человек. При скудном непостоянном бактериовыделении опасность заражения туберкулезом существует только в условиях тесного контакта с больным.

Дезинфекция помещения при туберкулезе состоит из:

1.      Текущей дезинфекции. Она включает в себя мероприятия, которые проводятся в присутствии больного человека (в палатах, квартире и иных помещениях).

К ним относится дезинфекция белья и температурная обработка. Текущая дезинфекция при туберкулезе направлена на предупреждение заражения медицинского персонала и родных. Ведь передача бактерий происходит как воздушно-капельным путем, так и контактным.

2.      Заключительной дезинфекции. Она осуществляется в тяжелых и сложных случаях, при выписке больного, летальном исходе или госпитализации из дома. Проведение обработки осуществляется с использованием уникальных средств. Заключительная дезинфекция от туберкулеза включает текущую дезинфекцию и обработку химическими средствами всех вещей после контакта с больным. Обратите внимание, что такой метод обработки используется и при сносах помещений, где проживали больные люди. Проведение заключительной дезинфекции происходит 2 раза в 12 месяцев при первой группе, 1 раз для группы номер два, а для третьей ее проведения не требуется.

3.      Дезинфекция с профилактической целью проводится в санаториях, больницах, туалетах. Для этого осуществляется обработка всей прилегающей территории с целью уничтожения всех вирусов и бактерий. Правила гласят: для предотвращения распространения инфекции должна проводиться обработка помещения и вещей. Уборка квартиры или дома после больного туберкулезом.

«Центр профессиональной дезинфекции «ДЕЗПРОФ» имеет в своем штате дипломированных медицинских сотрудников, которые в отличии от непонятных санитарных фирм, с сомнительными видами дезинфекционных услуг. Профессионально и оперативно проведут:

1.      Текущую дезинфекцию при Туберкулезе.

2.      Заключительную дезинфекцию при Туберкулезе.

3.      Профилактическую дезинфекцию против Туберкулеза.

С нами вы получите качественную дезинфекцию, направленную на ликвидацию микробактерий Туберкулеза в Вашем помещении и при необходимости официальные документы.

Патогенез туберкулеза сложен и зависит от многообразия условий, в которых происходит взаимодействие возбудителя инфекции и организма. Инфицирование микобактериями туберкулеза далеко не всегда вызывает развитие туберкулезного процесса. Ведущую роль в возникновении туберкулеза играют неблагоприятные условия жизни, а также снижение сопротивляемости организма. В развитии туберкулеза выделяют первичный и вторичный периоды, которые протекают в условиях различной реактивности организма.

Для первичного туберкулеза характерна высокая чувствительность тканей к микобактериям и их токсинам. В зоне проникновения микобактерии туберкулеза в организм (органы дыхания, желудочно-кишечный тракт, кожа) может возникнуть воспалительный очаг, или первичный аффект. В ответ на его образование в связи с сенсибилизацией организма развивается специфический процесс по ходу лимфатических сосудов и в регионарных лимфатических узлах с формированием первичного комплекса. Он чаще выявляется в легких и внутригрудных лимфатических узлах. С первых дней проникновения в организм микобактерии туберкулеза наблюдается бактериемия и возрастает активность иммунной системы, направленная на разрушение возбудителя болезни.

В процессе формирования очагов первичного туберкулеза может наблюдаться лимфогенная и гематогенная диссеминация с образованием туберкулезных очагов в различных органах – легких, костях, почках и др. Заживление очагов первичного туберкулеза сопровождается иммунной перестройкой организма, приобретением иммунитета. При снижении иммунитета (в подростковом или пожилом возрасте, на фоне стресса, алкоголизма, лечения глюкокортикостероидами, при заражении ВИЧ-инфекцией или развитии сахарного диабета) эти очаги могут активизироваться и прогрессировать – наступает вторичный период туберкулеза.

Клинические проявления туберкулеза многообразны. Чаще отмечается постепенно нарастающее хроническое течение заболевания, причем в течение некоторого времени оно протекает незаметно для больного и окружающих. Характерен синдром общей интоксикации разной степени выраженности. Он обусловлен размножением микобактерий и их диссеминацией; проявляется повышением температуры тела, слабостью, снижением работоспособности, потливостью, тахикардией, ухудшением аппетита, похуданием, иногда психическими расстройствами. Местные симптомы зависят от локализации поражения. Так, при туберкулезе легких больных беспокоит кашель с отделением желтоватой или зеленоватой мокроты (в поздних стадиях заболевания появляется кровохарканье), одышка. По интенсивности локальных изменений можно выделить ограниченные очаговые изменения (так называемые малые формы туберкулеза), при которых активность туберкулезного процесса может быть доказана или отвергнута только после длительного наблюдения, а иногда и пробного лечения противотуберкулезными средствами; распространенные изменения без деструкции, в том числе с поражением нескольких органов; прогрессирующий деструктивный процесс.

Диагноз. В выявлении туберкулеза важную роль играют профилактические осмотры. Для обнаружения туберкулеза органов дыхания используется флюорография грудной клетки, детям проводят туберкулинодиагностику. Предположительный диагноз туберкулеза устанавливают на основании клинических проявлений; диагноз подтверждают при обнаружении микобактерий туберкулеза в мокроте, моче, отделяемом свища, промывных водах бронхов и др. либо при гистологическом исследовании биоптата пораженного органа. Рентгенологический метод исследования является одним из основных при диагностике туберкулеза органов дыхания, а также туберкулеза костей и суставов, органов мочеполовой системы. Он позволяет определить локализацию, протяженность процесса, характер морфологических изменений.


Бактериологическое исследование направлено на выделение возбудителя инфекции из мокроты, мочи, отделяемого свища и др. При отсутствии мокроты можно исследовать промывные воды бронхов, желудка. Бактериологическое исследование включает бактериоскопический, культуральный методы, а также биологическую пробу. Культуральные методы выявления микобактерий туберкулеза обладают большой чувствительностью, они дают возможность получить чистую культуру микобактерий, идентифицировать ее, а также определить чувствительность к лекарственным средствам. Наиболее чувствительным методом выявления микобактерий туберкулеза является биологическая проба – заражение патологическим материалом морских свинок. Туберкулезные изменения в органах морской свинки могут быть обнаружены при содержании в 1 мл материала единичных микобактерий.

Туберкулинодиагностика основана на применении кожных туберкулиновых проб. Она позволяет выявить инфицированность организма микобактериями туберкулеза, а также изучить реактивность организма инфицированных или вакцинированных лиц. Туберкулин – биологически активный препарат, полученный из фильтратов культуры микобактерий туберкулеза. Чаще применяют внутрикожную и накожную туберкулиновые пробы. Основным методом туберкулинодиагностики является более чувствительная внутрикожная проба Манту, которую проводят с очищенным туберкулином (ППД-Л) в стандартном разведении в количестве 2 туберкулиновых единиц (ТЕ). Накожная туберкулиновая проба (проба Пирке) проводится путем нанесения на внутреннюю поверхность предплечья капли 100 % туберкулина с последующей скарификацией. Для уточнения характера чувствительности к туберкулину применяют также скарификационную градуированную пробу с туберкулином в различных разведениях.

Реакция на туберкулин считается отрицательной при отсутствии инфильтрата или гиперемии кожи через 48 – 72 ч, сомнительной – при образовании папулы диаметром 2 – 4 мм или наличии только гиперемии. Положительной считается проба при формировании папулы диаметром 5 мм и более. В случаях возникновения инфильтрата диаметром 17 мм и более реакция считается гиперергической. Отрицательная реакция наблюдается у здоровых невакцинированных и неинфицированных лиц, а также у больных с тяжелым распространенным туберкулезным процессом при сниженном иммунитете. У лиц пожилого и старческого возраста положительная реакция на туберкулин может появляться позже (через 72 – 96 ч), папулы имеют небольшие размеры, окружающая их зона не гиперемирована, редки гиперергические реакции.

Результаты клинических анализов крови (например, увеличенная СОЭ, лейкоцитоз, сдвиг лейкоцитарной формулы влево, иногда лимфопения, моноцитоз) и мочи (например, протеинурия, цилиндрурия и др. ), как правило, не позволяют выявить специфические для туберкулеза признаки, однако в сочетании с другими данными они играют важную роль в установлении диагноза и наблюдении за динамикой процесса в ходе лечения.

В сомнительных случаях проводят дополнительное исследование, включающее повторное исследование с целью обнаружения микобактерий туберкулеза в мокроте, промывных водах бронхов, отделяемом свища, мочи методом биологической пробы; томографию легких и средостения; различные иммунологические, а также инструментальные исследования (обзорная бронхоскопия с биопсией слизистой оболочки бронхов и легочной ткани, пункция периферических лимфатических узлов). Большое значение, особенно при внелегочной локализации процесса, имеет углубленная туберкулинодиагностика. С этой целью применяют более чувствительную пробу Коха с подкожным введением от 10 до 50 ТЕ ППД-Л (детям пробу Коха проводят лишь при отрицательной реакции Манту). При постановке пробы Коха учитывают местную (в области введения туберкулина), очаговую (в области очага специфического воспаления) и общую реакцию организма, включая изменения в крови.

Лечение. Основной целью лечения больных туберкулезом являются стойкое заживление туберкулезных очагов в пораженных органах и полная ликвидация всех клинических проявлений заболевания (клиническое излечение). Эффективность лечения туберкулеза, выявленного на ранних этапах (даже при деструктивных формах), значительно выше, чем при запущенном процессе. Лечение должно быть длительным. В среднем при успешной терапии излечение наступает через 1 год, иногда через 2 – 3 года и более. Лечение, как правило, начинается в стационаре. По достижении клинико-рентгенологического эффекта (прекращение бацилловыделения, заживление очагов деструкции) больных направляют в санатории (местные и климатические). Заканчивают лечение в амбулаторных условиях.

Лечение должно быть комплексным. Основным его компонентом является химиотерапия, при проведении которой большое значение имеет правильный выбор антибактериальных препаратов и их комбинации, оптимальной суточной дозы, кратности и способа введения, продолжительности лечения. На первом этапе проводят интенсивную химиотерапию с целью подавления размножения микобактерий, уменьшения их количества. Так, при деструктивных и распространенных процессах эффективно применение комбинации из трех препаратов с обязательным включением изониазида и рифампицина. Преждевременное прекращение химиотерапии может привести к обострению туберкулезного процесса. Важной задачей является обеспечение регулярного приема больным назначенных препаратов в течение всего периода лечения. Поэтому в больничных и санаторных условиях, а по возможности и при амбулаторном лечении прием назначенных препаратов должен осуществляться в присутствии медперсонала.

В тех случаях, когда консервативное лечение не позволяет добиться клинического излечения, прибегают к оперативному лечению. Оперативное лечение применяется при кавернозной форме туберкулеза органов дыхания, а также при ряде осложнений и последствиях перенесенного туберкулеза. Наибольшее распространение получила экономная резекция легких с полным или частичным удалением одного или нескольких легочных сегментов.

В лечении больного туберкулезом большое значение имеют режим и питание. Полный покой показан лишь при тяжелом состоянии больного, например после операции, при кровохарканье. По мере уменьшения интоксикации в режим включают тренирующие факторы (прогулки, лечебную физкультуру, трудотерапию). Питание больного должно быть высококалорийным, пища легкоусвояемой с высоким содержанием белка и витаминов, особенно С и группы В. Санаторно-курортное лечение показано, как правило, в период обратного развития процесса. Благоприятные климатические факторы, бальнеотерапия оказывают стимулирующее действие и способствуют прекращению процесса. Больных направляют на приморские, горноклиматические курорты, в санатории, расположенные в лесостепной, а также в местной климатогеографической зоне.

Прогноз. У большинства больных под влиянием лечения ликвидируются признаки болезни. При этом полностью исчезают или значительно уменьшаются воспалительные и деструктивные изменения в органах. Остаточные изменения могут совершенно отсутствовать, либо на месте туберкулезного процесса остаются рубцы, фиброз, одиночные или множественные очаги. В последних микобактерии туберкулеза могут пребывать в дремлющем состоянии и в благоприятных для них условиях начать размножаться, вызывая рецидив болезни. В связи с этим после достижения клинического излечения больные должны длительно находиться под наблюдением противотуберкулезного диспансера. У большинства больных, перенесших туберкулез, изменившаяся в процессе заболевания реактивность организма, как правило, не возвращается к исходному состоянию, и положительная туберкулиновая реакция сохраняется. Пожилой возраст больных, а также сопутствующие заболевания, особенно сахарный диабет и хронический алкоголизм, ухудшают прогноз.

Профилактика. Санитарно-профилактические мероприятия проводятся противотуберкулезными диспансерами совместно с учреждениями общей лечебной сети и центрами Госсанэпиднадзора. Объектом особого внимания противотуберкулезных диспансеров являются больные открытыми формами туберкулеза, выделяющие микобактерии, и окружающие их лица. Под наблюдением (в течение 1 года) находятся также лица, контактировавшие с больными животными.

Значительную часть впервые выявленных больных туберкулезом и больных, выделяющих микобактерии, составляют лица в возрасте 60 лет и старше. Контакт с ними, особенно внутрисемейный, весьма опасен, в частности для детей. Заражение окружающих наблюдается в тех случаях, когда больные не соблюдают правил личной гигиены, не получают полноценного лечения, а лицам, проживающим совместно с больным, не проводится химиопрофилактика. Учитывая недостаточный охват лиц пожилого и особенно старческого возраста профилактическими осмотрами, следует чаще проводить их рентгенологическое обследование при обращении в лечебные учреждения по поводу различных заболеваний.

Комплекс профилактических мероприятий в очагах включает проведение текущей и заключительной дезинфекции, изоляцию детей от бактериовыделителей путем госпитализации больного или помещения детей в детские учреждения, вакцинацию новорожденных и ревакцинацию неинфицированных лиц, контактирующих с больными, их регулярное обследование и проведение им химиопрофилактики, гигиеническое воспитание больных и членов их семей, улучшение жилищно-бытовых условий, лечение больного в условиях стационара с последующим амбулаторным проведением контролируемой химиотерапии.

Профилактической мерой является также недопущение больных, являющихся бактериовыделителями, к работе в медицинских детских учреждениях, учебных заведениях, на предприятиях общественного питания, пищевой промышленности.

Специфическая профилактика направлена на повышение резистентности организма к туберкулезной инфекции путем активной иммунизации (вакцинации и ревакцинации) БЦЖ или применения противотуберкулезных средств (химиопрофилактика). Заболеваемость туберкулезом среди привитых в 4 – 10 раз ниже, чем среди непривитых. Туберкулез у вакцинированных БЦЖ протекает более доброкачественно: у детей, привитых в период новорожденности, развитие заболевания ограничивается главным образом поражением внутригрудных лимфатических узлов. Проводится массовая вакцинация новорожденных, а также ревакцинация клинически здоровых людей с отрицательной реакцией Манту. Вакцинацию и ревакцинацию назначают с учетом медицинских противопоказаний. Иммунитет наступает приблизительно через 2 мес после введения вакцины. На этот срок необходимо изолировать вакцинированных (особенно новорожденных) от больных, выделяющих микобактерии туберкулеза. Прививочный иммунитет резко ослабевает через 5 – 7 лет.

Важную роль в предупреждении туберкулеза у здоровых лиц группы повышенного риска, особенно среди детей и подростков, играет химиопрофилактика. Различают два вида химиопрофилактики: первичную, которую проводят неинфицированным лицам с отрицательной реакцией на туберкулин, контактировавшим с больным активным туберкулезом, и вторичную, проводимую инфицированным лицам. Для химиопрофилактики применяют изониазид в течение 3 мес.

Особенности туберкулеза у детей. В детском возрасте преимущественно встречаются первичные формы туберкулеза, поскольку заражение происходит в результате первого соприкосновения ребенка с туберкулезной инфекцией. Микобактерии туберкулеза, попадая в организм, могут некоторое время не вызывать локальных патологических изменений, но приводят к иммунной перестройке и появлению положительной туберкулиновой реакции (вираж туберкулиновых реакций). Проведение профилактического лечения изониазидом в этот период предупреждает заболевание у большинства детей. Если химиопрофилактика не проводится, у детей нередко развивается особая, присущая детскому возрасту клиническая форма туберкулеза – туберкулезная интоксикация (туберкулез без определенной локализации процесса). Она характеризуется повышенной утомляемостью, снижением аппетита, периодическим субфебрилитетом, возбудимостью или, напротив, вялостью. При обследовании выявляется бледность кожи, снижение тургора тканей и тонуса мышц. Отмечаются увеличение до 5 – 6 мм в диаметре периферических лимфатических узлов, небольшое увеличение печени, иногда селезенки, изменения крови. Реакция Манту умеренно или значительно выражена. Дети с туберкулезной интоксикацией подлежат лечению в стационаре или санатории в течение 5 – 6 мес двумя противотуберкулезными препаратами. Выздоровление возможно и без лечения, но часто (при снижении резистентности организма) исходом туберкулезной интоксикации становится локальная форма первичного туберкулеза.

Особенностями первичного туберкулеза у детей являются: склонность к вовлечению в воспалительный процесс лимфатической системы, а также к распространению возбудителей инфекции гематогенным путем, наличие обширных перифокальных изменений, частые реакции токсико-аллергической природы (например, узловатая эритема), а также высокая способность к заживлению. Наиболее часто встречающейся формой первичного туберкулеза является туберкулез внутригрудных лимфатических узлов. У 1/3 больных с этой локализацией процесса диагностируются малые формы, которые обычно выявляются при туберкулинодиагностике у детей из групп риска, а также с туберкулезной интоксикацией. При несвоевременной диагностике и позднем начале лечения малых форм туберкулеза внутригрудных лимфатических узлов часто развиваются его выраженные формы с поражением легочной ткани, характеризующиеся значительной интоксикацией, отчетливой клинико-рентгенологической симптоматикой.

У 20% детей с выраженными формами первичного туберкулеза воспалительные изменения при полноценном лечении полностью исчезают через 6 – 8 мес. У остальных формируются фиброзные изменения или кальцинаты в лимфатических узлах и легочном очаге, которые в дальнейшем могут стать источником обострения процесса. Поздняя диагностика этих форм туберкулеза может привести к развитию ателектазов, распаду легочной ткани, диссеминации процесса, экссудативному плевриту, которые значительно отягощают течение и исходы заболевания и требуют длительного лечения. Раннее выявление туберкулеза у детей позволяет предупредить развитие его локальных и выраженных форм. Основным методом раннего выявления туберкулеза у детей является ежегодная туберкулинодиагностика, позволяющая обнаружить вираж туберкулиновых реакций или изменение чувствительности к туберкулину. Наряду с туберкулинодиагностикой детям старше 12 лет 1 раз в год проводят рентгенологическое или флюорографическое обследование. 

Еще раз о методах обнаружения микобактерий туберкулеза: что принесло новое тысячелетие?

Abstract

Туберкулез (ТБ) в 2019 г. поразил около 10 миллионов человек во всем мире. Приблизительно 3,4 % новых случаев туберкулеза имеют множественную лекарственную устойчивость. Золотой стандарт для обнаружения Микобактерии туберкулеза , который является этиологическим агентом ТБ, по-прежнему основан на процедурах микробиологического культивирования с последующей идентификацией видов и тестированием на чувствительность к лекарствам.Мокрота является наиболее часто получаемым клиническим образцом от больных туберкулезом легких. Хотя микроскопия мазка является дешевым и широко используемым методом, ее чувствительность составляет 50–60 %. Таким образом, в связи с необходимостью повышения эффективности современных микробиологических тестов для оперативного лечения были разработаны различные методы диагностики туберкулеза с различной чувствительностью и специфичностью. Здесь мы обсуждаем существующие методы, разработанные за последние 20 лет, включая их сильные и слабые стороны.Было показано, что внутренние и коммерческие методы являются многообещающими для быстрой диагностики. Комбинирование методов для систем обнаружения микобактерий демонстрирует 100% корреляцию. Другие анализы полезны для одновременного обнаружения М. туберкулез видов и мутаций, связанных с наркотиками. Новые подходы также использовались для быстрой идентификации и количественного определения общей РНК микобактерий, включая оценку глобальной экспрессии генов, измеренную в цельной крови, для выявления риска ТБ.Сполиготипирование, масс-спектрометрия и секвенирование следующего поколения также являются многообещающими технологиями; однако их стоимость должна быть снижена, чтобы страны с низким и средним уровнем дохода могли получить к ним доступ. Из-за большого воздействия М. туберкулез инфекции на общественное здравоохранение, разработка новых методов в контексте хорошо спланированных и контролируемых клинических испытаний может способствовать улучшению инфекционного контроля ТБ.

Ключевые слова: диагностика, лекарственно-устойчивый туберкулез, методы амплификации нуклеиновых кислот, туберкулез

Введение

Современный уровень техники

Методы выявления Микобактерии туберкулеза , этиологический агент туберкулеза (ТБ), в данном образце может иметь приличную чувствительность (т. е. способность обнаруживать присутствие бациллы в образце) и специфичность (т. е. способность обнаруживать только целевую бациллу). Существует множество коммерческих серологических тестов для диагностики ТБ во многих условиях; однако они не рекомендуются из-за их низкой производительности. Хотя мы признали их наличие, мы не пересматривали подробно ни один современный иммунологический тест для обнаружения М. туберкулез инфекция. Более того, серологические тесты оказались непоследовательными и неточными, с сильно различающимися значениями чувствительности и специфичности и высокой долей несоответствия.Поэтому Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) выпустила руководство, не рекомендующее использование таких тестов для диагностики туберкулеза [1]. С одной стороны, единственный тест in vivo , доступный для оценки М. туберкулез – кожная туберкулиновая проба, имеющая удовлетворительную чувствительность, но низкую специфичность [2]. С другой стороны, новые анализы высвобождения гамма-интерферона являются специфическими тестами ex vivo . Оба метода основаны на измерении адаптивного иммунного ответа хозяина.Однако ни один из этих тестов не может точно различить латентный и активный ТБ [2–4]. Другие диагностические инструменты были разработаны для обнаружения М. туберкулез , а также чувствительность к лекарственным препаратам и жизнеспособность, которые можно оценить по реактивности метаболической активности (обнаружение дыхания или синтеза мРНК), целостности клеточной мембраны или обнаружению нуклеиновых кислот [5]. Наряду с этими испытаниями были разработаны традиционные методы на основе твердых и новых жидких сред, которые позволяют получать быстрые результаты; однако эти тесты довольно дороги [6].Описаны и другие методы обнаружения патогенных микобактерий (4).

Таблица 1.

Обычно используемые методы выявления патогенных микобактерий

Анализ

Артикул

Полимеразная цепная реакция (ПЦР)*

[149]

Обратная транскрипция (ОТ)-ПЦР

[88, 150]

Иммуноферментный анализ (ИФА)

[151]

Потенциометрические биосенсоры

[152]

Поверхностный плазмонный резонанс

[153]

Биолюминесценция

[154]

Флуоресцентная маркировка

[155]

Проточная цитометрия (FCM)

[156]

Транскриптомный

[115]

Возбудитель туберкулеза

Приблизительно 50 видов микобактерий вызывают заболевания человека. М. туберкулез принадлежит к семейству Микобактерии и является членом М. туберкулез Комплекс , включающий М. туберкулез , М. canettii и М. африканский , а также другие представители, вызывающие заболевания у других видов животных (). Все бациллы, относящиеся к семейству Микобактерии имеют богатую липидами клеточную стенку, которая обеспечивает устойчивость к химиотерапевтическим агентам, но не к физическим агентам, таким как ультрафиолетовое излучение и тепло [7–10].

Генеалогическое древо, объединяющее нескольких членов Микобактерии туберкулеза Комплекс , вызывающий заболевание различных видов животных. Соответствующие ссылки показаны рядом с [157–164].

Золотым стандартом диагностики туберкулеза является положительный результат М. туберкулез культура [11]. М. туберкулез представляет собой палочковидную, не образующую спор и строго аэробную бактерию. Как факультативный внутриклеточный патоген он способен жить в фагоцитирующих клетках человека.Из-за низкой скорости роста клеточное деление происходит каждые 18–20 часов, и требуется несколько недель, чтобы бактерия была обнаружена в виде видимых колоний в плотных культуральных средах [12]. Важно отметить, что это можно считать серьезным препятствием для быстрой диагностики.

Метод Микобактерии сп. характеристика из культуры более чувствительна, чем обычная бактериоскопия, такая как микроскопия кислотоустойчивых бацилл (КУБ), которая позволяет обнаружить 10–100 бацилл мл -1 концентрированного клинического образца [13].Двумя наиболее широко используемыми питательными средами являются склоны Лёвенштейна-Йенсена (LJ) на яичной основе и серия агаров Миддлбрука (7 ч 20 мин и 7 ч 21 мин), обе из которых представляют собой твердофазные бульоны [14]. Среди этих двух методов LJ более эффективен для определения скорости роста, тогда как Миддлбрук способствует более быстрому росту бактерий [15]. Жидкие питательные среды рационально использовать как для увеличения числа клеток, так и для хранения штаммов. Использование двухфазных культур в одном и том же флаконе позволяет более точно анализировать аспект колонии [16].В случае образцов, полученных от пациентов с коинфекцией ТБ/ВИЧ, которые обычно имеют высокую частоту нетуберкулезных микобактерий (НТМ), их виды необходимо идентифицировать с помощью биохимических тестов или использования специфических генетических зондов [17].

После постановки точного диагноза пациенты должны немедленно начать химиотерапию туберкулеза специальными препаратами; однако, как указывалось ранее, лекарственная устойчивость и соблюдение режима лечения на данном этапе вызывают серьезную озабоченность. Неэффективность лечения тесно связана с отбором мутантных бацилл, устойчивых к стандартной противотуберкулезной терапии, поскольку резистентность ко всем используемым антимикобактериальным препаратам часто вызывается спонтанными мутациями М. туберкулез в генах-мишенях [18]. Два механизма резистентности, наблюдаемые в М. туберкулез являются (i) сверхэкспрессия мишени лекарственного средства [19] и (ii) изменение структуры мишени лекарственного средства [20]. Как указано, более быстрый диагностический процесс, включая идентификацию устойчивых штаммов, необходим для начала наиболее эффективного терапевтического режима. Существует множество генов-мишеней, которые потенциально можно использовать для выявления резистентных форм, таких как katG , inhA , mabA и ahpC для изониазида (INH), rpoB для рифампицина (RMP), rp. и rrs для стрептомицина (SM), embA и embB для этамбутола (EMB) и girA для фторхинолонов.Эти гены также могут быть использованы для обнаружения М. туберкулез в клинических образцах с использованием молекулярных подходов [21].

В связи с увеличением числа случаев неэффективности лечения больных активным туберкулезом разработка быстрых, надежных, простых и точных методов выявления Микобактерии сп. и его лекарственная устойчивость стала первостепенной. Следовательно, обнаружение М. туберкулез с использованием множества подходов преуспела за последние 20 лет.Из-за отсутствия обзорных статей по этой теме мы стремились представить основные тесты, разработанные в текущем тысячелетии и используемые в настоящее время для обнаружения этого возбудителя в клинических образцах, и обсудить их сильные и слабые стороны.

Микроскопический анализ

Что касается бактериологического анализа, то обнаружение КУМ в свежих, окрашенных мазках мокроты пациентов с подозрением на инфекцию при микроскопическом исследовании дает первоначальные доказательства присутствия микобактерий в клинических образцах.В странах с низким и средним уровнем дохода (LMI) диагноз ставится в основном с помощью микроскопического исследования, но этот метод имеет чувствительность только 50–60 % в случаях подтвержденного (бациллярного) легочного ТБ и даже более низкую чувствительность (< 30 %). у ВИЧ-положительных пациентов или пациентов с ослабленным иммунитетом и у детей [22]. Однако он недорог, прост в выполнении и анализе, имеет короткие временные рамки (1 день) и коррелирует с контагиозностью случая [23, 24]. Короче говоря, традиционный КУМ — это метод, предназначенный для бактерий, устойчивых к кислотному обесцвечиванию после процедур окрашивания, таких как методы Циля-Нильсена (ZN) и Киньюна.Это свойство связано с липидным компонентом, составляющим примерно 60% сухого веса клеточной стенки. Одна и та же богатая липидами структура отвечает как за медленный рост, так и за устойчивость бактерий к кислотам [25].

Среди нескольких факторов, связанных с вирулентностью М. туберкулез , липидный профиль клеточной стенки вызвал большой интерес из-за его уникального состава, который дает патогену преимущество над хозяином [26].Эта богатая липидами клеточная стенка представляет собой динамическую структуру, которая также участвует в регуляции транспорта противотуберкулезных препаратов [27]. На самом деле М. туберкулез также изменяет свой метаболизм жирных кислот, чтобы выжить в условиях хозяина; это отражается в различном составе клеточной стенки с точки зрения липидов, что увеличивает ее вирулентность. Кроме того, было показано, что этот профиль модулирует иммунные ответы, запускаемые хозяином [26]. Повышенная экспрессия гена изоцитратлиазы, свидетельствующая о сдвиге в центральном углеродном метаболизме, наблюдалась у 90 005 человек. М.туберкулез культивировали на длинноцепочечных жирных кислотах в загруженных липидами макрофагах [28]. Было показано, что усиление накопления липидов в этой бацилле как средство восстановления после редуктивного повреждения, вызванного стрессом, приводит к более медленной скорости роста и лекарственно-толерантному фенотипу в богатой липидами среде in vivo в среде макрофагов [28]. . Два недавних обширных обзора по этой увлекательной теме были опубликованы [26, 27].

До разработки новых методов диагностики микобактерии выявляли в образцах утренней мокроты методом прямой микроскопии методом ЗН [21]. Однако этот метод имеет серьезные недостатки (). Во-первых, время, необходимое для адекватного обнаружения, имеет решающее значение; Техническим специалистам требуется около 5 минут, чтобы увидеть как минимум 200–300 микроскопических полей только в одном мазке. Это приводит к утомлению под микроскопом (усталость от чтения) и, следовательно, к ложноотрицательным результатам; кроме того, в перегруженных лабораториях рекомендуемое время проведения анализа может не соблюдаться [29, 30]. Во-вторых, этот метод обладает низкой чувствительностью: у 45 % больных туберкулезом легких и 75 % больных внебольничным туберкулезом микобактерии в большинстве случаев не выявляются из-за минимального количества бацилл в пробе мокроты (10 4 мл −1). ) требуется [31].Наконец, образцы должны быть быстро доставлены на объект, чтобы избежать чрезмерного роста других загрязняющих веществ. Метод хлорида цетилпиридиния (CPC) широко используется для транспортировки образцов мокроты; однако обнаружение КУМ с помощью окрашивания ZN может быть значительно снижено в образцах, сохраненных с помощью CPC [32]. Кроме того, образцы, обработанные CPC, следует предпочтительно инокулировать в среды на основе яиц, поскольку среды на основе агара обладают недостаточной нейтрализующей активностью в отношении этого соединения четвертичного аммония.Было обнаружено, что карбонат натрия является лучшим консервантом образцов мокроты для микроскопии и посева мазка КУМ [33]. Тем не менее, помимо слабости, связанной с этим методом, недавнее исследование показало, что ДНК может быть извлечена из мазков ZN, а маркеры устойчивости к RMP могут быть оценены с помощью одной полимеразной цепной реакции (ПЦР), а именно гнездовой ПЦР [34], что позволяет более точный анализ образца, что актуально для полилекарственной терапии. В систематическом обзоре чувствительность микроскопии по сравнению с культурой колебалась от 0 до 100% в образцах индуцированной мокроты; только в 8 из 23 исследований сообщалось о видах микобактерий, выделенных в культуре [35].Примечательно, что в настройках с высоким уровнем М. туберкулез , метод ZN является самым дешевым методом [36].

Таблица 2.

Обзор наиболее часто используемых методов обнаружения М. туберкулез и его варианты, включая экономичность

Анализ

Доступность/стоимость

Чувствительность

Количественная оценка

Время обработки*

Идентификация сопротивления

Бакилоскопия

Высокий

Низкий

Промежуточный уровень

2–3 дня

Твердая культура

Дешево

Низкий

Промежуточный уровень

30–60 дней

Жидкая культура

Промежуточный уровень

Промежуточный уровень

Промежуточный уровень

15–30 дней

Проточная цитометрия

Низкий

Высокий

Высокий

2–3 дня

Да

Вложенная ПЦР/ОТ-ПЦР

Низкий

Промежуточный уровень

Низкий

2–4 дня

Да

кОТ-ПЦР

Низкий

Низкий

Промежуточный уровень

2–4 дня

№ †

GeneXpert MTB/RIF

Низкий

Высокий

Высокий

90 мин

Да

Флуоресцентная микроскопия

Промежуточный уровень

Высокий

Высокий

1–2 дня

Да

Флуоресцентная микроскопия (FM) является еще одним методом обнаружения М. туберкулез в данном образце. Использование аурамина в качестве флуоресцентного маркера было введено в 1940-х годах [37], и чувствительность прямой микроскопии может быть улучшена путем концентрирования мокроты в осадке и применения флуоресцентного окрашивания аурамином-О, хотя этого недостаточно для различения М. туберкулез от других микобактерий [21]. В 2003 г. Kivihya-Ndugga и соавт. [38] сравнили эффективность и экономичность FM с таковыми метода ZN для анализа мокроты больных туберкулезом легких.При рассмотрении экономической эффективности было показано, что ФМ имеет лучшую чувствительность (78% против 60% для ЗН), что является ключевым фактором, ведущим к экономии как для системы здравоохранения, так и для пациента [38]. Резюме этих выводов представлено в . На самом деле использование FM перспективно по сравнению с плохой чувствительностью световой микроскопии для детей с туберкулезом [39]. Было обнаружено, что он неэффективен для выявления ТБ с отрицательным мазком у ВИЧ-положительных пациентов [40–43]. Повышенная чувствительность ФМ по сравнению с традиционной световой микроскопией для выявления туберкулеза легких недавно была подтверждена в систематическом обзоре [44].Кроме того, метаанализ показал, что ФМ может повысить чувствительность мазков мокроты на 10 % по сравнению с традиционным методом [45]. Однако оборудование, необходимое для FM, дорого; таким образом, его использование было ограничено регионами, которые могут себе это позволить. Кроме того, флуоресценция со временем тускнеет. По этой причине слайды должны быть прочитаны в течение 24 часов после проявления [39].

Флуоресцентные маркеры особенно полезны для исследований in vitro и in vivo .Они могут иметь решающее значение для понимания М. туберкулез биология и развитие болезни, а также разработка новых технологий диагностики и лечения, таких как красители, используемые для анализа проточной цитометрии (как обсуждается ниже). Десять лет назад был разработан новый флуорогенный субстрат в ближней инфракрасной области для эндогенного фермента микобактерий. Этот метод с использованием микобактериальных соединений, чувствительных к β-лактамазе, способен быстрее обнаруживать in vitro , с пределом 6×10 2 колониеобразующих единиц, а также в легком мыши, с пределом приблизительно 1× 10 4 колониеобразующих единиц [46].Однако мокрота может мешать обнаружению этого фермента, увеличивая вероятность ложноположительных результатов. Следовательно, было высказано предположение, что неизвестная β-лактамаза, присутствующая в клинических образцах, может быть расщеплена флуорогенным субстратом, поскольку гипотетический фермент может иметь активный центр, аналогичный активному центру . М. туберкулез фермент [47].

Твердые и жидкие среды для культивирования

Золотым стандартом, рекомендованным ВОЗ для диагностики ТБ, является использование культурального метода и идентификация видов на основе их физиологических и биохимических особенностей, а также времени роста культуры [ 11].В биологических образцах для этой цели неизменно использовалась мокрота.

Внедрение методов культивирования прокариотических клеток позволило как клиническим, так и исследовательским лабораториям идентифицировать Микобактерии сп. и его чувствительность к антибиотикам, что приводит к более эффективному лечению больных туберкулезом (1). Посев гораздо более чувствителен, чем предварительное микроскопическое исследование: 50 % случаев легочного ТБ и еще большая часть задокументированных случаев внебольничного туберкулеза дают отрицательный результат при микроскопии и, следовательно, диагностируются только с помощью посева, поскольку этот метод способен обнаружить небольшое количество бактерий. на миллилитр [48, 49].Как указывалось ранее, традиционные методы определения жизнеспособности и роста Микобактерии сп. используются с использованием твердых агаровых сред, таких как Middlebrook 7h20 или LJ; последний был использован для культуры М. туберкулез в странах LMI. Среда Огава — это еще одна среда на яичной основе, которая по своему составу сравнима с LJ. Он более доступен из-за замены аспарагина глутаматом натрия, аминокислотой, которая более доступна и намного дешевле [50].Тем не менее, в этих плотных питательных средах требуется 6 недель для М. туберкулез легко выявляется в культуре [51, 52].

В 2007 г. ВОЗ одобрила использование жидких культуральных сред в качестве золотого стандарта диагностики ТБ на основании рекомендаций международных экспертов и исследований, которые продемонстрировали, что этот метод можно применять в условиях LMI для улучшения течения туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ). диагностика и выявление туберкулеза легких с отрицательным мазком на КУМ. Рекомендация ВОЗ согласуется с большим объемом научной литературы, касающейся жидких питательных сред.Исследования показали более высокую скорость выделения микобактерий в короткие сроки по сравнению с теми же образцами из плотных питательных сред [53]. Следовательно, последние были исключены из клинической лабораторной рутины [54].

В настоящее время доступны многочисленные жидкие среды для культивирования с автоматизированными методами инкубации и считывания, и несколько исследований, касающихся их использования для тестирования чувствительности к противомикробным препаратам (АСТ), были пересмотрены [6, 55]. Среди методов, использующих жидкие питательные среды, есть радиометрические методы, такие как система Becton Dickinson BACTEC 460 [56], и колориметрические методы, основанные на продукции бактериального газа, такие как система bioMérieux MB/BacT [57].Процедура BACTEC 460 основана на производстве радиоактивного диоксида углерода из пальмитиновой кислоты [58]. Он хорошо зарекомендовал себя и широко используется для ТЧА; сейчас он считается стандартным методом [59, 60]. К сожалению, у этого метода есть недостатки, такие как логистика в отношении захоронения радиоактивных отходов и необходимость инокуляции образцов в жидкую культуральную среду. Для преодоления этих проблем была разработана нерадиометрическая колориметрическая система, а именно пробирка-индикатор роста микобактерий BACTEC (MGIT) 960, которая кажется более надежной, чем BACTEC 460 для ТЧА [61–64]. Преимущество этого метода в том, что он полностью автоматизирован. Для обнаружения используется флуоресцентный датчик с гашением кислорода, что устраняет необходимость в использовании игл. Другой колориметрической системой является MB/BacT, которую сравнивают с BACTEC 460 [59]. Поразительно, что результаты для ТЧА показали хорошее совпадение и соответствие значениям для изониазида (96,3%), РМП (98,8%) и ЭМБ (98,8%) [65].

Исследование, проведенное Сорлозано и его коллегами [66], в котором сравнивались BACTEC MGIT 960 с MB/BacT и твердыми культуральными средами LJ, выявило 86.5 % выделения микобактерий из BACTEC MGIT 960 в клинических образцах по сравнению примерно с 79,5 % извлечения микобактерий из двух других. Исследование также показало, что комбинация сред на жидкой и твердой основе показала лучшую производительность (извлечение 95,5 %). Период, необходимый для выделения микобактерий, очень важен для быстрой диагностики [67]. Изоляция в методе BACTEC MGIT 960 (15,3±6,1 дней) была короче, чем в двух других методах (20,1±8,6 и 32,6±11,8 дней для MB/BacT и LJ соответственно). Обнаружение с помощью жидких сред быстрее и немного более чувствительно, чем с твердыми средами, хотя высокая чувствительность этого метода подвержена загрязнению микобактериями из окружающей среды и другими микроорганизмами [68, 69]. Это загрязнение может быть связано с НТМ, поскольку было обнаружено, что жидкие среды более эффективны для обнаружения НТМ, чем твердые среды [69].

В совокупности жидкие среды лучше поддерживают рост М. туберкулез сложнее, чем твердотельные среды [50].Хотя как жидкие, так и твердые среды обладают достаточной чувствительностью и специфичностью, их диагностические ценности ограничивают их качественный анализ. И наоборот, количественные методы, такие как прямой микроскопический подсчет КУМ, учитывают точное количество микобактерий, присутствующих в образце.

ПЦР и другие молекулярные методы

Молекулярная идентификация стала альтернативой или дополнением к традиционной микробиологической идентификации. В настоящее время он рассматривается как многообещающий подход [70]. Тесты амплификации нуклеиновых кислот (МАНК), такие как ПЦР на основе, вложенная ПЦР, ПЦР с обратной транскрипцией (ОТ) и изотермическая амплификация, опосредованная петлей TB (LAMP), используют молекулярные зонды, которые специфически гибридизуются с М. туберкулез Комплекс , М. авиум Комплекс , М. канзасии или М. гордонае [71]. Полный обзор см. в [5, 72]. Эти тесты имеют чувствительность и специфичность почти 100% в присутствии не менее 1×10 5 организмов, предлагая лучшую точность, чем микроскопия КУМ, и более быстрые результаты, чем посев [73].Соответственно, сравнительное исследование выявило 100% корреляцию между ПЦР на основе IS6110 и системой BACTEC MGIT 960, и авторы предложили использовать оба метода в качестве комбинированного протокола для рутинной клинической диагностики [74]. При малобациллярном туберкулезе с отрицательным мазком чувствительность МАНК неизменно составляет примерно 50–60%, а специфичность — почти 99% [75]. В целом, ПЦР менее чувствителен, чем посев, и его использование ограничено стоимостью и потребностью в лабораторных знаниях и инфраструктуре [76].

В начале 1990-х Эйзенах и его коллеги [77] провели первое исследование МАНК для обнаружения М. туберкулез с использованием ПЦР, в которой чувствительность, специфичность и итоговые результаты были доступны в течение 48 часов. Этот метод также можно использовать для выявления бацилл, устойчивых к лекарственным препаратам (). Фактически, в 2014 г. был проведен широкий обзор по теме тестирования на чувствительность к лекарственным препаратам [78], и поэтому мы намеревались обновить эту тему (). Соответственно, мы провели фенотипический и генетический анализ лекарственно-устойчивого фенотипа и мутаций, вызывающих устойчивость, у пациентов в специализированной больнице в Форталезе, Бразилия [79].Первичная резистентность была высокой у участников (50,9%), а анализ с помощью мультиплексной аллель-специфической ПЦР и секвенирования выявил и идентифицировал мутации в katG , rpoB , в промоторе inhA и gyrA (). Пространственный анализ выявил отдельные изоляты, распределенные в районах города с низким социально-экономическим статусом. Наши результаты подчеркивают важность выявления устойчивости к противотуберкулезным препаратам [79]. Ранее технология мультиплексной ПЦР использовалась для распознавания резистентного к INH штамма . М.туберкулез из изолятов в Индии [80]. Хотя ПЦР не может распознать жизнеспособные и нежизнеспособные бациллы (как обсуждается ниже), что связано с присущей недостаточностью количественного определения количества микобактерий, подходы МАНК в целом помогают быстро поставить диагноз ТБ и ускорить принятие решения. процесс создания лучшего протокола лечения наркомании ().

Таблица 3.

Обзор самых последних методов (начиная с 2014 г.) обнаружения М.туберкулез лекарственная устойчивость с выделением соответствующей мишени и лекарства

Анализ

Целевой ген

Направленный препарат

Артикул

GenoType MTBDRplus*

РПОБ , КатГ и Инга

ИНХ и РМП

[165–170]

GenoType MTBDRsl*

наб. , gyrA и ррс

EMB, фторхинолоны, аминогликозиды и циклический пептид

[171–173]

ОТ-ПЦР*

катГ , рпоБ , МПБ64 и ИС6110

РМП и ИНХ

[88, 150, 174–180]

Abbott Real-Time MTB RIF/INH†

катг , инха и рпоб

РМП и ИНХ

[181–183]

Мультиплексная аллель-специфическая ПЦР*,‡

рпоб , катг , инха , пнкА и набБ

RMP, INH, пиразинамид, фторхинолоны и аминогликозиды

[79, 184–192]

ПЦР-ПДРФ*

катГ , наб , рпсл и гирА

INH, стрептомицин и фторхинолоны

[193–195]

Генедрайв*

рпоБ

РМП

[196]

Anyplex Plus МТБ/НТМ*

катГ и инга

РМП и ИНХ

[197–199]

Боковой поток на основе AuNP*

катГ

ИНХ

[200]

Электрохимические датчики ДНК†, §

рпоБ

РМП

[201]

Бинарные дезоксирибозимные датчики†

рпоб , катг , инха и гира

РМП, изониазид и фторхинолоны

[202]

Микросфера Luminex MicroPlex†

rpoB , GyrA и inha

РМП и фторхинолоны

[203]

Нипро Геноученый†

пнкА

Пиразинамид

[204, 205]

Секвенирование*

рпоБ , катг , наб , гырА, гырБ , инха , рпсл и ррс

RMP, INH, фторхинолон и стрептомицин

[206–214]

В дополнение к ПЦР существуют три имеющихся в продаже теста для непосредственной идентификации бациллы ТБ по 16S рибосомным транскриптам, а именно: (i) М. туберкулез прямой тест (MTD) с использованием ампликона, выявляемого с помощью ДНК-зонда [81, 82]; (ii) Amplicor с использованием родоспецифических праймеров посредством колориметрической реакции [83]; и (iii) однопробирочный метод TB-LAMP для изотермической амплификации ДНК или РНК [84]. Первые два теста сравнивались с культуральными и клиническими параметрами, при этом оба показали высокую чувствительность и специфичность в образцах с положительным мазком; однако низкие значения были получены в образцах с отрицательным мазком [85].Кроме того, TB-LAMP является еще одним недорогим альтернативным тестом на КУМ ((84; [86]. TB-LAMP является простым, автономным и эффективным для ранней диагностики случаев подозрения на пропускная способность и отсутствие требований к сложному оборудованию и сложным средствам биобезопасности [84].Мета-анализ показал, что при принятии решения о реализации этого подхода следует учитывать дополнительные факторы, такие как стоимость, осуществимость и приемлемость в условиях, которые по-прежнему зависят от КУМ [86]. ].

ОТ-ПЦР применяли в культуральных и клинических образцах. Это масштабируемая технология, используемая для преодоления ограничений ПЦР при количественном определении образцов. Его чувствительность колеблется в пределах 71–98%, а специфичность близка к 100% [87]. Результаты обычно получают через 1,5–2 часа после выделения ДНК, и риск контаминации низок (реакция и обнаружение происходят в одной пробирке). В 2006 г. Орту и его коллеги [88] использовали ОТ-ПЦР для обнаружения и идентификации М.туберкулез . Авторы предположили, что этот метод может быть полезен для оценки ответа на лечение у больных туберкулезом, так как он способен количественно определять точное количество копий ДНК возбудителя, что указывает на степень инфицирования больного. Они также подчеркнули риск снижения чувствительности, когда образцы содержат небольшое количество М. туберкулез загрязнителей ДНК.

Как уже отмечалось, неотъемлемая проблема заключается в том, что обнаружение ДНК патогена с помощью ПЦР не позволяет отличить жизнеспособные бациллы от нежизнеспособных, а в некоторых исследованиях МАНК описано возникновение ложноположительных результатов из-за контаминации [89–91]. Чтобы свести к минимуму эту возможность, количественная (q) RT-PCR на основе мРНК в реальном времени вместо ДНК может быть полезна для обнаружения жизнеспособных М. туберкулез бацилл и для диагностики активного ТБ [92]. РНК имеет короткий период полураспада [93], и предполагается, что она будет обнаружена только в жизнеспособных клетках. Кроме того, М. туберкулез мРНК достаточно стабильна, период полураспада составляет примерно 9 мин [94]. Фактически мРНК Ag85B обнаружена только у жизнеспособных бактерий [95–97].Однако чувствительность анализа низкая, и рутинная работа с РНК обременительна (4). Таким образом, необходимы дополнительные усилия для разработки более простых и экономичных ПЦР-тестов, которые можно регулярно использовать в странах с низким уровнем дохода для достижения эффективной диагностики ТБ [92].

Хотя полиморфизм длины рестрикционных фрагментов ПЦР (ПДРФ) был разработан в прошлом столетии, для быстрой идентификации микобактерий, включая , использовался ПЦР-ПДРФ анализ генетического кода. М. туберкулез , в текущем тысячелетии [98].В некоторых случаях ПЦР-ПДРФ сравнивали с обычными биохимическими тестами для диагностического использования [99, 100]. Кроме того, ДНК-микрочипы использовались для идентификации М. авиум , М. chelonae , М. фортуитум , М. гордонае , М. внутриклеточный , М. канзасии , М. скрофуляцеум , М.смегматис , М. туберкулез и М. ксенопи изолятов [101]. Мы использовали системы сполиготипирования и географической привязки, пытаясь выяснить генетическое разнообразие М. туберкулез изолятов, циркулирующих у пациентов с легочным ТБ в Форталезе, Бразилия [102]. Были проведены тестирование на чувствительность к лекарственным препаратам и анализ на сполиготипирование, а места жительства пациентов были привязаны к географическим координатам. Примерно 44.3 % изолятов были устойчивы по крайней мере к одному лекарству, тогда как 55,7 % были чувствительны ко всем испытанным препаратам. Высокая частота резистентности наблюдалась у ранее леченных больных ТБ и среди новых случаев. Было замечено, что распределение семейства сполигопаттернов аналогично тому, которое сообщается для Южной Америки. Высокий уровень заболеваемости наблюдался среди резистентной группы ТБ из-за передаваемой и приобретенной устойчивости.

Автоматизированный метод, основанный на технологии ПЦР, был описан как многообещающий инструмент для быстрого и специфичного обнаружения М.туберкулез . Система Cepheid GeneXpert MTB/RIF и Xpert Ultra следующего поколения [103] используют пластиковый картридж, содержащий все реагенты, необходимые для выделения ДНК для амплификации гена rpoB . GeneXpert MTB/RIF обнаруживает ампликоны в сочетании с устройством для оказания медицинской помощи, с результатами, полученными через 2 часа и с минимальными техническими затратами времени [104]. Недавние исследования показали использование этого подхода для снижения риска биоаэрозольной инфекции, а также его использование в условиях оказания медицинской помощи [105].Соответственно, один тест с использованием GeneXpert MTB/RIF может выявить ТБ у 99% пациентов с положительным мазком и >80% пациентов с отрицательным мазком [76]. Кроме того, GeneXpert MTB/RIF может выявлять резистентность к RMP с чувствительностью 95,1 % и специфичностью 98,4 % [105], и метаанализ показал, что этот подход следует отдавать предпочтение в условиях, когда требования к ресурсам и инфраструктуре адекватны и где вызывает озабоченность коинфекция ТБ/ВИЧ или лекарственная устойчивость [86].Кроме того, обновленный тест Xpert Ultra может выявлять ВИЧ-ассоциированный ТБ с высокой чувствительностью, тем самым снижая связанную с ТБ смертность у пациентов с сочетанной инфекцией ТБ/ВИЧ [106]. ВОЗ первоначально рекомендовала эту технологию в начале 2011 г. [67]; организация следит за глобальным внедрением этого метода для содействия координации [107]. За последние 3 года были опубликованы один систематический и четыре литературных обзора эффективности GeneXpert MTB/RIF для диагностики ТБ в нескольких условиях [108–112].Поскольку всесторонние обзоры диагностической точности системы GeneXpert MTB/RIF были опубликованы в 2013 г. [113], 2014 г. [114] и 2019 г. [103], мы не сосредоточили внимание на этой теме. Соответственно, эти обзоры были доступны для выявления легочного ТБ и резистентности к RMP в рамках процесса ВОЗ по разработке структурированных руководств по использованию теста.

Наконец, оценки глобальной экспрессии генов, измеренные в цельной крови, недавно позволили поставить диагноз ТБ. Соответственно, первое исследование проспективно идентифицировало происходящие от хозяина биомаркеры экспрессии 16 генов в крови у людей из Южной Африки и Гамбии, которые подвержены риску развития активного туберкулеза, что указывает на возможность предотвращения заболевания с помощью целенаправленного вмешательства с использованием тесты без мокроты [115]. За один год сигнатура 16 генов предсказывала прогрессирование туберкулеза с чувствительностью 66,1% и специфичностью 80,6%. В тот же период сигнатура риска в нетронутых группах показала чувствительность 53,7% и специфичность 82,8%. Впоследствии была разработана еще одна надежная и простая транскриптомная сигнатура крови хозяина на основе ПЦР, так называемая RISK6, для выявления лиц с риском возникновения заболевания, для скрининга субклинического или клинического ТБ и мониторинга лечения ТБ [116]. Его эффективность в диагностике субклинических и клинических заболеваний у ВИЧ-неинфицированных и коинфицированных больных ТБ/ВИЧ превысила 85 %.В качестве скринингового теста на ТБ RISK6 соответствовал контрольным показателям, установленным в профилях целевых продуктов ВОЗ для этих тестов. Баллы RISK6 коррелировали с активностью иммунопатологии легких и отслеживали ответ на лечение. RISK6 предсказывал неэффективность лечения до начала химиотерапии. Чтобы получить дополнительные сведения, недавно были опубликованы два систематических обзора эффективности глобальной экспрессии генов в крови хозяина для диагностики и прогнозирования прогрессирования заболевания ТБ в разных когортах [117, 118]. В совокупности эти результаты показывают, что и 16-генная сигнатура, и RISK6 обещают применимость во всем мире в качестве удобных в полевых условиях сортировочных, диагностических и прогностических тестов на ТБ, основанных на выявлении профилей биомаркеров.

Все описанные выше методы МАНК имеют преимущества перед традиционными методами, такие как их быстрое обнаружение и идентификация ТБ, быстрое получение результатов, надежность и воспроизводимость. Однако при использовании этих методик необходимо дополнительное оборудование и обученный персонал.На сегодняшний день эти факторы ограничивают применение этих методологий в странах с низким уровнем доходов.

Проточная цитометрия

Эволюция методов обнаружения М. туберкулез , как описано ранее, резко сократил время, необходимое для тестирования чувствительности, с недель до часов. Среди этих методов FCM является многообещающим и потенциальным инструментом, который стал одним из лучших вариантов для быстрого обнаружения и количественного определения различных бактерий из окружающей среды, пищевых продуктов и клинических образцов [119, 120]. Обзор его возможностей представлен в .

В 1995 г. Norden и коллеги [121] описали использование FCM в качестве экспресс-теста на чувствительность к лекарственным средствам в пионерском исследовании. Используя диацетат флуоресцеина (FDA), авторы протестировали М. туберкулез штамма h47Ra, который чувствителен к антимикобактериальным агентам, в течение 24 часов и получил результаты, аналогичные тем, о которых сообщают другие [122, 123]. Другое исследование подтвердило примерно 94 % совпадение между методом пропорции агара и FCM (путем обнаружения гидролиза FDA) для штамма, устойчивого к INH, а также полное согласие для тестов EMB и RMP [124].Хотя результаты могут быть быстро получены с использованием FCM, его биобезопасность остается важным недостатком его крупномасштабного применения из-за образования инфекционных аэрозолей. Соответственно, Мур и его коллеги [125] инкубировали образцы с параформальдегидом перед анализом FCM. Однако было замечено, что туберкулезные бациллы, попавшие в контейнер, могли ускользнуть в результате более поздней обработки.

Другой метод проверки восприимчивости М. туберкулез к препаратам с использованием FCM было описано как быстрое и безопасное [126].В этом протоколе микобактерии убивают нагреванием и исследуют с помощью красителя SYTO 16, несимметричного цианина с тремя положительными зарядами, который при связывании с нуклеиновыми кислотами патогена увеличивает интенсивность флуоресцентного сигнала и, таким образом, отмечает мертвые клетки ярко-зеленым цветом. После инкубации М. туберкулез с SM, INH, RMP и EMB, клетки окрашивают и анализируют с использованием FCM. Превосходная корреляция между BACTEC MGIT 960 и FCM наблюдалась при сравнении с 12-15 днями или 72 часами инкубации соответственно, что указывает на то, что SYTO 16 обеспечивает четкое различие для тестов на лекарственную чувствительность [126].

Недавно Qin и коллеги [127] обсудили важность более ярких флуоресцентных меток для повышения чувствительности FCM и предложили использовать люминесцентные наночастицы, поскольку их превосходство над обычными флуорофорами с точки зрения интенсивности флуоресценции и фотостабильности было значительным. В их исследовании был разработан улучшенный двухцветный подход FCM с использованием комбинации наночастиц диоксида кремния, легированных красителем Rubpy, с красителем SYBR Green I для обнаружения М. туберкулез , тем самым избегая ложных срабатываний.Однако в этих условиях не были доступны ни тестирование на чувствительность к лекарственным препаратам, ни обнаружение клинических образцов. Другое исследование рекомендовало использование FCM для различения живых, пострадавших от наркотиков и мертвых . М. туберкулез [128]. Используя SYTO 9, йодид пропидия и моноазид этидия (соединение, которое необратимо связывается с ДНК мертвых клеток), авторы смогли определить эффективность противотуберкулезных агентов в качестве мишеней для индукции гибели.

Поскольку FCM — мощный, быстрый и безопасный инструмент, необходимый для М.туберкулез тестов на чувствительность к лекарствам в диагностике туберкулеза, которые должны оставаться простыми и экономически эффективными. Janossy [129] утверждал, что существует необходимость внедрения этого метода в условиях, практически не затронутых современными лабораторными технологиями. Кроме того, вопросы, связанные с техническим обслуживанием и специальной оперативной подготовкой, ограничивают широкое использование FCM, особенно в отношении внедрения метода в странах с низким уровнем дохода.

Другие нетрадиционные методы

Быстрое выявление микобактерий можно проводить вручную на основе восстановления индикатора соли тетразолия в жидкой среде [130].Эту методику сравнивали с использованием системы BACTEC 460 и плотной питательной среды LJ; это удобное для использования в полевых условиях устройство, в которое уже включена добавка антибиотика, а также гарантируется легкое и немедленное считывание результатов [131]. Однако в этом исследовании не сообщалось о дополнительных параметрах, таких как специфичность и чувствительность.

Система ESP Culture System II (ESP II) основана на обнаружении изменений давления в культуральной среде [64]. Этот метод был оценен путем сравнения его производительности с системами BACTEC 460 и Middlebrook 7h21.ESP II является менее трудоемкой альтернативой BACTEC 460 для обнаружения микобактерий [64]. Как и BACTEC 460 или другие жидкие питательные среды, ESP II рекомендуется использовать в сочетании с другим методом культивирования, а не как отдельную систему. ESP II плюс BACTEC 460 дали самую высокую скорость восстановления микобактерий; однако в большинстве лабораторий такая комбинация, вероятно, будет дорогостоящей [64].

В последние годы масс-спектрометрия (МС) показала высокую эффективность в идентификации бактерий в рутинной клинической работе [132, 133].Времяпролетная МС с лазерной десорбцией/ионизацией с использованием матрицы (MALDI-TOF) была представлена ​​в 1980-х годах [134], а в 2018 году Цао и его коллеги [135] провели систематический обзор и метаанализ, чтобы подтвердить ее точность в выявление микобактерий. Авторы сообщили, что этот метод может точно идентифицировать 92 % из М. туберкулез изолятов. Кроме того, несколько других исследований подтвердили, что MALDI-TOF MS демонстрирует хорошую чувствительность при идентификации М.туберкулез [136–138]. Однако этот метод не позволяет дифференцировать виды микобактерий с высоким генетическим сходством [139]. В любом случае MALDI-TOF MS считается многообещающим диагностическим методом, который потенциально ускоряет идентификацию медленно растущих видов микобактерий, а также может идентифицировать лекарственно-устойчивые штаммы . М. туберкулез штаммов [140]. Недостатком МС для широкого использования в диагностике туберкулеза, помимо вышеперечисленных преимуществ, является его высокая стоимость, особенно при его внедрении в странах с низким уровнем дохода.

Использование секвенирования ДНК началось в 1970-х годах, когда Фредерик Сэнгер разработал метод обрыва цепи [141]. Однако, несмотря на свое развитие, метод Сэнгера в то время имел ограничения, которые делали невозможным получение большого объема данных при низких затратах. С тех пор появились научные достижения в технике секвенирования, что привело к появлению секвенаторов нового поколения [142]. Полногеномное секвенирование (WGS) занимает центральное место в эпидемиологических исследованиях туберкулеза из-за его лучшего разрешения и экономической эффективности по сравнению с традиционными подходами к типированию.Многочисленные систематические обзоры эффективности этого метода были опубликованы в 2016 и 2017 годах в нескольких условиях, что указывает на скорость, с которой этот предсказанный диагностический инструмент стал популярным в последнее время [143–145]. В одном систематическом обзоре авторы выявили, что WGS обладает средней чувствительностью и специфичностью для выявления лекарственно-устойчивых форм М. туберкулез штаммов 98 и 97 % для RMP и 97 и 96 % для INH соответственно [145]. Однако Witney и коллеги [146] сообщили, что WGS может давать ложноположительные результаты, когда полиморфизм возникает в областях, коррелирующих с резистентностью к RMP. В другом исследовании авторы пришли к выводу, что еще многое предстоит узнать о происхождении растущего генетического разнообразия, которое влияет на интерпретацию понимания М. туберкулез в каждой среде, а группам общественного здравоохранения и исследователям следует объединить эпидемиологические, клинические данные и данные WGS для усиления исследований передачи ТБ [144]. Наконец, кроме отсутствия прямого сравнения в М. туберкулез изолятов исследование показало, что WGS обладает большей дискриминационной способностью, чем обычное генотипирование, и выявляет случаи передачи, пропущенные эпидемиологическими исследованиями [143].

Хотя этот метод обладает высокой чувствительностью, его внедрению в клиническую лабораторию препятствуют два фактора: (i) необходимость роста бактерий для получения определенного количества ДНК, необходимого для анализа, и (ii) высокая стоимость обслуживания системы . Одна из основных проблем WGS в диагностике М. туберкулез — прямое секвенирование образцов мокроты (). В 2015 году в исследовании использовался метод биотинилированной РНК, специально разработанный для обнаружения М.туберкулез геномов непосредственно из мокроты больных туберкулезом [147]. В 2018 году ВОЗ опубликовала рекомендации по использованию этой технологии для человек. М. туберкулез комплексной диагностики и для выявления мутаций, связанных с лекарственными препаратами [148].

Нетрадиционные и новые методы диагностики туберкулеза: осуществимость и применимость в полевых условиях

Реферат

Туберкулез (ТБ) остается одной из основных причин смерти от одного инфекционного агента во всем мире.Серьезную озабоченность в борьбе с ТБ вызывает появление лекарственной устойчивости. Поскольку от некоторых штаммов Mycobacterium tuberculosis с множественной лекарственной устойчивостью не существует лекарства, существует опасение, что они могут распространиться по всему миру, что подчеркивает необходимость дополнительных мер контроля, таких как новые средства диагностики, более совершенные лекарства для лечения и более эффективные вакцина.

Легочный туберкулез можно диагностировать по его симптомам, рентгенографии грудной клетки, микроскопии мазка мокроты и культивированию M.tuberculosis , который считается золотым стандартом. Недавние достижения в области молекулярной биологии и молекулярной эпидемиологии, а также лучшее понимание молекулярных основ лекарственной устойчивости при ТБ предоставили новые инструменты для быстрой диагностики; однако высокая стоимость большинства этих методов и потребность в сложном оборудовании и квалифицированном персонале препятствуют их внедрению на постоянной основе, особенно в странах с низким уровнем дохода.

Другие предложенные нетрадиционные диагностические подходы включают поиск биохимических маркеров, обнаружение иммунологического ответа и раннее выявление M.tuberculosis методами, отличными от подсчета колоний.

В настоящей статье будут рассмотрены некоторые из этих подходов и обсуждена возможность их реализации в диагностических лабораториях.

Туберкулез (ТБ) остается одной из основных причин смерти от одного инфекционного агента во всем мире. В общей сложности 99% из примерно двух миллионов смертей и 95% из более чем восьми миллионов новых случаев ежегодно приходится на страны со средним и низким уровнем дохода.Согласно отчету Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) 1, за 2002 г. глобальная заболеваемость составила 8,8 миллиона новых случаев, включая 3,9 миллиона пациентов с положительным мазком. На 22 страны с высоким бременем приходится 80% этих случаев. Эта ситуация усугубляется пандемией ВИЧ, поскольку риск смерти у ВИЧ-инфицированных пациентов с ТБ в два раза выше, чем у ВИЧ-инфицированных пациентов без ТБ 2. По оценкам, 12 миллионов пациентов коинфицированы ВИЧ и Mycobacterium tuberculosis как 2000 г., причем большинство из них проживает в странах Африки к югу от Сахары и Юго-Восточной Азии.

Серьезную озабоченность в борьбе с этим заболеванием вызывает появление лекарственной устойчивости (ЛУ), поскольку не существует лекарства от некоторых штаммов М. мир. ЛУ была обнаружена во всех обследованных странах и регионах, особенно в Восточной Европе, а новые районы с высокой распространенностью МЛУ-ТБ включают Китай и Иран. 3. Краткосрочный курс лечения под непосредственным наблюдением (ДОТС), стратегия лечения, одобренная ВОЗ, эффективен в предотвращении возникновения ДР; однако на практике только 27% больных туберкулезом фактически получают DOTS 4, что подчеркивает необходимость дополнительных мер контроля, таких как новые диагностические инструменты, более эффективные лекарства или даже более эффективная вакцина.

Легочный ТБ, наиболее важный вид ТБ с точки зрения общественного здравоохранения, может быть диагностирован по его симптомам, рентгенографии органов грудной клетки, микроскопии мазка мокроты и путем культивирования M. tuberculosis . Однако процент пациентов не подтверждается бактериологически и диагностируется только на основании сильного клинического подозрения и реакции на противотуберкулезные препараты 5.

Золотым стандартом диагностики ТБ является культивирование M.tuberculosis .Это может быть выполнено на различных образцах, таких как мокрота и бронхиальные смывы, а также на других нелегочных образцах. Он гораздо более чувствителен, чем микроскопия, и позволяет извлекать бактерии для других исследований, таких как определение чувствительности к лекарствам и генотипирование. В некоторых случаях диагностика ТБ становится еще более проблематичной из-за ряда факторов, связанных с иммуносупрессией у больных, как это происходит у ВИЧ-инфицированных лиц, в случае латентной инфекции или внелегочного ТБ.Из-за неспецифической клинической картины диагностика туберкулеза также проблематична у детей.

Недавние достижения в области молекулярной биологии и прогресс в понимании молекулярных основ ЛУ М.tuberculosis предоставили новые инструменты для его экспресс-диагностики молекулярными методами 6. Однако высокая стоимость большинства этих методов, и их потребность в сложном оборудовании или высококвалифицированном персонале препятствуют их внедрению на регулярной основе, особенно в странах с низким уровнем дохода 7. Другие недавно предложенные нетрадиционные подходы включают поиск биохимических маркеров, обнаружение иммунологического ответа и раннее обнаружение M. tuberculosis методами, отличными от подсчета колоний. В настоящей статье будут рассмотрены некоторые из этих подходов и обсуждена возможность их реализации в диагностических лабораториях.

НОВЫЕ МЕТОДЫ ВЫЯВЛЕНИЯ ТУБЕРКУЛЕЗНОЙ ИНФЕКЦИИ

Поскольку одна треть населения земного шара инфицирована M.tuberculosis , было бы важно иметь возможность прогнозировать, у кого из латентно инфицированных разовьется заболевание, чтобы лечить их до того, как разовьется активный ТБ. Единственным доступным тестом для выявления инфекции до недавнего времени была туберкулиновая кожная проба (ТКП). Однако недавно были предложены альтернативные методы in vitro на основе Т-клеток 8–10. Анализ интерферона (IFN)-γ основан на том факте, что Т-клетки, сенсибилизированные туберкулезными антигенами, будут продуцировать IFN-γ при повторном воздействии микобактериальных антигенов. Затем предполагается, что высокий уровень продукции IFN-γ коррелирует с туберкулезной инфекцией 11. Первые анализы IFN-γ использовали очищенное производное белка (PPD) в качестве стимулирующего антигена; более поздние анализы используют антигены, специфичные для M.tuberculosis , такие как ранний секреторный антиген-мишень 6 (ESAT6) и белок культурального фильтрата 10 (CFP10) 8. Эти белковые антигены кодируются генами, расположенными в области различия 1 (RD1) генома M. tuberculosis и гораздо более специфичны, чем PPD, поскольку они не являются общими с M.bovis bacillus calette-guerin (BCG) или большинство нетуберкулезных микобактерий (NTM), за исключением M. marinum , M. sulzgai и M. kansassi .

В настоящее время существует два коммерческих теста IFN-γ: анализ QuantiFERON-TB (Cellestis Ltd., Карнеги, Австралия) и тест T SPOT-TB (Oxford Immunotec, Оксфорд, Великобритания). Эти тесты измеряют выработку IFN-γ Т-клетками в ответ на антигены ТБ с помощью ELISA и иммуноферментного анализа соответственно. QuantiFERON-TB, анализ цельной крови, первоначально использовал PPD в качестве антигена, а расширенная версия QuantiFERON-TB Gold использует ESAT6 и CFP10. Напротив, в анализе T SPOT-TB используются мононуклеарные клетки периферической крови и ESAT6 и CFP10 в качестве антигенов для измерения количества Т-клеток, продуцирующих IFN-γ. Кроме того, были предложены некоторые некоммерческие внутренние методы 12.

В целом проведенные исследования показали, что анализы IFN-γ с использованием антигенов RD1 имеют некоторые преимущества перед ТКП, такие как более высокая специфичность, лучшая корреляция с предыдущим воздействием М.tuberculosis и низкой перекрестной реакцией из-за вакцинации БЦЖ или предыдущего контакта с НТМ. Кроме того, было обнаружено, что анализы IFN-γ, в которых используются коктейли антигенов, а не отдельные антигены, имеют лучшую точность 13. Однако необходимы дополнительные исследования, чтобы оценить полезность этих тестов для лечения лиц с ослабленным иммунитетом, детей и у больных внелегочным туберкулезом.

НЕТРАДИЦИОННЫЕ И НОВЫЕ МЕТОДЫ БАКИЛЛОСКОПИИ

Во многих странах диагностика туберкулеза проводится путем микроскопического исследования окрашенного мазка мокроты по методу Циля-Нильсена (ZN).Несмотря на простоту выполнения и специфичность, ему не хватает чувствительности: для положительного результата требуется ≥10 000 бацилл·мл -1 мокроты. Было проведено несколько исследований для оценки полезности добавления химического реагента, такого как гипохлорит натрия, для разжижения и последующего концентрирования мокроты путем дальнейшего центрифугирования для повышения чувствительности. В большинстве этих исследований было получено статистически значимое улучшение доли положительных мазков или чувствительности; однако по ряду причин гипохлорит натрия, также известный как метод «отбеливания», во многих случаях не используется рутинно 14.Использование аурамина в качестве флуоресцентного метода для выявления микобактерий в мокроте было предложено много лет назад и впоследствии переоценено с использованием комбинации аурамина-О и родамина 15. Этот флуоресцентный метод связан с более высокой скоростью обнаружения, поскольку предметные стекла могут быть рассматривают при меньшем увеличении. В недавнем исследовании по проверке квалификации, проведенном в 167 лабораториях, аураминовый метод и/или аураминовый/родаминовый метод показали лучшие результаты, чем окрашивание ZN или его модификация Киньюна 16. Поэтому обычно считается, что флуоресцентному методу следует отдавать предпочтение перед Методы ЗН и Киньюна.Как правило, флуоресцентный метод следует использовать в лабораториях с большим количеством образцов. Однако это дороже, чем обычное окрашивание ZN, требующее флуоресцентного микроскопа 17.

НЕТРАДИЦИОННЫЕ И НОВЫЕ МЕТОДЫ КУЛЬТУРЫ

Культивирование M.tuberculosis из клинических образцов является золотым стандартом диагностики активного ТБ. Он может обнаружить 100 бацилл·мл -1 мокроты по сравнению с 5 000–10 000 бацилл·мл -1 , необходимыми для микроскопии 18. Он также предоставляет материал для дальнейшей идентификации и тестирования на чувствительность к лекарственным препаратам. Обычные методы культивирования основаны на средах на основе яиц и агара, таких как среда Левенштейна-Йенсена (LJ) и агар Миддлбрука 19, 20. После процедур обеззараживания и разжижения образцы мокроты инокулируются и инкубируются для морфологического роста, обычно происходит после нескольких недель инкубации. Идентификация M.tuberculosis осуществляется путем проведения нескольких дополнительных биохимических тестов 19, 21.Однако это трудоемко и требует от 3 до 8 недель для получения результатов.

Внедрение радиометрической системы BACTEC (BACTEC TB-460; Becton Dickinson, Sparks, MD, USA) в 1980-х годах стало прорывом, поскольку она позволила обнаружить M.tuberculosis за несколько дней по сравнению с неделями в традиционной питательные среды 22. Однако использование радиоизотопов и стоимость оборудования препятствуют их использованию на рутинной основе, за исключением справочных лабораторий, преимущественно в развитых странах. Несколько лет назад Becton Dickinson предложил другую систему, основанную на флуоресцентном обнаружении роста микобактерий. дно трубки. При инокуляции M.tuberculosis потребление растворенного кислорода вызывает флуоресценцию при освещении УФ-лампой. Система MGIT была тщательно протестирована в клинических условиях для обнаружения и выделения микобактерий.Бадак и др. . 24 сравнили систему MGIT с культуральной средой BACTEC TB-460 и LJ на 1441 клиническом образце. Из 178 выделенных изолятов 30 (17%) представляли собой M.tuberculosis с системой MGIT, из которых было выделено 28 (93%) по сравнению с 25 (83%), выделенными с помощью среды LJ. В другом многоцентровом исследовании Pfyffer et al . 25 проанализировали 1500 клинических образцов, обнаружив в общей сложности 180 видов микобактерий, включая 113 комплексных изолятов M.tuberculosis .Комбинация MGIT и BACTEC выявила 171 (95%) всех изолятов со временем до обнаружения M.tuberculosis 9,9 дней по сравнению с 9,7 днями с BACTEC и 20,2 днями с твердой средой, доказывая, что MGIT был ценной альтернативой радиометрическая система 25.

Совсем недавно система MGIT была полностью автоматизирована и преобразована в систему BACTEC MGIT 960, которая представляет собой нерадиометрическую неинвазивную систему с пробирками, инкубируемыми в компактной системе, которая автоматически считывает данные.В многоцентровом исследовании система BACTEC MGIT 960 сравнивалась с радиометрической системой BACTEC TB-460 и средой LJ. При анализе 2576 образцов наилучший выход был получен при использовании BACTEC TB-460 (201 изолят) по сравнению со 190 изолятами при использовании BACTEC MGIT 960 и 168 изолятами при использовании среды LJ 26. В другом исследовании Idigoras et al . 27 сравнивали систему BACTEC MGIT 960 по чувствительности и времени обнаружения микобактерий на плотной среде и микроскопию на твердой среде. Чувствительность каждой среды по сравнению со всеми средами вместе взятыми для роста М.tuberculosis составлял 93%, 76%, 79% и 75% для MGIT 960, Middlebrook 7h21, LJ и Coletsos соответственно. Время обнаружения с помощью системы MGIT 960 составило 12,7 дней по сравнению с >20 днями с использованием твердых сред. В целом как автоматизированная, так и ручная системы MGIT показали схожие результаты, сопоставимые с результатами, полученными ранее с помощью радиометрического метода BACTEC. До сих пор отсутствуют исследования операционной эффективности и экономической эффективности, в которых оценивалось бы реальное влияние этих систем на страны с низким и средним уровнем дохода.

Другие недавние разработки для быстрого обнаружения микобактерий включают ручные методы, такие как MB-Redox (Heipha Diagnostika Biotest, Гейдельберг, Германия), основанные на восстановлении индикатора соли тетразолия в жидкой среде 28, и автоматизированные методы на основе оборудования, такие как MB /BacT (Organon Teknika, Boxtel, Holland), основанная на колориметрическом обнаружении диоксида углерода, образующегося при росте микобактерий в закрытой системе 29, и культуральной системе ESP II (Trek Diagnostics, Inc. , Кливленд, Огайо, США) на основе обнаружения изменений давления в культуральной среде запечатанного флакона во время роста микобактерий 30. Эти системы не получили широкого распространения за пределами лабораторий в промышленно развитых странах.

Другой недавней и интересной разработкой является анализ на основе фагов, основанный на способности M.tuberculosis поддерживать рост заражающего микобактериофага. Количество эндогенных фагов, представляющее исходное количество жизнеспособных М.tuberculosis , затем определяется в быстрорастущих микобактериях, таких как M. smegmatis 31. Анализ FASTPlaque TB (BIOTEC, Ипсвич, Саффолк, Великобритания), коммерческий тест, основанный на этой технологии, был предложен в качестве теста что при использовании в сочетании с микроскопией мазка можно увеличить диагностику ТБ 32. Было проведено несколько исследований для оценки этой технологии. Альберт и др. . 32 в сравнительном исследовании с микроскопией аураминового мазка и средой LJ в 1692 образцах мокроты было обнаружено, что тест FASTPlaque TB выявляет ТБ в 75% случаев с подтвержденным посевом и в 70% случаев с клиническим диагнозом ТБ со специфичностью 98. 7% и 99,0% соответственно. Напротив, микроскопия мазка с концентрированным аурамином имела чувствительность 63,4% и 61,3% и специфичность 97,4% и 97,3% в культурально-подтвержденных и всех случаях соответственно 32.

Другое исследование, проведенное в Пакистане, сравнило FASTPlaque TB с микроскопией кислотоустойчивых мазков и культурой в среде LJ 33. Для FASTPlaque TB они обнаружили чувствительность и специфичность 87,4 и 88,2% соответственно в образцах с положительным мазком и чувствительность и специфичность 67.1 и 98,4% соответственно в образцах с отрицательным мазком. Как обсуждалось Takiff и Heifets34, наиболее важным результатом этих исследований было то, что FASTPlaque TB был способен обнаруживать микобактерии в 50–65% образцов с отрицательным мазком со специфичностью 98%, и что комбинация теста с мазком микроскопия подтвердила наличие M.tuberculosis в 80–90% культур-позитивных образцов. Тем не менее, около 13% образцов с положительным мазком не были обнаружены тестом FASTPlaque TB, а в образцах с отрицательным мазком 8–19% образцов дали ложноположительный результат.

Совсем недавно, в сравнительном исследовании теста FASTPlaque TB и оригинального внутреннего метода, проведенного в Замбии, Mbulo et al . 35 обнаружили, что ни один из методов не может превзойти прямую микроскопию в образцах мокроты. Кроме того, с помощью теста FASTPlaque TB была получена степень контаминации 40%, что свидетельствует о том, что анализы на основе фагов не дают никаких преимуществ для диагностики ТБ в этих условиях. Некоторые другие фаговые технологии были предложены для быстрого обнаружения M.туберкулез 36, 37; однако они не были тщательно оценены в клинических условиях в высокоэндемичных странах.

НЕТРАДИЦИОННЫЕ МЕТОДЫ И НОВЫЕ МЕТОДЫ ИДЕНТИФИКАЦИИ

Идентификация микобактерий традиционно основывалась на нескольких биохимических тестах и ​​фенотипических характеристиках, таких как скорость роста и пигментация, которые позволяют отнести один конкретный штамм к группе четко определенных микобактерий. Несмотря на то, что они просты в выполнении и не требуют сложного оборудования, они, тем не менее, трудоемки и громоздки в выполнении, что во многих случаях задерживает быструю и правильную идентификацию микобактерий. Тем не менее, они остаются и составляют основную процедуру идентификации в клинических лабораториях, особенно в условиях ограниченных ресурсов. Профили миколевой кислоты микобактерий также были предложены в качестве быстрой альтернативы для идентификации. Это может быть выполнено с помощью тонкослойной хроматографии и высокоэффективной жидкостной хроматографии, которая имеет то преимущество, что ее можно выполнить за несколько часов, она относительно недорога и может идентифицировать широкий спектр видов микобактерий. Первоначальные вложения в стоимость оборудования составляют его главный недостаток как метода идентификации 38.

Недавно для идентификации микобактерий были внедрены молекулярные методы. Первым из таких доступных методов был AccuProbe (Gen-Probe, Inc., Сан-Диего, Калифорния, США), коммерческий метод, основанный на видоспецифичных ДНК-зондах, которые гибридизуются с рРНК для идентификации нескольких важных микобактерий, включая M.tuberculosis комплекс, M. avium , M.intracellulare , M.avium комплекс, M.kansasii и M.гордона . Зонды были всесторонне оценены в клинических условиях и показали очень хорошую чувствительность и специфичность, дающие результаты в течение ∼2 часов из образцов с положительным посевом 39.

Другие коммерчески доступные методы включают INNO-Lipa Mycobacteria (LiPA; Innogenetics, Гент, Бельгия) для одновременного обнаружения и идентификации микобактерий, включая комплекс M. tuberculosis и основанный на амплификации спейсерной области 16S–23S в сочетании с анализ линия-зонд обратной гибридизации.Он был оценен с помощью ДНК-зондов, обычных биохимических тестов и ПЦР-анализа полиморфизма длины рестрикционных фрагментов, показавшего четкие результаты 40, 41

Совсем недавно был представлен анализ GenoType Mycobacterium (Hain Diagnostika, Nehren, Germany) для идентификации из клинических образцов и жидких культур. Он основан на амплификации спейсерной области рибосомной ДНК 16S–23S с последующей гибридизацией с 16 специфическими олигонуклеотидными зондами; его преимущество заключается в обнаружении смешанных микобактериальных инфекций 42.

Также была предложена коммерческая система, предназначенная в первую очередь для культурального подтверждения, флуоресцентной гибридизации нуклеиновой кислоты ТБ пептида in situ (Dako, A/S Glostrup, Дания). Он основан на зондах пептидных нуклеиновых кислот, которые связываются с выбранными областями последовательностей 16S рРНК микобактерий, что позволяет различать туберкулезный и НТМ; обнаружение осуществляется с помощью флуоресценции гибридизации in situ с последующим микроскопическим исследованием 43. Он также был испытан на прямое обнаружение M.tuberculosis на образцах мокроты с положительным мазком и на фиксированных формалином биоптатах, залитых парафином 44.

Методы секвенирования на основе ПЦР в настоящее время широко используются во многих лабораториях для идентификации микобактерий. Они состоят из амплификации микобактериальной ДНК с родоспецифичными праймерами с последующим секвенированием амплифицированных продуктов. Идентификацию проводят путем сравнения последовательностей с последовательностями эталонных штаммов 45, 46. Наиболее часто используемой мишенью был ген, кодирующий 16S рРНК, хотя были охарактеризованы и другие гены-мишени 47, 48.

ПЦР-анализ полиморфизма длины рестрикционных фрагментов (PRA) гена, кодирующего белок теплового шока hsp65, также использовался для быстрой идентификации микобактерий, включая M. tuberculosis 49. В нескольких недавних исследованиях PRA показал хорошие результаты по сравнению с обычные методы 50, 51.

Совсем недавно ДНК-микрочипы или массивы олигонуклеотидов высокой плотности стали применяться для видовой идентификации микобактерий. Метод основан на гибридизации флуоресцентно меченных амплифицированных продуктов ПЦР, полученных из колоний микобактерий, с матрицами ДНК, содержащими нуклеотидные зонды 52, 53.

В целом, молекулярные методы имеют ряд преимуществ по сравнению с обычными методами быстрого обнаружения и идентификации M. tuberculosis , такие как время получения результатов, надежность, воспроизводимость и возможность улучшить ведение пациентов. Однако из-за потребности в дополнительном оборудовании и обученном персонале большинство этих методов еще не получили легкого доступа к рутинным процедурам, выполняемым в клинической микобактериологической лаборатории, особенно в странах с низким уровнем дохода, где ТБ является более серьезной проблемой здравоохранения.

НЕТРАДИЦИОННЫЕ И НОВЫЕ МЕТОДЫ ТЕСТИРОВАНИЯ НА ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ К ЛЕКАРСТВЕННЫМ СРЕДСТВАМ

Методы определения лекарственной чувствительности (ТЛЧ) включают метод пропорции, метод абсолютной концентрации и метод соотношения резистентности 19, 54. С внедрением радиометрической системы BACTEC и ее адаптацией для проведения ТЛЧ M. tuberculosis 22, 55 эти четыре метода считались золотым стандартом. 56. Длительное время обработки (TAT) и трудоемкость этих методов стимулировали поиск альтернативных и более быстрых методов. Эти новые методы можно разделить на генотипические и фенотипические.

Генотипические методы

Эти методы ищут генетические детерминанты резистентности, а не фенотип резистентности. Как правило, они состоят из двух основных этапов: этап молекулярной амплификации нуклеиновых кислот, такой как ПЦР для амплификации участков генома M. tuberculosis , о которых известно, что они изменены в резистентных штаммах, и второй этап оценки амплифицированных продуктов на наличие специфических мутаций. коррелирует с сопротивлением.Эти методы имеют несколько преимуществ: более быстрое ТАТ (дни вместо недель), отсутствие необходимости выращивания организма, возможность прямого применения к клиническим образцам, снижение рисков биологической опасности и возможность автоматизации. К сожалению, у них есть и недостатки, в том числе проблемы с ингибиторами при применении этих методов непосредственно к клиническим образцам.

Секвенирование ДНК

продуктов, амплифицированных с помощью ПЦР, было наиболее широко используемым методом, ставшим золотым стандартом. Это выполнялось как вручную, так и автоматическими процедурами, хотя последние использовались чаще всего 57–59. Он был тщательно использован для характеристики мутаций в гене rpoB в штаммах, устойчивых к рифампицину, и для выявления мутаций, ответственных за устойчивость к другим противотуберкулезным препаратам 57, 60, 61. Для выявления устойчивости к антибиотикам было предложено несколько других генотипических методов, таких как как ПЦР-конформационный полиморфизм одной цепи 57, ПЦР-образование гетеродуплекса 62 и анализы твердофазной гибридизации.Кроме того, Line Probe Assay (LiPA-Rif), основанный на гибридизации амплифицированной ДНК культивируемых штаммов или клинических образцов с десятью зондами, охватывающими центральную область гена rpoB M.tuberculosis , иммобилизованных на нитроцеллюлозной полоске 63, и тест GenoType mycobacterium tuberculosis (MTB) DR (Hain, Германия) – коммерческая система для выявления комплекса М.tuberculosis и его устойчивости к рифампицину и изониазиду из образцов культур, основанная на выявлении наиболее частых мутаций в гены rpoB и katG соответственно. Анализ LiPA-Rif был оценен в различных условиях и дал обнадеживающие результаты 64.

ДНК-микрочипы

и методы ПЦР в реальном времени также были предложены в качестве альтернативных методов обнаружения лекарственной устойчивости; первое все еще находится за пределами досягаемости клинико-диагностических лабораторий, а последнее все чаще оценивается с многообещающими результатами 65, 66.

Фенотипические методы

Новые фенотипические методы оценивают ингибирование М.tuberculosis в присутствии антибиотиков путем выявления более ранних признаков роста с использованием различных технологий, например, измерения метаболизма с помощью цветовых индикаторов или потребления кислорода, ранней визуализации микроколоний и применения фагов.

Система MGIT в ее ручной или автоматизированной версии, основанная на измерении потребления кислорода, прошла тщательную оценку ТЛЧ M. tuberculosis к препаратам первого и второго ряда, показав хорошее соответствие методу пропорции золотого стандарта. 67–69.

Еще одна коммерческая система E-test (AB BIODISK, Solna, Швеция), основанная на полосках с пропитанными градиентами антибиотиков для определения чувствительности к лекарственным средствам, позволяет считывать минимальные ингибирующие концентрации непосредственно на чашках с агаром. В нескольких исследованиях этот тест оценивался по сравнению с пропорциональным методом, обнаружив совпадение >90 % 70. Два других коммерческих и автоматизированных метода ТЛЧ — это система MB/BacT (Organon Technika) и культуральная система II ESP (Accumed International, Чикаго). , Иллинойс, США).Обе системы полагаются на тяжелое оборудование и также были оценены в нескольких исследованиях 71, 72.

Среди недавно примененных собственных методов ТЛЧ M.tuberculosis упоминания заслуживают три типа методов: 1) анализы на основе фагов; 2) колориметрические методы; и 3) анализ восстановления нитратов.

Применение фаговых анализов для ТЛЧ, либо в качестве исходного внутреннего метода 73, либо в качестве коммерческого анализа 74, применяется для выявления устойчивости к рифампицину M. tuberculosis как в культуральных образцах, так и непосредственно из мокроты. Результаты доступны в среднем через 2 дня с соответствием> 95% по сравнению с методом пропорции золотого стандарта.

Колориметрические методы основаны на уменьшении количества окрашенного индикатора, добавленного в культуральную среду после того, как M. tuberculosis подверглись воздействию in vitro различных антибиотиков. Резистентность выявляют по изменению окраски индикатора, которая прямо пропорциональна количеству жизнеспособных микобактерий в среде 75.Различные показатели были оценены для ТЛЧ к препаратам первого и второго ряда, что дало сопоставимые результаты и согласуется с методом пропорции золотого стандарта 76–78.

Анализ восстановления нитратов представляет собой очень простой метод, основанный на способности M.tuberculosis восстанавливать нитраты до нитритов, что обнаруживается путем добавления химического реагента в культуральную среду. М.tuberculosis культивируют в присутствии антибиотика и измеряют его способность восстанавливать нитраты через 10 дней инкубации.Резистентные штаммы будут снижать содержание нитратов, проявляющееся в розово-красной окраске среды, в то время как восприимчивые штаммы теряют эту способность, поскольку они ингибируются антибиотиком, оставляя среду бесцветной 79. препараты второго ряда с хорошими результатами 80, 81. Дополнительным преимуществом этого метода является использование того же формата и питательной среды, что и в методе стандартной пропорции.

В своем нынешнем формате колориметрические методы кажутся более подходящими для референтных лабораторий с оборудованием и условиями биобезопасности для работы с небольшими объемами жидких культур в формате микропланшетов.Анализ на основе фагов можно применять в микобактериологических диагностических лабораториях с соответствующим обученным персоналом, в то время как анализ на восстановление нитратов идеально подходит для использования в диагностических лабораториях ТБ, регулярно выполняющих ТЛЧ.

В таблице 1⇓ показаны основные методы ТЛЧ с точки зрения точности, стоимости, простоты использования и оцениваемых препаратов.

Таблица. 1—

Характеристики нескольких методов определения лекарственной чувствительности

МЕТОДЫ АМПЛИКАЦИИ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ

Значительным улучшением в диагностике ТБ стала разработка нескольких методов амплификации нуклеиновых кислот (АНК), таких как ПЦР, которые прошли всестороннюю оценку для быстрой диагностики ТБ.В последние годы было разработано и протестировано несколько внутренних методов ПЦР, и было опубликовано множество исследований по применению ПЦР для диагностики туберкулеза 82, 83. Эти исследования показали, что отсутствие специфичности было большей проблемой, чем отсутствие чувствительность, и это не было связано с использованием какого-либо конкретного метода. Также было обнаружено, что многие лаборатории не использовали надлежащий контроль качества 84, 85.

В настоящее время существует два одобренных коммерческих метода NAA: амплифицированный M. прямой тест на туберкулез (AMTD) (Gen-Probe) и тест Amplicor M. tuberculosis (Amplicor; Roche Diagnostic Systems, Inc., Нью-Джерси, США). MTD основан на методе, описанном Kwoh и др. . 86 с использованием амплификации рибосомных транскриптов 16S, которые выявляются с помощью ДНК-зонда 87. Amplicor представляет собой ДНК-тест, который амплифицирует ген 16S рРНК с использованием родоспецифичных праймеров и обнаруживает в колориметрической реакции 88. Оба метода были одобрены для прямое обнаружение М.tuberculosis в образцах из дыхательных путей с положительным мазком. Совсем недавно расширенный MTD также был одобрен для отрицательных по мазку образцов из дыхательных путей пациентов с подозрением на мазок 89. В нескольких исследованиях оценивали оба теста для обнаружения M.tuberculosis в клинических образцах 90. По сравнению с культурой и клиническим статусом, эти методы имеют высокую чувствительность и специфичность в образцах с положительным мазком, но более низкие значения получаются в образцах с отрицательным мазком, что исключает их использование в качестве скрининга для исключения заболевания. По этой причине рекомендуется всегда интерпретировать молекулярные методы в сочетании с клиническими данными пациента 91.

Две другие методики, недавно представленные для диагностики ТБ, включают ПЦР в реальном времени и методы амплификации методом смещения цепи. Технология ПЦР в реальном времени основана на гибридизации амплифицированных нуклеиновых кислот с флуоресцентно-мечеными зондами, охватывающими интересующие области ДНК и контролируемыми внутри термоциклеров 92. Флуоресцентный сигнал увеличивается прямо пропорционально количеству амплифицированного продукта в реакционной пробирке.

ПЦР в реальном времени оценивалась в нескольких исследованиях культурального материала, а совсем недавно — в клинических образцах. Чувствительность в этих исследованиях колебалась в пределах 71–98%, а специфичность близка к 100% 93. Основным преимуществом ПЦР в реальном времени является скорость получения результатов, 1,5–2  часа после выделения ДНК, и снижение риска загрязнения, так как и реакция, и обнаружение происходят в одной пробирке. Необходимы дальнейшие исследования, чтобы подтвердить реальную ценность этой новой методологии в клинических условиях.

Метод амплификации со смещением цепей используется в тесте BDProbe Tec MTB, полуавтоматической системе, разработанной Becton Dickinson для быстрого обнаружения M. tuberculosis в образцах из дыхательных путей. Он основан на ферментативной репликации последовательностей-мишеней вставочной последовательности IS6110 и гена 16S рРНК. Амплифицированные продукты обнаруживаются с помощью люминометра 94. Тест BDProbe Tec MTB оценивался в нескольких исследованиях; Пфайффер и др. .95 в исследовании 799 респираторных образцов получили общую чувствительность 97,6% и специфичность 95%. Однако основными недостатками были наличие ложноположительных результатов, которые были уменьшены после того, как персонал приобрел опыт работы с этим методом, а время, необходимое для подготовки образца, составляло ≥2 часов. Усовершенствованная версия этой системы, BDProbe Tec ET (Becton Dickinson), недавно была оценена на образцах из дыхательных путей в клинических условиях 96. Для подтверждения этих предварительных результатов необходимы исследования с участием большего числа пациентов с положительным результатом на ТБ.В таблице  2⇓ приведены значения чувствительности и специфичности основных тестов NAA.

Таблица. 2—

Чувствительность и специфичность методов амплификации нуклеиновых кислот в различных образцах #

МЕТОДЫ МОЛЕКУЛЯРНОЙ ЭПИДЕМИОЛОГИИ

Методы фингерпринтинга ДНК

включают типирование полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПДРФ) как наиболее часто используемый метод в изучении эпидемиологии и патогенеза туберкулеза. Он основан на вставочной последовательности IS6110, присутствующей в M.tuberculosis и принят в качестве стандартного метода типирования 97. ПДРФ использовался для дифференциации штаммов M. tuberculosis , для мониторинга передачи, для определения кластеров штаммов в популяциях, для дифференциации экзогенного повторного заражения и рецидива, для выявления лабораторных перекрестное загрязнение, для изучения молекулярной эволюции на уровне видов и для лучшего понимания патогенеза заболевания.

Другим широко используемым методом молекулярного типирования является спейсерное олиготипирование или сполиготипирование, которое представляет собой простой метод, позволяющий одновременно обнаруживать и типировать M.tuberculosis в клинических образцах. Он основан на полиморфизме хромосомного локуса DR, который содержит переменное количество коротких прямых повторов, перемежающихся неповторяющимися спейсерами. Большинство клинических изолятов демонстрируют уникальные паттерны гибридизации, в то время как штаммы из кластера имеют один и тот же паттерн 98. Для этой цели также использовалось типирование полиморфных GC-богатых повторяющихся последовательностей (PGRS) 99. PGRS является наиболее распространенным повторяющимся элементом в M .tuberculosis , который присутствует во многих копиях и состоит из тандемных повторов GC-богатой последовательности из 96 пар оснований (bp).Типирование PGRS в основном используется в качестве вторичного метода типирования штаммов с низким числом копий IS6110.

Совсем недавно были разработаны два других метода молекулярного типирования на основе ПЦР: анализ геномных делеций и типирование микобактериальных вкрапленных повторяющихся единиц (MIRU) 100, 101. Анализ геномных делеций использует ДНК-микрочипы для обнаружения геномных делеций относительно эталонного штамма . М. туберкулез . Его можно использовать для получения информации об эпидемиологии, эволюции генома и структуре популяции M.туберкулез .

Типирование MIRU основано на изменчивости количества тандемных повторов, которые представляют собой элементы размером 40–100  п.н., рассеянные в межгенных областях генома M. tuberculosis ; всего у M.tuberculosis идентифицирован 41 локус, 12 из них проявляют полиморфизм. Этот метод типирования сравнивали с типированием RFLP и сполиготипированием, создавая более четкие шаблоны 102. В настоящее время считается, что методы на основе MIRU в конечном итоге заменят классическое типирование IS6110 RFLP после того, как будет разработан стандартизированный протокол 103.

СЕРОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ТУБЕРКУЛЕЗА

Важным вопросом борьбы с ТБ является возможность диагностики и лечения латентной инфекции. Традиционным методом оценки этого является TST. PPD, используемый в TST, использовался в течение 50 лет для диагностики ТБ в клинике и для скрининга в программах борьбы с ТБ в эпидемиологических целях 8. PPD представляет собой грубую смесь антигенов с тем ограничением, что некоторые из них являются общими для M. туберкулез , М.bovis BCG и некоторые NTM. Из-за этого ТКП имеет низкую специфичность в популяциях, вакцинированных БЦЖ, и у тех, кто ранее подвергался воздействию НТМ 11. Чувствительность также может быть низкой у лиц с ослабленным иммунитетом, таких как ВИЧ-инфицированные.

Для серологической диагностики ТБ были предложены различные виды анализов крови 5, 104, 105. Первые исследования с использованием частично очищенных антигенов позволили выявить антимикобактериальные антитела у больных ТБ, но тесты показали низкую специфичность 106. Использование высокоочищенных нативных или рекомбинантных антигенов повышало специфичность, но снижало чувствительность. Также было обнаружено, что степень гуморального ответа на ТБ неоднородна 107; по этой причине было предложено использовать серодиагностические тесты на основе смесей нескольких антигенов M. tuberculosis 108. Однако до сих пор ни один из этих тестов не показал достаточной прогностической способности, чтобы оправдать их рутинное использование в качестве диагностических тестов на ТБ. .

ДРУГИЕ НЕМИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ

Среди немикробиологических диагностических методов, применяемых при туберкулезе, обнаружение аденозиндезаминазы (АДА) получило наибольшее внимание как непрямой метод диагностики.АДА представляет собой фермент, присутствующий в большинстве клеток, но было обнаружено, что его уровень увеличивается при туберкулезном плевральном выпоте (ТПЭ). Диагностика ТПЭ затруднена из-за низкой чувствительности прямой микроскопии и посева. Кроме того, лимфоцитарные экссудаты могут возникать при других заболеваниях, таких как злокачественные новообразования и системная красная волчанка 109. Определение уровня АДА считается многообещающим маркером, поскольку его можно легко, быстро и недорого выполнить с помощью колориметрического метода. Ли и др. .110 показали, что уровни АДА, обнаруженные в других группах пациентов, не превышали диагностический пороговый уровень для ТПО. В других исследованиях оценивалась полезность измерения уровня АДА в спинномозговой жидкости для диагностики туберкулезного менингита и в сыворотке крови для диагностики туберкулеза легких. Эти исследования показали, что измерение уровня АДА не является хорошим маркером для постановки диагноза 111, 112.

Совсем недавно комбинированное использование ПЦР и АДА для диагностики ТПЭ в регионе с высокой распространенностью ТБ позволило подтвердить заболевание у 14 из 16 положительных пациентов.Согласно рекомендациям, АДА следует использовать не для замены существующих методов диагностики, а в качестве дополнительного инструмента диагностики 113.

ВНЕДРЕНИЕ И ПЕРСПЕКТИВЫ НОВЫХ МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ

Было предложено несколько новых диагностических подходов к ТБ, и в ближайшем будущем наверняка появится еще несколько. Наиболее важное соображение, которое необходимо учитывать при выборе новых методов диагностики, заключается в том, что они должны быть такими же или лучше, чем существующие в настоящее время инструменты, и в то же время быть подходящими для стран с низким уровнем ресурсов, где бремя ТБ является более значительным.Например, методы NAA, особенно коммерческие наборы, преимущество которых состоит в том, что они хорошо стандартизированы и воспроизводимы, показали высокую чувствительность и специфичность в образцах с положительным мазком; однако эти значения намного ниже в образцах с отрицательным мазком или во внелегочных образцах, где полезность этих новых инструментов была бы гораздо более желательной. Еще одним важным соображением является стоимость, поскольку при нынешних ценах эти коммерческие наборы все еще недоступны для большинства диагностических лабораторий ТБ в странах с низким уровнем ресурсов. Другие молекулярные процедуры даже требуют использования сложного дорогостоящего оборудования и высококвалифицированного персонала, которые доступны только в развитых странах или в центральных лабораториях в странах, эндемичных по ТБ. До тех пор, пока эти ограничения не будут должным образом устранены, дорогостоящие коммерческие наборы, использующие методы NAA, будут по-прежнему доступны только развитым странам или академическим и исследовательским лабораториям с соответствующим финансированием, но далеко от программ борьбы с ТБ.

Что касается серологических подходов к диагностике ТБ, то ни один из предложенных до сих пор тестов с использованием различных микобактериальных антигенов не показал достаточной прогностической способности, чтобы оправдать их рутинное использование в качестве диагностического теста на ТБ.По-видимому, тесты с использованием коктейля антигенов, а не одного более специфичного антигена, дали лучшие результаты. Многообещающими являются новые тесты на основе ELISA, такие как тест QuantiFERON-TB и анализ T SPOT-TB, которые измеряют выработку IFN-γ активированными Т-клетками; однако необходимы дополнительные исследования в различных условиях, чтобы оценить их полезность в качестве диагностического инструмента в определенных группах населения, например, у лиц с ослабленным иммунитетом в результате ВИЧ-инфекции или других заболеваний, а также у детей. Стоимость этих тестов, поскольку они также доступны в виде коммерческого комплекта, повлияет на возможность их проведения на регулярной основе в будущем.

Тесты на основе фагов также оценивались в различных условиях либо в виде коммерческого набора, либо в качестве внутреннего метода. Низкая чувствительность, полученная в некоторых из этих исследований, могла быть связана с низкой инфекционностью фагов, на которую также могут влиять возраст и состояние образцов 35. Напротив, в исследованиях, в которых фаговые методы показали повышенная чувствительность по сравнению с прямой микроскопией и культурой, объем используемого образца был до пяти раз больше, чем для культуры.Похоже, что в своем нынешнем формате фаговые тесты не готовы в качестве инструмента для улучшения диагностики ТБ. Тем не менее, они подходят для быстрого выявления устойчивости к рифампицину 73.

Многие исследования в поисках более новых и быстрых методов диагностики ТБ проводятся в надежде найти «волшебную пулю», позволяющую диагностировать ТБ в течение нескольких часов или на месте. Возможно, так быть не должно, и исследователи не должны исключать простые и прагматичные подходы, более близкие к тому, что можно реализовать в диагностических лабораториях ТБ в странах с высокой эндемичностью.Например, простой метод, описанный Mejia и др. . 114 и основанный на быстром обнаружении микроколоний M.tuberculosis под стандартным микроскопом, позволил обнаружить >60% положительных образцов в течение первых 10 дней, а через 2 недели >80% были положительными при микроконтроле. -метод колоний по сравнению с 10% на среде LJ. Те же авторы в отчете, включающем более 1800 клинических образцов, показали чувствительность 72% по сравнению со стандартным культивированием в среде LJ и пришли к выводу, что одновременное использование обеих сред повышает чувствительность обнаружения 115.Другие недавние подходы, такие как описанный Angeby et al . 79, использование восстановления нитратов следует изучить в качестве инструмента экспресс-диагностики. Питательные среды, включающие нитрат калия и рифампицин, можно использовать непосредственно в деконтаминированных образцах мокроты для одновременного обнаружения не только M. tuberculosis , но и бацилл, устойчивых к рифампицину. Тот же подход можно использовать с недавно описанными колориметрическими методами, включающими цветные индикаторы в среду и инокуляцией непосредственно обеззараженными образцами мокроты.

И последнее соображение заключается в том, что любой новый метод или подход, сложный или нет, коммерческий или внутренний, должен оцениваться в хорошо спланированных и контролируемых клинических испытаниях и тестироваться в высокоэндемичных условиях с низким уровнем ресурсов, где внедрение и использование эти методы более необходимы для улучшения борьбы с туберкулезом.

Сноски

  • Предыдущие статьи из этой серии: № 1: Cardona P-J, Ruiz-Manzano J.О природе Mycobacterium tuberculosis — латентные бациллы. Евро Респир J 2004; 24: 1044–1051. № 2: Rieder H. Ежегодный риск заражения Mycobacterium tuberculosis . Евро Респир J 2005; 25: 181–185. № 3: Митчисон Д.А. Лекарственная устойчивость при туберкулезе. Евро Респир J 2005; 25: 376–379. № 4: Ким С.Дж. Тестирование лекарственной чувствительности при туберкулезе: методы и достоверность результатов. Евро Респир J 2005; 25: 564–569. № 5: Длодло Р.А., Фудзивара П.И., Энарсон Д.А. Следует ли по-разному подходить к лечению и борьбе с туберкулезом у ВИЧ-инфицированных и неинфицированных? Евро Респир J 2005; 25: 751–757. № 6: Каминеро Дж.А. Ведение пациентов с множественной лекарственной устойчивостью туберкулеза и пациентов, находящихся на повторном лечении. Евро Респир J 2005; 25: 928–936. № 7: Дасгупта К., Мензис Д. Экономическая эффективность стратегий борьбы с туберкулезом среди иммигрантов и беженцев. Евро Респир J 2005; 25: 1107–1116. № 8: Мартин С. Мечта о вакцине против туберкулеза; новые вакцины улучшают или заменяют БЦЖ? Евро Респир J 2005; 26: 162–167.

  • Получено 26 апреля 2005 г.
  • Принято 28 апреля 2005 г.

Ссылки

  1. Всемирная организация здравоохранения. Глобальная борьба с туберкулезом: эпиднадзор, планирование, финансирование. Отчет ВОЗ. Женева, WHO/HTM/TB/2004.331, 2004

  2. Барнс П.Ф., Лейки Д.Л., Берман В.Дж.Туберкулез у больных ВИЧ-инфекцией. Infect Dis Clin North Am 2002; 16: 107–126.

  3. Всемирная организация здравоохранения. Устойчивость к противотуберкулезным препаратам в мире. Отчет № 2. Распространенность и тенденции. ВОЗ/CDS/ТБ/2000.278, 2000

  4. Onyebujoh P, Rook GAW. Туберкулез. Nat Rev Microbiol 2004;2:930–932.

  5. Chan ED, Heifets L, Iseman MD.Иммунологическая диагностика туберкулеза: обзор. Tuber Lung Dis 2000; 80: 131–140.

  6. Takiff H. Молекулярные механизмы лекарственной устойчивости Mycobacterium tuberculosis . In : Bastian I, Portaels F, ред. Туберкулез с множественной лекарственной устойчивостью. Дордрехт, Нидерланды, Kluwer Academic Publishers, 2000; стр. 77–114

  7. Foulds J, O’Brien R. Новые инструменты для диагностики туберкулеза: перспективы развивающихся стран.Int J Tuberc Lung Dis 1998; 2: 778–783.

  8. Андерсен П., Мунк М.Е., Поллок Дж.М., Доэрти Т.М. Специфическая иммунологическая диагностика туберкулеза. Ланцет 2000;356:1099–1104.

  9. Докрелл Х.М., Вейр Р.Э. Анализы цельной крови на цитокины – новое поколение диагностических тестов на туберкулез? Int J Tuberc Lung Dis 1998; 6: 441–442.

  10. Лалвани А.Выявление латентной инфекции: путь к лучшей борьбе с туберкулезом. Торакс 2003; 58: 916–918.

  11. Pai M, Riley LW, Colford JM Jr. Интерферон-гамма анализы в иммунодиагностике туберкулеза: систематический обзор. Lancet Infect Dis 2004;4:761–776.

  12. Лейн А.Д., Фон Рейн С.Ф. In vitro клеточные и цитокиновые ответы на микобактериальные антигены: применение для диагностики туберкулезной инфекции и оценки ответа на микобактериальные вакцины.Am J Med Sci 1997;313:364–371.

  13. Брок И., Мунк М.Е., Кок-Йенсен А., Андерсен П. Выполнение теста IFN-гамма цельной крови для диагностики туберкулеза на основе PPD или специфических антигенов ESAT-6 и CFP-10. Int J Tuberc Lung Dis 2001; 5:462–467.

  14. Ангеби К.А., Хоффнер С.Е., Диван В.К. Следует ли рекомендовать «метод отбеливающей микроскопии» для улучшения выявления случаев туберкулеза? Обзор литературы и анализ ключевых лиц.Int J Tuberc Lung Dis 2004; 8: 806–815.

  15. Ба Ф, Ридер ХЛ. Сравнение флуоресцентной микроскопии с методом Циля-Нильсена при исследовании мокроты на кислотоустойчивые бациллы. Int J Tuberc Lung Dis 1999; 3:1101–1105.

  16. Somoskövi Á, Hotaling JE, Fitzgerald M. Уроки мероприятия по проверке квалификации для кислотоустойчивой микроскопии. Грудь 2001; 120: 250–257.

  17. Ласло А.Туберкулез: 7. Лабораторные аспекты диагностики. CMAJ 1999; 160: 1725–1729.

  18. Тирувилуамала П., Райхман Л.Б. Туберкулез. Annu Rev Public Health 2002; 23:403–426.

  19. Кент ТК, Кубица ГП. Микобактериология общественного здравоохранения. Руководство для лаборатории уровня III. Атланта, Центр контроля заболеваний, 1985 г.

  20. Хейфец Л. Лаборатория микобактериологии.Clin Chest Med 1997; 18:35–53.

  21. Metchock BG, Nolte FS, Wallace RJ Jr. Mycobacterium. В : Murray PR, изд. Руководство по клинической микробиологии, 7-е изд. Вашингтон, округ Колумбия, Американское общество микробиологии, 1999 г.; стр. 399–437

  22. Робертс Г.Д., Гудман Н.Л., Хейфец Л., и др. Оценка радиометрического метода BACTEC для выделения микобактерий и определение лекарственной чувствительности Mycobacterium tuberculosis из кислотоустойчивых образцов с положительным мазком.J Clin Microbiol 1983;18:689–696.

  23. Ханна Б.А., Уолтерс С.Б., Бонк С.Дж., Тик Л.Дж. Извлечение микобактерий из крови в пробирке индикатора роста микобактерий и наклонной плоскости Левенштейна-Йенсена после лизирующего центрифугирования. J Clin Microbiol 1995;33:3315–3316.

  24. Бадак Ф.З., Киска Д.Л., Сеттерквист С., Хартли С., О’Коннелл М.А., Хопфер Р.Л. Сравнение пробирки-индикатора роста микобактерий с BACTEC 460 для обнаружения и выделения микобактерий из клинических образцов.J Clin Microbiol 1996; 34:2236–2239.

  25. Pfyffer GE, Welscher HM, Kissling P, et al. Сравнение пробирок-индикаторов роста микобактерий (MGIT) с радиометрическими и твердыми культурами для выделения кислотоустойчивых бацилл. J Clin Microbiol 1997; 35:364–368.

  26. Tortoli E, Cichero P, Piersimoni C, Simonetti MT, Gesu G, Nista D. Использование BACTEC MGIT 960 для выделения микобактерий из клинических образцов: многоцентровое исследование.J Clin Microbiol 1999;37:3578–3582.

  27. Idigoras P, Beristain X, Iturzaeta A, Vicente D, Perez-Trallero E. Сравнение автоматизированной нерадиометрической системы Bactec MGIT 960 и твердых сред Löwenstein-Jensen, Coletsos и Middlebrook 7h21 для выделения микобактерий. Eur J Clin Microb Infect Dis 2000;19:350–354.

  28. Cambau E, Wichlacz C, Truffot-Pernot C, Jarlier V. Оценка новой окислительно-восстановительной системы MB для обнаружения роста микобактерий.J Clin Microbiol 1999; 37:2013–2015.

  29. Rohner P, Ninet B, Metral C, Emler S, Auckenthaler R. Оценка системы MB/BacT и сравнение с системой BACTEC 460 и твердыми средами для выделения микобактерий из клинических образцов. J Clin Microbiol 1997;35:3127–3131.

  30. Вудс Г.Л., Фиш Г., Плаунт М., Мерфи Т. Клиническая оценка системы культивирования difco ESP II для роста и обнаружения микобактерий.J Clin Microbiol 1997; 35:121–124.

  31. McNerney R. Технология репликации фагов для диагностики и тестирования чувствительности. В : Приход Т., Стокер Н.Г., ред. Mycobacterium tuberculosis протоколы. Methods in Molecular Medicine. Totowa, NY, Humana Press, 2001; стр. 145–154

  32. Альберт Х., Хейденрих А., Брукс Р., и др. Проведение экспресс-теста на основе фагов FASTPlaqueTB для диагностики туберкулеза легких по образцам мокроты в Южной Африке.Int J Tuberc Lung Dis 2002; 6: 529–537.

  33. Музаффар Р., Батул С., Азиз Ф., Накви А., Ризви А. Оценка анализа FASTPlaqueTB для прямого обнаружения Mycobacterium tuberculosis в образцах мокроты. Int J Tuberc Lung Dis 2002; 6: 635–640.

  34. Такифф Х., Хейфец Л. В поисках средств быстрой диагностики и выявления лекарственной устойчивости: ответит ли тест FASTPlaqueTB? Int J Tuberc Lung Dis 2002; 6: 560–561.

  35. Mbulo GM, Kambashi BS, Kinkese J, et al. Сравнение двух тестов с бактериофагами и амплификации нуклеиновых кислот для диагностики туберкулеза легких в странах Африки к югу от Сахары. Int J Tuberc Lung Dis 2004; 8: 1342–1347.

  36. Carriere C, Riska PF, Zimhony O, et al. Условно реплицирующиеся репортерные фаги люциферазы: повышенная чувствительность для быстрого обнаружения и оценки лекарственной чувствительности Mycobacterium tuberculosis .J Clin Microbiol 1997; 35:3232–3239.

  37. Banaiee N, Bobadilla-Del-Valle M, Bardarov S Jr, et al. Репортерные микобактериофаги люциферазы для обнаружения, идентификации и тестирования чувствительности к антибиотикам Mycobacterium tuberculosis в Мексике. J Clin Microbiol 2001;39:3883–3888.

  38. Батлер В.Р., Гутерц Л.С. Анализ миколевой кислоты с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии для идентификации видов микобактерий.Clin Microbiol Rev 2001; 14:704–726.

  39. Эванс К.Д., Накасоне А.С., Сазерленд П.А., де ла Маза Л.М., Петерсон Э.М. Идентификация Mycobacterium tuberculosis и Mycobacterium avium-M. intracellulare непосредственно из первичных культур BACTEC с использованием ДНК-зондов, меченных сложным эфиром акридиния. J Clin Microbiol 1992;30:2427–2431.

  40. Миллер Н., Инфанте С., Клири Т.Оценка анализа LiPA MYCOBACTERIA для идентификации видов микобактерий из бутылок BACTEC 12B. J Clin Microbiol 2000; 38:1915–1919.

  41. Suffys PN, da Silva Rocha A, de Oliveira M, et al. Быстрая идентификация микобактерий до видового уровня с использованием метода обратной гибридизации INNO-LiPA Mycobacteria. Дж. Клин. Микробиол 2001;39:4477–4482.

  42. Руис П., Гутьеррес Дж., Зероло Ф.Дж., Касаль М.Анализ микобактерий GenoType для идентификации видов микобактерий, выделенных из клинических образцов человека, с использованием жидкой среды. J Clin Microbiol 2002;40:3076–3078.

  43. Стендер Х., Лунд К., Петерсен К.Х., и др. Флуоресцентный гибридизационный анализ in situ с использованием зондов пептидных нуклеиновых кислот для дифференциации туберкулезных и нетуберкулезных видов микобактерий в мазках культур микобактерий. J Clin Microbiol 1999;37:2760–2765.

  44. Зерби П., Шонау А., Бонетто С., и др. Амплифицированная гибридизация in situ с зондами пептидных нуклеиновых кислот для дифференциации комплекса Mycobacterium tuberculosis и нетуберкулезных видов Mycobacterium на фиксированных в формалине и залитых парафином образцах архивной биопсии и аутопсии. Ам Дж. Клин Патол 2001; 116: 770–775.

  45. Рогалл Т., Флор Т., Боттгер Э.К.Дифференциация видов Mycobacterium путем прямого секвенирования амплифицированной ДНК. J Gen Microbiol 1990;136:1915–1920.

  46. Киршнер П., Спрингер Б., Фогель Ю., и др. Генотипическая идентификация микобактерий путем определения последовательности нуклеиновых кислот: отчет о двухлетнем опыте работы в клинической лаборатории. J Clin Microbiol 1993; 31:2882–2889.

  47. Soini H, Bottger EC, Viljanen MK.Идентификация микобактерий путем определения последовательности 32-килодальтонного гена белка методом ПЦР. J Clin Microbiol 1994;32:2944–2947.

  48. Рот А., Фишер М., Хамид М.Е., Михальке С., Людвиг В., Маух Х. Дифференциация филогенетически родственных медленно растущих микобактерий на основе внутренних транскрибируемых спейсерных последовательностей гена 16S–23S рРНК. J Clin Microbiol 1998;36:139–147.

  49. Теленти А., Маркези Ф., Бальц М., Балли Ф., Боттгер Э.С., Бодмер Т.Быстрая идентификация микобактерий до видового уровня с помощью полимеразной цепной реакции и рестрикционного анализа. J Clin Microbiol 1993;31:175–178.

  50. да Силва Роча А., да Коста Лейте С., Торрес Х.М., и др. Использование ПЦР-анализа полиморфизма длины фрагмента рестрикции гена hsp65 для быстрой идентификации микобактерий в Бразилии. J Microbiol Methods 1999;37:223–229.

  51. Эргин А, Кочагоз Т, Ус Д.Оценка 120 штаммов микобактерий, выделенных из клинических образцов, на видовой уровень с помощью полимеразно-цепной реакции-рестрикционного анализа. Scand J Infect Dis 2000; 32: 657–662.

  52. Gingeras TR, Ghandour G, Wang E, и др. Одновременное генотипирование и идентификация видов с использованием анализа распознавания образов гибридизации на матрицах ДНК родовых микобактерий. Genome Res 1998; 8: 435–448.

  53. Troesch A, Nguyen H, Miyada CG, et al. Идентификация видов микобактерий и определение устойчивости к рифампину с использованием массивов ДНК-зондов высокой плотности. J Clin Microbiol 1999; 37:49–55.

  54. Канетти Г., Фокс В., Хоменко А., и др. Достижения в методах тестирования чувствительности микобактерий к лекарствам и использование тестов на чувствительность в программах борьбы с туберкулезом. Bull World Health Organ 1969; 41:21–43.

  55. Сиддики С.Х., Либонати Дж.П., Миддлбрук Г.Оценка экспресс-радиометрического метода определения лекарственной чувствительности микобактерий туберкулеза. J Clin Microbiol 1981;13:908–912.

  56. Heifets LB, Cangelosi GA. Тестирование чувствительности микобактерий туберкулеза к лекарствам: забытая проблема на рубеже веков. Int J Tuberc Lung Dis 1999; 3: 564–581.

  57. Cooksey RC, Morlock GP, McQueen A, Glickman SE, Crawford JT.Характеристика механизмов устойчивости к стрептомицину среди микобактерий туберкулеза , выделенных от пациентов в Нью-Йорке. Противомикробные агенты Chemother 1996;40:1186–1188.

  58. Дельгадо М.Б., Теленти А. Обнаружение мутаций, связанных с устойчивостью к хинолонам, у Mycobacterium tuberculosis . В : Persing DH, изд. Избранные протоколы ПЦР для возникающих инфекционных заболеваний. Вашингтон, округ Колумбия, Американское общество микробиологии, 1996 г.; стр.138–143

  59. Теленти А., Имбоден П., Маркези Ф., и др. Обнаружение мутаций устойчивости к рифампицину у Mycobacterium tuberculosis . Ланцет 1993; 341: 647–650.

  60. Takiff HE, Salazar L, Guerrero C, и др. Клонирование и нуклеотидная последовательность генов gyrA и gyrB Mycobacterium tuberculosis и обнаружение мутаций устойчивости к хинолонам.Противомикробные агенты Chemother 1994;38:773–780.

  61. Местдаг М., Фонтейн П.А., Реалини Л., и др. Взаимосвязь между устойчивостью к пиразинамиду, потерей активности пиразинамидазы и мутациями в локусе pncA в полирезистентных клинических изолятах Mycobacterium tuberculosis . Противомикробные агенты Chemother 1999;43:2317–2319.

  62. Williams DL, Waguespack C, Eisenach K, и др. Характеристика устойчивости к рифампину патогенных микобактерий. Противомикробные агенты Chemother 1994; 38:2380–2386.

  63. Де Бенхауэр Х., Лхианг З., Яннес Г., и др. Быстрое выявление устойчивости к рифампицину в мокроте и биоптатах больных туберкулезом с помощью ПЦР и линейного зондового анализа. Tuberc Lung Dis 1995;76:425–430.

  64. Россау Р., Траоре Х., Де Бенхауэр Х., и др. Оценка INNO-LiPA Rif. Анализ ТБ, анализ обратной гибридизации для одновременного обнаружения комплекса Mycobacterium tuberculosis и его устойчивости к рифампину. Противомикробные агенты Chemother 1997;41:2093–2098.

  65. Sougakoff W, Rodriguez M, Truffot-Pernot C, et al. Использование массива ДНК-зондов высокой плотности для обнаружения мутаций, связанных с устойчивостью к рифампицину в Mycobacterium tuberculosis .Clin Microbiol Infect 2004; 10: 289–294.

  66. Ruiz M, Torres MJ, Llanos AC, Arroyo A, Palomares JC, Aznar J. Прямое обнаружение устойчивых к рифампину и изониазиду Mycobacterium tuberculosis в аурамин-родамин-положительных образцах мокроты с помощью ПЦР в реальном времени. J Clin Microbiol 2004;42:1585–1589.

  67. Палачи М., Уэки С.Ю., Сато Д.Н., и др. Оценка пробирки-индикатора роста микобактерий для выделения и определения лекарственной чувствительности Mycobacterium tuberculosis , изолятов из респираторных образцов.J Clin Microbiol 1996;34:762–764.

  68. Palomino JC, Traore H, Fissette K, Portaels F. Оценка пробирки индикатора роста микобактерий (MGIT) для определения лекарственной чувствительности Mycobacterium tuberculosis . Int J Tuberc Lung Dis 1999; 3:344–348.

  69. Сандерс, Калифорния, Ниеда, Р.Р., Десмонд, Э.П. Валидация использования агара Миддлбрук 7х20, сред BACTEC MGIT 960 и BACTEC 460 12B для тестирования чувствительности Mycobacterium tuberculosis к левофлоксацину.J Clin Microbiol 2004;42:5225–5228.

  70. Хаусдорфер Дж., Сомпек Э., Аллербергер Ф., Дирих М.П., ​​Руш-Гердес С. Е-тест для определения чувствительности Mycobacterium tuberculosis . Int J Tuberc Lung Dis 1998; 2: 751–755.

  71. Tortoli E, Mattei R, Savarino A, Bartolini L, Beer J. Сравнение тестов на чувствительность к Mycobacterium tuberculosis , выполненных с помощью систем BACTEC 460TB (Becton Dickinson) и MB/BacT (Organon Teknika).Diagn Microbiol Infect Dis 2000;38:83–86.

  72. Руис П., Зероло Ф.Дж., Касаль М.Дж. Сравнение тестирования чувствительности Mycobacterium tuberculosis с использованием системы культивирования ESP II с использованием метода BACTEC. J Clin Microbiol 2000;38:4663–4664.

  73. Симболи Н., Такифф Х., МакНерни Р., и др. Внутренний анализ амплификации фагов является надежной альтернативой для выявления устойчивых к рифампину Mycobacterium tuberculosis в условиях ограниченных ресурсов.Противомикробные агенты Chemother 2005;49:425–427.

  74. Альберт Х., Троллип А., моряк Т., Крот Р.Дж. Простая технология на основе фагов (FASTPplaque) для определения устойчивости к рифампицину Mycobacterium tuberculosis непосредственно из мокроты. Int J Tuberc Lung Dis 2004; 8: 1114–1119.

  75. Palomino JC, Martin A, Camacho M, Guerra H, Swings J, Portaels F. Планшет для микротитрования резазурина: простой и недорогой метод определения лекарственной устойчивости у Mycobacterium tuberculosis .Противомикробные агенты Chemother 2002;46:2720–2722.

  76. Яйко Д.М., Мадей Дж.Дж., Ланкастер М.В., и др. Колориметрический метод определения МИК противомикробных препаратов для Mycobacterium tuberculosis . J Clin Microbiol 1995;33:2324–2327.

  77. Abate G, Mshana RN, Miorner H. Оценка колориметрического анализа на основе бромида 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия (МТТ) для быстрого выявления устойчивости к рифампицину у Микобактерии туберкулеза .Int J Tuberc Lung Dis 1998; 2:1011–1016.

  78. Мартин А., Камачо М., Портаэлс Ф., Паломино Дж.С. Тестирование Mycobacterium tuberculosis на чувствительность к препаратам второй линии с помощью резазуринового микротитрационного планшета: быстрый, простой и недорогой метод. Противомикробные агенты Chemother 2003;47:3616–3619.

  79. Ангеби К.А., Клинц Л., Хоффнер С.Е. Быстрое и недорогое тестирование лекарственной чувствительности Mycobacterium tuberculosis с помощью анализа нитратредуктазы.J Clin Microbiol 2002;40:553–555.

  80. Монторо Э., Лемус Д., Эхемендиа М., Мартин А., Портаэлс Ф., Паломино Дж. К. Сравнительная оценка анализа восстановления нитратов, теста МТТ и анализа микротитров резазурина для тестирования лекарственной чувствительности клинических изолятов Mycobacterium tuberculosis . J Antimicrob Chemother 2005; 55: 500–505.

  81. Мартин А., Паломино Дж. К., Портаэлс Ф.Быстрое выявление устойчивости к офлоксацину у Mycobacterium tuberculosis с помощью двух недорогих колориметрических методов: анализа резазурина и нитратредуктазы. J Clin Microbiol 2005;43:1612–1616.

  82. Сандин Р.Л. Полимеразная цепная реакция и другие методы амплификации в микобактериологии. Clin Lab Med 1996; 16: 617–633.

  83. Кернс А.М., Фриман Р., Стюард М., Маги Дж.Г. Метод быстрой полимеразной цепной реакции для обнаружения М.tuberculosis в различных клинических образцах. Дж. Клин Патол, 1998; 51:922–924.

  84. Noordhoek GT, ван Эмбден JD, Колк, AH. Надежность амплификации нуклеиновых кислот для обнаружения Mycobacterium tuberculosis : международное совместное исследование по контролю качества с участием 30 лабораторий. J Clin Microbiol 1996;34:2522–2525.

  85. Suffys P, Palomino JC, Cardoso Leão S, и др. Оценка полимеразной цепной реакции для обнаружения Mycobacterium tuberculosis . Int J Tuberc Lung Dis 2000;4:179–183.

  86. Kwoh DY, Davis GR, Whitfield KM, Chappelle HL, DiMichele LJ, Gingeras TR. Система амплификации на основе транскрипции и обнаружение амплифицированного вируса иммунодефицита человека типа 1 с использованием формата сэндвич-гибридизации на основе шариков. Proc Natl Acad Sci USA 1989; 86: 1173–1177.

  87. Абэ С., Хирано К., Вада М., и др. Обнаружение Mycobacterium tuberculosis в клинических образцах с помощью полимеразной цепной реакции и прямого теста Gen-Probe на амплифицированные микобактерии туберкулеза. J Clin Microbiol 1993;31:3270–3274.

  88. Dalovisio JR, Черногория-Джеймс С., Кеммерли С.А. Сравнение прямого теста Amplified Mycobacterium tuberculosis (MTB), Amplicor MTB PCR и IS6110-PCR для обнаружения MTB в образцах из дыхательных путей. Clin Infect Dis 1996; 23:1099–1106.

  89. ЦКЗ. Амплификация нуклеиновых кислот при туберкулезе. MMWR 2000; 49: 593–594.

  90. Rajalahti I, Vuorinen P, Liippo K, Nieminen MM, Miettinen A. Оценка коммерческих анализов амплификации ДНК и рРНК для оценки результатов лечения больных туберкулезом легких. Eur J Clin Microbiol Infect Dis 2001;20:746–750.

  91. Pfyffer GE.Лабораторная диагностика туберкулеза. В : Kaufmann SHE, Hahn H, ред. Микобактерии и туберкулез. Базель, Каргер, Швейцария, 2003 г.; стр. 67–83

  92. Шампута И.С., Ригутс Л., Портаэлс Ф. Молекулярно-генетические методы диагностики и определения устойчивости микобактерий к антибиотикам из клинических образцов. АПМИС 2004; 112:728–752.

  93. Брокколо Ф., Скарпеллини П., Локателли Г., и др. Быстрая диагностика микобактериальных инфекций и количественный анализ нагрузки Mycobacterium tuberculosis с помощью двух калиброванных анализов ПЦР в реальном времени. J Clin Microbiol 2003;41:4565–4572.

  94. Бергманн Дж.С., Вудс Г.Л. Клиническая оценка анализа амплификации со смещением нити BDProbeTec для экспресс-диагностики туберкулеза. J Clin Microbiol 1998;36:2766–2768.

  95. Pfyffer GE, Funke-Kissling P, Rundler E, Weber R.Эксплуатационные характеристики системы BDProbeTec для прямого обнаружения комплекса Mycobacterium tuberculosis в образцах из дыхательных путей. J Clin Microbiol 1999;37:137–140.

  96. Бергманн Дж.С., Китинг В.Е., Вудс Г.Л. Клиническая оценка системы BDProbeTec ET для быстрого обнаружения Mycobacterium tuberculosis . J Clin Microbiol 2000;38:863–865.

  97. van Embden JD, Cave MD, Crawford JT, и др. Идентификация штамма Mycobacterium tuberculosis с помощью фингерпринтинга ДНК: рекомендации по стандартизированной методологии. J Clin Microbiol 1993;31:406–409.

  98. Камербек Дж., Шоулс Л., Колк А., и др. Одновременное выявление и дифференциация штамма Mycobacterium tuberculosis для диагностики и эпидемиологии. J Clin Microbiol 1997;35:907–914.

  99. ван Солинген Д., де Хаас П.П., Херманс П.В., Гроенен П.М., ван Эмбден Д.Д.Сравнение различных повторяющихся элементов ДНК в качестве генетических маркеров дифференциации штаммов и эпидемиологии Mycobacterium tuberculosis . J Clin Microbiol 1993;31:1987–1995.

  100. Goguet de la Salmoniere YO, Kim CC, Tsolaki AG, Pym AS, Siegrist MS, Small PM. Высокопроизводительный метод обнаружения полиморфизмов геномных делеций. J Clin Microbiol 2004;42:2913–2918.

  101. Снабж П., Лесжан С., Савин Э., Кремер К., ван Солинген Д., Лохт К.Автоматизированное высокопроизводительное генотипирование для изучения глобальной эпидемиологии Mycobacterium tuberculosis на основе микобактериальных вкраплений повторяющихся единиц. J Clin Microbiol 2001;39:3563–3571.

  102. Коуэн Л.С., Мошер Л., Дием Л., Мэсси Дж.П., Кроуфорд Дж.Т. Типирование тандемных повторов с переменным числом изолятов Mycobacterium tuberculosis с низким числом копий IS6110 с использованием микобактериальных вкраплений повторяющихся единиц. J Clin Microbiol 2002;40:1592–1602.

  103. Кандума Э., Макхью Т.Д., Гиллеспи С.Х. Молекулярные методы типирования штамма Mycobacterium tuberculosis : руководство пользователя. J Appl Microbiol 2003;94:781–791.

  104. Маэкура Р., Окуда Ю., Накагава М., и др. Клиническая оценка анализа антител к противотуберкулезным гликолипидным иммуноглобулинам G для быстрой серодиагностики туберкулеза легких. J Clin Microbiol 2001;39:3603–3608.

  105. Gounder C, De Queiroz Mello FC, Conde MB, и др. Полевая оценка экспресс-теста иммунохроматографии на туберкулез. J Clin Microbiol 2002;40:1989–1993.

  106. Grange JM, Laszlo A. Серодиагностические тесты на туберкулез: необходимость оценки их оперативной прогностической точности и приемлемости. Bull World Health Organ 1990; 68: 571–576.

  107. Лященко К.П., Сингх М., Коланджели Р., Дженнаро М.Л.Мультиантигенный иммуноанализ для разработки серологической диагностики инфекционных заболеваний. J Immunol Methods 2000;28:91–100.

  108. Дженнаро М.Л. Иммунологическая диагностика туберкулеза. Clin Infect Dis 2000;30: Доп. 3 С243–С246.

  109. Катария Ю.П., Хуршид И. Аденозиндезаминаза в диагностике туберкулезного плеврального выпота. Грудь 2001; 120: 334–336.

  110. Lee YC, Rogers JT, Rodriguez RM, Miller KD, Light RW.Уровни аденозиндезаминазы в нетуберкулезных лимфоцитарных плевральных выпотах. Грудь 2001; 120: 356–361.

  111. Corral I, Quereda C, Navas E, и др. Активность аденозиндезаминазы в спинномозговой жидкости ВИЧ-инфицированных пациентов: ограниченное значение для диагностики туберкулезного менингита. Eur J Clin Microbiol Infect Dis 2004;23:471–476.

  112. Conde MB, Marinho SR, Pereira Mde F, и др. Полезность активности аденозиндезаминазы 2 (ADA2) в сыворотке у взрослых для диагностики туберкулеза легких. Respir Med 2002; 96: 607–610.

  113. Лима, Д.М., Колареш, Дж.К., да Фонсека, Б.А. Совместное использование полимеразной цепной реакции и определение активности аденозиндезаминазы в плевральной жидкости повышает скорость диагностики туберкулеза плевры. Грудь 2003; 124: 909–914.

  114. Мехия Г.И., Кастрильон Л., Трухильо Х., Робледо Х.А.Выявление микроколоний в тонкослойной культуре 7х21 является альтернативой экспресс-диагностике инфекции Mycobacterium tuberculosis . Int J Tuberc Lung Dis 1999; 3:138–142.

  115. Мехия Г.И., Гусман А., Агудело К.А., Трухильо Х., Робледо Дж. Пятилетний опыт работы с тонкослойной агаровой средой для экспресс-диагностики туберкулеза. Biomedica 2004;24: Доп. 1 52–59.

KoreaMed Synapse

1.Асгарзаде М., Кафил Х.С., Поуростади М. Идентификация источника и борьба с туберкулезом с помощью молекулярной эпидемиологии. J Mazandaran Univ Med Sci. 2014; 24:181–192.

2. Ньендак М.Р., Левинсон Д.А., Левинсон Д.М. Новые методы диагностики туберкулеза. Curr Opin Infect Dis. 2009 г.; 22:174–182. PMID: 1

13.
3. Асгарзаде М., Кафил Х.С., Рудсари А.А., Ханифи Г.Р. Передача туберкулеза на северо-западе Ирана: с использованием методов MIRU-VNTR, ETR-VNTR и IS6110-RFLP. Заразить Генет Эвол. 2011 г.; 11:124–131.PMID: 20951237.
4. Ларак Ф., Григгс А., Слопен М., Мансифф С.С. Проведение тестов амплификации нуклеиновых кислот для диагностики туберкулеза в крупных городских условиях. Клин Инфекция Дис. 2009 г.; 49:46–54. PMID: 19476429.
5. Piersimoni C, Scarparo C. Актуальность коммерческих методов амплификации для прямого обнаружения комплекса Mycobacterium tuberculosis в клинических образцах. Дж. Клин Микробиол. 2003 г.; 41:5355–5365. PMID: 14662911.
7. Steingart KR, Henry M, Ng V, Hopewell PC, Ramsay A, Cunningham J, et al.Сравнение флуоресценции с обычной микроскопией мазка мокроты при туберкулезе: систематический обзор. Ланцет Infect Dis. 2006 г.; 6: 570–581. PMID: 168.
8. Cruciani M, Scarparo C, Malena M, Bosco O, Serpelloni G, Mengoli C. Мета-анализ BACTEC MGIT 960 и BACTEC 460 TB с твердыми средами или без них для обнаружения микобактерий. Дж. Клин Микробиол. 2004 г.; 42:2321–2325. PMID: 15131224.
9. Тивари Р.П., Хаттикудур Н.С., Бхармал Р.Н., Картикеян С., Дешмукх Н.М., Бисен П.С. Современные подходы к экспресс-диагностике туберкулеза: перспективы и проблемы.Туберкулез (Эдинб). 2007 г.; 87:193–201. PMID: 17029964.
10. Pfyffer GE, Welscher HM, Kissling P, Cieslak C, Casal MJ, Gutierrez J, et al. Сравнение пробирок индикатора роста микобактерий (MGIT) с радиометрическими и твердыми культурами для выделения кислотоустойчивых бацилл. Дж. Клин Микробиол. 1997 год; 35:364–368. PMID: 97.

11. Асгарзаде М., Шахбабян К., Самади Кафил Х., Рафи А. Использование ДНК-дактилоскопии при выявлении источника туберкулеза в провинции Восточный Азербайджан в Иране.J Med Sci. 2007 г.; 7:418–421.

12. Центры по контролю и профилактике заболеваний (CDC). Обновленные рекомендации по использованию тестов амплификации нуклеиновых кислот в диагностике туберкулеза. MMWR Morb Mortal Wkly Rep. 2009; 58:7–10. PMID: 1
21.
13. Greco S, Girardi E, Navarra A, Saltini C. Текущие данные о диагностической точности коммерческих тестов амплификации нуклеиновых кислот для диагностики туберкулеза легких. грудная клетка. 2006 г.; 61: 783–790. PMID: 16738037.
14.Рассел Д.Г., Барри К.Э. 3-й, Флинн Д.Л. Туберкулез: то, чего мы не знаем, может и причиняет нам вред. Наука. 2010 г.; 328:852–856. PMID: 20466922.
15. Сойни Х., Муссер Дж.М. Молекулярная диагностика микобактерий. Клин Хим. 2001 г.; 47:809–814. PMID: 11325882.
16. Aono A, Azuma Y, Mitarai S, Ogata H. Быстрое прогнозирование результатов культивирования BACTEC MGIT 960 с помощью обнаружения полимеразной цепной реакции COBAS amplicor Mycobacterium . Диагностика Microbiol Infect Dis. 2009 г.; 64:27–30. PMID: 19362257.
17.Kim JH, Kim YJ, Ki CS, Kim JY, Lee NY. Оценка Cobas TaqMan MTB PCR для обнаружения Mycobacterium tuberculosis. Дж. Клин Микробиол. 2011 г.; 49:173–176. PMID: 21048015.
18. Михос А.Г., Дайкос Г.Л., Цанету К., Теодориду М., Мошови М., Николаиду ​​П. и соавт. Обнаружение ДНК Mycobacterium tuberculosis в респираторных и нереспираторных образцах методом ПЦР Amplicor MTB. Диагностика Microbiol Infect Dis. 2006 г.; 54:121–126. PMID: 16406184.
19. Lee MR, Chung KP, Wang HC, Lin CB, Yu CJ, Lee JJ, et al.Оценка ПЦР в реальном времени Cobas TaqMan MTB для прямого обнаружения Mycobacterium tuberculosis в образцах из дыхательных путей. J Med Microbiol. 2013; 62 (часть 8): 1160–1164. PMID: 23657531.
20. Yuen KY, Yam WC, Wong LP, Seto WH. Сравнение двух автоматических систем амплификации ДНК с ручной однопробирочной вложенной ПЦР для диагностики туберкулеза легких. Дж. Клин Микробиол. 1997 год; 35:1385–1389. PMID:

49.
21. Блумберг Г.В., Фойт А., Риттер С., Деггим В., Боттгер Э.С. Оценка Cobas TaqMan MTB для прямого обнаружения комплекса Mycobacterium tuberculosis в сравнении с Cobas Amplicor MTB.Дж. Клин Микробиол. 2013; 51:2112–2117. PMID: 23616457.
22. Thierry D, Cave MD, Eisenach KD, Crawford JT, Bates JH, Gicquel B, et al. IS6110, IS-подобный элемент комплекса Mycobacterium tuberculosis. Нуклеиновые Кислоты Res. 1990 г.; 18:188. PMID: 2155396.
23. Андерсен А.Б., Хансен Э.Б. Структура и картирование антигенных доменов белка антигена b, белка с молекулярной массой 38000 Mycobacterium tuberculosis . Заразить иммун. 1989 год; 57:2481–2488. PMID: 2545626.
24. Chen JH, She KK, Kwong TC, Wong OY, Siu GK, Leung CC, et al.Эффективность нового автоматизированного анализа Abbott RealTime MTB для быстрого обнаружения комплекса Mycobacterium tuberculosis в образцах из дыхательных путей. Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 2015 г.; 34: 1827–1832. PMID: 26071001.
25. Центры по контролю и профилактике заболеваний (CDC). Обновление: тесты амплификации нуклеиновых кислот на туберкулез. MMWR Morb Mortal Wkly Rep. 2000; 49: 593–594. PMID: 10

9.
26. Pfyffer GE, Kissling P, Wirth R, Weber R. Прямое обнаружение комплекса Mycobacterium tuberculosis в образцах из дыхательных путей с помощью тест-системы с усилением мишени.Дж. Клин Микробиол. 1994 год; 32:918–923. PMID: 8027344.
27. Бергманн Дж.С., Юох Г., Фиш Г., Вудс Г.Л. Клиническая оценка усиленного прямого теста Gen-Probe с усилением Mycobacterium tuberculosis для экспресс-диагностики туберкулеза у заключенных. Дж. Клин Микробиол. 1999 г.; 37:1419–1425. PMID: 10203498.
28. Мак П.А., Рао С.П., Пинг Тан М., Лин С., Чиба Дж., Тай Дж. и др. Высокопроизводительный скрининг для выявления ингибиторов гомеостаза АТФ в нереплицирующихся Mycobacterium tuberculosis .ACS Chem Biol. 2012 г.; 7:1190–1197. PMID: 22500615.
29. Barrett A, Magee JG, Freeman R. Оценка системы BD ProbeTec ET для прямого обнаружения Mycobacterium tuberculosis в образцах из дыхательных путей. J Med Microbiol. 2002 г.; 51:895–898. PMID: 12435071.
30. Пьерсимони С., Скарпаро С., Пикколи П., Ригон А., Руджеро Г., Ниста Д. и др. Оценка эффективности двух коммерческих анализов амплификации для прямого обнаружения комплекса Mycobacterium tuberculosis в респираторных и внелегочных образцах.Дж. Клин Микробиол. 2002 г.; 40:4138–4142. PMID: 12409387.
31. Всемирная организация здравоохранения. Заявление о политике: автоматизированная технология амплификации нуклеиновых кислот в режиме реального времени для быстрого и одновременного выявления туберкулеза и устойчивости к рифампицину: система Xpert MTB/RIF [Интернет]. Женева: Всемирная организация здравоохранения, 2011 г. процитировано 1 марта 2015 г. Доступно по адресу: http://www.who.int/iris/handle/10665/44586#sthash.Cdd-BEYMy.dpuf.
32. Steingart KR, Schiller I, Horne DJ, Pai M, Boehme CC, Dendukuri N. Анализ Xpert® MTB/RIF на туберкулез легких и устойчивость к рифампицину у взрослых.Кокрановская система базы данных, ред. 2014 г.; (1): CD009593. PMID: 24448973.
35. Морган М., Калантри С., Флорес Л., Пай М. Коммерческий линейный зонд для быстрого выявления устойчивости к рифампицину у Mycobacterium tuberculosis : систематический обзор и метаанализ. BMC Infect Dis. 2005 г.; 5:62. PMID: 16050959.
36. Eigner U, Veldenzer A, Holfelder M. Оценка MTB-теста Fluoro-Type для быстрого и надежного обнаружения Mycobacterium tuberculosis в образцах из дыхательных путей.Клин Лаборатория. 2013; 59:1179–1181. PMID: 24273945.
37. Hillemann D, Weizenegger M, Kubica T, Richter E, Niemann S. Использование анализа генотипа MTBDR для быстрого выявления устойчивости к рифампицину и изониазиду в изолятах комплекса Mycobacterium tuberculosis . Дж. Клин Микробиол. 2005 г.; 43:3699–3703. PMID: 16081898.
38. Банг Д., Бенгард Андерсен А., Томсен В.О. Быстрое генотипическое выявление устойчивых к рифампину и изониазиду Mycobacterium tuberculosis непосредственно в клинических образцах.Дж. Клин Микробиол. 2006 г.; 44:2605–2608. PMID: 16825393.
39. Сомоскови А., Дорманди Дж., Мицани Д., Ривенбург Дж., Салфингер М. Использование образцов с положительным мазком для оценки основанного на ПЦР анализа генотипа MTBDR для быстрого прямого обнаружения комплекса Mycobacterium tuberculosis , а также его устойчивости к изониазид и рифампин. Дж. Клин Микробиол. 2006 г.; 44:4459–4463. PMID: 17035488.
40. Равиндран Р., Ваттал С., Оберой Дж. К., Гоэл Н., Датта С., Прасад К. Дж. Использование анализа GenoType MTBDRplus для экспресс-диагностики туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью в центре третичной медицинской помощи в Индии.Индийская J Med Microbiol. 2012 г.; 30:58–63. PMID: 22361762.
41. Tenover FC, Crawford JT, Huebner RE, Geiter LJ, Horsburgh CR Jr, Good RC. Возрождение туберкулеза: готова ли ваша лаборатория? Дж. Клин Микробиол. 1993 год; 31: 767–770. PMID: 8463384.
42. Scarparo C, Ricordi P, Ruggiero G, Piccoli P. Оценка полностью автоматизированной системы BACTEC MGIT 960 для тестирования чувствительности Mycobacterium tuberculosis к пиразинамиду, стрептомицину, изониазиду, рифампину и этамбутолу и сравнение с радиометрическим методом BACTEC 460TB. .Дж. Клин Микробиол. 2004 г.; 42:1109–1114. PMID: 15004061.
43. Аджерс-Коскела К., Катила М.Л. Тестирование чувствительности с помощью ручного индикатора роста микобактерий (MGIT) и системы MGIT 960 обеспечивает быструю и надежную верификацию туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью. Дж. Клин Микробиол. 2003 г.; 41:1235–1239. PMID: 12624056.
44. Rusch-Gerdes S, Pfyffer GE, Casal M, Chadwick M, Siddiqi S. Многоцентровая лабораторная валидация метода BACTEC MGIT 960 для тестирования чувствительности Mycobacterium tuberculosis к классическим препаратам второго ряда и новым противомикробным препаратам.Дж. Клин Микробиол. 2006 г.; 44:688–692. PMID: 16517840.

45. Всемирная организация здравоохранения. Некоммерческие методы исследования культуры и лекарственной чувствительности для скрининга пациентов с риском туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью: программное заявление. Женева: Всемирная организация здравоохранения, 2011 г.

46. ​​Мур Д.А., Эванс К.А., Гилман Р.Х., Кавьедес Л., Коронел Дж., Вивар А. и соавт. Анализ лекарственной чувствительности под микроскопом для диагностики туберкулеза. N Engl J Med. 2006 г.; 355: 1539–1550. PMID: 17035648.
47. Ejigu GS, Woldeamanuel Y, Shah NS, Gebyehu M, Selassie A, Lemma E. Анализ лекарственной чувствительности под микроскопом обеспечивает быструю и надежную идентификацию МЛУ-ТБ. Int J Tuberc Lung Dis. 2008 г.; 12:332–337. PMID: 18284841.
48. Seng P, Rolain JM, Fournier PE, La Scola B, Drancourt M, Raoult D. Применение MALDI-TOF-масс-спектрометрии в клинической микробиологии. Будущая микробиология. 2010 г.; 5: 1733–1754. PMID: 21133692.
49. Croxatto A, Prod’hom G, Greub G. Применение масс-спектрометрии MALDI-TOF в клинической диагностической микробиологии.FEMS Microbiol Rev. 2012; 36:380–407. PMID: 220.
50. Кемптнер Дж., Марчетти-Дешманн М., Мах Р., Дружинина И.С., Кубичек С.П., Аллмайер Г. Оценка методов подготовки матричной лазерной десорбции/ионизации (MALDI) для характеристики поверхности интактных спор Fusarium с помощью линейного времени MALDI. бортовая масс-спектрометрия. Быстрый общественный масс-спектр. 2009 г.; 23:877–884. PMID: 132.
51. Jiang X, Zhang W, Gao F, Huang Y, Lv C, Wang H. Сравнение протеома устойчивых и чувствительных к изониазиду штаммов Mycobacterium tuberculosis .Устойчивость к микробам. 2006 г.; 12: 231–238. PMID: 17227207.
52. Deng C, Lin M, Hu C, Li Y, Gao Y, Cheng X, et al. Изучение модели дерева серологической классификации активного туберкулеза легких с помощью предварительной обработки магнитными шариками и анализа MALDI-TOF MS. Сканд Дж. Иммунол. 2011 г.; 74:397–405. PMID: 21668462.
53. Ли Ш. Диагностика и лечение латентной туберкулезной инфекции. Tuberc Respir Dis. 2015 г.; 78:56–63.
54. Chen J, Zhang R, Wang J, Liu L, Zheng Y, Shen Y, et al. Анализы высвобождения гамма-интерферона для диагностики активного туберкулеза у ВИЧ-инфицированных пациентов: систематический обзор и метаанализ.ПЛОС Один. 2011 г.; 6:e26827. PMID: 22069472.

55. Всемирная организация здравоохранения. Использование анализов высвобождения интерферона-гаммы туберкулеза (IGRA) в странах с низким и средним уровнем дохода: программное заявление. Женева: Всемирная организация здравоохранения, 2011 г.

56. Ravn P, Munk ME, Andersen AB, Lundgren B, Lundgren JD, Nielsen LN, et al. Проспективная оценка анализа цельной крови с использованием Mycobacterium tuberculosis -специфических антигенов ESAT-6 и CFP-10 для диагностики активного туберкулеза. Клин Диагн Лаб Иммунол.2005 г.; 12: 491–496. PMID: 15817755.
57. Кан Ю.А., Ли Х.В., Юн Х.И., Чо Б., Хан С.К., Шим Ю.С. и др. Несоответствие между туберкулиновой кожной пробой и гамма-анализом интерферона цельной крови для диагностики латентной туберкулезной инфекции в стране со средним бременем туберкулеза. ДЖАМА. 2005 г.; 293: 2756–2761. PMID: 15941805.
58. Андерсен П., Мунк М.Е., Поллок Дж.М., Доэрти Т.М. Специфическая иммунологическая диагностика туберкулеза. Ланцет. 2000 г.; 356: 1099–1104. PMID: 11009160.
59. Goletti D, Carrara S, Butera O, Amicosante M, Ernst M, Sauzullo I, et al.Точность иммунодиагностических тестов на активный туберкулез по одиночным и комбинированным результатам: многоцентровое TBNET-исследование. ПЛОС Один. 2008 г.; 3:e3417. PMID: 18

9.
60. Pai M, Zwerling A, Menzies D. Систематический обзор: анализы на основе Т-клеток для диагностики латентной туберкулезной инфекции: обновление. Энн Интерн Мед. 2008 г.; 149:177–184. PMID: 18593687.
61. Дил Р., Голетти Д., Феррара Г., Ботамли Г., Сирилло Д., Кампманн Б. и др. Анализы высвобождения гамма-интерферона для диагностики латентной инфекции Mycobacterium tuberculosis : систематический обзор и метаанализ.Евр Респир Дж. 2011; 37:88–99. PMID: 21030451.
62. Sester M, Sotgiu G, Lange C, Giehl C, Girardi E, Migliori GB, et al. Анализы высвобождения гамма-интерферона для диагностики активного туберкулеза: систематический обзор и метаанализ. Евр Респир Дж. 2011; 37:100–111. PMID: 20847080.
63. Хантер С.В., Гейлорд Х., Бреннан П.Дж. Структура и антигенность фосфорилированных липополисахаридных антигенов возбудителей лепры и туберкулеза. Дж. Биол. Хим. 1986 год; 261:12345–12351. PMID: 30

.
65. Беме С., Молокова Е., Минья Ф., Гейс С., Лошер Т., Мабоко Л. и др. Обнаружение микобактериального липоарабиноманнана с помощью ИФА с захватом антигена в необработанной моче танзанийских пациентов с подозрением на туберкулез. Trans R Soc Trop Med Hyg. 2005 г.; 99:893–900. PMID: 16139316.
66. Minion J, Leung E, Talbot E, Dheda K, Pai M, Menzies D. Диагностика туберкулеза с помощью липоарабиноманнанов в моче: систематический обзор и метаанализ. Евр Респир Дж. 2011; 38:1398–1405. PMID: 21700601.
67.Kroidl I, Clowes P, Reither K, Mtafya B, Rojas-Ponce G, Ntinginya EN, et al. Эффективность анализа липоарабиноманнана мочи на туберкулез у детей в Танзании. Евр Респир Дж. 2015; 46:761–770. PMID: 26113682.
68. Лужайка С.Д. Выявление липоарабиноманнана (ЛАМ) в моче для диагностики ВИЧ-ассоциированного туберкулеза: обзор современного состояния дел. BMC Infect Dis. 2012 г.; 12:103. PMID: 22536883.
69. Килер Э., Перкинс М.Д., Смолл П., Хэнсон С., Рид С., Каннингем Дж. и соавт. Снижение глобального бремени туберкулеза: вклад улучшенной диагностики.Природа. 2006 г.; 444 (Приложение 1): 49–57. PMID: 17159894.
70. Рю Ю.Дж. Диагностика туберкулеза легких: последние достижения и алгоритмы диагностики. Tuberc Respir Dis. 2015 г.; 78:64–71.
71. Zhang R, Long Y, He W, Hao X, Liu J. Статус применения масс-спектрометрии MALDI-TOF для идентификации и определения лекарственной устойчивости Mycobacterium tuberculosis . Дж. Торак Дис. 2014; 6: 512–516. PMID: 24822112.

Особенности подхода, мазок мокроты, тесты на амплификацию нуклеиновых кислот

Автор

Томас Э. Херчлайн, доктор медицины  , профессор медицины, Государственный университет Райта, Медицинская школа Бунсхофта; Медицинский консультант, общественное здравоохранение, Туберкулезная клиника округа Дейтон и Монтгомери (Огайо)

Томас Э. Херчлайн, доктор медицинских наук, является членом следующих медицинских обществ: Alpha Omega Alpha, Общество инфекционных заболеваний Америки, Общество инфекционных заболеваний штата Огайо

Раскрытие информации: Получен исследовательский грант от: Regeneron.

Соавтор (ы)

Джудит К. Амороза, доктор медицины, FACR  Клинический профессор радиологии и заместитель председателя по развитию факультета и медицинскому образованию, Медицинская школа имени Роберта Вуда Джонсона в Рутгерсе

Джудит К. Амороза, доктор медицины, FACR является членом следующих медицинских обществ: Американский колледж радиологии, Американское общество рентгеновских лучей, Ассоциация университетских рентгенологов, Радиологическое общество Северной Америки, Общество торакальной радиологии

Раскрытие информации: Нечего раскрывать.

Главный редактор

Michael Stuart Bronze, MD  David Ross Boyd Профессор и заведующий кафедрой медицины Stewart G Wolf Endowed заведующей кафедрой внутренних болезней медицинского факультета Центра медицинских наук Университета Оклахомы; магистр Американского колледжа врачей; член Американского общества инфекционистов; Член Королевского колледжа врачей, Лондон,

Майкл Стюарт Бронз, доктор медицинских наук, является членом следующих медицинских обществ: Альфа-Омега-Альфа, Американский колледж врачей, Американская медицинская ассоциация, Ассоциация профессоров медицины, Американское общество инфекционистов, Медицинская ассоциация штата Оклахома, Южное общество клинических исследований

Раскрытие информации: Нечего раскрывать.

Благодарности

Эрика Бэнг Государственный университет Нью-Йорка Медицинский центр Даунстейт Медицинский колледж

Раскрытие информации: Нечего раскрывать.

Диана Брейнард, MD Консультирующий персонал, отделение инфекционных заболеваний, Massachusetts General Hospital

Раскрытие информации: Нечего раскрывать.

Памела С. Чавис, доктор медицины , профессор кафедры офтальмологии и неврологии Медицинского университета Южной Каролины, медицинский колледж

Памела С. Чавис, доктор медицинских наук, является членом следующих медицинских обществ: Американской академии неврологии, Американской академии офтальмологии и Североамериканского общества нейроофтальмологии

.

Раскрытие информации: Нечего раскрывать.

Дирк М. Элстон, MD Директор Академии дерматопатологии Аккермана, Нью-Йорк

Дирк М. Элстон, доктор медицинских наук, является членом следующих медицинских обществ: Американская академия дерматологии

.

Раскрытие информации: Нечего раскрывать.

Теодор Дж. Гаэта, DO, MPH, FACEP Клинический адъюнкт-профессор, отделение неотложной медицины, Медицинский колледж Вейла Корнелла; заместитель председателя и программный директор резидентуры по неотложной медицинской помощи, отделение неотложной медицинской помощи, методистская больница Нью-Йорка; Академический председатель, адъюнкт-профессор, отделение неотложной медицины, Медицинский факультет Университета Святого Георгия

Теодор Дж. Гаэта, DO, MPH, FACEP является членом следующих медицинских обществ: Альянс клинического образования, Американский колледж врачей скорой помощи, Директора клерков по неотложной медицине, Совет директоров резидентур по неотложной медицине, Нью-Йоркская медицинская академия и Общество академической неотложной медицины

Раскрытие информации: Нечего раскрывать.

Аарон Глатт, доктор медицинских наук, профессор клинической медицины, Нью-Йоркский медицинский колледж; Президент и главный исполнительный директор, бывший главный врач отделения медицины и инфекционных заболеваний больницы Св. Иосифа (бывшая больница Нью-Айленд)

Аарон Глатт, доктор медицинских наук, является членом следующих медицинских обществ: Американского колледжа пульмонологов, Американского колледжа врачей-руководителей, Американского колледжа врачей, Американского колледжа врачей-Американского общества внутренних болезней, Американской медицинской ассоциации, Американского общества микробиологии. , Американское торакальное общество, Американская ассоциация венерических заболеваний, Американское общество инфекционных заболеваний, Международное общество по СПИДу и Американское общество медицинской эпидемиологии

Раскрытие информации: Нечего раскрывать.

Simon K Law, MD, PharmD Клинический профессор медицинских наук, отделение офтальмологии, Глазной институт Жюля Штейна, Калифорнийский университет, Лос-Анджелес, Медицинская школа Дэвида Геффена

Simon K Law, MD, PharmD является членом следующих медицинских обществ: Американской академии офтальмологии, Американского общества глаукомы и Ассоциации исследований в области зрения и офтальмологии

.

Раскрытие информации: Нечего раскрывать.

John M Leedom, MD Почетный профессор медицины, Медицинская школа Кека Университета Южной Калифорнии

John M Leedom, MD, является членом следующих медицинских обществ: Alpha Omega Alpha, Американский колледж врачей-Американское общество внутренних болезней, Американское общество микробиологии, Американское общество инфекционистов, Международное общество по СПИДу и Phi Beta Kappa

Раскрытие информации: Нечего раскрывать.

Джеймс Ли, доктор медицинских наук , бывший доцент кафедры неотложной медицины Гарвардской медицинской школы; Совет директоров, Дистанционная медицина

Раскрытие информации: Нечего раскрывать.

Джеффри Мефферт, доктор медицины , ассистент клинического профессора дерматологии Медицинской школы Техасского университета в Сан-Антонио

Джеффри Мефферт, доктор медицинских наук, является членом следующих медицинских обществ: Американской академии дерматологии, Американской медицинской ассоциации, Ассоциации военных дерматологов и Техасского дерматологического общества

.

Раскрытие информации: Нечего раскрывать.

Монте С. Мельцер, MD Начальник дерматологической службы, Union Memorial Hospital

Монте С. Мельцер, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Alpha Omega Alpha и Американской академии дерматологии

.

Раскрытие информации: Нечего раскрывать.

Susannah K Mistr, MD Врач-резидент, отделение офтальмологии, Медицинский центр Университета Мэриленда

Susannah K Mistr, MD, является членом следующих медицинских обществ: Американская академия офтальмологии, Американский колледж хирургов, Американская медицинская ассоциация, Американская ассоциация студентов-медиков/Фонд, Американское общество катарактальной и рефракционной хирургии и Медицинская ассоциация Южной Каролины

.

Раскрытие информации: Нечего раскрывать.

Кэрол А. Нэйси, доктор философии Адъюнкт-профессор кафедры биологии Католического университета Америки; Адъюнкт-профессор кафедры тропической медицины и микробиологии Университета Джорджа Вашингтона

Кэрол Нэйси, доктор философии, является членом следующих медицинских обществ: Американской академии микробиологии и Американского общества микробиологии

.

Раскрытие информации: Sequella, Inc. Доля участия Занятость; Sequella, Inc. Долевой инвестор

Дж. Джеймс Роуси, доктор медицины , бывший директор службы роговицы, Институт катаракты и лазера Святого Луки

J James Rowsey, MD, является членом следующих медицинских обществ: Американская академия офтальмологии, Американская ассоциация развития науки, Американская медицинская ассоциация, Ассоциация исследований в области зрения и офтальмологии, Медицинская ассоциация Флориды, Панамериканская ассоциация офтальмологии. , Sigma Xi и Южная медицинская ассоциация

Раскрытие информации: Нечего раскрывать.

Hampton Roy Sr, MD Адъюнкт-профессор, кафедра офтальмологии, Арканзасский университет медицинских наук

Хэмптон Рой-старший, доктор медицинских наук, является членом следующих медицинских обществ: Американской академии офтальмологии, Американского колледжа хирургов и Панамериканской ассоциации офтальмологов

.

Раскрытие информации: Нечего раскрывать.

John D Sheppard Jr, MD, MMSc Профессор офтальмологии, микробиологии и молекулярной биологии, клинический директор Центра офтальмологической фармакологии Томаса Р. Ли, директор ординатуры по офтальмологии, Медицинская школа Восточной Вирджинии; Президент Virginia Eye Consultants

John D Sheppard Jr, MD, MMSc является членом следующих медицинских обществ: Американская академия офтальмологии, Американское общество микробиологии, Американское общество катарактальной и рефракционной хирургии, Американское общество увеита и Ассоциация исследований зрения и офтальмологии

Раскрытие информации: Нечего раскрывать.

Ричард Х. Синерт, DO Профессор неотложной медицины, клинический ассистент профессор медицины, директор по исследованиям, Медицинский колледж Государственного университета Нью-Йорка; Консультирующий персонал, отделение неотложной медицины, Больничный центр округа Кингс

Richard H Sinert, DO является членом следующих медицинских обществ: Американский колледж врачей и Общество академической неотложной медицины

.

Раскрытие информации: Нечего раскрывать.

Франсиско Талавера, PharmD, PhD Адъюнкт-профессор, Фармацевтический колледж Медицинского центра Университета Небраски; Главный редактор Medscape Drug Reference

Раскрытие информации: Заработная плата Medscape

Кит Цанг, MD Врач-резидент, клинический помощник инструктора, отделение неотложной медицины, Государственный университет штата Нью-Йорк, Больница округа Кингс

Кит Цанг, доктор медицинских наук, является членом следующих медицинских обществ: Американский колледж врачей скорой помощи, Ассоциация резидентов скорой помощи и Общество академической неотложной медицины

.

Раскрытие информации: Нечего раскрывать.

Шьям Верма, MBBS, DVD, FAAD Доцент кафедры дерматологии Университета Вирджинии; Адъюнкт-профессор кафедры дерматологии Государственного университета Нью-Йорка в Стонибруке, адъюнкт-профессор кафедры дерматологии Пенсильванского университета

Шьям Верма, MBBS, DVD, FAAD является членом следующих медицинских обществ: Американская академия дерматологии

Раскрытие информации: Нечего раскрывать.

Ричард П. Винсон, доктор медицины Ассистент клинического профессора, кафедра дерматологии, Центр медицинских наук Техасского технологического университета, Медицинская школа Пола Л. Фостера; Консультант, дерматология Маунтин-Вью, PA

Ричард П. Винсон, доктор медицинских наук, является членом следующих медицинских обществ: Американской академии дерматологии, Ассоциации военных дерматологов, Техасского дерматологического общества и Техасской медицинской ассоциации

.

Раскрытие информации: Нечего раскрывать.

Эрик Л. Вайс, доктор медицинских наук, DTM&H Медицинский директор, Управление непрерывности обслуживания и планирования на случай стихийных бедствий, Директор по стипендиям, Стипендия по медицине катастроф Медицинского центра Стэнфордского университета, Председатель Целевой группы SUMC и LPCH по биотерроризму и готовности к чрезвычайным ситуациям, клинический младший преподаватель, Департамент Хирургия (неотложная медицинская помощь), Медицинский центр Стэнфордского университета

Эрик Л. Вайс, доктор медицинских наук, DTM&H, является членом следующих медицинских обществ: Американский колледж врачей скорой помощи, Американский колледж медицины труда и окружающей среды, Американская медицинская ассоциация, Американское общество тропической медицины и гигиены, Врачи за социальную ответственность, Юго-восточное хирургическое общество. Конгресс, Южная ассоциация онкологии, Южное клиническое неврологическое общество и Медицинское общество дикой природы

Раскрытие информации: Нечего раскрывать.

​Некультуральные методы выявления инфекции

Иммуноанализы используют антитела для обнаружения либо антител, либо антигена в образце пациента (обычно это сыворотка, но также мазки из носоглотки, мазки из зева и моча).

Тестирование на антитела

Иммунологические анализы на антитела, обычно называемые серологическими, имеют особое преимущество перед другими некультуральными диагностическими методами в их способности ретроспективно диагностировать инфекцию спустя долгое время после исчезновения жизнеспособных микроорганизмов или восстанавливаемой нуклеиновой кислоты.К другим преимуществам относятся высокая степень специфичности в случае сероконверсии, короткие сроки выполнения и повышенная безопасность по сравнению с методами культивирования некоторых организмов (например, Coxiella burnetii ). Они также могут исключить острую инфекцию на основании серологических данных предыдущего контакта и иммунитета.

Однако иммуноанализы имеют ряд недостатков. Большинство серологических диагнозов основаны на раннем обнаружении специфических IgM во время острой инфекции с последующей сероконверсией на специфические IgG.В этом подходе есть несколько подводных камней. Во-первых, во время острой инфекции серология может быть отрицательной, поскольку у пациента еще не выработался гуморальный ответ. Во-вторых, могут возникать перекрестные реакции с неродственными IgM. Хотя специфический IgM обычно выявляется в течение от шести недель до трех месяцев после острой инфекции, иногда он сохраняется в течение месяцев или лет или может повторно появляться в виде анамнестического ответа из-за другой инфекции. Этот ответ особенно характерен для IgM против Toxoplasma gondii , а также при диагностике арбовирусных инфекций, таких как вирус Barmah Forest и вирус Ross River, и может привести к ложноположительным результатам и ложным диагнозам.Такие ошибки можно уменьшить, измеряя концентрации антител в острой фазе и в фазе выздоровления, чтобы отслеживать изменения в ответ на инфекцию. Это предпочтительный метод окончательной серологической диагностики, но он явно замедляет время подтверждения диагноза. Сероконверсия часто происходит через две недели и более.

Чувствительность серологической диагностики может быть снижена под воздействием различных факторов, включая возраст и иммунодефицит. Серология полезна для диагностики только тогда, когда существует четкая связь между концентрацией антител и инфекцией.Он менее полезен при инфекциях, при которых антитела могут сохраняться, но не обеспечивают защиты от повторной инфекции или реактивации, таких как простой герпес, цитомегаловирус и вирус ветряной оспы, или при инфекциях, вызванных комменсальными организмами.

Ослабление иммунитета и повторное заражение обычно происходят с Bordetella pertussis , вызывающим коклюш. Обнаружение IgG, специфичного к токсину B. pertussis , более 100 МЕ/мл свидетельствует об острой инфекции, а у детей старшего возраста и взрослых это может быть подтверждено наличием IgA к B.коклюшный токсин .

Инфекции, для которых серология остается основой диагностики в общей практике, включают сифилис, вирус Эпштейна-Барра, цитомегаловирус, токсоплазмоз, парвовирус, вирус леса Барма, вирус реки Росс, лихорадку денге, чикунгунья и вирус Зика. Исторически выявление поликлональных антител (тест Monospot) использовалось для диагностики острой железистой лихорадки. Ему не хватает чувствительности и специфичности, и его обычно заменяют обнаружением специфических IgM/IgG к капсидному антигену вируса Эпштейна-Барр в сочетании с отсутствием IgG к ядерному антигену, который развивается от шести недель до трех месяцев после острой инфекции и остается положительным на протяжении всей жизни.

Тестирование на микробные антигены

Антиген – это компонент патогена, стимулирующий иммунный ответ. Иммуноанализы могут измерять это в различных типах образцов. Многие из этих тестов используются в настоящее время, в том числе тесты мочи на антиген Streptococcus pneumoniae и Legionella pneumophila серогруппы 1. Они полезны для идентификации возбудителя острой внебольничной пневмонии, а также тест на антиген стрептококка группы А в горле. мазки на бактериальный фарингит.Другие примеры полезных анализов антигена включают обнаружение криптококкового антигена в сыворотке и спинномозговой жидкости как у иммунокомпетентных пациентов, так и у пациентов с ослабленным иммунитетом, а также галактоманнановый антиген, который является суррогатным маркером инвазивного аспергиллеза, обычно у лиц с ослабленным иммунитетом.

Анализ на антиген может дать быстрые результаты — тест на антиген S. pneumoniae можно выполнить в течение 15 минут. Многие из этих тестов обладают очень хорошей специфичностью. Например, положительный антиген стрептококка группы А в мазке из зева может позволить целенаправленное лечение, если оно показано, и устранить необходимость в посеве.К сожалению, эти тесты часто менее чувствительны по сравнению с традиционными культуральными методами и особенно по сравнению с тестами амплификации нуклеиновых кислот. Поэтому их полезность часто заключается в обеспечении быстрой диагностики, а не в исключении клинической инфекции.

Комбинированные иммуноанализы

Недостатки изолированного использования анализов на антигены и антитела можно преодолеть путем их комбинирования. Анализы, включающие как антиген, так и антитела, такие как антиген NS1 вируса денге с IgM/IgG или скрининговое тестирование на антиген/антитело ВИЧ, предлагают сокращенные периоды диагностического окна и повышенную чувствительность и специфичность.Обнаружение антигена денге NS1 (рис.), в частности, позволило быстро подтвердить лихорадку денге с возможностью более раннего инициирования вмешательств общественного здравоохранения. Его чувствительность приравнивается к чувствительности теста полимеразной цепной реакции (ПЦР) на лихорадку денге в первую неделю болезни.

Использование бактериофага в качестве диагностического инструмента

Туберкулез (ТБ) — смертельное инфекционное заболевание, от которого в 2020 г. во всем мире умерло 1,5 миллиона человек. Особенно страдают развивающиеся страны, и диагностика, особенно у детей и подростков, может быть затруднена.Помимо заражения людей, микобактерии, вызывающие туберкулез, также могут заражать крупный рогатый скот и оказывать серьезное влияние на сельское хозяйство. PBD Biotech разработала диагностический тест на туберкулез, в котором используется технология бактериофагов наряду с количественной ПЦР для выявления живых болезнетворных патогенов у людей и крупного рогатого скота.

Мы поговорили с доктором Томасом Ричардсоном, менеджером по исследованиям и разработкам в PBD Biotech, чтобы узнать больше о том, что означает разработка технологии Actiphage ® для диагностики туберкулеза в будущем.

Кэти Брайтон (КБ): Не могли бы вы объяснить, что такое бактериофаги и как они используются?

Томас Ричардсон (TR): Фаги (или бактериофаги, если дать им свое полное название) — это вирусы, которые инфицируют и размножаются внутри бактерий в рамках их естественного жизненного цикла. Во время этого процесса бактериальная клетка обычно разрушается, а ее содержимое и ДНК высвобождаются.

С точки зрения их использования и применения, я думаю, что растет признание фагов и вирусов в целом как в качестве исследовательского инструмента, так и в более прикладных условиях.В последние годы фаги все чаще используются для лечения устойчивых к антибиотикам бактериальных инфекций. Фаг даже был предложен в качестве инструмента для достижения индивидуальной инженерии кишечного микробиома, поскольку исследователи начинают лучше понимать роль различных видов бактерий, обнаруженных в кишечной флоре. Вирусы в целом также являются богатым источником компонентов для синтетической биологии, где их можно использовать для создания ортологичных цепей и систем.

KB: Как компания PBD Biotech использовала технологию бактериофагов для разработки нового диагностического теста?

 

TR: Крайне важно, что фаг проявляет специфичность к хозяину и заражает только живые бактерии данного вида или группы.Что PBD Biotech сделала со своим анализом Actiphage ® , так это объединила фаговую технологию (для обнаружения только жизнеспособных микобактерий) с традиционными методами количественной ПЦР (которые чрезвычайно чувствительны и специфичны для ДНК-мишени) для создания высокочувствительного и специфичного нового диагностического анализа, который обнаруживает только живые болезнетворные микроорганизмы. Тест в настоящее время проходит клинические испытания для оценки его эффективности для обнаружения Mycobacterium tuberculosis (TB) у людей. По данным ВОЗ, 1.В 2020 году от туберкулеза во всем мире умерло 5 миллионов человек, и еще миллионы являются носителями этого заболевания, поэтому существует острая необходимость в быстрой и эффективной диагностике.

У человека и других видов возбудители туберкулеза называются микобактериями и характеризуются необычно толстой воскообразной клеточной стенкой. К сожалению, это свойство делает микобактерии невосприимчивыми к выделению ДНК и обнаружению методом ПЦР. Диагностика туберкулеза с использованием культуральных методов также чрезвычайно сложна: в основном из-за удивительно медленного роста, который они демонстрируют.Например, быстрорастущие бактерии, такие как Escherichia coli , растут и размножаются со временем удвоения всего 20 минут, тогда как время удвоения микобактерий может превышать 24 часа.

Текущие методы диагностики туберкулеза человека также обычно полагаются на мокроту из легких для выявления инфекции. Однако почти половина всех больных туберкулезом легких не может выделять мокроту, особенно на ранних стадиях заболевания и у детей. Actiphage ® способен обнаруживать микобактерии в образцах крови, которые, как правило, легче собрать.Надеемся, что это позволит впервые провести скрининг заболеваний всего населения. Поскольку Actiphage ® может специфически обнаруживать живые жизнеспособные бактерии в кровотоке, ранние данные также свидетельствуют о том, что этот метод может быть особенно эффективным при определении того, когда человек или животное могут стать заразными или у них появятся симптомы туберкулеза.

 

KB: Анализ Actiphage ® также позволяет диагностировать туберкулез у крупного рогатого скота. Какое преимущество дает эта комбинация по сравнению с существующими методами тестирования?

 

TR: В 2021 году в Великобритании из-за туберкулеза крупного рогатого скота было забито более 40 000 голов крупного рогатого скота.Заболевание является огромной проблемой для фермеров и бременем для налогоплательщиков. Текущим первичным скрининговым тестом на туберкулез крупного рогатого скота является однократный сравнительный внутрикожный туберкулиновый тест (SICTT), который работает путем оценки иммунного ответа крупного рогатого скота. Для проведения теста ветеринар вводит небольшое количество птичьего и бычьего туберкулина в кожу животного в двух разных местах, чтобы сравнить относительные иммунные реакции. Если животное ранее было заражено бычьим туберкулезом, через три дня в месте инъекции быка может быть обнаружена более выраженная локальная припухлость.

Считается, что тест SICTT имеет чувствительность 50–90 %. Для получения результата требуется три дня, требуется не менее двух посещений ветеринара, и он не может отличить зараженный скот от вакцинированного, что препятствует использованию вакцинации в качестве инструмента для достижения биологического контроля. Из-за относительно низкой чувствительности метода SICTT он также пропускает значительную часть носителей, оставляя резервуар болезни в стадах.

 

Actiphage ® определяет присутствие живых патогенов даже при очень низких уровнях.Таким образом, это может помочь выявить носителей болезни до того, как они станут заразными, чтобы их можно было удалить из стада. Тот факт, что Actiphage ®  выявляет патоген, а не иммунный ответ, также означает, что его можно использовать в качестве анализа DIVA для «отличения инфицированных животных от вакцинированных», что потенциально чрезвычайно полезно в борьбе за искоренение туберкулеза крупного рогатого скота.

KB: Анализ Actiphage ® уничтожает и обнаруживает определенные бактерии?

 

TR: Несмотря на то, что фаги способны заражать и уничтожать бактерии, в настоящее время нет планов превратить Actiphage ® в антибактериальное средство.Однако существует возможность использования фага для нацеливания на микобактерии, наблюдаемые при так называемом «начальном» заболевании; фаза туберкулезной инфекции, при которой ранее латентное заболевание постепенно становится активным. Согласно исследованию 2016 года, опубликованному в PLOS Medicine, до 1,7 миллиарда человек во всем мире могут быть носителями латентной формы туберкулеза. Мы также знаем, что у некоторых людей, у которых диагностировано латентное заболевание, болезнь находится в начальной или даже активной стадии, но они неправильно классифицируются с помощью существующих диагностических методов. Если Actiphage ® сможет правильно идентифицировать начальное заболевание, это будет очень интересно, поскольку потенциально позволит идентифицировать «латентные» туберкулезные инфекции, которые находятся в процессе прогрессирования в активное заболевание.

 

KB: Считаете ли вы, что тестирование применимо не только для крупного рогатого скота? Как насчет диагностики различных заболеваний?

 

TR: Абсолютно. Помимо туберкулеза человека, туберкулеза крупного рогатого скота и болезни Ионе у крупного рогатого скота (которые вызываются Mycobacterium tuberculosis , M. bovis и M. avium подвидов paratuberculosis соответственно), у нас есть данные, позволяющие предположить, что Actiphage ® можно использовать для обнаружения более 20 видов микобактерий.Эта технология была успешно применена на образцах крови животных-хозяев, включая бизонов и оленей, а также экзотических животных, таких как львы, жирафы и верблюды. Как упоминалось ранее, Actiphage ®  в настоящее время также проходит клинические испытания для оценки его эффективности для выявления туберкулеза у людей.

 

KB: В дополнение к вашей цели получить одобрение Всемирной организации здравоохранения животных (МЭБ), каковы следующие шаги/приоритеты для вас и вашей команды?

TR: Поскольку ТБ крупного рогатого скота является заболеванием, подлежащим регистрации, валидация МЭБ, безусловно, является важным шагом на пути к международному признанию Actiphage ® в качестве эффективного диагностического средства.Однако эту технологию можно использовать и без валидации МЭБ для диагностики болезни Ионе. Это важно, так как современные диагностические тесты изо всех сил пытаются добиться точного обнаружения возбудителя ( M. avium , подвид paratuberculosis ).

Я думаю, что в дальнейшем компания PBD Biotech будет уделять все больше внимания диагностике и борьбе с туберкулезом человека. Туберкулез человека уступает только COVID-19 в качестве смертельного инфекционного заболевания во всем мире. Таким образом, работа с партнерами по разработке высокоэффективного средства диагностики человека, способного выявлять латентные формы туберкулеза, станет ключевым приоритетом.

 

Томас Ричардсон разговаривал с Кэти Брайтон, научным копирайтером для Technology Networks.

Быстрая идентификация инфекции Mycobacterium tuberculosis методом поверхностного плазмонного резонанса на основе нового формата массива | Nanoscale Research Letters

  • Soo PC, Horng YT, Chang KC, Wang JY, Hsueh PR, Chuang CY, Lu CC, Lai HC: Простой анализ наночастиц золота для идентификации комплекса Mycobacterium tuberculosis и Mycobacterium tuberculosis из клинические образцы. Mol Cell Probes 2009, 23: 240–246. 10.1016/j.mcp.2009.04.006

    Артикул Google ученый

  • Dye C, Lonnroth K, Jaramillo E, Williams BG, Raviglione M: Тенденции заболеваемости туберкулезом и их детерминанты в 134 странах. Bull World Health Organ 2009, 87: 683–691. 10.2471/БЛТ.08.058453

    Артикул Google ученый

  • Soo PC, Horng YT, Hsueh PR, Shen BJ, Wang JY, Tu HH, Wei JR, Hsieh SC, Huang CC, Lai HC: Прямая и одновременная идентификация комплекса Mycobacterium tuberculosis (MTBC) и Mycobacterium tuberculosis (MTB) с помощью экспресс-анализа гнездовой мультиплексной ПЦР-ICT. J Microbiol Methods 2006, 66: 440–448. 10.1016/j.mimet.2006.01.010

    Артикул Google ученый

  • Young DB, Perkins MD, Duncan K, Barry CE III: Противостояние научным препятствиям на пути к глобальной борьбе с туберкулезом. J Clin Invest 2008, 118: 1255–1265. 10.1172/JCI34614

    Артикул Google ученый

  • Brisson-Noel A, Aznar C, Chureau C, Nguyen S, Pierre C, Bartoli M, Bonete R, Pialoux G, Gicquel B, Garrigue G: Диагностика туберкулеза путем амплификации ДНК в оценке клинической практики. Ланцет 1991, 338: 364–366. 10.1016/0140-6736(91)-8

    Артикул Google ученый

  • Li H, Turhan V, Chokhani L, Stratton CW, Dunbar SA, Tang YW: Идентификация и дифференциация клинически значимых видов микобактерий непосредственно из кислотоустойчивых бациллоположительных культуральных бульонов. J Clin Microbiol 2009, 47: 3814–3820. 10.1128/JCM.01534-09

    Артикул Google ученый

  • Мдивани Н., Ли Х., Ахалаиа М., Гегия М., Гогинашвили Л., Кернодл Д.С., Хечинашвили Г., Тан Ю.В.: Мониторинг терапевтической эффективности путем обнаружения в режиме реального времени мРНК Mycobacterium tuberculosis в мокроте. Clin Chem 2009, 55: 1694–1700. 10.1373/clinchem.2009.124396

    Артикул Google ученый

  • Chan ED, Heifets L, Iseman MD: Иммунологическая диагностика туберкулеза: обзор. Tuber Lung Dis 2000, 80: 131–140. 10.1054/тул.2000.0243

    Артикул Google ученый

  • Steingart KR, Henry M, Ng V, Hopewell PC, Ramsay A, Cunningham J, Urbanczik R, Perkins M, Aziz MA, Pai M: Сравнение флуоресценции с обычной микроскопией мазка мокроты на туберкулез: систематический обзор. Lancet Infect Dis 2006, 6: 570–581. 10.1016/S1473-3099(06)70578-3

    Артикул Google ученый

  • Дробневски Ф.А., Коуз М., Гибсон А., Янг Д.: Современная лабораторная диагностика туберкулеза. Lancet Infect Dis 2003, 3: 141–147. 10.1016/S1473-3099(03)00544-9

    Артикул Google ученый

  • Prasek J, Huska D, Jasek O, Zajickova L, Trnkova L, Adam V, Kizek R, Hubalek J: Электроды на основе углеродных композитных микро- и нанотрубок для обнаружения нуклеиновых кислот. Nanoscale Res Lett 2011, 6: 385. 10.1186/1556-276X-6-385

    Статья Google ученый

  • Сильва Л.Б., Вейгас Б., Дориа Г., Коста П., Инасио Дж., Мартинс Р., Фортунато Э., Баптиста П.В.: Портативная оптоэлектронная биосенсорная платформа для идентификации микобактерий из комплекса Mycobacterium tuberculosis . Биосенс ​​Биоэлектрон 2011, 26: 2012–2017. 10.1016/j.bios.2010.08.078

    Статья Google ученый

  • Yeo WH, Liu S, Chung JH, Liu Y, Lee KH: Быстрое обнаружение клеток Mycobacterium tuberculosis с помощью иммуноанализа на основе микронаконечников. Anal Bioanal Chem 2009, 393: 1593–1600. 10.1007/s00216-008-2591-x

    Артикул Google ученый

  • Дженнаро М.Л.: Иммунологическая диагностика туберкулеза. Clin Infect Dis 2000, 30: S243-S246. 10.1086/313868

    Артикул Google ученый

  • Steingart KR, Henry M, Laal S, Hopewell PC, Ramsay A, Menzies D, Cunningham J, Weldingh K, Pai M: Коммерческие тесты на обнаружение серологических антител для диагностики туберкулеза легких: систематический обзор. PLoS Med 2007, 4: e202. 10.1371/journal.pmed.0040202

    Статья Google ученый

  • Gauglitz G: Прямое оптическое обнаружение в биоанализе: обновление. Anal Bioanal Chem 2010, 398: 2363–2372. 10.1007/s00216-010-3904-4

    Артикул Google ученый

  • Chang CC, Chiu NF, Lin DS, Chu-Su Y, Liang YH, Lin CW: Высокочувствительное обнаружение углеводного антигена 15–3 с использованием тонкопленочного биосенсора на основе плазмонного резонанса на основе золота/оксида цинка. Anal Chem 2010, 82: 1207–1212. 10.1021/ac7j

    Артикул Google ученый

  • Лепаж Д., Кэрриер Д., Хименес А., Бове Дж., Дубовски Дж.Дж.: Расстояния распространения плазмонов для интерферометрического поверхностного плазмонного резонанса. Nanoscale Res Lett 2011, 6: 388. 10.1186/1556-276X-6-388

    Статья Google ученый

  • Хонг С., Ли С., Йи Дж.: Чувствительное и селективное по размеру молекул обнаружение белков с использованием наноостровков золота на основе чипа и гетеролигандов с помощью спектроскопии локализованного поверхностного плазмонного резонанса. Nanoscale Res Lett 2011, 6: 336. 10.1186/1556-276X-6-336

    Статья Google ученый

  • Chang CC, Lin S, Wei SC, Chen CY, Lin CW: Усиленный датчик поверхностного плазмонного резонанса для включения ионов ртути с использованием наночастиц золота. Биосенс ​​Биоэлектрон 2011, 30: 235–240. 10.1016/j.bios.2011.09.018

    Статья Google ученый

  • Дорохин Д., Хааснут В., Франссен МКР, Зуилхоф Х., Нилен М.В.Ф.: визуализация поверхностного плазмонного резонанса для мультиплексного микроанализа обнаружения микотоксинов. Anal Bioanal Chem 2011, 400: 3005–3011. 10.1007/s00216-011-4973-8

    Артикул Google ученый

  • Оцуки С., Исикава М.: Поверхностный плазмонно-резонансный томограф со сканированием длины волны для безметочного мультиплексного белкового микрочипового анализа. Биосенс ​​Биоэлектрон 2010, 26: 202–206. 10.1016/j.bios.2010.06.017

    Статья Google ученый

  • Chen Y, Nguyen A, Niu L, Corn RM: Изготовление микрочипов ДНК с монослоями поли(L-глутаминовой кислоты) на золотых подложках для измерений SPR-визуализации. Ленгмюр 2009, 25: 5054–5060. 10.1021/la804021t

    Артикул Google ученый

  • Файнштейн А.Р.: Клиническая биостатистика. XXXIII. О преподавании статистики студентам-медикам. Clin Pharmacol Ther 1975, 18: 121–126.

    Google ученый

  • Houghton RL, Lodes MJ, Dillon DC, Reynolds LD, Day CH, McNeill PD, Hendrickson RC, Skeiky YA, Sampaio DP, Badaro R, Lyashchenko KP, Reed SG: Использование мультиэпитопных полипротеинов в серодиагностике активного туберкулеза. Clin Diagn Lab Immunol 2002, 9: 883–891.

    Google ученый

  • Moran AJ, Treit JD, Whitney JL, Abomoelak B, Houghton R, Skeiky YA, Sampaio DP, Badaro R, Nano FE: Оценка серодиагностического потенциала девяти новых белков из Mycobacterium tuberculosis . FEMS Microbiol Lett 2001, 198: 31–36.

  • Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован.