Энтерококк фекальный при беременности: Фекальный энтерококк в мазке при беременности — 14 ответов гинеколога на вопрос №469654

Содержание

Энтерококк фекальный при беременности — Вопрос урологу

Если вы не нашли нужной информации среди ответов на этот вопрос, или же ваша проблема немного отличается от представленной, попробуйте задать дополнительный вопрос врачу на этой же странице, если он будет по теме основного вопроса. Вы также можете задать новый вопрос, и через некоторое время наши врачи на него ответят. Это бесплатно. Также можете поискать нужную информацию в похожих вопросах на этой странице или через страницу поиска по сайту. Мы будем очень благодарны, если Вы порекомендуете нас своим друзьям в социальных сетях.

Медпортал 03online.com осуществляет медконсультации в режиме переписки с врачами на сайте. Здесь вы получаете ответы от реальных практикующих специалистов в своей области. В настоящий момент на сайте можно получить консультацию по 74 направлениям: специалиста COVID-19, аллерголога, анестезиолога-реаниматолога, венеролога, гастроэнтеролога, гематолога, генетика, гепатолога, гериатра, гинеколога, гинеколога-эндокринолога, гомеопата, дерматолога, детского гастроэнтеролога, детского гинеколога, детского дерматолога, детского инфекциониста, детского кардиолога, детского лора, детского невролога, детского нефролога, детского онколога, детского офтальмолога, детского психолога, детского пульмонолога, детского ревматолога, детского уролога, детского хирурга, детского эндокринолога, дефектолога, диетолога, иммунолога, инфекциониста, кардиолога, клинического психолога, косметолога, липидолога, логопеда, лора, маммолога, медицинского юриста, нарколога, невропатолога, нейрохирурга, неонатолога, нефролога, нутрициолога, онколога, онкоуролога, ортопеда-травматолога, офтальмолога, паразитолога, педиатра, пластического хирурга, подолога, проктолога, психиатра, психолога, пульмонолога, ревматолога, рентгенолога, репродуктолога, сексолога-андролога, стоматолога, трихолога, уролога, фармацевта, физиотерапевта, фитотерапевта, флеболога, фтизиатра, хирурга, эндокринолога.

Мы отвечаем на 97.15% вопросов.

Оставайтесь с нами и будьте здоровы!

энтерококк в мазке, в моче и вред от антибиотиков для малыша: ru_perinatal — LiveJournal

casa_bella (casa_bella) wrote in ru_perinatal,
Category: Девушки, я в отчаянье: энтерококк faecalis атаковал мой организм! В небеременность в посеве тоже нередко его обнаруживали, лечила антибиотиками. В беременность впервые взяли посев в 14 недель, и там он — энтерококк (просто мазки на флору всегда хорошие — и тогда, и сейчас), и еще кишечная палочка, титры что-то ок. 10в6, потом 10в8. Лечили амоксиклавом внутривенно, энтерококк никуда не делся, чуть поуменьшился, но потом снова вырос. На 20 неделе зашили ШМ, в связи с этим, а также в связи с энтерококком назначили антибиотик цифатоксин, снова внутривенно, снова на 7 дней. Контрольный посев еще не делала, но чувствую, что и этот антибиотик не убил эту гадость (не даром же пишут в инете, что не лечат дисбактериозы антибиотиками, что на их фоне бактерии только множатся!). Параллельно с а/биотиками пила интестибактериофак и аципол (начиталась, что интести эффективен в этом случае, хотя анализ на чувствительность к фагам не сдавала). Короче, на 21 неделе чертов энтерокк высеился еще и в моче (титры не знаю) и лейкоциты в анализе по Ничипоренко 8700 при норме до 2000. (до этого моча была чистая, как слеза). Теперь уже назначили монурал — 3 г., да еще и два паектика. Я выпила пока один и больше не хочу травить ребеночка!
Девочки, мне так страшно: во-первых, из-за того, что инфекция никак не хочет изводиться. Как мне с ней бороться, что делать? Сейчас вторую неделю пью канефрон и завариваю лист брусники. Про правила подмывания и прочее знаю, стринги не ношу, откуда берется эта хрень? а во-вторых, как все эти антибиотики сказываются на малышке??? Конечно, они все разрешены при беременности, но ведь половина точно проникает к ребенку.
Чем это чревато для него? Дисбактериозом и коликами или еще чем-то?
  • Отзывы о врачах 1РД

    Решила всё-таки остановиться на 1 роддоме. Ищу свежие отзывы (здесь нашла максимум за 2015-16 годы) на Утц, Любанскую. Они вроде сейчас поменьше…

  • Варикоз и тест на АТ мужу

    Девочки, хэлп! У кого было и как справлялись? Варикоз половых губ. Сейчас 25 недель. А что же будет дальше? Как себе помочь? Уже тяжело ходить, болят…

  • 1-й роддом, Зеленоградский ПЦ, другие роддома на северо-западе Москвы

    Добрый день! Ищу относительно свежие отзывы по 1РД на Планерной, ПЦ в Зеленограде, возможно, 17РД или что-то ещё на северо-западе Мск. Нужно…

Photo

Hint http://pics.livejournal.com/igrick/pic/000r1edq

Насколько опасен энтерококк фекалис у мужчины при планировании беременности?

Насколько опасен энтерококк фекалис у мужчины при планировании беременности?

Спросить у доктора

Информация о материале
Категория: Спросить у доктора
Опубликовано: 19 августа 2014
Просмотров: 9702

Добрый день! Скажите, пожалуйста, насколько опасен энтерококк фекалис у мужчины при планировании беременности? Как он передается, может ли он меня заразить? И как он поддается лечению? У мужа был найден 10*4, пролечил антибиотиком флексид.

Теперь не знаем что делать, сдавать ли повторный анализ? Или наличие этого энтерококка может показать спермограмма или посев спермы на флору?

Спасибо! Марина.

Уважаемая Марина, не совсем ясно в какой среде выявлен данный микроорганизм. В случае, если речь идет об эякуляте или секрете простаты, то данный титр (количество инфекции) является высоким и минимальный курс антибиотикотерапии должен составлять 20 дней. Лекарственный препарат должен быть подобран строго по результатам посева флоры и определения ее чувствительности к антибиотикам. Также, безусловно, необходимо установить причину инфекционно-воспалительного процесса. Для более подробной консультации запишитесь на прием по тел.: 84952013995, наши доктора Вам все подробно расскажут.

Операции «Золотого стандарта»

КЛИНИКА УРОЛОГИИ

Сеченовского университета
Основана в 1866 году.

+7 (495) 201-39-95

Москва, ул. Большая Пироговская, 2, стр. 1
отделение №2, м. Фрунзенская
e-mail: Адрес электронной почты защищен от спам-ботов. Для просмотра адреса в вашем браузере должен быть включен Javascript.

СХЕМА ПРОЕЗДА

ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М.Сеченова Минздрава России

Enterococcus Faecalis в моче, норма энтерококка у женщин и ребенка


Содержание

За энтерококком фекальным в моче при беременности следует следить особенно внимательно, поскольку именно в этот период организм достаточно слаб и не может нормально противостоять многим проблемам. В результате число бактерий начинает расти, что нередко вызывает серьезные заболевания, которые могут стать угрозой беременности.

Фекальный энтерококк длительное время был частью большой группы, но недавно его все же вывели в отдельный тип. С этого момента появилась отдельная условно-патогенная микрофлора, которая и получила название фекального энтерококка. Данные микробы играют в организме человека огромную роль. Без них нормальной работы некоторых органов быть не может, но и чрезмерная концентрация микроорганизмов очень опасна.

Представительницам прекрасного пола специалисты рекомендуют часто проходить проверку на баланс микрофлоры. Именно женщины чаще всего страдают от фекального энтерококка. Чрезмерное размножение микроорганизмов может вызывать массу патологий мочеполовой системы. Сюда относятся цистит, пиелонефрит, уретрит и аднексит.


Чтобы не сталкиваться с подобными неприятностями, особенно во время беременности, необходимо внимательно следить за своим здоровьем и периодически проводить профилактические мероприятия. Определить наличие фекального энтерококка можно по определенным симптомам. Женщины в положении часто узнают о своей проблеме во время сдачи ежемесячных анализов. Поэтому не стоит игнорировать посещение врача и прохождение профилактической диагностики.

Причины появления фекального энтерококка

Как уже говорилось выше, эти микроорганизмы всегда присутствуют в теле человека в определенном количестве. В небольшой концентрации они приносят большую пользу, но как только численность фекального энтерококка возрастает, это вызывает серьезные заболевания.

Чаще всего страдают от подобной проблемы представительницы прекрасного пола. Более того, именно во время вынашивания ребенка в организме чаще всего происходят изменения, которые и приводят к увеличению концентрации фекального энтерококка в моче. Поэтому беременные женщины нередко жалуются на цистит и уретрит, хотя никаких видимых причин для появления подобных недугов нет.

Увеличение числа фекальных энтерококков говорит о том, что в организме имеется дисбактериоз. Это большая проблема, которая может повлечь за собой неприятные последствия. Чаще всего к дисбактериозу приводит неправильное использование антибиотиков, чрезмерное увлечение гигиеническими процедурами и изменение гормонального фона.

К примеру, негативным фактором может оказаться спринцевание. Если нормальная микрофлора влагалища будет нарушена, это вызовет активное размножение некоторых элементов. Среди них оказывается и фекальный энтерококк, который после можно обнаружить в анализах мочи.

Признаки патологии


Что дает анализ мочи?[/url]

Если численность элементов фекального энтерококка нормальная, никаких негативных проявлений быть не должно. Однако как только количество микроорганизмов увеличится, могут проявиться различные заболевания мочеполовой системы. Чаще всего фекальный энтерококк вызывает цистит и уретрит, а также может стать причиной пиелонефрита.

Все это очень неприятно, а в некоторых случаях, к примеру, при беременности, может быть достаточно опасно. Поэтому лечить заболевания нужно правильно, а для начала болезнь необходимо верно диагностировать.

Явными признаками того, что в организме увеличилось число патогенных микроорганизмов, является боль во время мочеиспускания, появление подозрительных выделений, которые отличаются резким запахом и необычным цветом, сильный дискомфорт в нижней части живота, слабость, повышенная утомляемость и снижение иммунитета.

Особенно стоит заметить, что при увеличении численности фекального энтерококка в организме женщины происходит нарушение работы некоторых важных систем. Это сказывается на снижении полового влечения и качестве ощущений во время полового акта.


Энтерококк при беременности

Женщины в положении должны сдавать анализы часто. Только так у врача будет возможность следить за состоянием здоровья своей пациентки и правильно вести беременность. Анализ мочи представительницы прекрасного пола во время вынашивания ребенка должны сдавать каждый месяц.

Нередко при исследовании материала специалисты лаборатории находят в моче беременных женщин бактерии. Учитывая то, что в этот сложный период организм сильно перегружен, могут развиться различные патологии. Поэтому увеличение численности некоторых микроорганизмов не считается редкостью.

Если в моче будут выявлены бактерии больше нормы, ставится диагноз «бактериурия». Очень часто представительницы прекрасного пола получают такой диагноз внезапно.

То есть никакие неприятные симптомы их не беспокоят, но состав мочи оказывается ненормальным.



Отклонением от нормы считается концентрация микроорганизмов более 100 тысяч единиц на 1 см³ жидкости. В случае, когда бактериурия протекает без каких-либо симптомов, ее классифицируют, как асимптоматичную.

Примерно в 20% случаев причиной бактериурии у беременных женщин становится фекальный энтерококк, вызывающий цистит или уретрит.

Для течения беременности это опасная ситуация. Подобные заболевания нужно лечить, а численность бактерий восстанавливать до нужного уровня. Учитывая то, что лечению может помешать гормональный дисбаланс и снижение иммунитета, для беременных женщин всегда выбирается особая терапия. Более того, не нужно забывать о том, что лекарственные препараты должны быть достаточно безопасными для того, чтобы не навредить развитию будущего ребенка.


Читайте также:
Много бактерий в моче у женщин
Бактерии в анализе мочи при беременности

Лечение патологии

Если не проводить лечебных мероприятий и игнорировать рекомендации врача, беременность может обернуться выкидышем либо осложнениями во время родов. Назначить лечебные процедуры может только гинеколог после тщательного осмотра пациентки и получения данных всех необходимых анализов. Чаще всего для решения проблемы с фекальным энтерококком специалисты назначают антибактериальные лекарственные средства. Во время беременности может применяться Ампициллин, Гентамицин либо Цефтриаксон.

Кроме того, в дополнение к антибактериальному лечению часто назначают качественные витаминные комплексы, которые способны улучшить состояние иммунной системы, помогая организму самому побороть патологию. К таким препаратам относят Компливит, Элевит, Витрум, Виталюкс и Прегнавит.

При проявлении признаков дисбактериоза либо цистита может быть использовано средство местного действия.

Это различные гели и мази с антибактериальным эффектом. В последнее время все чаще для решения проблем с энтерококками стали использовать бактериофаги. Их принимают в жидком виде утром до приема пищи.

Бактериофаги считаются безопасными средствами, которые подходят для лечения беременных женщин. Их назначают и маленьким детям, но только в виде клизмы. Такой способ лечения бактериоза используется при обнаружении проблем у новорожденных детей.

Медики признают, что бактериофаги нельзя сравнить по эффективности с антибактериальными препаратами. Но их побочные эффекты минимальны, поэтому такой тип лечения идеально подходит для представительниц прекрасного пола в положении.


[url=http://siberian-health.ru/files/2017/enterococcus-fae-moch-2.jpg]

Польза и вред энтерококков

В организме человека присутствует несколько видов бактерий. Некоторые из них полезны, другие вредны. Существует и отдельный тип микроорганизмов, которые несут большую пользу, но только в том случае, если их концентрация не выходит за пределы нормы. Фекальный энтерококк входит в число последних. В определенном количестве данная бактерия имеется у каждого, но допускать повышения уровня ее концентрации нельзя.

Энтерококки необходимы организму, так как они участвуют в переработке углеводов, выделяют молочную кислоту и улучшают иммунитет. Однако если по какой-либо причине число бактерий вырастает, они начинают провоцировать развитие опасных заболеваний, которые в первую очередь связаны с мочеполовой системой. Действие энтерококков может сказаться и на органах дыхания, поэтому от дисбактериоза нужно обязательно избавляться.

Во время беременности представительницы прекрасного пола должны предельно тщательно следить за своим здоровьем. При появлении жжения во время мочеиспускания, боли в животе и подозрительных выделений зеленоватого либо желтоватого цвета, нужно срочно обратиться к врачу.

Повышение уровня фекальных энтерококков и бактериурия может стать причиной маточно-плацентарной недостаточности и отхождения вод задолго до начала беременности. Все это очень опасно, так как грозит инфицированием плода либо преждевременными родами. Фекальный энтерококк в моче может стать причиной развития внутриутробных патологий, поэтому от него нужно обязательно избавляться, как можно раньше, а лучше вовсе не допускать развития подобной неприятности.


Понравилась статья? Поделиться с друзьями:

Выживание, распространение и транслокация Enterococcus faecalis и последствия для беременных мышей | Письма FEMS по микробиологии

109″> Аннотация

Беременные матери подвержены бактериальным инфекциям, которые могут поставить под угрозу здоровье матери и потомства. Enterococcus faecalis — это повсеместно распространенный вид, встречающийся в продуктах питания, ресторанах и больницах, где беременные женщины часто подвергаются воздействию этой бактерии. Однако выживание, распространение, транслокация и соответствующее влияние E.faecalis не исследовались в период беременности, когда мать и плод восприимчивы к бактериальной инфекции. В этом исследовании флуоресцентный штамм E. faecalis использовался для отслеживания судьбы бактерии у беременных мышей. Было обнаружено, что перорально введенный штамм E.

faecalis выживает и распространяется во все отделы желудочно-кишечного тракта. Он также изменил структуру бактериального сообщества, значительно уменьшив разнообразие видов Lactobacillus , нарушив нормальную структуру и функцию кишечного барьера, что может способствовать транслокации бактерий в кровь, селезенку, плаценту и плод.Это может повлиять на рост и развитие плода и плаценты.

111″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0001″> Введение

Enterococcus faecalis широко выделяют из окружающей среды (Rathnayake et al. , 2011), пищи (Giraffa, 2006) и пищеварительного тракта (Nueno-Palop & Narbad, 2011). В прошлом E. faecalis считались безвредными бактериями. Некоторые штаммы даже использовались в качестве пробиотиков для создания благоприятной среды в кишечнике (Franz et al., 2011). Однако этот консенсус был оспорен (Arias & Murray, 2012). Исследования показали, что E. faecalis является частым возбудителем внутрибольничных инфекций и может нарушать микробный баланс кишечника и вызывать воспаление (Balish & Warner, 2002; Kim et al. , 2007; Lupp et al. , 2007). ).

Беременная женщина восприимчива к патогенным инфекциям, которые могут поставить под угрозу здоровье как матери, так и потомства, таким как цитомегаловирус (Scott et al., 2012), Trypanosoma Cruzi (Duaso et al. , 2011), Salmonella (Chattopadhyay et al. , 2010) и Listeria monocytogenes (Lamont et al. , 2011). Хотя E. faecalis был клинически обнаружен в грудном молоке, плаценте, амниотической жидкости, пуповинной крови и меконии (Martin et al. , 2004; Jimé nez et al. , 2008), его влияние на беременных редко вызывает беспокойство.В предыдущих отчетах упоминалось, что E. faecalis способен преодолевать кишечный барьер и впоследствии вызывать заболевание (Wells et al. , 1990; Zeng et al. , 2004; Steck et al. , 2011). Однако выживаемость, распространение, транслокация и соответствующее влияние E. faecalis не исследовались в период беременности, когда мать и плод восприимчивы к бактериальной инфекции. Целью данного исследования является изучение влияния E.faecalis на беременных мышах.

114″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0002″> Материалы и методы

115″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0003″> Бактериальный штамм и условия культивирования

Enterococcus faecalis OG1RF с плазмидой pMV158GFP (резистентность к тетрациклину, Tc R ) был предоставлен Manuel Espinosa (Nieto & Espinosa, 2003). Штамм культивировали в среде TSB, содержащей 4 мкг мл -1 тетрациклина. Клетки собирали и восстанавливали до 10 9 КОЕ мл -1 перед использованием.

117″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0004″> Уход за животными

За животными ухаживали в соответствии с руководящими принципами институционального комитета по уходу за животными (NIH, публикация № 85–23, 1996 г.). Все процедуры проводились в соответствии с протоколами, предоставленными и одобренными Комитетом по обзору ухода за животными (номер утверждения 0064257), Наньчанский университет, Цзянси, Китай. Двенадцатинедельных беременных мышей КМ разводили в экспериментальном центре животных Наньчанского университета. Мышей содержали в клетках при 25 °C с 12-часовым циклом свет/темнота и ежедневно кормили водой и лабораторным кормом для мышей.Всех мышей умерщвляли с использованием CO 2 в конце эксперимента.

119″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0005″> Enterococcus faecalis инфекция полости рта

Беременных мышей случайным образом распределяли в опытную или контрольную группу в первый день беременности. Контрольной группе перорально вводили фосфатно-солевой буфер (PBS), а опытной группе — по 100 мкл бактериальной взвеси один раз в день в течение 19 дней (срок беременности мышей — 21 день). За день до предполагаемой даты родов всех мышей умерщвляли и стерилизовали поверхность 75% этанолом.Кровь получали путем энуклеации глазного яблока. Животных вскрывали для сбора соответствующих органов, включая желудок, кишечник, сердце, головной мозг, печень, селезенку, почки, плаценту и плод.

121″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0006″> Обнаружение E. faecalis у беременных мышей

Все образцы тканей гомогенизировали в PBS, серийно разбавляли и наносили на чашку с агаром TSB Tc R . Все планшеты инкубировали при 37°С в течение 24–48 ч до образования зеленых флуоресцентных колоний. И флуоресценцию, и устойчивость к тетрациклину использовали в качестве маркера обнаружения Е.faecalis OG1RF:pMV158GFP. Предварительные экспериментальные результаты показали, что другие устойчивые к тетрациклину бактерии также присутствовали в пищеварительном тракте беременных мышей.

123″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0007″> ПЦР-ДГГЭ анализ

Суммарная геномная ДНК была выделена с помощью бисерного метода. ПЦР проводили с использованием набора ДНК-полимеразы Taq (CoWin Biotech Co., Ltd, Пекин, Китай). Все используемые праймеры перечислены во вспомогательной информации, таблица S1. Условия ПЦР были следующими: 94 °С в течение 5 мин; 30 циклов при 94 °С по 30 с, 55 °С по 30 с и 72 °С по 30 с; затем 72°С в течение 10 мин.Продукты ПЦР анализировали в 1,5% агарозных гелях.

Денатурирующий градиентный гель-электрофорез (DGGE) анализ продуктов ПЦР выполняли с помощью универсальной системы обнаружения мутаций DCode™ (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA). Шаблоны DGGE были нормализованы и проанализированы с помощью биочислового программного обеспечения версии 2.0 (Applied Maths, Лондон, Великобритания). В процессе обработки выделялись разные дорожки, вычитался фон, компенсировались различия в интенсивности полос при нормализации и вычислялась корреляционная матрица. Кластеризация проводилась с помощью корреляции Пирсона и метода UPGMA. Также рассчитывались индексы разнообразия: богатство ( S ) определялось как количество полос в одной дорожке, индекс Шеннона-Винера ( H′ ) рассчитывался как , где P i – вероятность важности полосы на дорожке, рассчитанные из N i / N , где N i — высота пика полосы, а N — сумма всех высот пиков, ровность ( E ) рассчитывали из , где (Yu & Morrison, 2004).Индекс Симпсона ( D ) рассчитывали как (Menezes Bento et al ., 2005). Наконец, каждую представляющую интерес полосу вырезали из гелей, затем переносили в 1,5-мл пробирку, содержащую 30 мкл ТЕ-буфера, и инкубировали в течение ночи при 4°C, чтобы позволить ДНК диффундировать в буфер. Собранные растворы ДНК впоследствии использовали для секвенирования. Последовательности сравнивали с использованием blast-n, предоставленного NCBI blast (http://www. ncbi.nlm.nih.gov).

126″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0008″> Гистопатология и иммуногистохимия

Небольшие кусочки подвздошной, слепой и толстой кишки вырезали и фиксировали в 10% формалине.Эти образцы обезвоживали и заливали в парафин. Затем вырезали срезы ткани толщиной 5 мкм. Эти срезы переносили на чистые предметные стекла, сушили в течение ночи и хранили при комнатной температуре до использования. Смонтированные срезы тканей окрашивали гематоксилином и эозином для гистологического исследования. Для оценки патологии шесть полей на образец были исследованы и оценены в соответствии с методом, описанным Yang et al. . (2013).

Антиген был получен в 0.01 М раствор цитрата натрия при микроволновом облучении. Срезы толщиной 5 мкм окрашивали и визуализировали с использованием системы обнаружения Dako REAL EnVision™, пероксидаза/DAB, кролик/мышь (K5007, Dako, Glostrup, Дания). В качестве первичного антитела использовали анти-E-кадгерин (sc-8426) 1:200 (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA); биотинилированный козий антикроличий IgG служил вторичным антителом, а стрептавидин-пероксидаза хрена, входящая в набор, использовалась для передачи сигнала. Затем срезы фотографировали под микроскопом (Nikon Corp., Токио, Япония), и результаты были проанализированы с помощью Image-Pro Plus 6.0 (Media Cybernetics, Bethesda, MA). Среднюю оптическую плотность (MOD) (интегральная оптическая плотность/площадь) использовали для расчета уровней экспрессии Е-кадгерина в тканях.

129″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0009″> Статистический анализ

Если не указано иное, все эксперименты повторяли трижды. Все данные были проанализированы с помощью Sigma Plot 11.0 (Systat Software, Сан-Хосе, Калифорния) и версии 16.0 spss (SPSS Inc., Чикаго, Иллинойс).

131″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0010″> Результаты

132″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0011″> Распространение и транслокация жизнеспособных флуоресцентных E. faecalis у беременных мышей

Как показано на рис. 1а, жизнеспособность флуоресцентного E. faecalis в разных отделах пищеварительного тракта сильно различалась. В желудке не было обнаружено жизнеспособных флуоресцирующих штаммов E. faecalis , что позволяет предположить, что E. faecalis OG1RF не смогли колонизировать эту область. Однако количество флуоресцирующих Е.faecalis из толстой кишки были ≥ 5,6 ± 0,4 log 10 КОЕ г -1 . Количество клеток в слепой кишке колебалось от 5,6 ± 0,4 до 6,8 ± 0,2 log 10 КОЕ г -1 . Количество клеток в тонкой кишке было вариабельным. У трех из пяти беременных мышей количество клеток колебалось от 3,8 ± 0,2 до 4,0 ± 0,4 log 10 КОЕ г -1 , но целевые бактерии не были обнаружены в тонком кишечнике двух других мышей. В целом исследование показало, что при пероральном введении штаммов E.faecalis OG1RF может выживать и распространяться по всему кишечному тракту, особенно по слепой кишке.

Обследование флуоресцирующих Enterococcus faecalis у беременных мышей. ( а ) Количество флуоресцирующих E. faecalis , которые колонизировали различные области пищеварительного тракта беременных мышей. Значения представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение. ( б ) Количество флуоресцирующих E. faecalis , транслоцированных в разные ткани беременных мышей. Значения представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение.НД, не обнаружено.

Обследование флуоресцирующих Enterococcus faecalis у беременных мышей. ( а ) Количество флуоресцирующих E. faecalis , которые колонизировали различные области пищеварительного тракта беременных мышей. Значения представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение. ( б ) Количество флуоресцирующих E. faecalis , транслоцированных в разные ткани беременных мышей. Значения представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение. НД, не обнаружено.

На рис. 1b показано, что флуоресцирующие E. faecalis были обнаружены в различных тканях, что свидетельствует о способности перорально вводимых бактерий перемещаться.В целом, в головном мозге, сердце, печени или почках не было обнаружено жизнеспособных флуоресцирующих штаммов E. faecalis . Однако он был обнаружен в крови, селезенке, плаценте и плоде. Бактерии в крови колебались от 2,1 ± 0,1 до 2,3 ± 0,3 log 10 КОЕ мл -1 , а в селезенке от 2,4 ± 0,4 до 2,7 ± 0,4 log 10 КОЕ г -1 . Кроме того, в плацентах двух мышей было обнаружено относительно низкое количество флуоресцирующих E. faecalis (≤ 1,9 ± 0,2 Log 10 КОЕ г -1 ).Более того, у одной мыши в ее плоде наблюдали несколько жизнеспособных флуоресцентных E. faecalis .

136″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0012″> Влияние перорально вводимых E. faecalis на разнообразие бактериального сообщества в слепой кишке

Изменения показателей нормальной микробиоты и видов Lactobacillus определяли методом ПЦР-ДГГЭ. На рисунке S1 показано, что индекс сходства между контрольной и обработанной группами составлял 0,50–0,70 и 0,28–0,40 соответственно. На рис.2б индексы сходства составили 0,45–0,70 и 0,24–0,49 для видов Lactobacillus . Как правило, эти результаты показывают, что бактериальное сообщество в слепой кишке относительно стабильно, но резко изменилось при пероральном введении E. faecalis .

Влияние перорально введенного Enterococcus faecalis на сообщество Lactobacillus в микробиоте слепой кишки беременных мышей. ( а ) Lactobacillus , видоспецифические отпечатки PCR-DGGE микробиоты слепой кишки беременных мышей.( б ) Дендрограмма внутригруппового сходства профилей DGGE микробиоты слепой кишки у беременных мышей. Сходство было рассчитано с использованием корреляции Пирсона, а кластеризация была выполнена с использованием UPGMA.

Влияние перорально вводимого Enterococcus faecalis на сообщество Lactobacillus в микробиоте слепой кишки беременных мышей. ( а ) Lactobacillus , видоспецифические отпечатки PCR-DGGE микробиоты слепой кишки беременных мышей. ( б ) Дендрограмма внутригруппового сходства профилей DGGE микробиоты слепой кишки у беременных мышей.Сходство было рассчитано с использованием корреляции Пирсона, а кластеризация была выполнена с использованием UPGMA.

На основании ПЦР-ДГГЭ доминирующими бактериями в слепой кишке контрольных беременных мышей были Proteobacterium ( vc-a ), некультивируемые бактерии ( vc-b ), Lachnospiraceae ( v0-c ), Bacteroidales ( vc-d ), некультивируемая бактерия ( vc-e ) и Gammaproteobacterium ( vc-f ), как показано в таблице 1.Однако после перорального инфицирования E. faecalis Lachnospiraceae ( vc-g ) оказались доминирующими у трех обработанных мышей, а некультивированные бактерии ( vc-h ) стали доминирующими бактериями у трех других мышей. обработанные мыши; vc-d , соответствующий Bacteroidales , либо уменьшился, либо исчез (табл. 1). Кроме того, не было обнаружено существенной разницы в разнообразии структуры сообщества нормальной микробиоты (таблица S2).Доминирующим Lactobacillus у контрольных беременных мышей были Lactobacillus johnsonii ( lc-a ) и Lactobacillus sp. ( lc-b, c и d ). У подопытных животных в качестве доминирующих видов зарегистрированы L. johnsonii ( lc-e ), Lactobacillus reuteri ( lc-f ) и Lactobacillus gasseri ( lc-g ) (таблица 1). ). Более того, мы обнаружили, что структурное разнообразие Lactobacillus (индекс богатства и Шеннона-Винера) в испытуемой группе значительно уменьшилось (таблица S2).Таким образом, результаты подтверждают значительный эффект перорально введенного E. faecalis на разнообразие слепой кишки.

141″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0013″> Влияние перорально введенного E. faecalis на структуру и функцию кишечника

Репрезентативные гистологические микрофотографии подвздошной, слепой и толстой кишки показаны на рис. 3a–c соответственно. Гистологический анализ показал, что в эпителии обработанных мышей было обнаружено несколько поражений (повреждения крипт, редукция бокаловидных клеток и эрозии эпителия).Эти результаты указывают на возможное повреждение в результате перорального введения E. faecalis беременным мышам.

Гистологический анализ кишечника беременных мышей после перорального введения Enterococcus faecalis . Репрезентативные срезы тканей, окрашенные для H&E, показаны из (а) подвздошной кишки, (б) слепой кишки и (в) толстой кишки. Оригинальное увеличение: ×200. (d) Гистологическая оценка кишечника представлена ​​в виде средних значений ± стандартное отклонение от пяти мышей на группу.** Достоверная разница ( P < 0,01).

Гистологический анализ кишечника беременных мышей после перорального введения Enterococcus faecalis . Репрезентативные срезы тканей, окрашенные для H&E, показаны из (а) подвздошной кишки, (б) слепой кишки и (в) толстой кишки. Оригинальное увеличение: ×200. (d) Гистологическая оценка кишечника представлена ​​в виде средних значений ± стандартное отклонение от пяти мышей на группу. ** Достоверная разница ( P < 0,01).

На рис.4а–в соответственно. MOD срезов тканей использовали для количественной оценки экспрессии E-кадгерина в кишечнике (рис. 4d). Результаты показали, что MOD обработанной подвздошной кишки (75,4 ± 11,0) был значительно меньше, чем в контроле (93,3 ± 6,3). Точно так же по сравнению с контролем (59,1 ± 7,4) показатель MOD обработанной слепой кишки (36,7 ± 12,9) был значительно снижен. MOD контрольной толстой кишки составил 54,6 ± 9,2, что значительно выше, чем MOD обработанной толстой кишки (37,6 ± 7,8). Эти результаты показали, что присутствие E-кадгерина значительно уменьшилось в кишечнике беременных мышей после перорального заражения E.фекальный . Следовательно, можно сделать вывод, что пероральное введение E. faecalis способствовало нарушению барьерной функции эпителия беременных.

Эффекты экспрессии E-кадгерина в кишечнике беременных мышей, связанные с пероральным введением Enterococcus faecalis . Репрезентативные срезы тканей с иммуноокрашиванием E-кадгерином показаны из (а) подвздошной кишки, (б) слепой кишки и (в) толстой кишки. Оригинальное увеличение: ×200. ( d ) MOD иммуноокрашивания кишечника E-кадгерином представлено как среднее значение ± стандартное отклонение от пяти мышей в группе.Достоверная разница * P < 0,05, ** P < 0,01.

Эффекты экспрессии E-кадгерина в кишечнике беременных мышей, связанные с пероральным введением Enterococcus faecalis . Репрезентативные срезы тканей с иммуноокрашиванием E-кадгерином показаны из (а) подвздошной кишки, (б) слепой кишки и (в) толстой кишки. Оригинальное увеличение: ×200. ( d ) MOD иммуноокрашивания кишечника E-кадгерином представлено как среднее значение ± стандартное отклонение от пяти мышей в группе. Достоверная разница * P < 0.05, ** Р < 0,01.

146″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0014″> Влияние перорально введенного E. faecalis на рост плода и плаценты мышей

Размер плода значительно уменьшился, когда беременным мышам перорально вводили E. faecalis (рис. 5а). Вес плода составлял всего 1,22 ± 0,13 г в группе, получавшей лечение, по сравнению с 1,63 ± 0,30 г в контрольной группе, что составляет снижение на 25,6% (рис. 5а). Масса плаценты также снизилась с 0,13 ± 0,02 г в контрольной группе до 0.11 ± 0,01 г в группе, получавшей E. faecalis , со снижением на 15,4% (рис. 5b). Следовательно, результаты показывают, что пероральное введение E. faecalis может задерживать рост и развитие плода и плаценты.

Влияние на рост плода и плаценты мышей, связанное с пероральным введением Enterococcus faecalis . (а) Вес плода. (b) Вес плаценты. Достоверная разница * P < 0,05, ** P < 0. 01.

Влияние на рост плода и плаценты мышей, связанное с пероральным введением Enterococcus faecalis . (а) Вес плода. (b) Вес плаценты. Достоверная разница * P < 0,05, ** P < 0,01.

149″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0015″> Обсуждение

Выживание и колонизация кишечника являются важнейшей предпосылкой для того, чтобы как пищевые патогены, так и комменсальные бактерии сохранялись и функционировали в кишечнике (Shi & Walker, 2004). Понимание судьбы бактерий в пищеварительном тракте может пролить свет на то, где, как и какую роль играют бактерии.В этом исследовании мы исследовали распределение E. faecalis в различных отделах беременных мышей (рис. 1а). Наши результаты показывают, что E. faecalis смогли выжить в кишечном тракте и сохраниться среди кишечной микробиоты беременных мышей.

Влияние на выживаемость и распределение в кишечнике после перорального введения изучали с помощью PCR-DGGE. PCR-DGGE — это эффективный метод снятия отпечатков пальцев для оценки распределения и динамики микробного сообщества (Hawkins & Purdy, 2007).Согласно результатам, пероральное введение E. faecalis изменило распределение бактериального сообщества. Примечательно, что разнообразие видов Lactobacillus (обозначенное индексом богатства и Шеннона-Винера) было значительно снижено у мышей, получавших E. faecalis (таблица S2). Это изменение может снизить защиту кишечника хозяина и привести к нарушению нормальной структуры и функции кишечного тракта (Round & Mazmanian, 2009; Sekirov et al., 2010).

Также было исследовано влияние E. faecalis на кишечник беременных мышей. Результаты гистологических исследований кишечника беременных мышей, которым перорально вводили E. faecalis , выявили патологические изменения (рис. 3). В прошлом в нескольких сообщениях было показано, что E. faecalis вызывают воспаление толстой кишки и хронический колит у мышей с интерлейкином-10 -/- , но не у мышей дикого типа (Kim et al. , 2005).Более того, было показано, что E. faecalis влияет на экспрессию E-cadherin посредством межклеточной адгезии и функции эпителиального барьера (Steck et al. , 2011). Точно так же результаты показали, что экспрессия E-кадгерина во всех областях кишечника была значительно снижена по сравнению с контролем (фиг. 4). Это означает, что присутствие E. faecalis нарушает целостность эпителиального барьера во время беременности у мышей.

На основании полученных результатов перорально введен E.faecalis транслоцировался в кровь и селезенку (рис. 1б). Кроме того, штамм E. faecalis индуцировал изменения популяции бактериального сообщества и нарушал нормальную структуру и функцию кишечника, что позволяло E. faecalis транслоцироваться в кровоток и селезенку. Бактериальная транслокация признана важным фактором, способствующим возникновению и развитию заболеваний (Van Leeuwen и др. , 1994). В 1990 году Уэллс и др. .наблюдали транслокацию E. faecalis через кишечный тракт мышей. Цзэн и др. . (2004, 2005) сравнили способность к транслокации среди нескольких штаммов E. faecalis и продемонстрировали, что epa и желатиназа важны для его транслокации. Tsuda и Shigematsu отметили, что термически поврежденные мыши восприимчивы к транслокации E. faecalis , которая впоследствии вызывает сепсис (Tsuda et al. , 2008; Shigematsu et al., 2012). Это исследование показало, что при пероральном введении E. faecalis выживали в кишечнике, транслоцировались и вызывали бактериемию у беременных мышей.

Кроме того, в дополнение к материнским нарушениям транслокация E. faecalis даже с относительно низкой частотой наблюдалась в материнских плацентах и ​​плодах (рис. 1b). Предполагается, что они влияют на рост и развитие плода (Rezeberga et al. , 2008). В соответствии с нашими предположениями результаты показали, что материнский штамм E. faecalis снижал массу плода и плаценты (рис. 5).

Таким образом, наши результаты показали, что перорально введенный штамм E. faecalis может выживать в кишечнике беременных мышей. Эти E. faecalis могут вызывать изменение присущей бактериальному сообществу структуры, особенно разнообразия видов Lactobacillus . Кроме того, взаимодействие бактерии E. faecalis с хозяином может нарушать целостность кишечного барьера, что могло способствовать транслокации E.faecalis в кровь, селезенку, плаценту и плод. Это может привести к задержке роста и развития плода и плаценты.

156″> Благодарности

Этот исследовательский проект был поддержан Национальным фондом естественных наук Китая (NSF31170091, 31000048), Программой подготовки академических и технических руководителей по основным предметам провинции Цзянси (2009 г.) и Исследовательской программой Государственной ключевой лаборатории пищевых наук и технологий. Наньчанского университета (SKLF-TS-200916, SKLF-MB-201002).

158″> Каталожные номера

(

2012

)

Рост Enterococcus : выход за пределы устойчивости к ванкомицину

.

Nat Rev Microbiol

10

:

266

278

.

(

2002

)

Enterococcus faecalis вызывает воспалительное заболевание кишечника у мышей с нокаутом интерлейкина-10

.

Am J Pathol

160

:

2253

2257

.

(

2010

)

Salmonella enterica serovar Typhimurium Индуцированное воспаление плаценты, а не бактериальная нагрузка коррелирует с патологией и фатальным заболеванием матери

.

Infect Immun

78

:

2292

2301

.

(

2011

)

Trypanosoma cruzi индуцирует апоптоз в ex vivo инфицированных ворсинах хориона человека

.

Плацента

32

:

356

361

.

(

2011

)

Энтерококки как пробиотики и их влияние на безопасность пищевых продуктов

.

Int J Food Microbiol

151

:

125

140

.

(

2006

)

Энтерококки из пищевых продуктов

.

FEMS Microbiol Rev

26

:

163

171

.

(

2007

)

Генотипическое распределение местного модельного микроорганизма вдоль эстуарного уклона

.

FEMS Microbiol Ecol

62

:

187

194

.

(

2008

)

Действительно ли меконий здоровых новорожденных стерилен?

Рез микробиол

159

:

187

193

.

(

2005

)

Вариабельные фенотипы энтероколита у мышей с дефицитом интерлейкина-10, моноассоциированных с двумя разными комменсальными бактериями

.

Гастроэнтерология

128

:

891

906

.

(

2007

)

Двойная ассоциация гнотобиотика IL10 -/- мышей с 2 ​​непатогенными комменсальными бактериями вызывает агрессивный панколит

.

Воспаление кишечника Dis

13

:

1457

1466

.

(

2011

)

Листериоз у беременных: систематический обзор

.

Дж Перинат Мед

39

:

227

236

.

(

2007

)

Опосредованное хозяином воспаление нарушает микробиоту кишечника и способствует чрезмерному росту Enterobacteriaceae

.

Микроб-хозяин клетки

2

:

119

129

.

(

2004

)

Комменсальная микрофлора грудного молока: новые перспективы пищевой бактериотерапии и пробиотиков

.

Trends Food Sci Technol

15

:

121

127

.

(

2005

)

Разнообразие микроорганизмов — продуцентов биосурфактантов , выделенных из почв , загрязненных дизельным топливом

.

Микробиол Рез

160

:

249

255

.

(

2003

)

Конструирование мобилизуемой плазмиды pMV158GFP, производной pMV158, несущей ген, кодирующий зеленый флуоресцентный белок

.

Плазмида

49

:

281

285

.

(

2011

)

Пробиотическая оценка Enterococcus faecalis CP58, выделенного из кишечника человека

.

Int J Food Microbiol

145

:

390

394

.

(

2011

)

Разнообразие SNP Enterococcus faecalis и Enterococcus faecium в водном пути Юго-Восточного Квинсленда, Австралия, и связанные с ними профили генов устойчивости к антибиотикам

.

BMC Microbiol

11

:

201

.

(

2008

)

Гистологическое воспаление плаценты и инфекции половых путей у беременных с низким риском в Латвии

.

Acta Obstet Gynecol Scand

87

:

360

365

.

(

2009

)

Микробиота кишечника формирует иммунные реакции кишечника в норме и при болезни

.

Nat Rev Immunol

9

:

313

323

.

(

2012

)

Цитомегаловирусная инфекция во время беременности с передачей от матери к плоду индуцирует провоспалительные цитокины в плаценте и амниотической жидкости

.

J Infect Dis

205

:

1305

1310

.

(

2010

)

Микробиота кишечника в норме и при патологии

.

Physiol Rev

90

:

859

904

.

(

2004

)

Бактериальная колонизация и развитие защиты кишечника

.

Банка J Гастроэнтерол

18

:

493

500

.

(

2012

)

Влияние антисмысловых олигодезоксинуклеотидов CCL2 на бактериальную транслокацию и последующий сепсис у мышей с тяжелыми ожогами, перорально инфицированных Enterococcus faecalis

.

Евро J Иммунол

42

:

158

164

.

(

2011

)

Enterococcus faecalis Металлопротеаза разрушает эпителиальный барьер и способствует воспалению кишечника

.

Гастроэнтерология

141

:

959

971

.

.

J Иммунол

180

:

4133

4138

.

(

1994

)

Клиническое значение транслокации

.

Гут

35

:

S28

S34

.

(

1990

)

Доказательства транслокации Enterococcus faecalis через кишечный тракт мыши

.

J Infect Dis

162

:

82

90

.

(

2013

)

Идентификация белка внешней мембраны Salmonella enterica серовара Typhimurium в качестве потенциального кандидата на вакцину против сальмонеллеза у мышей

.

Микробы заражают

15

:

388

398

.

(

2004

)

Сравнение различных гипервариабельных областей генов rrs для использования в фингерпринтинге микробных сообществ с помощью ПЦР-денатурирующего градиентного гель-электрофореза

.

Appl Environ Microbiol

70

:

4800

4806

.

(

2004

)

Транслокация штаммов Enterococcus faecalis через монослой поляризованных энтероцитоподобных клеток T84 человека

.

J Clin Microbiol

42

:

1149

1154

.

(

2005

)

Желатиназа важна для транслокации Enterococcus faecalis через поляризованные человеческие энтероцитоподобные клетки T84

.

Infect Immun

73

:

1606

1612

.

159″> Дополнительная информация

Дополнительную вспомогательную информацию можно найти в онлайн-версии этой статьи:

Рис. С1. Влияние перорально вводимого E. faecalis OG1RF на бактериальное сообщество в микробиоте слепой кишки беременных мышей.

Таблица S1. Праймеры, используемые в ПЦР-ДГГЭ.

Таблица S2. Анализ разнообразия структуры сообщества микробиоты слепой кишки на рис. S1 и 2.

Примечания автора

© 2013 Федерация европейских микробиологических обществ. Опубликовано John Wiley & Sons Ltd. Все права защищены

Выживание, распространение и транслокация Enterococcus faecalis и последствия для беременных мышей | Письма FEMS по микробиологии

109″> Аннотация

Беременные матери подвержены бактериальным инфекциям, которые могут поставить под угрозу здоровье матери и потомства. Enterococcus faecalis — это повсеместно распространенный вид, встречающийся в продуктах питания, ресторанах и больницах, где беременные женщины часто подвергаются воздействию этой бактерии. Однако выживаемость, распространение, транслокация и соответствующее влияние E. faecalis не исследовались в период беременности, когда мать и плод восприимчивы к бактериальной инфекции. В этом исследовании флуоресцентный штамм E. faecalis использовался для отслеживания судьбы бактерии у беременных мышей.Было обнаружено, что перорально введенный штамм E. faecalis выживает и распространяется во все отделы желудочно-кишечного тракта. Он также изменил структуру бактериального сообщества, значительно уменьшив разнообразие видов Lactobacillus , нарушив нормальную структуру и функцию кишечного барьера, что может способствовать транслокации бактерий в кровь, селезенку, плаценту и плод. Это может повлиять на рост и развитие плода и плаценты.

111″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0001″> Введение

Enterococcus faecalis широко выделяют из окружающей среды (Rathnayake et al. , 2011), пищу (Giraffa, 2006) и пищеварительный тракт (Nueno-Palop & Narbad, 2011). В прошлом E. faecalis считались безвредными бактериями. Несколько штаммов даже использовались в качестве пробиотиков для создания благоприятной среды в кишечнике (Franz et al. , 2011). Однако этот консенсус был оспорен (Arias & Murray, 2012). Исследования показали, что E. faecalis является частым возбудителем внутрибольничных инфекций и может нарушать микробный баланс кишечника и вызывать воспаление (Balish & Warner, 2002; Kim et al., 2007; Лупп и др. , 2007).

Беременная женщина восприимчива к патогенным инфекциям, которые могут поставить под угрозу здоровье как матери, так и потомства, таким как цитомегаловирус (Scott et al. , 2012), Trypanosoma cruzi (Duaso et al. , 2011) , Salmonella (Chattopadhyay et al. , 2010) и Listeria monocytogenes (Lamont et al. , 2011). Хотя E. faecalis был клинически обнаружен в грудном молоке, плаценте, амниотической жидкости, пуповинной крови и меконии (Martín et al., 2004; Jimé nez и др. , 2008), его влияние на беременных редко вызывало беспокойство. В предыдущих отчетах упоминалось, что E. faecalis способен преодолевать кишечный барьер и впоследствии вызывать заболевание (Wells et al. , 1990; Zeng et al. , 2004; Steck et al. , 2011). Однако выживаемость, распространение, транслокация и соответствующее влияние E. faecalis не исследовались в период беременности, когда мать и плод восприимчивы к бактериальной инфекции.Целью данного исследования является изучение влияния E. faecalis на беременных мышей.

114″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0002″> Материалы и методы

115″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0003″> Бактериальный штамм и условия культивирования

Enterococcus faecalis OG1RF с плазмидой pMV158GFP (резистентность к тетрациклину, Tc R ) был предоставлен Manuel Espinosa (Nieto & Espinosa, 2003). Штамм культивировали в среде TSB, содержащей 4 мкг мл -1 тетрациклина. Клетки собирали и восстанавливали до 10 9 КОЕ мл -1 перед использованием.

117″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0004″> Уход за животными

За животными ухаживали в соответствии с руководящими принципами институционального комитета по уходу за животными (NIH, публикация № 85–23, 1996 г.). Все процедуры проводились в соответствии с протоколами, предоставленными и одобренными Комитетом по обзору ухода за животными (номер утверждения 0064257), Наньчанский университет, Цзянси, Китай. Двенадцатинедельных беременных мышей КМ разводили в экспериментальном центре животных Наньчанского университета. Мышей содержали в клетках при 25 °C с 12-часовым циклом свет/темнота и ежедневно кормили водой и лабораторным кормом для мышей.Всех мышей умерщвляли с использованием CO 2 в конце эксперимента.

119″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0005″> Enterococcus faecalis инфекция полости рта

Беременных мышей случайным образом распределяли в опытную или контрольную группу в первый день беременности. Контрольной группе перорально вводили фосфатно-солевой буфер (PBS), а опытной группе — по 100 мкл бактериальной взвеси один раз в день в течение 19 дней (срок беременности мышей — 21 день). За день до предполагаемой даты родов всех мышей умерщвляли и стерилизовали поверхность 75% этанолом.Кровь получали путем энуклеации глазного яблока. Животных вскрывали для сбора соответствующих органов, включая желудок, кишечник, сердце, головной мозг, печень, селезенку, почки, плаценту и плод.

121″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0006″> Обнаружение E. faecalis у беременных мышей

Все образцы тканей гомогенизировали в PBS, серийно разбавляли и наносили на чашку с агаром TSB Tc R . Все планшеты инкубировали при 37°С в течение 24–48 ч до образования зеленых флуоресцентных колоний. И флуоресценцию, и устойчивость к тетрациклину использовали в качестве маркера обнаружения Е.faecalis OG1RF:pMV158GFP. Предварительные экспериментальные результаты показали, что другие устойчивые к тетрациклину бактерии также присутствовали в пищеварительном тракте беременных мышей.

123″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0007″> ПЦР-ДГГЭ анализ

Суммарная геномная ДНК была выделена с помощью бисерного метода. ПЦР проводили с использованием набора ДНК-полимеразы Taq (CoWin Biotech Co., Ltd, Пекин, Китай). Все используемые праймеры перечислены во вспомогательной информации, таблица S1. Условия ПЦР были следующими: 94 °С в течение 5 мин; 30 циклов при 94 °С по 30 с, 55 °С по 30 с и 72 °С по 30 с; затем 72°С в течение 10 мин.Продукты ПЦР анализировали в 1,5% агарозных гелях.

Денатурирующий градиентный гель-электрофорез (DGGE) анализ продуктов ПЦР выполняли с помощью универсальной системы обнаружения мутаций DCode™ (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA). Шаблоны DGGE были нормализованы и проанализированы с помощью биочислового программного обеспечения версии 2.0 (Applied Maths, Лондон, Великобритания). В процессе обработки выделялись разные дорожки, вычитался фон, компенсировались различия в интенсивности полос при нормализации и вычислялась корреляционная матрица. Кластеризация проводилась с помощью корреляции Пирсона и метода UPGMA. Также рассчитывались индексы разнообразия: богатство ( S ) определялось как количество полос в одной дорожке, индекс Шеннона-Винера ( H′ ) рассчитывался как , где P i – вероятность важности полосы на дорожке, рассчитанные из N i / N , где N i — высота пика полосы, а N — сумма всех высот пиков, ровность ( E ) рассчитывали из , где (Yu & Morrison, 2004).Индекс Симпсона ( D ) рассчитывали как (Menezes Bento et al ., 2005). Наконец, каждую представляющую интерес полосу вырезали из гелей, затем переносили в 1,5-мл пробирку, содержащую 30 мкл ТЕ-буфера, и инкубировали в течение ночи при 4°C, чтобы позволить ДНК диффундировать в буфер. Собранные растворы ДНК впоследствии использовали для секвенирования. Последовательности сравнивали с использованием blast-n, предоставленного NCBI blast (http://www. ncbi.nlm.nih.gov).

126″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0008″> Гистопатология и иммуногистохимия

Небольшие кусочки подвздошной, слепой и толстой кишки вырезали и фиксировали в 10% формалине.Эти образцы обезвоживали и заливали в парафин. Затем вырезали срезы ткани толщиной 5 мкм. Эти срезы переносили на чистые предметные стекла, сушили в течение ночи и хранили при комнатной температуре до использования. Смонтированные срезы тканей окрашивали гематоксилином и эозином для гистологического исследования. Для оценки патологии шесть полей на образец были исследованы и оценены в соответствии с методом, описанным Yang et al. . (2013).

Антиген был получен в 0.01 М раствор цитрата натрия при микроволновом облучении. Срезы толщиной 5 мкм окрашивали и визуализировали с использованием системы обнаружения Dako REAL EnVision™, пероксидаза/DAB, кролик/мышь (K5007, Dako, Glostrup, Дания). В качестве первичного антитела использовали анти-E-кадгерин (sc-8426) 1:200 (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA); биотинилированный козий антикроличий IgG служил вторичным антителом, а стрептавидин-пероксидаза хрена, входящая в набор, использовалась для передачи сигнала. Затем срезы фотографировали под микроскопом (Nikon Corp., Токио, Япония), и результаты были проанализированы с помощью Image-Pro Plus 6.0 (Media Cybernetics, Bethesda, MA). Среднюю оптическую плотность (MOD) (интегральная оптическая плотность/площадь) использовали для расчета уровней экспрессии Е-кадгерина в тканях.

129″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0009″> Статистический анализ

Если не указано иное, все эксперименты повторяли трижды. Все данные были проанализированы с помощью Sigma Plot 11.0 (Systat Software, Сан-Хосе, Калифорния) и версии 16.0 spss (SPSS Inc., Чикаго, Иллинойс).

131″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0010″> Результаты

132″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0011″> Распространение и транслокация жизнеспособных флуоресцентных E. faecalis у беременных мышей

Как показано на рис. 1а, жизнеспособность флуоресцентного E. faecalis в разных отделах пищеварительного тракта сильно различалась. В желудке не было обнаружено жизнеспособных флуоресцирующих штаммов E. faecalis , что позволяет предположить, что E. faecalis OG1RF не смогли колонизировать эту область. Однако количество флуоресцирующих Е.faecalis из толстой кишки были ≥ 5,6 ± 0,4 log 10 КОЕ г -1 . Количество клеток в слепой кишке колебалось от 5,6 ± 0,4 до 6,8 ± 0,2 log 10 КОЕ г -1 . Количество клеток в тонкой кишке было вариабельным. У трех из пяти беременных мышей количество клеток колебалось от 3,8 ± 0,2 до 4,0 ± 0,4 log 10 КОЕ г -1 , но целевые бактерии не были обнаружены в тонком кишечнике двух других мышей. В целом исследование показало, что при пероральном введении штаммов E.faecalis OG1RF может выживать и распространяться по всему кишечному тракту, особенно по слепой кишке.

Обследование флуоресцирующих Enterococcus faecalis у беременных мышей. ( а ) Количество флуоресцирующих E. faecalis , которые колонизировали различные области пищеварительного тракта беременных мышей. Значения представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение. ( б ) Количество флуоресцирующих E. faecalis , транслоцированных в разные ткани беременных мышей. Значения представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение.НД, не обнаружено.

Обследование флуоресцирующих Enterococcus faecalis у беременных мышей. ( а ) Количество флуоресцирующих E. faecalis , которые колонизировали различные области пищеварительного тракта беременных мышей. Значения представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение. ( б ) Количество флуоресцирующих E. faecalis , транслоцированных в разные ткани беременных мышей. Значения представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение. НД, не обнаружено.

На рис. 1b показано, что флуоресцирующие E. faecalis были обнаружены в различных тканях, что свидетельствует о способности перорально вводимых бактерий перемещаться.В целом, в головном мозге, сердце, печени или почках не было обнаружено жизнеспособных флуоресцирующих штаммов E. faecalis . Однако он был обнаружен в крови, селезенке, плаценте и плоде. Бактерии в крови колебались от 2,1 ± 0,1 до 2,3 ± 0,3 log 10 КОЕ мл -1 , а в селезенке от 2,4 ± 0,4 до 2,7 ± 0,4 log 10 КОЕ г -1 . Кроме того, в плацентах двух мышей было обнаружено относительно низкое количество флуоресцирующих E. faecalis (≤ 1,9 ± 0,2 Log 10 КОЕ г -1 ).Более того, у одной мыши в ее плоде наблюдали несколько жизнеспособных флуоресцентных E. faecalis .

136″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0012″> Влияние перорально вводимых E. faecalis на разнообразие бактериального сообщества в слепой кишке

Изменения показателей нормальной микробиоты и видов Lactobacillus определяли методом ПЦР-ДГГЭ. На рисунке S1 показано, что индекс сходства между контрольной и обработанной группами составлял 0,50–0,70 и 0,28–0,40 соответственно. На рис.2б индексы сходства составили 0,45–0,70 и 0,24–0,49 для видов Lactobacillus . Как правило, эти результаты показывают, что бактериальное сообщество в слепой кишке относительно стабильно, но резко изменилось при пероральном введении E. faecalis .

Влияние перорально введенного Enterococcus faecalis на сообщество Lactobacillus в микробиоте слепой кишки беременных мышей. ( а ) Lactobacillus , видоспецифические отпечатки PCR-DGGE микробиоты слепой кишки беременных мышей.( б ) Дендрограмма внутригруппового сходства профилей DGGE микробиоты слепой кишки у беременных мышей. Сходство было рассчитано с использованием корреляции Пирсона, а кластеризация была выполнена с использованием UPGMA.

Влияние перорально вводимого Enterococcus faecalis на сообщество Lactobacillus в микробиоте слепой кишки беременных мышей. ( а ) Lactobacillus , видоспецифические отпечатки PCR-DGGE микробиоты слепой кишки беременных мышей. ( б ) Дендрограмма внутригруппового сходства профилей DGGE микробиоты слепой кишки у беременных мышей.Сходство было рассчитано с использованием корреляции Пирсона, а кластеризация была выполнена с использованием UPGMA.

На основании ПЦР-ДГГЭ доминирующими бактериями в слепой кишке контрольных беременных мышей были Proteobacterium ( vc-a ), некультивируемые бактерии ( vc-b ), Lachnospiraceae ( v0-c ), Bacteroidales ( vc-d ), некультивируемая бактерия ( vc-e ) и Gammaproteobacterium ( vc-f ), как показано в таблице 1.Однако после перорального инфицирования E. faecalis Lachnospiraceae ( vc-g ) оказались доминирующими у трех обработанных мышей, а некультивированные бактерии ( vc-h ) стали доминирующими бактериями у трех других мышей. обработанные мыши; vc-d , соответствующий Bacteroidales , либо уменьшился, либо исчез (табл. 1). Кроме того, не было обнаружено существенной разницы в разнообразии структуры сообщества нормальной микробиоты (таблица S2).Доминирующим Lactobacillus у контрольных беременных мышей были Lactobacillus johnsonii ( lc-a ) и Lactobacillus sp. ( lc-b, c и d ). У подопытных животных в качестве доминирующих видов зарегистрированы L. johnsonii ( lc-e ), Lactobacillus reuteri ( lc-f ) и Lactobacillus gasseri ( lc-g ) (таблица 1). ). Более того, мы обнаружили, что структурное разнообразие Lactobacillus (индекс богатства и Шеннона-Винера) в испытуемой группе значительно уменьшилось (таблица S2).Таким образом, результаты подтверждают значительный эффект перорально введенного E. faecalis на разнообразие слепой кишки.

141″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0013″> Влияние перорально введенного E. faecalis на структуру и функцию кишечника

Репрезентативные гистологические микрофотографии подвздошной, слепой и толстой кишки показаны на рис. 3a–c соответственно. Гистологический анализ показал, что в эпителии обработанных мышей было обнаружено несколько поражений (повреждения крипт, редукция бокаловидных клеток и эрозии эпителия).Эти результаты указывают на возможное повреждение в результате перорального введения E. faecalis беременным мышам.

Гистологический анализ кишечника беременных мышей после перорального введения Enterococcus faecalis . Репрезентативные срезы тканей, окрашенные для H&E, показаны из (а) подвздошной кишки, (б) слепой кишки и (в) толстой кишки. Оригинальное увеличение: ×200. (d) Гистологическая оценка кишечника представлена ​​в виде средних значений ± стандартное отклонение от пяти мышей на группу.** Достоверная разница ( P < 0,01).

Гистологический анализ кишечника беременных мышей после перорального введения Enterococcus faecalis . Репрезентативные срезы тканей, окрашенные для H&E, показаны из (а) подвздошной кишки, (б) слепой кишки и (в) толстой кишки. Оригинальное увеличение: ×200. (d) Гистологическая оценка кишечника представлена ​​в виде средних значений ± стандартное отклонение от пяти мышей на группу. ** Достоверная разница ( P < 0,01).

На рис.4а–в соответственно. MOD срезов тканей использовали для количественной оценки экспрессии E-кадгерина в кишечнике (рис. 4d). Результаты показали, что MOD обработанной подвздошной кишки (75,4 ± 11,0) был значительно меньше, чем в контроле (93,3 ± 6,3). Точно так же по сравнению с контролем (59,1 ± 7,4) показатель MOD обработанной слепой кишки (36,7 ± 12,9) был значительно снижен. MOD контрольной толстой кишки составил 54,6 ± 9,2, что значительно выше, чем MOD обработанной толстой кишки (37,6 ± 7,8). Эти результаты показали, что присутствие E-кадгерина значительно уменьшилось в кишечнике беременных мышей после перорального заражения E.фекальный . Следовательно, можно сделать вывод, что пероральное введение E. faecalis способствовало нарушению барьерной функции эпителия беременных.

Эффекты экспрессии E-кадгерина в кишечнике беременных мышей, связанные с пероральным введением Enterococcus faecalis . Репрезентативные срезы тканей с иммуноокрашиванием E-кадгерином показаны из (а) подвздошной кишки, (б) слепой кишки и (в) толстой кишки. Оригинальное увеличение: ×200. ( d ) MOD иммуноокрашивания кишечника E-кадгерином представлено как среднее значение ± стандартное отклонение от пяти мышей в группе.Достоверная разница * P < 0,05, ** P < 0,01.

Эффекты экспрессии E-кадгерина в кишечнике беременных мышей, связанные с пероральным введением Enterococcus faecalis . Репрезентативные срезы тканей с иммуноокрашиванием E-кадгерином показаны из (а) подвздошной кишки, (б) слепой кишки и (в) толстой кишки. Оригинальное увеличение: ×200. ( d ) MOD иммуноокрашивания кишечника E-кадгерином представлено как среднее значение ± стандартное отклонение от пяти мышей в группе. Достоверная разница * P < 0.05, ** Р < 0,01.

146″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0014″> Влияние перорально введенного E. faecalis на рост плода и плаценты мышей

Размер плода значительно уменьшился, когда беременным мышам перорально вводили E. faecalis (рис. 5а). Вес плода составлял всего 1,22 ± 0,13 г в группе, получавшей лечение, по сравнению с 1,63 ± 0,30 г в контрольной группе, что составляет снижение на 25,6% (рис. 5а). Масса плаценты также снизилась с 0,13 ± 0,02 г в контрольной группе до 0.11 ± 0,01 г в группе, получавшей E. faecalis , со снижением на 15,4% (рис. 5b). Следовательно, результаты показывают, что пероральное введение E. faecalis может задерживать рост и развитие плода и плаценты.

Влияние на рост плода и плаценты мышей, связанное с пероральным введением Enterococcus faecalis . (а) Вес плода. (b) Вес плаценты. Достоверная разница * P < 0,05, ** P < 0. 01.

Влияние на рост плода и плаценты мышей, связанное с пероральным введением Enterococcus faecalis . (а) Вес плода. (b) Вес плаценты. Достоверная разница * P < 0,05, ** P < 0,01.

149″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0015″> Обсуждение

Выживание и колонизация кишечника являются важнейшей предпосылкой для того, чтобы как пищевые патогены, так и комменсальные бактерии сохранялись и функционировали в кишечнике (Shi & Walker, 2004). Понимание судьбы бактерий в пищеварительном тракте может пролить свет на то, где, как и какую роль играют бактерии.В этом исследовании мы исследовали распределение E. faecalis в различных отделах беременных мышей (рис. 1а). Наши результаты показывают, что E. faecalis смогли выжить в кишечном тракте и сохраниться среди кишечной микробиоты беременных мышей.

Влияние на выживаемость и распределение в кишечнике после перорального введения изучали с помощью PCR-DGGE. PCR-DGGE — это эффективный метод снятия отпечатков пальцев для оценки распределения и динамики микробного сообщества (Hawkins & Purdy, 2007).Согласно результатам, пероральное введение E. faecalis изменило распределение бактериального сообщества. Примечательно, что разнообразие видов Lactobacillus (обозначенное индексом богатства и Шеннона-Винера) было значительно снижено у мышей, получавших E. faecalis (таблица S2). Это изменение может снизить защиту кишечника хозяина и привести к нарушению нормальной структуры и функции кишечного тракта (Round & Mazmanian, 2009; Sekirov et al., 2010).

Также было исследовано влияние E. faecalis на кишечник беременных мышей. Результаты гистологических исследований кишечника беременных мышей, которым перорально вводили E. faecalis , выявили патологические изменения (рис. 3). В прошлом в нескольких сообщениях было показано, что E. faecalis вызывают воспаление толстой кишки и хронический колит у мышей с интерлейкином-10 -/- , но не у мышей дикого типа (Kim et al. , 2005).Более того, было показано, что E. faecalis влияет на экспрессию E-cadherin посредством межклеточной адгезии и функции эпителиального барьера (Steck et al. , 2011). Точно так же результаты показали, что экспрессия E-кадгерина во всех областях кишечника была значительно снижена по сравнению с контролем (фиг. 4). Это означает, что присутствие E. faecalis нарушает целостность эпителиального барьера во время беременности у мышей.

На основании полученных результатов перорально введен E.faecalis транслоцировался в кровь и селезенку (рис. 1б). Кроме того, штамм E. faecalis индуцировал изменения популяции бактериального сообщества и нарушал нормальную структуру и функцию кишечника, что позволяло E. faecalis транслоцироваться в кровоток и селезенку. Бактериальная транслокация признана важным фактором, способствующим возникновению и развитию заболеваний (Van Leeuwen и др. , 1994). В 1990 году Уэллс и др. .наблюдали транслокацию E. faecalis через кишечный тракт мышей. Цзэн и др. . (2004, 2005) сравнили способность к транслокации среди нескольких штаммов E. faecalis и продемонстрировали, что epa и желатиназа важны для его транслокации. Tsuda и Shigematsu отметили, что термически поврежденные мыши восприимчивы к транслокации E. faecalis , которая впоследствии вызывает сепсис (Tsuda et al. , 2008; Shigematsu et al., 2012). Это исследование показало, что при пероральном введении E. faecalis выживали в кишечнике, транслоцировались и вызывали бактериемию у беременных мышей.

Кроме того, в дополнение к материнским нарушениям транслокация E. faecalis даже с относительно низкой частотой наблюдалась в материнских плацентах и ​​плодах (рис. 1b). Предполагается, что они влияют на рост и развитие плода (Rezeberga et al. , 2008). В соответствии с нашими предположениями результаты показали, что материнский штамм E. faecalis снижал массу плода и плаценты (рис. 5).

Таким образом, наши результаты показали, что перорально введенный штамм E. faecalis может выживать в кишечнике беременных мышей. Эти E. faecalis могут вызывать изменение присущей бактериальному сообществу структуры, особенно разнообразия видов Lactobacillus . Кроме того, взаимодействие бактерии E. faecalis с хозяином может нарушать целостность кишечного барьера, что могло способствовать транслокации E.faecalis в кровь, селезенку, плаценту и плод. Это может привести к задержке роста и развития плода и плаценты.

156″> Благодарности

Этот исследовательский проект был поддержан Национальным фондом естественных наук Китая (NSF31170091, 31000048), Программой подготовки академических и технических руководителей по основным предметам провинции Цзянси (2009 г.) и Исследовательской программой Государственной ключевой лаборатории пищевых наук и технологий. Наньчанского университета (SKLF-TS-200916, SKLF-MB-201002).

158″> Каталожные номера

(

2012

)

Рост Enterococcus : выход за пределы устойчивости к ванкомицину

.

Nat Rev Microbiol

10

:

266

278

.

(

2002

)

Enterococcus faecalis вызывает воспалительное заболевание кишечника у мышей с нокаутом интерлейкина-10

.

Am J Pathol

160

:

2253

2257

.

(

2010

)

Salmonella enterica serovar Typhimurium Индуцированное воспаление плаценты, а не бактериальная нагрузка коррелирует с патологией и фатальным заболеванием матери

.

Infect Immun

78

:

2292

2301

.

(

2011

)

Trypanosoma cruzi индуцирует апоптоз в ex vivo инфицированных ворсинах хориона человека

.

Плацента

32

:

356

361

.

(

2011

)

Энтерококки как пробиотики и их влияние на безопасность пищевых продуктов

.

Int J Food Microbiol

151

:

125

140

.

(

2006

)

Энтерококки из пищевых продуктов

.

FEMS Microbiol Rev

26

:

163

171

.

(

2007

)

Генотипическое распределение местного модельного микроорганизма вдоль эстуарного уклона

.

FEMS Microbiol Ecol

62

:

187

194

.

(

2008

)

Действительно ли меконий здоровых новорожденных стерилен?

Рез микробиол

159

:

187

193

.

(

2005

)

Вариабельные фенотипы энтероколита у мышей с дефицитом интерлейкина-10, моноассоциированных с двумя разными комменсальными бактериями

.

Гастроэнтерология

128

:

891

906

.

(

2007

)

Двойная ассоциация гнотобиотика IL10 -/- мышей с 2 ​​непатогенными комменсальными бактериями вызывает агрессивный панколит

.

Воспаление кишечника Dis

13

:

1457

1466

.

(

2011

)

Листериоз у беременных: систематический обзор

.

Дж Перинат Мед

39

:

227

236

.

(

2007

)

Опосредованное хозяином воспаление нарушает микробиоту кишечника и способствует чрезмерному росту Enterobacteriaceae

.

Микроб-хозяин клетки

2

:

119

129

.

(

2004

)

Комменсальная микрофлора грудного молока: новые перспективы пищевой бактериотерапии и пробиотиков

.

Trends Food Sci Technol

15

:

121

127

.

(

2005

)

Разнообразие микроорганизмов — продуцентов биосурфактантов , выделенных из почв , загрязненных дизельным топливом

.

Микробиол Рез

160

:

249

255

.

(

2003

)

Конструирование мобилизуемой плазмиды pMV158GFP, производной pMV158, несущей ген, кодирующий зеленый флуоресцентный белок

.

Плазмида

49

:

281

285

.

(

2011

)

Пробиотическая оценка Enterococcus faecalis CP58, выделенного из кишечника человека

.

Int J Food Microbiol

145

:

390

394

.

(

2011

)

Разнообразие SNP Enterococcus faecalis и Enterococcus faecium в водном пути Юго-Восточного Квинсленда, Австралия, и связанные с ними профили генов устойчивости к антибиотикам

.

BMC Microbiol

11

:

201

.

(

2008

)

Гистологическое воспаление плаценты и инфекции половых путей у беременных с низким риском в Латвии

.

Acta Obstet Gynecol Scand

87

:

360

365

.

(

2009

)

Микробиота кишечника формирует иммунные реакции кишечника в норме и при болезни

.

Nat Rev Immunol

9

:

313

323

.

(

2012

)

Цитомегаловирусная инфекция во время беременности с передачей от матери к плоду индуцирует провоспалительные цитокины в плаценте и амниотической жидкости

.

J Infect Dis

205

:

1305

1310

.

(

2010

)

Микробиота кишечника в норме и при патологии

.

Physiol Rev

90

:

859

904

.

(

2004

)

Бактериальная колонизация и развитие защиты кишечника

.

Банка J Гастроэнтерол

18

:

493

500

.

(

2012

)

Влияние антисмысловых олигодезоксинуклеотидов CCL2 на бактериальную транслокацию и последующий сепсис у мышей с тяжелыми ожогами, перорально инфицированных Enterococcus faecalis

.

Евро J Иммунол

42

:

158

164

.

(

2011

)

Enterococcus faecalis Металлопротеаза разрушает эпителиальный барьер и способствует воспалению кишечника

.

Гастроэнтерология

141

:

959

971

.

.

J Иммунол

180

:

4133

4138

.

(

1994

)

Клиническое значение транслокации

.

Гут

35

:

S28

S34

.

(

1990

)

Доказательства транслокации Enterococcus faecalis через кишечный тракт мыши

.

J Infect Dis

162

:

82

90

.

(

2013

)

Идентификация белка внешней мембраны Salmonella enterica серовара Typhimurium в качестве потенциального кандидата на вакцину против сальмонеллеза у мышей

.

Микробы заражают

15

:

388

398

.

(

2004

)

Сравнение различных гипервариабельных областей генов rrs для использования в фингерпринтинге микробных сообществ с помощью ПЦР-денатурирующего градиентного гель-электрофореза

.

Appl Environ Microbiol

70

:

4800

4806

.

(

2004

)

Транслокация штаммов Enterococcus faecalis через монослой поляризованных энтероцитоподобных клеток T84 человека

.

J Clin Microbiol

42

:

1149

1154

.

(

2005

)

Желатиназа важна для транслокации Enterococcus faecalis через поляризованные человеческие энтероцитоподобные клетки T84

.

Infect Immun

73

:

1606

1612

.

159″> Дополнительная информация

Дополнительную вспомогательную информацию можно найти в онлайн-версии этой статьи:

Рис. С1. Влияние перорально вводимого E. faecalis OG1RF на бактериальное сообщество в микробиоте слепой кишки беременных мышей.

Таблица S1. Праймеры, используемые в ПЦР-ДГГЭ.

Таблица S2. Анализ разнообразия структуры сообщества микробиоты слепой кишки на рис. S1 и 2.

Примечания автора

© 2013 Федерация европейских микробиологических обществ. Опубликовано John Wiley & Sons Ltd. Все права защищены

Выживание, распространение и транслокация Enterococcus faecalis и последствия для беременных мышей | Письма FEMS по микробиологии

109″> Аннотация

Беременные матери подвержены бактериальным инфекциям, которые могут поставить под угрозу здоровье матери и потомства. Enterococcus faecalis — это повсеместно распространенный вид, встречающийся в продуктах питания, ресторанах и больницах, где беременные женщины часто подвергаются воздействию этой бактерии. Однако выживаемость, распространение, транслокация и соответствующее влияние E. faecalis не исследовались в период беременности, когда мать и плод восприимчивы к бактериальной инфекции. В этом исследовании флуоресцентный штамм E. faecalis использовался для отслеживания судьбы бактерии у беременных мышей.Было обнаружено, что перорально введенный штамм E. faecalis выживает и распространяется во все отделы желудочно-кишечного тракта. Он также изменил структуру бактериального сообщества, значительно уменьшив разнообразие видов Lactobacillus , нарушив нормальную структуру и функцию кишечного барьера, что может способствовать транслокации бактерий в кровь, селезенку, плаценту и плод. Это может повлиять на рост и развитие плода и плаценты.

111″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0001″> Введение

Enterococcus faecalis широко выделяют из окружающей среды (Rathnayake et al. , 2011), пищу (Giraffa, 2006) и пищеварительный тракт (Nueno-Palop & Narbad, 2011). В прошлом E. faecalis считались безвредными бактериями. Несколько штаммов даже использовались в качестве пробиотиков для создания благоприятной среды в кишечнике (Franz et al. , 2011). Однако этот консенсус был оспорен (Arias & Murray, 2012). Исследования показали, что E. faecalis является частым возбудителем внутрибольничных инфекций и может нарушать микробный баланс кишечника и вызывать воспаление (Balish & Warner, 2002; Kim et al., 2007; Лупп и др. , 2007).

Беременная женщина восприимчива к патогенным инфекциям, которые могут поставить под угрозу здоровье как матери, так и потомства, таким как цитомегаловирус (Scott et al. , 2012), Trypanosoma cruzi (Duaso et al. , 2011) , Salmonella (Chattopadhyay et al. , 2010) и Listeria monocytogenes (Lamont et al. , 2011). Хотя E. faecalis был клинически обнаружен в грудном молоке, плаценте, амниотической жидкости, пуповинной крови и меконии (Martín et al., 2004; Jimé nez и др. , 2008), его влияние на беременных редко вызывало беспокойство. В предыдущих отчетах упоминалось, что E. faecalis способен преодолевать кишечный барьер и впоследствии вызывать заболевание (Wells et al. , 1990; Zeng et al. , 2004; Steck et al. , 2011). Однако выживаемость, распространение, транслокация и соответствующее влияние E. faecalis не исследовались в период беременности, когда мать и плод восприимчивы к бактериальной инфекции.Целью данного исследования является изучение влияния E. faecalis на беременных мышей.

114″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0002″> Материалы и методы

115″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0003″> Бактериальный штамм и условия культивирования

Enterococcus faecalis OG1RF с плазмидой pMV158GFP (резистентность к тетрациклину, Tc R ) был предоставлен Manuel Espinosa (Nieto & Espinosa, 2003). Штамм культивировали в среде TSB, содержащей 4 мкг мл -1 тетрациклина. Клетки собирали и восстанавливали до 10 9 КОЕ мл -1 перед использованием.

117″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0004″> Уход за животными

За животными ухаживали в соответствии с руководящими принципами институционального комитета по уходу за животными (NIH, публикация № 85–23, 1996 г.). Все процедуры проводились в соответствии с протоколами, предоставленными и одобренными Комитетом по обзору ухода за животными (номер утверждения 0064257), Наньчанский университет, Цзянси, Китай. Двенадцатинедельных беременных мышей КМ разводили в экспериментальном центре животных Наньчанского университета. Мышей содержали в клетках при 25 °C с 12-часовым циклом свет/темнота и ежедневно кормили водой и лабораторным кормом для мышей.Всех мышей умерщвляли с использованием CO 2 в конце эксперимента.

119″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0005″> Enterococcus faecalis инфекция полости рта

Беременных мышей случайным образом распределяли в опытную или контрольную группу в первый день беременности. Контрольной группе перорально вводили фосфатно-солевой буфер (PBS), а опытной группе — по 100 мкл бактериальной взвеси один раз в день в течение 19 дней (срок беременности мышей — 21 день). За день до предполагаемой даты родов всех мышей умерщвляли и стерилизовали поверхность 75% этанолом.Кровь получали путем энуклеации глазного яблока. Животных вскрывали для сбора соответствующих органов, включая желудок, кишечник, сердце, головной мозг, печень, селезенку, почки, плаценту и плод.

121″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0006″> Обнаружение E. faecalis у беременных мышей

Все образцы тканей гомогенизировали в PBS, серийно разбавляли и наносили на чашку с агаром TSB Tc R . Все планшеты инкубировали при 37°С в течение 24–48 ч до образования зеленых флуоресцентных колоний. И флуоресценцию, и устойчивость к тетрациклину использовали в качестве маркера обнаружения Е.faecalis OG1RF:pMV158GFP. Предварительные экспериментальные результаты показали, что другие устойчивые к тетрациклину бактерии также присутствовали в пищеварительном тракте беременных мышей.

123″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0007″> ПЦР-ДГГЭ анализ

Суммарная геномная ДНК была выделена с помощью бисерного метода. ПЦР проводили с использованием набора ДНК-полимеразы Taq (CoWin Biotech Co., Ltd, Пекин, Китай). Все используемые праймеры перечислены во вспомогательной информации, таблица S1. Условия ПЦР были следующими: 94 °С в течение 5 мин; 30 циклов при 94 °С по 30 с, 55 °С по 30 с и 72 °С по 30 с; затем 72°С в течение 10 мин.Продукты ПЦР анализировали в 1,5% агарозных гелях.

Денатурирующий градиентный гель-электрофорез (DGGE) анализ продуктов ПЦР выполняли с помощью универсальной системы обнаружения мутаций DCode™ (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA). Шаблоны DGGE были нормализованы и проанализированы с помощью биочислового программного обеспечения версии 2.0 (Applied Maths, Лондон, Великобритания). В процессе обработки выделялись разные дорожки, вычитался фон, компенсировались различия в интенсивности полос при нормализации и вычислялась корреляционная матрица. Кластеризация проводилась с помощью корреляции Пирсона и метода UPGMA. Также рассчитывались индексы разнообразия: богатство ( S ) определялось как количество полос в одной дорожке, индекс Шеннона-Винера ( H′ ) рассчитывался как , где P i – вероятность важности полосы на дорожке, рассчитанные из N i / N , где N i — высота пика полосы, а N — сумма всех высот пиков, ровность ( E ) рассчитывали из , где (Yu & Morrison, 2004).Индекс Симпсона ( D ) рассчитывали как (Menezes Bento et al ., 2005). Наконец, каждую представляющую интерес полосу вырезали из гелей, затем переносили в 1,5-мл пробирку, содержащую 30 мкл ТЕ-буфера, и инкубировали в течение ночи при 4°C, чтобы позволить ДНК диффундировать в буфер. Собранные растворы ДНК впоследствии использовали для секвенирования. Последовательности сравнивали с использованием blast-n, предоставленного NCBI blast (http://www. ncbi.nlm.nih.gov).

126″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0008″> Гистопатология и иммуногистохимия

Небольшие кусочки подвздошной, слепой и толстой кишки вырезали и фиксировали в 10% формалине.Эти образцы обезвоживали и заливали в парафин. Затем вырезали срезы ткани толщиной 5 мкм. Эти срезы переносили на чистые предметные стекла, сушили в течение ночи и хранили при комнатной температуре до использования. Смонтированные срезы тканей окрашивали гематоксилином и эозином для гистологического исследования. Для оценки патологии шесть полей на образец были исследованы и оценены в соответствии с методом, описанным Yang et al. . (2013).

Антиген был получен в 0.01 М раствор цитрата натрия при микроволновом облучении. Срезы толщиной 5 мкм окрашивали и визуализировали с использованием системы обнаружения Dako REAL EnVision™, пероксидаза/DAB, кролик/мышь (K5007, Dako, Glostrup, Дания). В качестве первичного антитела использовали анти-E-кадгерин (sc-8426) 1:200 (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA); биотинилированный козий антикроличий IgG служил вторичным антителом, а стрептавидин-пероксидаза хрена, входящая в набор, использовалась для передачи сигнала. Затем срезы фотографировали под микроскопом (Nikon Corp., Токио, Япония), и результаты были проанализированы с помощью Image-Pro Plus 6.0 (Media Cybernetics, Bethesda, MA). Среднюю оптическую плотность (MOD) (интегральная оптическая плотность/площадь) использовали для расчета уровней экспрессии Е-кадгерина в тканях.

129″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0009″> Статистический анализ

Если не указано иное, все эксперименты повторяли трижды. Все данные были проанализированы с помощью Sigma Plot 11.0 (Systat Software, Сан-Хосе, Калифорния) и версии 16.0 spss (SPSS Inc., Чикаго, Иллинойс).

131″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0010″> Результаты

132″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0011″> Распространение и транслокация жизнеспособных флуоресцентных E. faecalis у беременных мышей

Как показано на рис. 1а, жизнеспособность флуоресцентного E. faecalis в разных отделах пищеварительного тракта сильно различалась. В желудке не было обнаружено жизнеспособных флуоресцирующих штаммов E. faecalis , что позволяет предположить, что E. faecalis OG1RF не смогли колонизировать эту область. Однако количество флуоресцирующих Е.faecalis из толстой кишки были ≥ 5,6 ± 0,4 log 10 КОЕ г -1 . Количество клеток в слепой кишке колебалось от 5,6 ± 0,4 до 6,8 ± 0,2 log 10 КОЕ г -1 . Количество клеток в тонкой кишке было вариабельным. У трех из пяти беременных мышей количество клеток колебалось от 3,8 ± 0,2 до 4,0 ± 0,4 log 10 КОЕ г -1 , но целевые бактерии не были обнаружены в тонком кишечнике двух других мышей. В целом исследование показало, что при пероральном введении штаммов E.faecalis OG1RF может выживать и распространяться по всему кишечному тракту, особенно по слепой кишке.

Обследование флуоресцирующих Enterococcus faecalis у беременных мышей. ( а ) Количество флуоресцирующих E. faecalis , которые колонизировали различные области пищеварительного тракта беременных мышей. Значения представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение. ( б ) Количество флуоресцирующих E. faecalis , транслоцированных в разные ткани беременных мышей. Значения представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение.НД, не обнаружено.

Обследование флуоресцирующих Enterococcus faecalis у беременных мышей. ( а ) Количество флуоресцирующих E. faecalis , которые колонизировали различные области пищеварительного тракта беременных мышей. Значения представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение. ( б ) Количество флуоресцирующих E. faecalis , транслоцированных в разные ткани беременных мышей. Значения представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение. НД, не обнаружено.

На рис. 1b показано, что флуоресцирующие E. faecalis были обнаружены в различных тканях, что свидетельствует о способности перорально вводимых бактерий перемещаться.В целом, в головном мозге, сердце, печени или почках не было обнаружено жизнеспособных флуоресцирующих штаммов E. faecalis . Однако он был обнаружен в крови, селезенке, плаценте и плоде. Бактерии в крови колебались от 2,1 ± 0,1 до 2,3 ± 0,3 log 10 КОЕ мл -1 , а в селезенке от 2,4 ± 0,4 до 2,7 ± 0,4 log 10 КОЕ г -1 . Кроме того, в плацентах двух мышей было обнаружено относительно низкое количество флуоресцирующих E. faecalis (≤ 1,9 ± 0,2 Log 10 КОЕ г -1 ).Более того, у одной мыши в ее плоде наблюдали несколько жизнеспособных флуоресцентных E. faecalis .

136″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0012″> Влияние перорально вводимых E. faecalis на разнообразие бактериального сообщества в слепой кишке

Изменения показателей нормальной микробиоты и видов Lactobacillus определяли методом ПЦР-ДГГЭ. На рисунке S1 показано, что индекс сходства между контрольной и обработанной группами составлял 0,50–0,70 и 0,28–0,40 соответственно. На рис.2б индексы сходства составили 0,45–0,70 и 0,24–0,49 для видов Lactobacillus . Как правило, эти результаты показывают, что бактериальное сообщество в слепой кишке относительно стабильно, но резко изменилось при пероральном введении E. faecalis .

Влияние перорально введенного Enterococcus faecalis на сообщество Lactobacillus в микробиоте слепой кишки беременных мышей. ( а ) Lactobacillus , видоспецифические отпечатки PCR-DGGE микробиоты слепой кишки беременных мышей.( б ) Дендрограмма внутригруппового сходства профилей DGGE микробиоты слепой кишки у беременных мышей. Сходство было рассчитано с использованием корреляции Пирсона, а кластеризация была выполнена с использованием UPGMA.

Влияние перорально вводимого Enterococcus faecalis на сообщество Lactobacillus в микробиоте слепой кишки беременных мышей. ( а ) Lactobacillus , видоспецифические отпечатки PCR-DGGE микробиоты слепой кишки беременных мышей. ( б ) Дендрограмма внутригруппового сходства профилей DGGE микробиоты слепой кишки у беременных мышей.Сходство было рассчитано с использованием корреляции Пирсона, а кластеризация была выполнена с использованием UPGMA.

На основании ПЦР-ДГГЭ доминирующими бактериями в слепой кишке контрольных беременных мышей были Proteobacterium ( vc-a ), некультивируемые бактерии ( vc-b ), Lachnospiraceae ( v0-c ), Bacteroidales ( vc-d ), некультивируемая бактерия ( vc-e ) и Gammaproteobacterium ( vc-f ), как показано в таблице 1.Однако после перорального инфицирования E. faecalis Lachnospiraceae ( vc-g ) оказались доминирующими у трех обработанных мышей, а некультивированные бактерии ( vc-h ) стали доминирующими бактериями у трех других мышей. обработанные мыши; vc-d , соответствующий Bacteroidales , либо уменьшился, либо исчез (табл. 1). Кроме того, не было обнаружено существенной разницы в разнообразии структуры сообщества нормальной микробиоты (таблица S2).Доминирующим Lactobacillus у контрольных беременных мышей были Lactobacillus johnsonii ( lc-a ) и Lactobacillus sp. ( lc-b, c и d ). У подопытных животных в качестве доминирующих видов зарегистрированы L. johnsonii ( lc-e ), Lactobacillus reuteri ( lc-f ) и Lactobacillus gasseri ( lc-g ) (таблица 1). ). Более того, мы обнаружили, что структурное разнообразие Lactobacillus (индекс богатства и Шеннона-Винера) в испытуемой группе значительно уменьшилось (таблица S2).Таким образом, результаты подтверждают значительный эффект перорально введенного E. faecalis на разнообразие слепой кишки.

141″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0013″> Влияние перорально введенного E. faecalis на структуру и функцию кишечника

Репрезентативные гистологические микрофотографии подвздошной, слепой и толстой кишки показаны на рис. 3a–c соответственно. Гистологический анализ показал, что в эпителии обработанных мышей было обнаружено несколько поражений (повреждения крипт, редукция бокаловидных клеток и эрозии эпителия).Эти результаты указывают на возможное повреждение в результате перорального введения E. faecalis беременным мышам.

Гистологический анализ кишечника беременных мышей после перорального введения Enterococcus faecalis . Репрезентативные срезы тканей, окрашенные для H&E, показаны из (а) подвздошной кишки, (б) слепой кишки и (в) толстой кишки. Оригинальное увеличение: ×200. (d) Гистологическая оценка кишечника представлена ​​в виде средних значений ± стандартное отклонение от пяти мышей на группу.** Достоверная разница ( P < 0,01).

Гистологический анализ кишечника беременных мышей после перорального введения Enterococcus faecalis . Репрезентативные срезы тканей, окрашенные для H&E, показаны из (а) подвздошной кишки, (б) слепой кишки и (в) толстой кишки. Оригинальное увеличение: ×200. (d) Гистологическая оценка кишечника представлена ​​в виде средних значений ± стандартное отклонение от пяти мышей на группу. ** Достоверная разница ( P < 0,01).

На рис.4а–в соответственно. MOD срезов тканей использовали для количественной оценки экспрессии E-кадгерина в кишечнике (рис. 4d). Результаты показали, что MOD обработанной подвздошной кишки (75,4 ± 11,0) был значительно меньше, чем в контроле (93,3 ± 6,3). Точно так же по сравнению с контролем (59,1 ± 7,4) показатель MOD обработанной слепой кишки (36,7 ± 12,9) был значительно снижен. MOD контрольной толстой кишки составил 54,6 ± 9,2, что значительно выше, чем MOD обработанной толстой кишки (37,6 ± 7,8). Эти результаты показали, что присутствие E-кадгерина значительно уменьшилось в кишечнике беременных мышей после перорального заражения E.фекальный . Следовательно, можно сделать вывод, что пероральное введение E. faecalis способствовало нарушению барьерной функции эпителия беременных.

Эффекты экспрессии E-кадгерина в кишечнике беременных мышей, связанные с пероральным введением Enterococcus faecalis . Репрезентативные срезы тканей с иммуноокрашиванием E-кадгерином показаны из (а) подвздошной кишки, (б) слепой кишки и (в) толстой кишки. Оригинальное увеличение: ×200. ( d ) MOD иммуноокрашивания кишечника E-кадгерином представлено как среднее значение ± стандартное отклонение от пяти мышей в группе.Достоверная разница * P < 0,05, ** P < 0,01.

Эффекты экспрессии E-кадгерина в кишечнике беременных мышей, связанные с пероральным введением Enterococcus faecalis . Репрезентативные срезы тканей с иммуноокрашиванием E-кадгерином показаны из (а) подвздошной кишки, (б) слепой кишки и (в) толстой кишки. Оригинальное увеличение: ×200. ( d ) MOD иммуноокрашивания кишечника E-кадгерином представлено как среднее значение ± стандартное отклонение от пяти мышей в группе. Достоверная разница * P < 0.05, ** Р < 0,01.

146″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0014″> Влияние перорально введенного E. faecalis на рост плода и плаценты мышей

Размер плода значительно уменьшился, когда беременным мышам перорально вводили E. faecalis (рис. 5а). Вес плода составлял всего 1,22 ± 0,13 г в группе, получавшей лечение, по сравнению с 1,63 ± 0,30 г в контрольной группе, что составляет снижение на 25,6% (рис. 5а). Масса плаценты также снизилась с 0,13 ± 0,02 г в контрольной группе до 0.11 ± 0,01 г в группе, получавшей E. faecalis , со снижением на 15,4% (рис. 5b). Следовательно, результаты показывают, что пероральное введение E. faecalis может задерживать рост и развитие плода и плаценты.

Влияние на рост плода и плаценты мышей, связанное с пероральным введением Enterococcus faecalis . (а) Вес плода. (b) Вес плаценты. Достоверная разница * P < 0,05, ** P < 0. 01.

Влияние на рост плода и плаценты мышей, связанное с пероральным введением Enterococcus faecalis . (а) Вес плода. (b) Вес плаценты. Достоверная разница * P < 0,05, ** P < 0,01.

149″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0015″> Обсуждение

Выживание и колонизация кишечника являются важнейшей предпосылкой для того, чтобы как пищевые патогены, так и комменсальные бактерии сохранялись и функционировали в кишечнике (Shi & Walker, 2004). Понимание судьбы бактерий в пищеварительном тракте может пролить свет на то, где, как и какую роль играют бактерии.В этом исследовании мы исследовали распределение E. faecalis в различных отделах беременных мышей (рис. 1а). Наши результаты показывают, что E. faecalis смогли выжить в кишечном тракте и сохраниться среди кишечной микробиоты беременных мышей.

Влияние на выживаемость и распределение в кишечнике после перорального введения изучали с помощью PCR-DGGE. PCR-DGGE — это эффективный метод снятия отпечатков пальцев для оценки распределения и динамики микробного сообщества (Hawkins & Purdy, 2007).Согласно результатам, пероральное введение E. faecalis изменило распределение бактериального сообщества. Примечательно, что разнообразие видов Lactobacillus (обозначенное индексом богатства и Шеннона-Винера) было значительно снижено у мышей, получавших E. faecalis (таблица S2). Это изменение может снизить защиту кишечника хозяина и привести к нарушению нормальной структуры и функции кишечного тракта (Round & Mazmanian, 2009; Sekirov et al., 2010).

Также было исследовано влияние E. faecalis на кишечник беременных мышей. Результаты гистологических исследований кишечника беременных мышей, которым перорально вводили E. faecalis , выявили патологические изменения (рис. 3). В прошлом в нескольких сообщениях было показано, что E. faecalis вызывают воспаление толстой кишки и хронический колит у мышей с интерлейкином-10 -/- , но не у мышей дикого типа (Kim et al. , 2005).Более того, было показано, что E. faecalis влияет на экспрессию E-cadherin посредством межклеточной адгезии и функции эпителиального барьера (Steck et al. , 2011). Точно так же результаты показали, что экспрессия E-кадгерина во всех областях кишечника была значительно снижена по сравнению с контролем (фиг. 4). Это означает, что присутствие E. faecalis нарушает целостность эпителиального барьера во время беременности у мышей.

На основании полученных результатов перорально введен E.faecalis транслоцировался в кровь и селезенку (рис. 1б). Кроме того, штамм E. faecalis индуцировал изменения популяции бактериального сообщества и нарушал нормальную структуру и функцию кишечника, что позволяло E. faecalis транслоцироваться в кровоток и селезенку. Бактериальная транслокация признана важным фактором, способствующим возникновению и развитию заболеваний (Van Leeuwen и др. , 1994). В 1990 году Уэллс и др. .наблюдали транслокацию E. faecalis через кишечный тракт мышей. Цзэн и др. . (2004, 2005) сравнили способность к транслокации среди нескольких штаммов E. faecalis и продемонстрировали, что epa и желатиназа важны для его транслокации. Tsuda и Shigematsu отметили, что термически поврежденные мыши восприимчивы к транслокации E. faecalis , которая впоследствии вызывает сепсис (Tsuda et al. , 2008; Shigematsu et al., 2012). Это исследование показало, что при пероральном введении E. faecalis выживали в кишечнике, транслоцировались и вызывали бактериемию у беременных мышей.

Кроме того, в дополнение к материнским нарушениям транслокация E. faecalis даже с относительно низкой частотой наблюдалась в материнских плацентах и ​​плодах (рис. 1b). Предполагается, что они влияют на рост и развитие плода (Rezeberga et al. , 2008). В соответствии с нашими предположениями результаты показали, что материнский штамм E. faecalis снижал массу плода и плаценты (рис. 5).

Таким образом, наши результаты показали, что перорально введенный штамм E. faecalis может выживать в кишечнике беременных мышей. Эти E. faecalis могут вызывать изменение присущей бактериальному сообществу структуры, особенно разнообразия видов Lactobacillus . Кроме того, взаимодействие бактерии E. faecalis с хозяином может нарушать целостность кишечного барьера, что могло способствовать транслокации E.faecalis в кровь, селезенку, плаценту и плод. Это может привести к задержке роста и развития плода и плаценты.

156″> Благодарности

Этот исследовательский проект был поддержан Национальным фондом естественных наук Китая (NSF31170091, 31000048), Программой подготовки академических и технических руководителей по основным предметам провинции Цзянси (2009 г.) и Исследовательской программой Государственной ключевой лаборатории пищевых наук и технологий. Наньчанского университета (SKLF-TS-200916, SKLF-MB-201002).

158″> Каталожные номера

(

2012

)

Рост Enterococcus : выход за пределы устойчивости к ванкомицину

.

Nat Rev Microbiol

10

:

266

278

.

(

2002

)

Enterococcus faecalis вызывает воспалительное заболевание кишечника у мышей с нокаутом интерлейкина-10

.

Am J Pathol

160

:

2253

2257

.

(

2010

)

Salmonella enterica serovar Typhimurium Индуцированное воспаление плаценты, а не бактериальная нагрузка коррелирует с патологией и фатальным заболеванием матери

.

Infect Immun

78

:

2292

2301

.

(

2011

)

Trypanosoma cruzi индуцирует апоптоз в ex vivo инфицированных ворсинах хориона человека

.

Плацента

32

:

356

361

.

(

2011

)

Энтерококки как пробиотики и их влияние на безопасность пищевых продуктов

.

Int J Food Microbiol

151

:

125

140

.

(

2006

)

Энтерококки из пищевых продуктов

.

FEMS Microbiol Rev

26

:

163

171

.

(

2007

)

Генотипическое распределение местного модельного микроорганизма вдоль эстуарного уклона

.

FEMS Microbiol Ecol

62

:

187

194

.

(

2008

)

Действительно ли меконий здоровых новорожденных стерилен?

Рез микробиол

159

:

187

193

.

(

2005

)

Вариабельные фенотипы энтероколита у мышей с дефицитом интерлейкина-10, моноассоциированных с двумя разными комменсальными бактериями

.

Гастроэнтерология

128

:

891

906

.

(

2007

)

Двойная ассоциация гнотобиотика IL10 -/- мышей с 2 ​​непатогенными комменсальными бактериями вызывает агрессивный панколит

.

Воспаление кишечника Dis

13

:

1457

1466

.

(

2011

)

Листериоз у беременных: систематический обзор

.

Дж Перинат Мед

39

:

227

236

.

(

2007

)

Опосредованное хозяином воспаление нарушает микробиоту кишечника и способствует чрезмерному росту Enterobacteriaceae

.

Микроб-хозяин клетки

2

:

119

129

.

(

2004

)

Комменсальная микрофлора грудного молока: новые перспективы пищевой бактериотерапии и пробиотиков

.

Trends Food Sci Technol

15

:

121

127

.

(

2005

)

Разнообразие микроорганизмов — продуцентов биосурфактантов , выделенных из почв , загрязненных дизельным топливом

.

Микробиол Рез

160

:

249

255

.

(

2003

)

Конструирование мобилизуемой плазмиды pMV158GFP, производной pMV158, несущей ген, кодирующий зеленый флуоресцентный белок

.

Плазмида

49

:

281

285

.

(

2011

)

Пробиотическая оценка Enterococcus faecalis CP58, выделенного из кишечника человека

.

Int J Food Microbiol

145

:

390

394

.

(

2011

)

Разнообразие SNP Enterococcus faecalis и Enterococcus faecium в водном пути Юго-Восточного Квинсленда, Австралия, и связанные с ними профили генов устойчивости к антибиотикам

.

BMC Microbiol

11

:

201

.

(

2008

)

Гистологическое воспаление плаценты и инфекции половых путей у беременных с низким риском в Латвии

.

Acta Obstet Gynecol Scand

87

:

360

365

.

(

2009

)

Микробиота кишечника формирует иммунные реакции кишечника в норме и при болезни

.

Nat Rev Immunol

9

:

313

323

.

(

2012

)

Цитомегаловирусная инфекция во время беременности с передачей от матери к плоду индуцирует провоспалительные цитокины в плаценте и амниотической жидкости

.

J Infect Dis

205

:

1305

1310

.

(

2010

)

Микробиота кишечника в норме и при патологии

.

Physiol Rev

90

:

859

904

.

(

2004

)

Бактериальная колонизация и развитие защиты кишечника

.

Банка J Гастроэнтерол

18

:

493

500

.

(

2012

)

Влияние антисмысловых олигодезоксинуклеотидов CCL2 на бактериальную транслокацию и последующий сепсис у мышей с тяжелыми ожогами, перорально инфицированных Enterococcus faecalis

.

Евро J Иммунол

42

:

158

164

.

(

2011

)

Enterococcus faecalis Металлопротеаза разрушает эпителиальный барьер и способствует воспалению кишечника

.

Гастроэнтерология

141

:

959

971

.

.

J Иммунол

180

:

4133

4138

.

(

1994

)

Клиническое значение транслокации

.

Гут

35

:

S28

S34

.

(

1990

)

Доказательства транслокации Enterococcus faecalis через кишечный тракт мыши

.

J Infect Dis

162

:

82

90

.

(

2013

)

Идентификация белка внешней мембраны Salmonella enterica серовара Typhimurium в качестве потенциального кандидата на вакцину против сальмонеллеза у мышей

.

Микробы заражают

15

:

388

398

.

(

2004

)

Сравнение различных гипервариабельных областей генов rrs для использования в фингерпринтинге микробных сообществ с помощью ПЦР-денатурирующего градиентного гель-электрофореза

.

Appl Environ Microbiol

70

:

4800

4806

.

(

2004

)

Транслокация штаммов Enterococcus faecalis через монослой поляризованных энтероцитоподобных клеток T84 человека

.

J Clin Microbiol

42

:

1149

1154

.

(

2005

)

Желатиназа важна для транслокации Enterococcus faecalis через поляризованные человеческие энтероцитоподобные клетки T84

.

Infect Immun

73

:

1606

1612

.

159″> Дополнительная информация

Дополнительную вспомогательную информацию можно найти в онлайн-версии этой статьи:

Рис. С1. Влияние перорально вводимого E. faecalis OG1RF на бактериальное сообщество в микробиоте слепой кишки беременных мышей.

Таблица S1. Праймеры, используемые в ПЦР-ДГГЭ.

Таблица S2. Анализ разнообразия структуры сообщества микробиоты слепой кишки на рис. S1 и 2.

Примечания автора

© 2013 Федерация европейских микробиологических обществ. Опубликовано John Wiley & Sons Ltd. Все права защищены

Ассоциированная с беременностью бессимптомная бактериурия и лекарственная устойчивость

https://doi.org/10.1016/j.jtumed.2015.01.011Получить права и содержание

Резюме

Цели

В развивающихся странах бактериурия связана со значительным риском для матери и плода. Быстрое появление резистентности к антибиотикам требует непрерывного мониторинга моделей чувствительности бактериальных изолятов. В этом исследовании мы сообщаем о наших выводах, касающихся моделей лекарственной устойчивости бактериальных изолятов от беременных женщин с инфекциями мочевыводящих путей (ИМП).

Методы

В исследование были включены 1358 беременных женщин, посещавших женскую консультацию отделения акушерства и гинекологии в период с июля 2013 г. по август 2014 г.Образцы мочи обрабатывали для выделения и идентификации видов бактерий в соответствии со стандартными микробиологическими методами. Диско-диффузионный тест был использован для определения моделей устойчивости выделенных изолятов к противомикробным препаратам в Центральной лаборатории микробиологии Медицинского колледжа Непалгунджа, Непал.

Результаты

Триста семнадцать изолятов дали положительный результат на значительную бактериурию. E. coli, K. pneumonia, P. aeruginosa, E. faecalis, S. aureus, P.mirabilis, CoNS, и P. vulgaris составляли 61,5%, 17%, 7,5%, 5,3%, 2,8%, 2,5%, 1,8% и 1,2% бактериальных изолятов соответственно. Наблюдалась резистентность к эритромицину (58,6%), котримоксазолу (57,4%) и ципрофлоксацину (50,1%). Среди 317 положительных изолятов 203 (64%) были получены от женщин в возрастной группе 21–30 лет, и частота бактериурии в этой группе была статистически значимо выше, чем в других возрастных группах ( P  < 0,05).

Выводы

Бактериурия часто встречается у беременных женщин, что требует рутинного скрининга посева мочи.В этом исследовании E. coli был наиболее преобладающим идентифицированным видом бактерий, за которым следовал K. pneumonia . Кроме того, женщины в возрасте 21–30 лет были подвержены более высокому риску ИМП. Эритромицин, ко-тримоксазол и ципрофлоксацин не следует эмпирически использовать в качестве препаратов первой линии при лечении ИМП. Непрерывный локальный мониторинг моделей резистентности необходим для определения соответствующей эмпирической противомикробной терапии.

Ключевые слова

Бактериурия

Лекарственная устойчивость

Беременные

Инфекции мочевыводящих путей

Рекомендованные статьиСсылки на статьи (0)

Copyright © 2015 Авторы. Производство и размещение Elsevier Ltd.

Рекомендуемые статьи

Ссылки на статьи

Фекальное носительство и факторы, связанные с энтеробактериями, продуцирующими расширенный спектр β-лактамаз, среди беременных женщин в специализированной больнице третичного уровня, Танзания

Trop Med Health. 2020; 48: 84.

, , , , , , и и

Ambele M. Mwandigha

Отдел микробиологии и иммунологии, Мухимбили Университет здравоохранения и союзников, P.O. Box 65001, Дар-эс-Салам, Танзания

Дорин Камори

Кафедра микробиологии и иммунологии, Университет здравоохранения и смежных наук Мухимбили, P.O. Box 65001, Dar es Salaam, Tanzania

Upendo O. Kibwana

Кафедра микробиологии и иммунологии, Университет здравоохранения и смежных наук Мухимбили, P.O. Box 65001, Dar es Salaam, Tanzania

Salim Masoud

Кафедра микробиологии и иммунологии, Университет здравоохранения и смежных наук Мухимбили, P. O. Box 65001, Dar es Salaam, Tanzania

Joel Manyahi

Кафедра микробиологии и иммунологии, Университет здравоохранения и смежных наук Мухимбили, P.O. Box 65001, Dar es Salaam, Tanzania

Mtebe Majigo

Кафедра микробиологии и иммунологии, Университет здравоохранения и смежных наук Мухимбили, P.O. Box 65001, Dar es Salaam, Tanzania

Кафедра микробиологии и иммунологии, Университет здравоохранения и смежных наук Мухимбили, P.O.Box 65001, Дар-эс-Салам, Танзания

Автор, ответственный за переписку.

Поступила в редакцию 3 июня 2020 г .; Принято 24 сентября 2020 г.

Открытый доступ Эта статья находится под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 International License, которая разрешает использование, совместное использование, адаптацию, распространение и воспроизведение на любом носителе или в любом формате при условии, что вы укажете оригинал. автор(ы) и источник, предоставьте ссылку на лицензию Creative Commons и укажите, были ли внесены изменения. Изображения или другие сторонние материалы в этой статье включены в лицензию Creative Commons на статью, если иное не указано в кредитной строке материала. Если материал не включен в лицензию Creative Commons статьи, а ваше предполагаемое использование не разрешено законом или выходит за рамки разрешенного использования, вам необходимо получить разрешение непосредственно от правообладателя. Чтобы просмотреть копию этой лицензии, посетите http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/.Эта статья цитировалась в других статьях в PMC.
Заявление о доступности данных

Все соответствующие данные, полученные и проанализированные в ходе этого исследования, можно получить у соответствующего автора по обоснованному запросу.

Реферат

История вопроса

Инфекции, вызванные Enterobacteriaceae, продуцирующими бета-лактамазы расширенного спектра действия (ESBL-E), растут во всем мире. Имеющиеся данные свидетельствуют о том, что фекальное носительство ESBL-E во время беременности предрасполагает женщин к потенциально опасным для жизни инфекциям мочевыводящих путей и впоследствии увеличивает риск неонатальных инфекций. Имеются ограниченные данные о фекальном носительстве ESBL-E и связанных с ним факторов среди беременных женщин в Танзании. Мы стремились восполнить этот пробел, определив долю беременных женщин с фекальным носительством БЛРС-Э и выявив связанные с этим факторы.

Методология

Поперечное исследование было проведено в Национальной больнице Мухимбили в Дар-эс-Саламе, Танзания. В исследование были включены 182 беременные со сроком гестации 37 недель и старше. Социально-демографическая, клиническая и гигиеническая информация участников была собрана с помощью хорошо структурированного вопросника.Ректальные мазки собирали и обрабатывали для выделения ESBL-E. Продукцию β-лактамаз расширенного спектра и тест на чувствительность к антибиотикам (AST) проводили с использованием двухдискового синергетического теста и дискового диффузионного метода Кирби-Бауэра соответственно.

Результаты

Всего у 117 (64,3%) беременных женщин был обнаружен ESBL-E. Такие факторы, как самостоятельное назначение антибиотиков во время беременности, низкий уровень образования и совместное использование туалета, были независимо связаны с фекальным носительством БЛРС-Э. Пять видов БЛРС-Э, которые были выделены, включают Escherichia coli (84,6%), Klebsiella pneumoniae (8,9%), Klebsiella oxytoca (3,3%), Citrobacter spp. (1,6%) и Enterobacter spp. (1,6%). Изоляты ESBL-E продемонстрировали высокую устойчивость к азтреонаму и сульфаметоксазолу-триметоприму.

Заключение

Это исследование выявило относительно высокий уровень фекального носительства ESBL-E среди беременных женщин, что свидетельствует о необходимости рутинного скрининга среди этой группы населения.Мы рекомендуем дальнейшие исследования для всестороннего изучения факторов, связанных с высоким фекальным носительством ESBL-E во время беременности, и потенциальной кинетики передачи их новорожденным детям.

Ключевые слова: Бета-лактамазы расширенного спектра действия, Enterobacteriaceae, Фекальное носительство, Устойчивость к противомикробным препаратам, Беременность

История вопроса

Устойчивость к противомикробным препаратам (УПП) является новой проблемой у людей во всем мире [1]. Широкое использование антибиотиков у людей, животных и растений может вызывать непрерывные и динамические мутации бактерий [2].Мутации могут приводить к выработке резистентных генов, таких как те, которые кодируют ферменты β-лактамаз расширенного спектра (ESBL), которые придают множественную лекарственную устойчивость [3]. Предыдущие исследования показали, что фекальное носительство ESBL-продуцирующих Enterobacteriaceae (ESBL-E) колеблется от 3,2 до 67,9% [4–8]. По оценкам, около 110 миллионов человек в Африке являются носителями ESBL-E, что связано с высокой плотностью населения, ограниченным доступом к питьевой воде и бедностью [9]. Исследование, проведенное в Танзании, показало фекальное носительство ESBL-E 11.6% среди здоровых детей в результате широкого применения антибиотиков [10].

В мире частота фекального носительства БЛРС-Э среди беременных колеблется от 7,3 до 15,4%, что сопоставимо со здоровым населением в разных регионах [11–13]. В Африке фекальное носительство БЛРС-Э в среднем составляет 17% среди беременных [14] и 15% у родильниц [15]. Основной проблемой фекального носительства БЛРС-Э во время беременности является повышенный риск передачи этих резистентных штаммов новорожденным, что впоследствии может способствовать неонатальному сепсису [13, 16].Кроме того, носительство ESBL-E увеличивает риск передачи инфекции медицинским работникам и другим госпитализированным пациентам.

Кроме того, беременные женщины относятся к группе с ослабленным иммунитетом и подвержены различным бактериальным инфекциям. Колонизация ESBL-E в мочевыводящих путях беременных вследствие фекально-вагинальной передачи часто приводит к инфекции мочевыводящих путей (ИМП) [17, 18]. Во всем мире доля беременных женщин, колонизированных ESBL-E в мочевыводящих путях, колеблется от 2,0 до 75%, что является самым высоким показателем в развивающихся странах [19, 20].В Африке высокая доля выше 70% наблюдается в странах к югу от Сахары из-за широкого использования антибиотиков в сельском хозяйстве, ветеринарии и центрах здравоохранения [14, 21]. В Танзании доля БЛРС-Э среди изолятов мочи у беременных женщин колеблется от 18,8 до 45,2% [22].

В наших условиях данные о носительстве БЛРС-Э среди беременных женщин ограничены. Таким образом, это исследование определило фекальное носительство ESBL-E среди беременных женщин, сопутствующие факторы и модели резистентности к противомикробным препаратам изолятов бактерий ESBL-E.

Материалы и методы

Дизайн и условия исследования

Исследование представляло собой поперечный анализ на базе больницы, проводившийся с февраля по май 2019 года в Национальной больнице Мухимбили (MNH) в Дар-эс-Саламе, Танзания. MNH является крупнейшим учреждением третичной медицинской помощи в Танзании с 25 отделениями, 106 подразделениями обслуживания и вместимостью 1500 коек. Больница служит исследовательским центром, университетской клинической больницей и специализированной больницей. Около 1000-1200 амбулаторных пациентов посещают различные клиники в день с примерно 1000-1200 госпитализаций в неделю.Всего в учреждении работает 2700 сотрудников, в том числе 300 врачей, 900 медсестер и 1500 вспомогательного персонала. В этой больнице беременные женщины посещают не менее четырех визитов с интервалом в 4 недели, начиная с 12-недельного гестационного возраста. Клиника оказывает дородовые услуги в среднем 700 беременным женщинам в месяц, при этом за одно посещение клиники приходится около 25 беременных женщин. В среднем почти четверть беременных женщин, посещающих клинику ежемесячно, имеют гестационный возраст, равный или превышающий 37 недель.Общее количество родов в MNH с января по декабрь 2019 г. составило примерно 2126.

Исследуемая популяция, размер выборки и процедура выборки

согласился участвовать. Беременные женщины с известным повышенным риском бактериальной колонизации, такими как гестационный диабет, длительная госпитализация в анамнезе во время беременности, злокачественные новообразования, заболевания почек и печени, не подходили для включения в исследование.

В исследовании использовалась формула Киша Лесли, n = z 2 p (1 − p )/ e 2 , для расчета размера выборки. В формуле « n » означает требуемый минимальный размер выборки, а « z » — значение уровня достоверности (1,96) при доверительном интервале 95%. Ожидаемая доля ( на ) БЛРС-Э среди беременных женщин была оценена в 18,5% по данным исследования, проведенного на Мадагаскаре [23], а погрешность « на » составила 6%.Минимальный необходимый размер выборки оценивался в 161 беременную женщину. Для включения в исследование беременных женщин использовалась удобная выборка. Новые подходящие беременные женщины последовательно включались во время визита в клинику до тех пор, пока не был достигнут репрезентативный размер выборки.

Сбор данных

Хорошо структурированная анкета использовалась для сбора социально-демографической информации (возраст и уровень образования), истории самостоятельного назначения антибиотиков и гигиенических практик (тип туалета, совместное использование туалета, мытье рук и использование очищенной питьевой воды).Антенатальная карта была источником клинической информации, которая включала гестационный возраст, количество родов, ВИЧ-статус и сопутствующие заболевания.

Переменные исследования

Уровень образования был классифицирован как низкий для начального образования и ниже и как высокий уровень для среднего образования и выше. Самостоятельное назначение антибиотиков при беременности определялось как применение любого антибиотика без назначения врача во время беременности хотя бы один раз за последние 4 недели.Тип используемого туалета был тот, который был дома в предыдущие 3 месяца. Совместное использование туалета во время беременности означало использование общего/общественного туалета дома более чем одним человеком за последние 3 месяца. Мытье рук с мылом перед едой засчитывали, когда руки мыли с мылом каждый день во время основных приемов пищи на предыдущей неделе. Мытье рук с мылом после дефекации определялось, когда мыло использовалось для мытья рук после дефекации каждый день в течение последней недели. Использование очищенной питьевой воды считалось, когда очищенная вода использовалась для питья не менее одного раза в день в течение предыдущей недели.

Сбор проб и лабораторные процедуры

Ректальные мазки были взяты у беременных женщин обученным медицинским персоналом. Вкратце, медицинский персонал ввел стерильный ватный тампон в прямую кишку примерно на 10 с. Затем собранный образец выдерживали в среде Кэри-Блера, а затем транспортировали в Центральную лабораторию патологии (ЦПЛ) в течение 2 ч после сбора [24].

Образец ректального мазка был инокулирован на агар МакКонки (MCA) с добавлением 2.0 мкг/мл цефтазидима и инкубировали в аэробных условиях при 37 °C в течение ночи [25]. Предварительная идентификация изолятов основывалась на морфологии колоний и свойствах окрашивания по Граму. Все изоляты пересевали на питательный агар (NA) и инкубировали в аэробных условиях при 37 °C в течение ночи. Изоляты из НА идентифицировали с помощью обычных биохимических тестов. Идентификационные тесты включали тест на оксидазу, агар с железом Клиглера, тест на серо-индоловую подвижность, цитратный тест Симмонса и уреазный тест, как описано ранее [15]. Изоляты были подтверждены как ESBL-E с помощью двухдискового синергетического теста [26].

Пять дисков с антибиотиками: гентамицин (10 мкг), азтреонам (30 мкг), сульфаметоксазол-триметоприм (1,25/23,75), меропенем (10 мкг) и ципрофлоксацин (5 мкг) использовали для определения чувствительности к антибиотикам с помощью Диско-диффузионный метод Кирби-Бауэра. За исключением азтреонама, оставшиеся диски были выбраны, поскольку сообщалось, что они чувствительны к ESBL-E [15, 27, 28], тогда как азтреонам тестировали на чувствительность, чтобы проверить, все ли изоляты ESBL-E устойчивы к азтреонаму или нет.Характер резистентности был определен на основе рекомендаций Института клинических и лабораторных стандартов (CLSI) от 2018 г.

Контроль качества

Все эталонные микроорганизмы и реагенты были четко и однозначно маркированы, датированы и хранились в оптимальных условиях. Рабочие температуры холодильника и инкубатора контролировались и документировались ежедневно. Все питательные среды были приготовлены в соответствии с рекомендациями производителя и внутренними стандартными операционными процедурами и проверены на эффективность и стерильность. Мы стандартизировали мутность суспензии изолята по стандарту МакФарланда 0,5. Согласно CLSI (2018), Klebsiella pneumoniae (ATCC-700603) и Escherichia coli (ATCC-25922) были положительным и отрицательным контрольными штаммами бактерий соответственно [29].

Статистический анализ

Для статистического анализа использовалось программное обеспечение STATA версии 15.1. Непрерывные переменные суммировались как медиана и межквартильный размах (IQR), тогда как пропорции использовались для описания категориальных переменных.Групповые различия были исследованы с использованием точного критерия Фишера для категориальных переменных и критерия t для непрерывных переменных. Для выявления факторов, связанных с фекальным носительством ESBL-E, у беременных женщин в зависимости от общего отношения шансов (COR) с 95% доверительным интервалом (ДИ) была проведена бинарная логистическая регрессия. Многофакторная логистическая регрессия была проведена для изучения связи между переменной исхода и независимыми переменными после корректировки всех факторов, которые показали значимость в двумерном анализе, таких как уровень образования, самостоятельный прием антибиотиков во время беременности, совместное использование туалета и мытье рук. мыло после дефекации.Связи в многофакторных логистических моделях были представлены как скорректированные отношения шансов (AOR) с 95% CI. Двустороннее значение p <0,05 считалось значимым.

Результаты

Характеристика и гигиенические практики участников исследования

Обследовано 182 беременных со медианой возраста 29 лет, МКР [25–32], с гестационным возрастом, паритетом 39 нед, МКР [40–32]. 38] и 2, IQR [3-1], соответственно, были включены в исследование. Из 182, 56.0% имели высокий уровень образования, а 95,0% были ВИЧ-серонегативными. Кроме того, 52,2% (95/182) участников сообщили о самостоятельном назначении антибиотиков во время беременности (таблица). В общей сложности 154 (84,6%) участника пользовались туалетами со смывом, при этом 86 (74,7%) сообщили, что пользуются общими туалетами. Что касается соблюдения гигиены, то большинство (87,4%) сообщили о мытье рук с мылом перед едой. Аналогичным образом, 85,7% подтвердили мытье рук с мылом после дефекации, а 62,1% сообщили об использовании очищенной питьевой воды (таблица).

Таблица 1

Распределение социально-демографических, клинических и гигиенических переменных среди беременных женщин ( N = 182)

Обучающие
Переменная Общее количество процент (%)
Возраст
18-25
50 27,5
26-35 107 58.8
36+ 25 13.7
гестационный возраст
37-39 121 66,5
40-42 57 31,3
43-45 4 2. 2
Количество паритетов
0-1 73 40.1
2 53 29.1
3+ 56 30,8 уровень
Низкая 80 44,0
Высокое 102 56,0
ВИЧ Статус
9 5. 0
отрицательный 173 95.0
Self-рецепт лекарства антибиотиков во время беременности
Да 95 52,2
Нет 87 47,8
Тип туалета используется
Флеш 154 84,6
Отверстие 28 15,4
обмена Туалет
Нет 46 25 . 3
Да 136 74,7
Мытье с мылом перед едой
Да 159 87,4
Нет 23 12,6
Ручная промывание с мылом после дефекации
Да 156 85,7
26 14. 3
Использование очищенной питьевой воды
Да 113 62,1
Нет 69 37,9

Фекальные перевозки БЛРС-E

Фекальное носительство БЛРС-Э выявлено у 117 (64,3%) беременных. У участниц, которые в анамнезе самостоятельно назначали антибиотики во время текущей беременности, были более колонизированы ESBL-E, чем у тех, кто не назначал себе антибиотики в анамнезе ( p < 0.001). Отказ от мытья рук с мылом после дефекации и пользования туалетом был связан с более высоким фекальным носительством ESBL-E ( p <0,05). Мы наблюдали тенденцию к снижению доли фекального носительства БЛРС-Э с повышением уровня образования участников. Разница между низким (77,5%) и высоким (53,9%) уровнями образования была достоверной ( p = 0,001). Различия фекального носительства БЛРС-Э между категориями по возрастным группам, гестационному возрасту, паритету, ВИЧ-статусу, типам используемых туалетов, мытью рук с мылом перед едой и использованию очищенной воды были недостоверны ( p > 0.05) (таблица).

Таблица 2

фекальная перевозка ESBL-E среди беременных женщин социально-демографическими, клиническими факторами и гигиеническими факторами

1 Age Group 0,69 0,26 1 9 (47. 8) 9
Переменная Общее количество FeCal Carraniage, N (%) P p
182 117 (64. 3)
0.06
18-25 50 39 (78.0)
26-35 107 63 (58.9)
35+ 25 15 (60,0)
гестационный возраст
37-39 121 75 (62. 0)
40-42 57 39 (68,4)
43 –45 4 3 (75.0)
Количество четности
0-1 73 50 (68,5)
2 53 36 (67.9)
3+ 56 56 31 (55.4)
Low 80 62 (77116 )5)
высокий 102 55 (53,9)
ВИЧ-статус 0,16
Положительный 9 8 (88,9)
Отрицательный 173 109 (63. 0)
Саморегушечник антибиотики при беременности
Да 95 72 (75.8)
Нет 87 45 (51,7)
Виды туалета использовали 1,00
Флеш 154 99 (64,3)
HOLE 28 18 (6411)
NO
NO
Да 136 95 (69.9)
Мытье с мылом перед едой 0,17
Да 159 99 (62,3)
NO
NO 23 18 (78.3)
Да 156 95 (60. 9)
Нет 26 22 (84,6)
Использование очищенной питьевой воды 0,27
Да 113 69 (61,1)
 Нет 69 48 (69,6)

Предикторы фекального носительства БЛРС-Э

чем участники с высоким уровнем образования (cOR 2.94, 95% ДИ 1,53–5,66). Самостоятельное назначение антибиотиков во время беременности повышало вероятность фекального носительства БЛРС-Э (cOR, 2,92, 95% ДИ 1,56–5,49). Совместное использование туалета и мытье рук после дефекации в 2,5 и 3,5 раза превышало вероятность фекального носительства БЛРС-Э соответственно (таблица).

Таблица 3

Социально-демографические, клинические и гигиенические факторы, связанные с Esbl-e FeCal Chariage by Бивариата Анализ

0,001 1
Переменная Общее количество положительный, N (%) COR 95% ДИ p значение
Возраст ( p

6 9 = 0.06)

182 117 (64.3) 0.95 0.95 0.89-1.00 0,07
Уровень образования ( P = 0,001)
Низкая 80 62 (77,5) 2,94 1. 53-5.66
Высокое 102 55 (53,9)
ВИЧ-статус ( р = 0.16)
Положительный 9 8 (88,9) 4,70 0.57-38.42 0,15
Отрицательный 173 109 ( 63. 0) Ref
Самостоятельный прием антибиотиков при беременности ( p = 0,001)
 Да 95 72 (75.8) 2,92 1.56-5.49 0,001
Нет 87 45 (51,7) Ref
обмена Туалет ( р = 0,01)
Нет 46 22 (47,8) Ссылка
Да 136 95 (69. 9) 2,53 1,27–5,01 0,008
Мытье рук с мылом перед едой (

5 стр.

41

41 = 0,17 )

Да 159 99 (62,3) Ref
Нет 23 18 (78,3) 2,18 0.77-6.18 0,14
Мытье рук с мылом после дефекации ( p = 0.03)
Да 156 95 (60,9) Ссылка
Нет 26 22 (84,6) 3,53 1. 16-10.74 0,03

При многофакторном анализе факторами, которые были независимо связаны с фекальным носительством БЛРС-Э, были уровень образования, самостоятельное назначение антибиотиков во время беременности и пользование туалетом.Вероятность носительства ESBL-E была в два раза выше среди участников с низким уровнем образования, чем с высоким (aOR = 2,19, 95% CI = 1,08–4,43). У участников с историей самостоятельного назначения антибиотиков вероятность носительства ESBL-E была в три раза выше (aOR = 3,11, 95% CI = 1,59–6,01). Вероятность носительства ESBL-E была в два раза выше среди тех, кто пользовался общим туалетом во время беременности (aOR = 2,39, 95% CI = 1,10–5,21) (таблица).

Таблица 4

Многомерная логистическая регрессия для факторов, независимо связанных с Esbl-e FeCal Carrage

Ссылка (69,9) 0,008 95113 Ref
Переменная ESBL-E FeCal Carrange, N (%) COR 95% CI P Value AOR 95% CI P Value
Уровень образования
Low 62 (77. 5) 2,94 1.53-5.66 0,001 2,19 1.08-4.43 0,04
Высокое 55 (53,9) Ссылка
Самостоятельный прием антибиотиков при беременности ( p = 0,001)
 Да 72 (75,8) 2.92 1.56-5.49 0,001 3,11 1. 59-6.01 0,001
Нет 45 (51.7) Ссылка Ссылка
Общий туалет ( p = 0,01)
22 (47.8) Ссылка Ссылка
Да 95 2,53 1. 27-5.01 2,39 1.10-5.21 0,03
Мытье рук с мылом после дефекации ( p = 0,03)
Да 95 (60.9) Ref
22 (84.6) 3.53 1.16-10.74 0,03 0,03 2. 69 0,83-8.72 0.10

Видовые узоры Esbl-e и устойчивость к антимикробну

Пять бактерийных видов были выявлены среди 123 изолятов. Escherichia coli была наиболее преобладающей с долей 84,6%, за ней следовали Klebsiella pneumoniae (8,9%), Klebsiella oxytoca (3,3%), Citrobacter spp.(1,6%) и Enterobacter spp. (1,6%) (рис. ).

Доля видов ESBL-E, выделенных от беременных женщин. На рисунке показано распределение специфических изолятов ESBL-E, полученных от 182 беременных женщин в Национальной больнице Мухимбили

. Тест на чувствительность к антибиотикам был проведен с использованием пяти препаратов. Азтреонам обладал высокой устойчивостью к Citrobacter spp. (100,0%), K. pneumoniae (90,9%), E. coli (85,6%) и K. окситока (75,0%). Высокую устойчивость к сульфаметоксазол-триметоприму проявили Enterobacter spp. (100,0%), E. coli (76,0%), K. oxytoca (75,0%) и K. pneumoniae (63,6%). Резистентность к ципрофлоксацину была самой низкой в ​​диапазоне от 0 до 25%. Было обнаружено, что среди изолятов ESBL-E K. oxytoca обладает наибольшей устойчивостью к большинству испытанных антибиотиков, тогда как Citrobacter spp. имели наименьшую резистентность по сравнению со всеми другими изолятами (таблица).

Таблица 5

Узор на антимикробных устойчивости среди изолителей ESBL-e

99 (76.0)

119″ data-legacy-id=»fml12280-sec-0005″>01 Citrobacter вид. ( Н = 2)

ESBL-e изолирует Gentamicin, N (%) Aztreonam, N (%) Сульфаметоксазол -триметоприм, N (%) Meropenem, N (%) Ciprofloxacin, N (%)
E. кишечная палочка ( Н = 104) 1 (25.0) 89 (85.6) 79 (76,0) 31 (29.8) 24 (23.1)
K. pneumoniae ( Н = 11) 4 (36,4) 10 (90.9) 7 (63.6) 3 (27.3) 1 (9.1)
K. Oxytoca ( Н = 4) 18 (17.3) 3 (75,0) 3 (75,0) 3 (75,0) 1 (25,0)
Энтеробактер

6 вид. ( Н = 2)

0 1 (50) 2 (100,0) 0 0
0 2 (100.0) 1 (50) 0 0

Обсуждение

Это исследование показало высокую каловую перевозку ESBL-E среди беременных женщин, которые совпадают с выводами Djuikoue et al.в Камеруне, где сообщалось о фекальном носительстве 66,3% в аналогичной популяции [30]. Напротив, в других исследованиях сообщалось о более низком фекальном носительстве по сравнению с нашими результатами. Например, Фортин и др. в Нигерии сообщили о фекальном носительстве 31,7% [31], Chereau et al. на Мадагаскаре сообщили о 18,6% [23], а Nelson et al. в Мванзе, Танзания, 15% [15]. Несколько факторов могут быть связаны с высокой частотой фекального носительства ESBL-E, о которой сообщалось в этом исследовании, включая неправильное использование антибиотиков, низкий уровень образования и плохую гигиеническую практику.

Большинство женщин с фекальным носительством БЛРС-Э имели низкий уровень образования, что указывает на повышенный риск фекального носительства БЛРС-Э при низком уровне образования; что согласуется с результатами других предыдущих исследований [17, 30]. Низкий уровень образования может сопровождаться отсутствием знаний, что предрасполагает этих женщин к неправильному использованию антибиотиков и плохой гигиене. Ранее сообщалось, что эти факторы связаны с носительством ESBL-E [11, 26–28].

Мы наблюдали, что нерациональное использование антибиотиков во время беременности было в значительной степени связано с носительством ESBL-E.Участники, которые самостоятельно назначали антибиотики, имели повышенный риск фекального носительства ESBL-E. Этот результат сравним с другими исследованиями, которые продемонстрировали связь между предшествующим воздействием антибиотиков и носительством или инфекцией ESBL-E [15, 29, 31]. В этом исследовании беременные женщины, которые сообщали о совместном использовании туалетов с другими людьми, имели высокий риск заражения ESBL-E. На повышенный риск могут влиять плохая чистота туалета и самогигиена, которые создают высокую вероятность передачи резистентных патогенов [32–34].

В настоящем исследовании мы наблюдали, что ESBL-E имеют низкую и умеренную резистентность к ципрофлоксацину и гентамицину, а также к меропенему соответственно. Однако ESBL-E продемонстрировал высокую устойчивость к азтреонаму и сульфаметоксазол-триметоприму. Эти данные согласуются с другими исследованиями [15, 35, 36]. В связи с текущим состоянием роста устойчивости к противомикробным препаратам наши результаты подчеркивают необходимость проведения тестов на чувствительность к возбудителям БЛРС, чтобы дать рекомендации по выбору препарата для лечения в наших условиях.

Наше исследование может иметь некоторые ограничения. Во-первых, результаты больничного дизайна не могут быть распространены на население, так как может иметь место систематическая ошибка отбора. В исследование были включены беременные женщины во время последнего визита, поэтому существует вероятность того, что эти участники контактировали с БЛРС-Э во время других дородовых визитов, а не от сообщества. Во-вторых, мы признаем, что опора на информацию, которую сообщают сами, могла привести к предвзятости припоминания; потому что некоторые вопросы требуется вспомнить еще 3 месяца назад.В-третьих, исследование не смогло определить сезонность распространенности БЛРС-Э. Наконец, исследование проводилось в больнице третичного уровня, где доступность антибиотиков в городских районах выше, чем в пригородных и сельских районах; следовательно, настоящие выводы не могут быть обобщены.

Заключение

Фекальное носительство ESBL-E среди беременных женщин относительно велико, и большинство изолятов устойчивы к некоторым антибиотикам, обычно используемым в наших условиях.Мы заметили, что предшествующее воздействие антибиотиков увеличивает вероятность носительства ESBL-E. Полученные данные показывают, что управление противомикробными препаратами имеет важное значение для проверки чувствительных препаратов для лечения инфекций, связанных с ESBL-E. Наши результаты свидетельствуют о необходимости принятия комплексных мер предосторожности путем предоставления медико-санитарного просвещения медицинским работникам и пациентам по вопросам предотвращения внутрибольничной передачи инфекции. В свете этих результатов необходимы дополнительные исследования для дальнейшего определения риска передачи инфекции новорожденным от матерей, колонизированных ESBL-E, и определения профиля антибиотиков для бактерий, продуцирующих ESBL.

Благодарности

Авторы хотели бы поблагодарить всех пациентов, принимавших участие в этом исследовании. Мы хотим поблагодарить медсестер из MNH, которые помогали в наборе пациентов и сборе образцов. Мы также благодарим всех сотрудников отдела микробиологии, CPL, в MNH за их самоотверженное сотрудничество во время лабораторных работ.

Сокращения

AMR Устойчивость к противомикробным препаратам
АНК Дородовая клиника
АСТ Чувствительность к антибиотикам тест
CLSI Клиническая лаборатория Институт Стандартизации
DDST Дважды диск тест синергия
ESBL расширенного спектра бета-лактамазы
БЛРС-E расширенного спектра бета-лактамаз-продуцирующих энтеробактерий
ВИЧ вирус иммунодефицита человека
MCA МакКонки агар
MNH Muhimbili Национальная больница
МУХАС Muhimbili университет здравоохранения и смежных наук
Н. А. Питательный агар
ИМП мочевыводящих путей инфе
ВОЗ Всемирная организация здравоохранения

Вклад авторов

AM и DK участвовали в концептуализации исследования и сборе данных.А.М. выполнил лабораторную работу. AM, DK и MM выполнили все статистические анализы. AM, DK, UK, MM, SM и JM участвовали в составлении рукописи. М.М. участвовал в критическом обзоре рукописи. Авторы прочитали и одобрили окончательный вариант рукописи.

Финансирование

На данное исследование средства не поступали.

Доступность данных и материалов

Все соответствующие данные, полученные и проанализированные в ходе этого исследования, можно получить у соответствующего автора по обоснованному запросу.

Одобрение этики и согласие на участие

Этическое одобрение было получено от Комитета Сената по исследованиям и публикациям Университета здравоохранения и смежных наук Мухимбили (MUHAS). Разрешение на проведение исследования получено от администрации МНХ. Участники предоставили письменное информированное согласие до включения в исследование. Мы обеспечили конфиденциальность участников исследования за счет использования кодов вместо имен участников.

Согласие на публикацию

Не применимо

Конкурирующие интересы

Авторы заявляют об отсутствии конкурирующих интересов.

Сноски

Примечание издателя

Springer Nature остается нейтральной в отношении юрисдикционных претензий в опубликованных картах и ​​институциональной принадлежности.

Ссылки

3. Брэдфорд, Пенсильвания. Бета-лактамазы расширенного спектра в 21 веке: характеристика, эпидемиология и обнаружение этой важной угрозы резистентности. Clin Microbiol Rev. 2001;14(4):933–951. doi: 10.1128/CMR.14.4.933-951.2001. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]4.Кадер АА, Камат КА. Фекальное носительство бактерий, продуцирующих бета-лактамазы расширенного спектра, в обществе. East Mediterr Health J. 2009;15(6):1365–1370. [PubMed] [Google Scholar]5. Хериндрайни П., Рандрианирина Ф., Ратовосон Р., Рацима Хариниана Э., Буиссон Ю., Генел Н., Декре Д., Арлет Г., Талармин А., Ричард В. Ректальное носительство грамотрицательных бацилл, продуцирующих бета-лактамазы расширенного спектра, в общественных условиях в Мадагаскар. ПЛОС Один. 2011;6(7):e22738. doi: 10.1371/journal.pone.0022738. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]6.Хоуки ПМ. Распространенность и клональность бета-лактамаз расширенного спектра действия в Азии. Клин Микробиол Инфект. 2008; 14 (Приложение 1): 159–165. doi: 10.1111/j.1469-0691.2007.01855.x. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]7. Фридманн Р., Равех Д., Зарцер Э., Руденски Б., Бройд Э., Аттиас Д., Иннон А.М. Проспективная оценка колонизации энтеробактериями, продуцирующими бета-лактамазы расширенного спектра (БЛРС), среди пациентов при поступлении в больницу и последующей колонизации энтеробактериями, продуцирующими БЛРС, среди пациентов во время госпитализации. Infect Control Hosp Epidemiol. 2009;30(6):534–542. дои: 10.1086/597505. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]8. Родригес-Бано Дж., Лопес-Сереро Л., Наварро М.Д., Диас де Альба П., Паскуаль А. Фекальное носительство Escherichia coli , продуцирующего бета-лактамазы расширенного спектра: распространенность, факторы риска и молекулярная эпидемиология. J Антимикробная химиотерапия. 2008;62(5):1142–1149. doi: 10.1093/jac/dkn293. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]9. Woerther PL, Burdet C, Chachaty E, Andremont A. Тенденции фекального носительства β-лактамаз расширенного спектра у людей в обществе: к глобализации CTX-M.Clin Microbiol Rev. 2013;26(4):744–758. doi: 10.1128/CMR.00023-13. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]10. Теллевик М.Г., Бломберг Б., Коммедаль О., Маселле С.Ю., Лангеланд Н., Мойо С.Дж. Высокая распространенность фекального носительства энтеробактерий, продуцирующих БЛРС, среди детей в Дар-эс-Саламе. Танзания. 2016;11(12):e0168024. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]11. Саес-Лопес Э., Гирал Э., Фернандес-Орт Д., Вильянуэва С., Гонсе А., Лопес М. и др. (2016) Вагинальная и акушерская инфекция Изоляты Escherichia coli среди беременных женщин: устойчивость к противомикробным препаратам и профиль генетической вирулентности.ПЛОС Один. 2016;11(1):e0146531. [Бесплатная статья PMC] [PubMed]12. Патак А., Чандран С.П., Махадик К., Макаден Р., Лундборг С.С. Частота и факторы, связанные с носительством комменсала Escherichia coli с множественной лекарственной устойчивостью среди женщин, посещающих дородовые женские консультации в Центральной Индии. BMC Infect Dis. 2013;13:199. дои: 10.1186/1471-2334-13-199. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]13. Денкель Л.А., Шваб Ф., Кола А., Лейстнер Р., Гартен Л., фон Вайцзекер К., Гефферс С., Гастмайер П., Пининг Б.Мать как наиболее важный фактор риска колонизации младенцев с очень низкой массой тела при рождении (ОНМТ) энтеробактериями, продуцирующими бета-лактамазы расширенного спектра действия (ESBL-E) J Antimicrob Chemother. 2014;69(8):2230–2237. doi: 10.1093/jac/dku097. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 14. Булабула А.Н., Драмовски А., Мехтар С. Колонизация матери или инфицирование энтеробактериями, продуцирующими расширенный спектр бета-лактамаз, в Африке: систематический обзор и метаанализ. Int J Infect Dis. 2017;64:58–66.doi: 10.1016/j.ijid.2017.08.015. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 15. Нельсон Э., Кайега Дж., Сени Дж., Муши М.Ф., Киденья Б.Р., Хокороро А., Зуехнер А., Кихунрва А., Мшана С.Е. Оценка существования и передачи бактерий, продуцирующих бета-лактамазу расширенного спектра, от женщин после родов новорожденным в Медицинском центре Бугандо. Мванза-Танзания. Примечания BMC Res. 2014;7:279. дои: 10.1186/1756-0500-7-279. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]16. Реттедал С., Лёр И.Х., Бернхофф Э., Натас О.Б., Сундсфьорд А., Оймар К.Enterobacteriaceae, продуцирующие бета-лактамазы расширенного спектра действия, среди беременных женщин в Норвегии: распространенность и передача от матери к новорожденному. Дж. Перинатол. 2015;35(11):907–912. doi: 10.1038/jp.2015.82. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 17. Watt S, Lanotte P, Mereghetti L, Moulin-Schouleur M, Picard B, Quentin R. Штаммы Escherichia coli от беременных женщин и новорожденных: внутривидовое генетическое распространение и распространенность факторов вирулентности. Дж. Клин Микробиол. 2003; 41 (5): 1929–1935. дои: 10.1128/JCM.41.5.1929-1935.2003. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]18. Obata-Yasuoka M, Ba-Thein W, Tsukamoto T, Yoshikawa H, Hayashi H. Вагинальные Escherichia coli имеют общие профили факторов вирулентности, серотипы и филогению с другими внекишечными E. coli . Микробиология. 2002; 148 (часть 9): 2745–2752. doi: 10.1099/00221287-148-9-2745. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 19. Падмавати К., Кришнан П., Раджасекаран С. Устойчивость к фторхинолонам среди CTX-M, продуцирующих уропатогенные Escherichia coli , от ВИЧ-инфицированных и не-ВИЧ пациентов в Южной Индии. BMC Infect Dis. 2014;14:P63. doi: 10.1186/1471-2334-14-S3-P63. [Перекрестная ссылка] [Академия Google] 20. Bouchillon SK, Johnson BM, Hoban DJ, Johnson JL, Dowzicky MJ, Wu DH, Visalli MA, Bradford PA. Определение заболеваемости β-лактамазами расширенного спектра, продуцирующими Enterobacteriaceae, устойчивыми к ванкомицину Enterococcus faecium и устойчивыми к метициллину Staphylococcus aureus в 38 центрах из 17 стран: исследование PEARLS 2001–2002. Противомикробные агенты Int J. 2004;24(2):119–124. doi: 10.1016/j.ijantimicag.2004.01.010. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 21. Тансарли Г.С., Пуликакос П., Капаскелис А., Фалагас М.Е. Доля изолятов, продуцирующих бета-лактамазы расширенного спектра (БЛРС), среди энтеробактерий в Африке: оценка доказательств — систематический обзор. J Антимикробная химиотерапия. 2014;69(5):1177–1184. doi: 10.1093/jac/dkt500. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 22. Мойо С.Дж., Абуд С., Касуби М., Лямуя Э.Ф., Маселле С.Ю. Устойчивость к противомикробным препаратам среди продуцентов и непродуцентов бета-лактамаз расширенного спектра в мочевых изолятах в больнице третичного уровня в Танзании. Примечания BMC Res. 2010;3:348. дои: 10.1186/1756-0500-3-348. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]23. Chereau F, Herindrainy P, Garin B, Huynh BT, Randrianirina F, Padget M, Piola P, Guillemot D, Delarocque-Astagneau E. Колонизация энтеробактерий, продуцирующих расширенный спектр β-лактамаз и NDM-1, среди беременных женщин в сообщество в стране с низким уровнем дохода: потенциальный резервуар для передачи полирезистентных энтеробактерий новорожденным. Противомикробные агенты Chemother. 2015;59(6):3652–3655.doi: 10.1128/AAC.00029-15. [PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

24. Cheesbrough M. Районная лабораторная практика в тропических странах. 2 и Эди. Издательство Кембриджского университета; 2006. Глава 3: исследование образцов фекалий; п. 97-105.

25. Доктор Рао С.П. Бета-лактамазы расширенного спектра — всесторонний обзор. 2015. Глава 5: лабораторное обнаружение БЛРС; п. 49-51.

26. Дхара М., Диша П., Сачин П., Маниша Дж. , Сима Б., Вегад М. Сравнение различных методов обнаружения бета-лактамаз расширенного спектра в Klebsiella pneumoniae , выделенных из отделения интенсивной терапии новорожденных.Национальный J Med Res. 2012;2:348–353. [Google Академия] 27. Марва К.Дж., Муси М.Ф., Конье Э., Алеле П.Е., Кидола Дж., Мирамбо М.М. Резистентность к котримоксазолу и другим противомикробным препаратам среди изолятов, полученных от пациентов с ВИЧ/СПИДом и пациентов, не инфицированных ВИЧ/СПИДом, в медицинском центре Бугандо, Мванза. Танзания. Лечение СПИДа. 2015;2015:103874. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]28. Сени Дж., Наджука С.Ф., Катит Д.П., Макоборе П., Джолоба М.Л., Каджумбула Х., Капеса А., Бванга Ф. Устойчивость к противомикробным препаратам у госпитализированных хирургических пациентов: молчаливо возникающая проблема общественного здравоохранения в Уганде.Примечания BMC Res. 2013;6:298. дои: 10.1186/1756-0500-6-298. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]29. Институт клинических и лабораторных стандартов. Стандарты производительности M100 для противомикробных препаратов. 28 2018. [Google Scholar]30. Джуикоуэ И.С., Вёртер П.Л., Тукам М., Бурдет С., Руппе Э., Гонсу К.Х., Фокунанг С., Эль Мниай А., Лариса К., Пьеме А.С., Мбупаинг М.Г. Кишечное носительство бета-лактамаз расширенного спектра, продуцирующих E. coli , у женщин с инфекциями мочевыводящих путей, Камерун.J Infect Dev Cries. 2016;10:1135–1139. doi: 10.3855/jidc.7616. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 31. Fortini D, Fashae K, Villa L, Feudi C, García-Fernández A, Carattoli A. Новая плазмида, несущая blaCTX-M-15, идентифицированная в комменсале Escherichia coli от здоровых беременных женщин в Ибадане. Нигерия. J Glob противомикробный резист. 2015;3(1):9–12. doi: 10.1016/j.jgar.2014.12.002. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 32. Кагия Н., Косгей П., Ооко М., Вафула Л., Мтури Н., Анампиу К., Мварумба С., Ньюгуна П., Сил А.С., Беркли Дж.А., Боттомли К.Носительство и приобретение Enterobacterales, продуцирующих β-лактамазы расширенного спектра действия, среди новорожденных, поступивших в больницу в Килифи. Кения. Клин Инфекция Дис. 2019;69(5):751–759. doi: 10.1093/cid/ciy976. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]33. Мандал Д.К., Сах С.К., Мишра С.К., Шарма С., Каттель Х.П., Пандит С., Ядав П.К., Лагху У., Лама Р., Сах Н.П., Шерчанд Дж.Б., Параджули К., Бастола А., Пун С.Б., Риджал Б.П., Похарел Б.М. Носительство энтеробактерий, продуцирующих β-лактамазы и AmpC-β-лактамазы расширенного спектра действия (ESBL-PE), у здоровых пациентов в амбулаторных отделениях (OPD) в Непале.Может ли J заразить Dis Med Microbiol. 2020;2020:5154217. doi: 10.1155/2020/5154217. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]34. Дэй М.Дж., Хопкинс К.Л., Уэрхэм Д.В., Толеман М.А., Элвис Н., Рэндалл Л., Тил С., Клири П., Виуфф С., Думит М., Эллингтон М.Дж. Escherichia coli , продуцирующая β-лактамазы расширенного спектра, в образцах, полученных от человека и пищевой цепи, из Англии, Уэльса и Шотландии: эпидемиологическое наблюдение и исследование типирования. Ланцет Infect Dis. 2019;19(12):1325–1335. дои: 10.1016/S1473-3099(19)30273-7. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 35. Бишара Дж., Ливне Г., Ашкенази С., Леви И., Питлик С., Офир О., Лев Б., Самра З. Антибактериальная чувствительность , продуцирующих бета-лактамазы расширенного спектра, Klebsiella pneumoniae и Escherichia coli . Isr Med Assoc J. 2005;7(5):298–301. [PubMed] [Google Scholar] 36. Фалагас МЭ, Карагеоргопулос ДЭ. Организмы, продуцирующие β-лактамазы расширенного спектра действия. Джей Хосп заражает. 2009;73(4):345–354. doi: 10.1016/j.jhin.2009.02.021. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

Инфекции во время беременности, которые могут повлиять на вашего ребенка

На протяжении всей жизни мы все сталкиваемся со многими вирусами и бактериями.

Эта страница посвящена инфекциям, которые могут вызвать проблемы во время беременности, их симптомам и тому, что делать, если вы беспокоитесь.

Ветряная оспа при беременности

Заражение ветрянкой при беременности может быть опасным как для вас, так и для вашего ребенка, поэтому важно как можно раньше обратиться за консультацией, если вы подозреваете, что у вас может быть ветряная оспа.

Вероятность того, что вы невосприимчивы к ветряной оспе, составляет 90%. Но если у вас никогда не было ветрянки (или вы не уверены, болели ли вы ею) и контактируете с ребенком или взрослым, у которого она есть, немедленно обратитесь к своему врачу общей практики, акушеру или акушерке. Анализ крови покажет, есть ли у вас иммунитет.

ЦМВ во время беременности

ЦМВ (цитомегаловирус) – это распространенный вирус, входящий в группу герпеса, который также может вызывать герпес и ветряную оспу. ЦМВ-инфекции часто встречаются у детей раннего возраста.

Инфекция может быть опасна во время беременности, поскольку она может вызвать проблемы у нерожденных детей, такие как потеря слуха, нарушение зрения или слепота, трудности в обучении и эпилепсия.

ЦМВ особенно опасен для ребенка, если беременная мать ранее не болела инфекцией.

Предотвратить инфекцию ЦМВ не всегда возможно, но вы можете снизить риск, если:

  • не целовать маленьких детей в лицо – лучше целовать их в голову или обнимать
  • не делить еду или столовые приборы с маленькими детьми и не пить из одного с ними стакана
  • Это особенно важно, если у вас есть работа, связанная с тесным контактом с маленькими детьми. В этом случае вы можете сдать анализ крови, чтобы узнать, были ли вы ранее инфицированы ЦМВ.

    Узнайте больше о цитомегаловирусе

    Стрептококк группы B при беременности

    Стрептококк группы B (GBS или стрептококк группы B) редко причиняет вред или вызывает симптомы.

    В большинстве беременностей он не вызывает никаких проблем, но в небольшом числе случаев стрептококк группы В поражает ребенка, обычно непосредственно перед родами или во время родов, что приводит к серьезным заболеваниям.

    Если у вас уже был ребенок с инфекцией GBS, вам следует предложить антибиотики во время родов, чтобы снизить вероятность заражения вашего нового ребенка.Вам также следует предлагать их во время родов, если во время беременности у вас была инфекция мочевыводящих путей, вызванная стрептококком группы B.

    Заражение ребенка СГБ более вероятно, если:

    • у вас начнутся преждевременные роды (до 37 недель беременности)
    • у вас рано отойдут воды
    • у вас жар во время родов
    • у вас в настоящее время есть СГБ

    Ваша акушерка или врач оценят, следует ли вам предлагать антибиотики во время родов, чтобы защитить вашего ребенка от заражения.

    На поздних сроках беременности можно пройти тест на СГБ. Поговорите со своим врачом или акушеркой, если у вас есть проблемы.

    Инфекции, передаваемые животными

    Кошки

    Фекалии кошек могут содержать токсоплазму – микроорганизм, вызывающий токсоплазмоз. Токсоплазмоз может нанести вред вашему ребенку.

    Чтобы снизить риск заражения:

    • избегайте опорожнения лотка для кошачьего туалета во время беременности
    • если никто другой не может опорожнять лоток, используйте одноразовые резиновые перчатки – лотки следует чистить ежедневно
    • избегать тесного контакта с больными кошки
    • даже если у вас нет кошки, надевайте перчатки при работе в саду на случай, если почва загрязнена фекалиями
    • мойте руки и перчатки после работы в саду
    • при контакте с кошачьими фекалиями тщательно мойте руки
    • соблюдайте общие правила гигиены пищевых продуктов – узнайте, как безопасно готовить пищу и как безопасно хранить продукты. Они также являются переносчиками токсоплазмы.

      Избегайте ягнения или доения овец, а также любого контакта с новорожденными ягнятами. Сообщите своему врачу, если вы испытываете симптомы гриппа после контакта с овцами.

      Свиньи

      Продолжаются исследования, чтобы выяснить, могут ли свиньи быть источником инфекции гепатита Е. Эта инфекция опасна, если вы беременны.

      Профилактика инфекций путем:

      • тщательного приготовления мяса и мясных продуктов
      • избегания употребления в пищу сырого или недоваренного мяса и моллюсков
      • тщательного мытья рук перед приготовлением, подачей на стол и приемом пищи

      Более подробную информацию о гепатите Е можно найти на сайте GOV.Великобритания

      Гепатит B

      Гепатит B — это вирус, поражающий печень. У многих людей с гепатитом В не будет никаких признаков болезни, но они могут быть носителями и заразить других.

      Вирус передается при половом акте с инфицированным человеком без использования презерватива и при прямом контакте с зараженной кровью. Если у вас есть гепатит В или вы заразились во время беременности, вы можете передать инфекцию своему ребенку при рождении.

      Вам предложат сдать анализ крови на гепатит В в рамках дородового наблюдения.Младенцам из группы риска следует делать прививку от гепатита В при рождении, чтобы предотвратить инфекцию и серьезные заболевания печени в более позднем возрасте.

      Гепатит С

      Вирус гепатита С поражает печень. Многие люди с гепатитом С не имеют симптомов и не знают, что инфицированы. Вирус передается при прямом контакте с зараженной кровью.

      У людей, принимающих запрещенные наркотики, это может быть результатом использования общих игл, загрязненных кровью.

      Лица, перенесшие переливание крови в Великобритании до сентября 1991 г. или продукты крови до 1986 г., также могут подвергаться риску.

      Гепатит С также может передаваться при получении медицинского или стоматологического лечения в странах, где гепатит С распространен, а инфекционный контроль может быть плохим, или при половом акте с инфицированным партнером.

      Если у вас есть гепатит С, вы можете передать инфекцию своему ребенку, хотя риск намного ниже, чем при гепатите В или ВИЧ. В настоящее время это невозможно предотвратить.

      Ваш ребенок может пройти обследование на гепатит С и, если он инфицирован, может быть направлен на обследование у специалиста.

      Герпес во время беременности

      Инфекция генитального герпеса может быть опасна для новорожденного.

      Вы можете заразиться герпесом при генитальном контакте с инфицированным человеком или при оральном сексе с человеком, у которого есть герпес (оральный герпес).

      Первичная инфекция вызывает болезненные волдыри или язвы на половых органах. Менее серьезные вспышки обычно возникают в течение нескольких лет после этого.

      Лечение доступно, если вы впервые заразились во время беременности.Если ваша первая инфекция произошла ближе к концу беременности или во время родов, может быть рекомендовано кесарево сечение, чтобы снизить риск передачи герпеса вашему ребенку.

      Если у вас или вашего партнера есть герпес, используйте презервативы или избегайте секса во время вспышки. Избегайте незащищенного орального секса, так как герпес очень легко передается.

      Сообщите акушерке или врачу, если у вас или вашего партнера рецидивирует герпес или появляются язвы.

      ВИЧ во время беременности

      Вам будет предложено пройти конфиденциальный тест на ВИЧ (вирус иммунодефицита человека) в рамках обычного дородового наблюдения.Ваша акушерка или врач обсудят с вами тест, и в случае положительного результата будет доступна консультация.

      Узнайте больше о скрининге на ВИЧ во время беременности

      Имеющиеся данные свидетельствуют о том, что если вы ВИЧ-положительны, у вас хорошее здоровье и у вас нет симптомов инфекции, вы вряд ли подвергнетесь неблагоприятным последствиям во время беременности.

      Однако ВИЧ может передаваться вашему ребенку во время беременности, родов, кормления грудью или грудного вскармливания.

      Если у вас диагностирован ВИЧ, вам и вашему врачу необходимо будет обсудить ведение беременности и родов, чтобы снизить риск заражения вашего ребенка.

      Лечение во время беременности значительно снижает риск передачи ВИЧ ребенку — с 1 из 4 до менее чем 1 из 100. Ваш ребенок будет проходить тестирование на ВИЧ при рождении и через регулярные промежутки времени в течение 18 месяцев.

      Вам будет рекомендовано не кормить грудью и не кормить грудью, так как таким путем ВИЧ может передаться вашему ребенку.

      Если вы ВИЧ-положительны, поговорите со своим врачом или акушеркой о своем здоровье и доступных вам вариантах. Вы также можете обратиться за информацией и поддержкой в ​​такие организации, как Positively UK или Terrence Higgins Trust.

      Британская ассоциация по ВИЧ располагает дополнительной информацией о ВИЧ и беременности

      Видео: ВИЧ и беременность

      В этом видео рассказывается история Сары о ВИЧ и беременности.

      Последнее рассмотрение СМИ: 16 ноября 2020 г.
      Срок рассмотрения СМИ: 16 ноября 2023 г.

      Синдром пощечины при беременности

      Синдром пощечины часто встречается у детей. Обычно вызывает сыпь на лице.

      Синдром пощечины очень заразен и может нанести вред ребенку.

      Если вы вступите в контакт с кем-либо, кто инфицирован, вам следует поговорить со своим врачом, который может провести анализ крови, чтобы проверить, есть ли у вас иммунитет. В большинстве случаев ребенок не страдает, если у вас синдром пощечины.

      Краснуха (краснуха) во время беременности

      Краснуха редко встречается в Великобритании благодаря широкому использованию вакцины MMR (кори, эпидемического паротита и краснухи).

      Но если у вас развилась краснуха в первые 4 месяца беременности, это может привести к серьезным проблемам, включая врожденные дефекты и выкидыш.

      Если вы беременны, вам следует как можно скорее обратиться к своему терапевту или акушерке, если:

      • вы вступили в контакт с больным краснухой
      • у вас появилась сыпь или вы вступили в контакт с больным краснухой
      • вы есть симптомы краснухи

      В таких обстоятельствах маловероятно, что у вас краснуха, но для проверки вам может потребоваться анализ крови.

      Если вы беременны и не уверены, получили ли вы 2 дозы вакцины MMR, попросите своего врача общей практики проверить вашу историю вакцинации.

      Если вы не получили обе дозы или нет записей, вам следует попросить вакцину, когда вы пойдете на послеродовой осмотр через 6 недель после родов. Это защитит вас во время будущих беременностей.

      Вакцину MMR нельзя вводить во время беременности.

      ИППП во время беременности

      ИППП часто не имеют симптомов, поэтому вы можете не знать, есть ли они у вас.Однако многие ИППП могут повлиять на здоровье вашего ребенка как во время беременности, так и после родов.

      Если у вас есть основания полагать, что у вас или вашего партнера может быть ИППП, как можно скорее пройдите обследование. Вы можете спросить своего врача общей практики или акушерку. Если вы предпочитаете, вы можете пойти в клинику сексуального здоровья. Конфиденциальность гарантируется.

      Найдите ближайшую к вам службу сексуального здоровья

      Если вам меньше 25 лет, вы также можете посетить центр Brook для получения бесплатной конфиденциальной консультации. Вы также можете заказать бесплатный тест на хламидиоз через Интернет.

      Вирус Зика

      Вирус Зика может вызвать врожденные дефекты, если вы заразитесь им во время беременности. В частности, это может привести к тому, что у ребенка будет аномально маленькая голова (микроцефалия).

      Зика в природе не встречается в Великобритании. Обратитесь за консультацией по вопросам здоровья перед поездкой, если вы планируете отправиться в пострадавший район, например:

      • Южная или Центральная Америка
      • Карибский бассейн
      • Юго-Восточная Азия
      • Тихоокеанский регион — например, Фиджи

      Во время беременности , рекомендуется отложить несущественные поездки в районы повышенного риска.

      Получите информацию о рисках для конкретной страны на GOV.UK

      Также рекомендуется избегать беременности во время путешествий и в течение 3 месяцев после возвращения в Великобританию.

      Зика распространяется комарами. Вы можете снизить риск укусов комаров, используя репелленты от насекомых и надев свободную одежду, закрывающую руки и ноги.

      Неонатальный сепсис, вызванный резистентным к гликопептидам Enterococcus faecium из колонизированного материнского кишечника – свидетельство редкого случая | Устойчивость к противомикробным препаратам и инфекционный контроль

      Из всех видов Enterococci , E faecalis и E faecium являются наиболее распространенными патогенами человека.Серьезные энтерококковые инфекции часто трудно поддаются лечению, поскольку организм проявляет внутреннюю устойчивость к различным антибиотикам, включая пенициллины, цефалоспорины, а иногда и к аминогликозидам, клиндамицину и другим линкозамидам [3]. Недавнее появление полирезистентных (МЛУ) энтерококков , , особенно VRE, спровоцировало возникновение нескольких нозокомиальных вспышек во всем мире [9].

      Энтерококки являются одними из первых бактерий, которые колонизируют желудочно-кишечный тракт новорожденных из вагинальной и желудочно-кишечной флоры матери во время родов, при проглатывании грудного молока или в результате тесной связи с матерью [10]. Хотя мы не пытались исследовать точный путь передачи организма в данном случае, два возможных пути распространения [11,12,13], по нашему мнению, могут быть (i) из материнского кишечника в материнский кровоток , затем трансплацентарно к плоду или (ii) из кишечника матери в полость рта новорожденного во время родов, распространяясь оттуда в кровь новорожденного. Поскольку это случай сепсиса новорожденных с ранним началом, временные рамки предполагают, что первый путь является наиболее вероятным, хотя такие пути недостаточно документированы среди Enterococcus .Подчеркивая это далее, выделение VRE из крови новорожденного, кишечника матери и новорожденного с аналогичной антибиотикограммой и аналогичной картиной PFGE подтверждает предположение о том, что мать является источником инфекции.

      Используя ПЦР-риботипирование, Kaushal S и коллеги [14] из Индии сообщили о van A генотипах E faecalis в стуле и крови новорожденного с септицемией и заявили, что желудочно-кишечный носитель может быть возможным источником сепсиса. Карл М.А. и соавт.[15] предположили, что вертикально передаваемые грамотрицательные бациллы (GNB) и стрептококки группы B во время вагинальных родов колонизируют желудочно-кишечный тракт новорожденных с последующим эпизодом позднего сепсиса. Дас и др. [16] заметили, что у новорожденных с GNB в кишечнике частота клинического сепсиса постоянно выше, чем у новорожденных без такой колонизации.

      Наше наблюдение сходных паттернов PFGE фекальных изолятов и изолятов крови подтверждает сильную связь колонизации материнского кишечника с неонатальным сепсисом.В данном случае у ребенка на основании клинических данных был диагностирован легкий синдром аспирации мекония. Бактериальное разнообразие мекония было оценено ранее у недоношенных и доношенных детей, что оказало глубокое влияние на здоровье новорожденных, в большей степени недоношенных детей [17]. Мы не проверяли меконий на стерильность. Молес Л. и др. [17] и Jiménez E et al. [18] предположили, что кишечник плода может быть нестерильным и что часть бактериальной флоры, обнаруживаемой в меконии, может не всегда иметь постнатальное происхождение. Кроме того, было также постулировано, что многие из родов бактерий, обнаруженных в меконии, в том числе Enterococcus , были обычными обитателями материнского кишечника [19]. Трансплацентарная миграция E faecium была продемонстрирована Jiménez E et al. [18] в эксперименте, где беременных мышей кормили молоком, содержащим меченый E faecium. Меконий от щенков, рожденных путем кесарева сечения, дал такую ​​же маркировку E faecium . Кишечная флора матери может распространяться на новорожденного во время хирургического вмешательства [20, 21], через трахею [22] и может приводить к бактериемии.

      Тем не менее, нет необходимости подчеркивать, что нозокомиальный сепсис после колонизации кишечника у новорожденных имеет первостепенное клиническое значение, особенно в развивающихся странах, где в большинстве больниц преобладают неадекватные меры инфекционного контроля. Патоген Enterococcus в данном случае был устойчив ко многим антибиотикам, включая ванкомицин и тейкопланин. Перед лицом повышения уровня резистентности и ограниченных возможностей лечения профилактика полирезистентных инфекций Enterococcus имеет первостепенное значение.Таким образом, CDC недавно рекомендовал использовать все контактные меры предосторожности, такие как барьерный уход, мытье рук и т. д., не только для носителей MDR Enterococcus , но и для всех MDR-организмов, чтобы предотвратить распространение этих организмов в медицинских учреждениях [23]. Некоторые больницы практиковали рутинный скрининг и деколонизацию носителей MRSA, чтобы предотвратить последующее распространение инфекции [24]. В отличие от этого эффективного скрининга и деколонизации носителей VRE не практикуется во многих больницах, поскольку VRE является гораздо менее распространенным инвазивным патогеном, чем MRSA, и имеет тенденцию поражать меньшую группу пациентов [25].

      Несмотря на вышеизложенное, другие исследователи [3, 4, 14] также сообщали о высокой частоте van A VRE-носительства в фекалиях пациентов, поступивших в отделения интенсивной терапии.

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован.