Гемолизины: Сдать анализ: Гемолизины (антитела по системе АВ0)

Содержание

Публикации в СМИ

Аутоиммунные гемолитические анемии — приобретённые анемии, характеризующиеся развитием гемолиза в результате выработки аутоантител против Аг эритроцитов или эритрокариоцитов.

Классификация аутоантител на основании серологических исследований • Тепловые АТ (реагирующие с эритроцитами при температуре не менее 37 °C) — 80–90% • Холодовые АТ (реагирующие с эритроцитами при температуре менее 37 °C) — 10% • Двухфазные гемолизины.

Этиология • Тепловые АТ •• Идиопатические причины (50%) •• Неопластические процессы (лейкоз, миелома множественная, лимфома, тимома) •• Системные заболевания соединительной ткани •• Вирусная инфекция (например, гепатит) • Холодовые АТ: •• Идиопатические причины (50%) •• Инфекции (микоплазмы, некоторые вирусы) •• Неопластические процессы (лимфома) •• Пароксизмальная холодовая гемоглобинурия (синдром Доната–Ландштайнера) • Индуцированная ЛС (метилдопа, высокие дозы пенициллинов и цефалоспоринов) • См.

также Агранулоцитоз.

Клиническая картина • Острое начало с повышения температуры тела • Желтуха • Гепатоспленомегалия • Общие признаки анемии (слабость, бледность кожных покровов, утомление, одышка при нагрузке, головокружение, тахикардия и т.д.) • Дистрофия миокарда.

Течение • Острое • Подострое • Хроническое • Рецидивирующее.

Лабораторные исследования • Положительная проба Кумбса (тест с антиглобулином к эритроцитам) • Анемия • Увеличение СОЭ • Увеличение среднего содержания Hb в эритроцитах • В периферической крови — нормохромия, пойкилоцитоз, анизоцитоз, «монетные столбики» из эритроцитов, ретикулоцитоз; эритроциты содержат ядра; осмотическая резистентность эритроцитов не снижена • Гипербилирубинемия (за счёт непрямого билирубина) • Снижение содержания гаптоглобина • В моче — уробилинурия, протеинурия; в кале — плейохромия (повышение содержания стеркобилина).

Специальные исследования • Серологическое исследование направлено на выявление иммуноглобулина G (IgG; АТ тепловые) • иммуноглобулина M (IgM; АТ холодовые).

ЛЕЧЕНИЕ

Режим стационарный. Постельный режим до полного купирования симптоматики.

Тактика ведения зависит от степени тяжести • При индуцированной ЛС — отмена препарата, вызвавшего гемолиз эритроцитов. Проявления гемолитического синдрома исчезают в течение 2 нед (проба Кумбса остаётся положительной более 1 года) или сразу после выведения препарата из организма, если гемолиз был вызван введением антибиотиков. При тяжёлом течении назначают ГК • При этиологической роли тепловых АТ: •• лёгкая степень — заместительная терапия •• средне-тяжёлая — ГК •• тяжёлая — большие дозы ГК, иммунодепрессанты, переливание эритроцитарной массы • При этиологической роли холодовых АТ •• Заместительная терапия •• Следует избегать переохлаждения •• Переливание эритроцитарной массы •• Возможно назначение высоких доз ГК •• Необходимо ограничить применение других ЛС • Плазмаферез проводят с целью снижения концентрации ЦИК.

Оперативное лечение. Тяжёлая анемия, вызванная тепловыми АТ, — спленэктомия.

Лекарственная терапия • Препараты выбора — ГК, например преднизолон по 1–2 мг/кг/сут. При длительном лечении дозу постепенно снижают • Альтернативные препараты — иммунодепрессанты (при неэффективности преднизолона и спленэктомии): азатиоприн по 125 мг/сут до 6 мес • Циклоспорин при неэффективности ГК-терапии в дозе 3–5 мг/кг/сут на фоне мониторинга концентрации препарата в крови до купирования признаков с последующей постепенной отменой. Обычно применяют сочетание циклоспорина и преднизолона.

Осложнения • Шок (выраженная анемия) • Тромбоэмболии • Тромбоцитопеническая пурпура.

Течение и прогноз • Благоприятные при адекватном лечении • Если анемия вторична, прогноз определяется течением основного заболевания • При молниеносном течении летальность достигает 50%.

Профилактика. Следует избегать температурных воздействий, приёма ЛС, индуцирующих гемолиз (см. Этиология).

МКБ-10 • D59.0 Медикаментозная аутоиммунная гемолитическая анемия • D59.1 Другие аутоиммунные гемолитические анемии

Иммунологический тест определения холодовых агглютининов при гемолитических анемиях

Лабораторное исследование, направленное на выявление аутоантител, вызывающих агглютинацию и гемолиз эритроцитов при низких температурах.

Синонимы русские

Холодовые агглютинины, исследование полных холодовых агглютининов.

Синонимы английские

Cold agglutinins blood test,  Cold Autoantibodies, Cold-Reacting Antibodies.

Метод исследования

Реакция агглютинации.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Аутоиммунные гемолитические анемии (АИГА) возникают в результате срыва вследствие ряда причин иммунологической толерантности и выработки антител против собственных эритроцитов. Различают тепловые и холодовые аутоантитела. Тепловые наиболее эффективно связываются с эритроцитарными антигенами при температуре 37 °С, а холодовые – при 4-18 °С. В зависимости от эффекта, который аутоантитела оказывают на эритроциты в пробирке, выделяют гемолизины (разрушают клетки) и агглютинины (вызывают склеивание эритроцитов между собой).

Аутоиммунная гемолитическая анемия с холодовыми агглютининами – относительно редкая форма иммунных гемолитических анемий (по некоторым данным, 20% всех случаев АИГА). Может быть как идиопатической (причина возникновения неизвестна), так и симптоматической. Идиопатический вариант чаще встречается у лиц пожилого и старческого возраста (60-80 лет), в то время как симптоматический может возникать в детском и юношеском возрасте, осложняя течение микоплазменной пневмонии, инфекционного мононуклеоза, легионеллеза, а также системных аутоиммунных заболеваний (системная красная волчанка, ревматоидный артрит). У пожилых людей АИГА с холодовыми агглютининами часто ассоциирована с лимфопролиферативными заболеваниями, такими как хронический лимфолейкоз и макроглобулинемия Вальденстрема.

Холодовые агглютинины — это чаще всего IgM, реже — представлены смесью иммуноглобулинов разных классов. Они связываются с мембраной эритроцитов при низких температурах и присоединяют комплемент — семейство сывороточных белков, которые разрушают меченные антителами клетки. После присоединения комплемента на мембране эритроцита образуется мембраноповреждающий комплекс, формирование которого приводит к образованию большого количества пор в оболочке клетки, ее набуханию и разрушению.

В качестве лабораторного маркера аутоиммунного гемолиза, обусловленного холодовыми агглютининами, целесообразно использовать выявление в сыворотке крови пациента антител, приводящих к агглютинации эритроцитов в процессе инкубации при низких температурах.

Современным методом постановки теста на холодовые агглютинины является реакция агглютинации в геле. В микропробирки, содержащие нейтральный гель, добавляют взвесь донорских эритроцитов. Затем добавляют исследуемую сыворотку и инкубируют при температуре 2-8 °С.

При наличии в исследуемой сыворотке холодовых агглютининов в процессе инкубации при низких температурах они связываются с эритроцитами и вызывают их агглютинацию. Оценка результата теста производится после центрифугирования, в процессе которого происходит разделение агглютинированных и неагглютинированных эритроцитов. Неагглютинированные эритроциты имеют размер, сравнимый с размером частиц геля, и свободно проходят сквозь них под действием центробежной силы, формируя на дне микропробирки компактный осадок красного цвета, а агглютинированные эритроциты ввиду больших размеров задерживаются на поверхности геля или в его толще.

Для чего используется исследование?

  • Для выявления в сыворотке крови пациента антиэритроцитарных антител, вызывающих гемолиз при низких температурах.

Когда назначается исследование?

  • При подозрении на аутоиммунную гемолитическую анемию с холодовыми агглютининами: характерная особенность заболевания – плохая переносимость холода, когда и проявляются основные симптомы.

Что означают результаты?

Референсные значения: не обнаружены.

  • Отрицательный результат — клетки образуют компактный осадок на дне микропробирки — свидетельствует об отсутствии холодовых агглютининов в исследуемой сыворотке.
  • Положительный результат — агглютинированные клетки образуют красный слой на поверхности или в толще геля — свидетельствует о наличии холодовых антител в исследуемой сыворотке.

Что может влиять на результат?

  • В низких титрах холодовые агглютинины могут обнаруживаться и у здоровых людей.

1.2. Этиология и патогенез / КонсультантПлюс

1.2. Этиология и патогенез

Возбудители — спиралевидные подвижные микроорганизмы, относящиеся к роду Leptospirae, семейству Spirochaetalis, размером 7 — 14 мкм на 0,3 — 0,5 мкм. Род лептоспиры разделяют на виды: паразитический (L. interrogans) и сапрофитический (L. biflexa). Известно около 200 серовариантов патогенных лептоспир, объединенных в 25 серологических групп. На территории России выделяют следующие серогруппы лептоспир: Icterohaemorragia, Hebdomadis, Tarassovi, Canicola, Pomona, Grippotyphosa. Лептоспиры относят к анаэробам. Факторы патогенности лептоспир: эндотоксин, экзотоксиноподобные вещества, гемолизины, фибринолизин. Лептоспиры устойчивы во внешней среде, гидрофильны (одним из условий выживания лептоспир является повышенная влажность среды). Оптимальный рост лептоспир наблюдается при температуре среды 28 — 30 °C. Лептоспиры могут сохраняться в открытых водоемах до 1 мес., на пищевых продуктах — до нескольких дней. Лептоспиры чувствительны к нагреванию, высушиванию, действию УФО, к дезинфицирующим средствам. Лептоспиры обладают чувствительностью к пенициллину, стрептомицину, тетрациклинам, макролидам.

Возбудитель внедряется в организм человека через поврежденную кожу, слизистые оболочки. Лимфогенно и гематогенно проникает в печень, селезенку, почки. Эта стадия патогенеза соответствует кратковременной первичной бактериемии. В пораженных тканях в течение 2 — 30 дней происходит размножение лептоспир. Затем лептоспиры вторично попадают в кровь (вторичная бактериемия), что приводит к генерализации инфекции и проявляется лихорадкой, интоксикацией, клиникой миозита, менингита, гепатита, нефроза. В генезе патологических процессов участвуют реакции иммунитета и факторы патогенности возбудителя. В ответ на внедрение лептоспир в организме вырабатываются антитела (на 3 — 4 нед. болезни появляются IgM, затем — IgG). Иммунные комплексы адсорбируются на эндотелии капилляров, вызывают мутное набухание эндотелиальных клеток, их дистрофические и некротические изменения. При распаде лептоспир выделяется эндотоксин и другие патогенные субстанции, вызывающие повреждения эндотелия капилляров различных органов, способствуя развитию кровотечений, кровоизлияний. Поражение печени при лептоспирозе сопровождается нарушением синтеза факторов свертывающей системы, что также способствует формированию геморрагий. Наблюдается тромбоцитопения, тромбоцитопатия. Желтуха при лептоспирозе обусловлена паренхиматозным гепатитом и гемолизом эритроцитов. Морфологически в печени отмечается полнокровие, отек межуточной ткани с инфильтрацией ее лимфогистиоцитами, дистрофия и некроз гепатоцитов, тромбоз желчных капилляров. Патогномоничное проявление лептоспироза — рабдомиолиз (распад мышечных волокон и кровоизлияния), сопровождаемый сильной болью. Отмечаются случаи лептоспироза с поражением легких (пневмонии), глаз (ириты, иридоциклиты). Большинство случаев летальных исходов связано с острой почечной недостаточностью (уремическая кома). Морфологические изменения в почках характеризуются ишемией и полнокровием мозгового слоя, наличием кровоизлияний, стазов, фибриновыми тромбами в клубочках, повреждениями эпителия канальцев. После перенесенного заболевания формируется стойкий, но типоспецифический иммунитет [1, 2, 3].

Открыть полный текст документа

Лабораторная диагностика во время беременности

За период беременности женщина проходит многочисленные лабораторные исследования, в этой статье мы хотим рассказать об основных из них.

Группа крови и резус-фактор (RH)

Этот анализ необходим для определения риска развития резус-конфликта, иммунологического конфликта с совместимостью крови, который может негативно сказаться на течении беременности. Резус-конфликт может стать проблемой только для женщин с отрицательным резус-фактором, в том случае, когда ребенок унаследовал от отца положительный.

Если у женщины первая беременность, это означает, что она еще не сталкивалась с резус-положительной кровью, а значит он не имеет антител, соответственно риск развития у нее резус-конфликта значительно ниже. Не менее важным является контроль уровня групповых антител (гемолизинов) у беременных с I (0) группой крови. При конфликте с АВО-системе может развиться гемолитическая болезнь новорожденного, при которой врачи контролируют уровень антител в динамике с целью раннего выявления и коррекции конфликта. Беременные женщины сдают анализ на наличие резус-антител, чтобы выяснить, не началась ли у женщины сенсибилизация (резус-конфликт). Сразу после родов, если у плода положительный резус-фактор, женщине вводят антирезусный иммуноглобулин, который позволит избежать развития сенсибилизации во время следующей беременности.

Резус-конфликт очень опасное явление для плода. Антитела матери проникают через плаценту и атакуют эритроциты ребенка. При этом в крови малыша появляется большое количество билирубина, который провоцирует развитие гемолитической желтухи.

 

Коагулограмма (свертывание крови)

Коагулограмму необходимо проходить несколько раз за период беременности для того, чтобы врач мог отследить динамику и, в случае возникновения патологического свертывания крови, назначить профилактическую терапию.

Изменение системы гемостаза (свертывания крови) опасна для плода, ведь может задерживать его рост, стимулирукт преждевременное старение плаценты, плацентарную недостаточность, а также очень опасную для жизни беременной и плода патологии — ДВС-синдром.

Сифилис

Несмотря на то, что сифилис не является распространенной болезнью, из-за тяжелых последствий для плода анализ на сифилис необходимо сдавать всем женщинам, независимо от принадлежности к группе риска. Более того, из-за того, что сифилис обнаруживается в крови лишь через 4-6 недель после инфицирования, анализ нужно повторять дважды за период беременности.

Женщина, у которой был обнаружено сифилис, обязательно должна пройти лечение. Если не лечить это заболевание, то вероятность заражения плода очень высока, особенно на ранних сроках беременности. В 40% случаев нелеченный первичный сифилис приводит к выкидышам, рождению мертвого ребенка или скорой смерти после рождения. Сифилис также повышает риск преждевременных родов и задержки развития плода.

Хламидии

Во избежание распространения хламидий, все беременные женщины сдают анализ на хламидиоз. Это распространенная инфекция, передающаяся половым путем. Если у беременной женщины были обнаружены хламидии, ей обязательно нужно пройти лечение, поскольку это заболевание может привести к таким осложнениям, как: преждевременное прерывание беременности, задержки родов, несвоевременное отхождение околоплодных вод, большая кровопотеря у матери в процессе родов, инфицирование ребенка во время прохождений через родовые пути.

Определение уровня глюкозы

Анализ сыворотки крови на глюкозу и тест на толерантность к глюкозе беременные женщины сдают для выявления сахарного диабета, который мог не проявляться до беременности, и гестационного диабета, который часто развивается примерно на 20-й неделе беременности и проходит после родов. Это связано с тем, что во время беременности плацента вырабатывает гормоны, необходимые для развития плода. Если же эти гормоны блокируют действие материального инсулина, развивается гестационный диабет. При этом возникает состояние, которое врачи называют инсулинорезистентностью (нечувствительность клеток к инсулину), и уровень сахара в крови повышается.

Стафилококк

Разновидностей стафилококка множество, однако особенно опасными для матери и ребенка есть только три из них. Лидером опасных последствий, которые могут возникнуть в случае заражения, медики называют именно «золотистый» стафилококк. Для самой женщины этот вид стафилококка может провоцировать развитие пневмоний, менингита, перитонита, тяжелых гнойных процессов. Что касается плода, то, к сожалению, золотистый стафилококк способен нести значительную опасность — прежде всего в виде острого инфицирования всех околоплодных оболочек и самого малыша.

 

 

Исследование антител к антигенам групп крови

АНМО «Ставропольский краевой клинический консультативно-диагностический центр»:

355017, г. Ставрополь, ул. Ленина 304

(8652) 951-951, (8652) 35-61-49 (факс)

(8652) 951-951, (8652) 31-51-51 (справочная служба)

Посмотреть подробнее

Обособленное подразделение «Диагностический центр на Западном обходе»:

355029 г. Ставрополь, ул. Западный обход, 64

(8652) 951-951, (8652) 31-51-51 (контактный телефон)

(8652) 31-68-89 (факс)

Посмотреть подробнее

Клиника семейного врача:

355017 г. Ставрополь, пр. К. Маркса, 110 (за ЦУМом)

(8652) 951-951, (8652) 31-51-51 (контактный телефон)

(8652) 31-50-60 (регистратура)

Посмотреть подробнее

Невинномысский филиал:

357107, г. Невинномысск, ул. Низяева 1

(86554) 95-777, 8-962-400-57-10 (регистратура)

Посмотреть подробнее

Обособленное структурное подразделение в г. Черкесске :

369000, г. Черкесск, ул. Умара Алиева 31

8(8782) 26-48-02, +7-988-700-81-06 (контактные телефоны)

Посмотреть подробнее

Обособленное структурное подразделение в г. Элисте :

358000, г. Элиста, ул. Республиканская, 47

8(989) 735-42-07 (контактные телефоны)

Посмотреть подробнее

ЗАО «Краевой клинический диагностический центр»:

355017 г. Ставрополь, ул. Ленина 304

(8652) 951-951, (8652) 35-61-49 (факс)

(8652) 951-951, (8652) 31-51-51 (справочная служба)

Посмотреть подробнее

Обособленное структурное подразделение на ул. Савченко, 38 корп. 9:

355021, г. Ставрополь, ул. Савченко, 38, корп. 9

8 (8652) 316-847 (контактный телефон)

Посмотреть подробнее

Обособленное структурное подразделение на ул. Чехова, 77 :

355000, г. Ставрополь, ул. Чехова, 77

8(8652) 951-943 (контактный телефон)

Посмотреть подробнее

Обособленное структурное подразделение в г. Михайловске:

358000, г. Михайловск, ул. Ленина, 201 (в новом жилом районе «Акварель»).

8(988) 099-15-55 (контактный телефон)

Посмотреть подробнее

Гемолизин — Справочник химика 21

    Третий тип (70%) —эритроциты гемолизируют только в присутствии лецитина и прямого гемолизина (птицы, млекопитающие), для них характерна разная резистентность у представителей не только одного класса, но и одного семейства и даже вида.[c.93]

    Механизм гемолитического действия ПГФ пока не ясен. Д. И. Сахибов, В. М. Сорокин, Л. Я. Юкельсон (1972) высказывают свои предположения и приводят мнения ряда авторов о влиянии прямого гемолизина на мембраны эритроцитов. Прямой гемолизин, имеющий щелочные свойства, несет положительный заряд. При помощи электростатистических сил он связывается с кислыми группировками эритроцитов (изоэлектрическая точка эритроцитов находится в кислой среде). Б результате этих кислотно-щелочных реакций изменяется структура эритроцитарной мембраны. [c.94]


    Гемолитическая система состоит из смешанных в равных объемах гемолитической сыворотки (взятой в тройном титре) и 3%-й взвеси эритроцитов барана. Для сенсибилизации эритроцитов гемолизинами смесь выдерживают в термостате при 37 °С в течение 30 мин. [c.72]

    Основные компоненты яда и их характеристика. Свежедобытый яд белого цвета, кислой реакции, хорошо растворим в воде, водном растворе глицерина разрушается спиртом, эфиром, крепкими щелочами. При нагревании до 80 °С в течение 15-20 мин инактивируется. В яде идентифицированы протео-литические ферменты, гемолизины, серотонин, гистамин, гиалуронидаза. [c.737]

    Гемолизины — вещества различной природы, вызывающие гемолиз. [c.851]

    Холестерин в некоторых отношениях является антагонистом лецитина. Так, резистентность эритроцитов к гемолизинам — веществам, вызывающим растворение (гемолиз) красных кровяных шариков, содержащимся, например, в змеином яде, резко изменяется при добавлении коллоидных растворов лецитина или холестерина. Лецитин и лизолецитин способствуют гемолизу эритроцитов холестерин, напротив, повышает устойчивость эритроцитов к гемолизинам. [c.107]

    Подготовка исследуемой на антитела сыворотки для разрушения гемолизинов сыворотку в объеме 1—0,5 мл инактивируют при -Ьбе С в течение 30 мин в аппарате для инактивации сывороток или водяной бане, затем разводят физиологическим раствором 1 2 и 3 раза адсорбируют осадком отмытых эритроцитов барана. Для этого на 1 мл разведенной сыворотки добавляют 1 каплю осадка, перемешивают и инкубируют в течение 20 мин при комнатной температуре. После инкубации эритроциты осаждают центрифугированием при 1500 об/мин в течение 5—7 мин, сыворотку переносят в чистую пробирку и снова добавляют 1 каплю осадка эритроцитов. [c.218]

    Прямой гемолизин обладает слабой гемолитической активностью. Его роль заключается в подготовке отмытых эритроцитов к действию фосфолипазы А. При взаимодействии ПГФ и эритроцитов изменяется простран-ствеЕ1ная ориентация фосфолипидов мембраны и они становятся доступными действию фермента. Гемолитическая активность цельных ядов обусловлена синергичным действием обоих факторов. Гемолиз постоянно поддерживается накапливающимися продуктами реакции — лизофосфатидами (Д. И. Сахибов, В. М. Сорокин, Л, Я. Юкельсон, 1972 ondrea et al., 1965, и др.). [c.94]

    Какие же компоненты яда способствуют появлению внутрисосудистого гемолиза Согласно представлениям ряда авторов (А. С. Мелик-Карамян, 1947 М. И. Султанов, 1958 С. В. Пигулевский, 1966), внутрисосудистый гемолиз вызывает фосфолипаза А и гемолизины яда. Если это так, тогда неясно, почему яд кобры, содержащий, как было указано выще, высокоактивный прямой гемолизин и фосфолипазу А (Д. Н. Сахибов,. Л. Я- Юкельсон, 1966), сильнейшее гемолитическое средство in vitro Я. Давлятов, 1967), не способствует появлению гемолиза in vivo. [c.95]

    Отношение к окраске по Граму и углеводам такое же, как и у других возбудителей газовой гангрены. Однако, в противоположность последним, этот микроорганизм разжижает свернутую сыворотку молоко после свертывания пептонизирует. Вас. histolyti us не образует гемолизина и, повидимому, эктотоксина. По данным Вейнберга и Сегена, токсическое начало связано с микробной клеткой. [c.462]


    Кроме того, работами этих же авторов было показано, что условия проявления гемолитической и ихтиотоксической активностей радикально отличны токсичность для рыб проявлялась лишь при уровне pH выше 7,0, в то время как гемолизин мог быть продемонстрирован при pH 5,0 и отсутствовал при щелочном значении.[c.92]

    Таким образом, сравнительное исследование внутриклеточной токсичности культур, выросших на свету или в темноте, показало, что биосинтез гемолизинов и ихтиотоксинов у Prymnesium [c.100]

    Первая попытка выделить и очистить гемолизины и ихтио-токсин из растворов (природной воды или культуральной жидкости) была сделана в 1958 г. Яривом (Yariv, 1958). Для этих целей он использовал абсорбцию примнезина на колонках с Mg (ОН) 2, в результате чего получил сухой стабильный порошок [c.107]

    Дальнейшую очистку препарата авторы осуществляли, используя хроматографию на бумаге и колонках с целлюлозой. При хроматографировании применялись различные системы растворителей, в каждой из которых были определены величины Rf. Токсичность элюатов устанавливали с помощью биоизмерений. Ниже приводятся данные о подвижности различных гемолизинов на хроматографической бумаге. (Время хроматографирования 15 час., температура комнатная).[c.109]

    Кроме отработки способов выделения и очистки препарата гемолизина, Улитзуром (Ulitzur, 1973) было обращено большое внимание на вопросы получения активной биомассы самих водорослей как продуцентов токсина, т. е. подобраны наилучшие для накопления гемолизина в клетках — питательная среда, а также условия освещенности, pH и температура (см. стр. 97—101). [c.110]

    Активность токсичности гемолизина определялась колориметрически (по ollier, 1952) со светофильтром 54. Величины оптической плотности составляли соответственно 340 и 100 для О и 100% гемолизиса. [c.113]


Анализ крови на иммунные антитела к эритроцитам по системе Резус

Общая характеристика

Резус-антитела в норме не содержатся в сыворотке человека. Они появляются в крови Rh-отрицательных людей вследствие иммунизации (переливание крови, несовместимой по Rh-фактору, беременность Rh(-) женщины Rh(+) ребенком).
Определение Rh-антител необходимо для предотвращения иммунного конфликта вследствие переливания Rh- несовместимой крови, а также для диагностики Rh-конфликта беременных женщин и предотвращения гемолитической болезни плода и новорожденного.

Показания для назначения

1. Беременность (профилактика резус-конфликта).
2. Наблюдение за беременными с отрицательным резус-фактором.
3. Невынашивание беременности.
4. Гемолитическая болезнь новорождённых.
5. Подготовка к гемотрансфузии.

Маркер

Маркер оценки сенсибилизации организма (антитела к эритроцитарным антигенам, в первую очередь резус-фактору).

Клиническая значимость

Мониторинг уровня антител во время беременности, чтобы помочь оценить риск гемолитической болезни новорожденных


Состав показателей:

Имунные полные антирезусные антитела
Метод: Гемагглютинация в геле
Диапазон измерений: 0-0

Референтные значения:

Возраст

Комментарии

Имунные неполные антирезусные антитела
Метод: Гемагглютинация в геле
Диапазон измерений: 0-0

Референтные значения:

Возраст

Комментарии

Выполнение возможно на биоматериалах:

Биологический материал

Условия доставки

Контейнер

Объем

цельная кровь/ЭДТА (ИммГем)

Условия доставки:

24 час. при температуре от 2 до 8 градусов Цельсия

Контейнер:

Система с ЕДТА без разделительного геля

Объем:

2 Миллилитров

Правила подготовки пациента

Стандартные условия подготовки (если иное не определено врачом): За 4 часа Выдержать голодание, исключить жирную пищу. Можно пить воду. За 1 час не курить. За 15 минут исключить физические нагрузки и стрессы.

Вы можете добавить данное исследование в корзину на этой странице

Интерференция:

  • Не обнаружена.
  • Не обнаружена.

Интерпретация:

  • Положительный результат: наличие в исследуемой сыворотке антирезусных антител к эритроцитам.
  • Отрицательный результат: отсутствие в исследуемой сыворотке антирезусных антител к эритроцитам.

Гемолизин — обзор | ScienceDirect Topics

Уничтожение лейкоцитов

S. aureus убивает эукариотические клетки с помощью секретируемых гемолизинов, лейкоцидинов и фенолорастворимых модулей (PSM). 11,143,144 Существует четыре типа гемолизинов, обозначаемых как α-гемолизин (Hla), β-гемолизин (Hlb), δ-гемолизин (Hld) и γ-гемолизин (Hlg).

Hla и Hld секретируются в нетоксичных растворимых формах и мультимеризуются на эукариотических мембранах с образованием литических пор. α-гемолизин (или α-токсин) участвует в самых разнообразных заболеваниях. 145,146 Он мультимеризуется в виде гептамеров на мембранах, содержащих фосфохолин, этот процесс зависит от присутствия трансмембранного белка клетки-хозяина ADAM10, который воссоединяет свойства металлопротеазы и дезинтигрина (интегрин-связывающего). 147 Кроме того, α-гемолизин взаимодействует с белками соединения адгезивов, вызывая уничтожение клеток, в первую очередь с белком 7, содержащим гомологичный плекстрину домен (PLEKHA7). Действительно, PLEKHA7-дефицитные клетки могут легко восстанавливаться после цитотоксичности Hla. 148 Следовательно, полиморфизм этой детерминанты может влиять на индивидуальную восприимчивость к инфекции.

Hld действует аналогично и относится к тому же семейству, что и PSM, которые были описаны совсем недавно. 144 Существует четыре типа PSMα (PSMα 1–4 ), состоящих примерно из 20 аминокислот, и два типа PSMβ (PSMβ 1–2 ), состоящих примерно из 40 аминокислот, гены которых расположены на стафилококковой хромосоме. Hld расположен выше регуляторной РНК agr RNAIII (см. раздел «Регулирование»).Структура Hld и PSM состоит из амфипатических α-спиралей, которые придают несколько свойств помимо повреждения мембраны клеток, включая оборот биопленки и воспалительные реакции. 149

Hlb отличается тем, что это сфингомиелиназа, которая повреждает мембраны посредством ферментативного изменения содержания в них липидов.

Hlg также отличается тем, что состоит из двух типов белков, называемых S и F, для медленного и быстрого элюирования при хроматографии. Он быстро лизирует лейкоциты в дополнение к другим клеткам и иногда называется лейкоцидином.Он кодируется двумя разными оперонами, один из которых кодирует уникальный HlgA (белок S), а другой кодирует один белок S (HlgC) и один белок F (HlgB). Белки S и F должны собраться, чтобы сформировать мембрано-перфорирующие комплексы. Поэтому этот класс гемолизинов также называют синергименотропными токсинами. Активный α-гемолизин существует в двух биоактивных формах: HlgA-HlgB и HlgA-HlgC.

Пантон-валентиновый лейкоцидин

PVL является своеобразным гомологом Hlg, о котором впервые сообщили в 1932 г. Пантон и Валентайн. 150 , 151 PVL кодируется двумя генами, lukS и lukF, , которые могут собираться либо между собой, либо с компонентами Hlg, образуя комплексы-химеры. Как и другие гемолизины, PVL регулируется agr (см. табл. 194.1). В отличие от других гемолизинов, PVL кодируется мобильными фагами, включая ϕSLT, ϕSa2958, ϕSa2MW, ϕPVL, ϕ108PVL, ϕ7247PVL, ϕSa119, ϕTCH60 и ϕSa2USA, которые могут передавать PVL другим штаммам. 151 , 152 Кроме того, в отличие от других гемолизинов, уровень распространенности PVL обычно низок (≤2%) при MSSA и связанном с оказанием медицинской помощи MRSA (HCA-MRSA), 150 , тогда как он присутствует в почти 100% изолятов внебольничного MRSA (CA-MRSA) кластера USA300, особенно распространенного в Северной Америке. 151 , 153

Гемолизин Определение и примеры — Биологический онлайн-словарье.

лизис эритроцитов, приводящий к высвобождению гемоглобина
Дополнение
Гемолизин относится к любому агенту или веществу, которое способствует гемолизу. Это может быть экзотоксиновый белок, продуцируемый бактериями. Это также может быть антитело, результирующее иммунное действие которого включает гемолиз. Другими возможными гемолизинами являются другие иммунологические факторы, токсины и ферменты. Гемолизин способен вызывать лизис эритроцитов, что приводит к высвобождению гемоглобина.
Гемолизин, продуцируемый бактериями (например,г. Staphyloccus и Streptococcus spp.) представлен стрептолизином. Стрептококки, продуцирующие экзотоксичные стрептолизины, могут быть сгруппированы как альфа – или бета –. Альфа-гемолитические стрептококки продуцируют гемолизины, которые могут вызывать неполный гемолиз, тогда как бета-тип вызывает полный гемолиз эритроцитов.
Гемолиз эритроцитов также может быть опосредован антителами. Описаны два возможных механизма: (1) внутрисосудистое разрушение эритроцитов путем лизиса комплемента и (2) внесосудистое разрушение эритроцитов иммунными клетками, которые распознают антитело и комплемент, связанные с эритроцитом. 1
Аутоиммунная гемолитическая анемия является примером редкого случая, когда действие антител направлено на собственные эритроциты. Таким образом, состояние характеризуется анемией (при недостаточном количестве эритроцитов для переноса кислорода в кровотоке).
Слово Происхождение: Греческий Haǐma (Кровь) + Лизин
Вариант (ы): 9

Синоним (S):

Эритроцитолисин
  • Эритроцитолисин
  • См. Также:

    Ссылка(и):

    1 Флегель, В.А. (2015). Патогенез и механизмы гемолиза, опосредованного антителами. Переливание, 55(0), S47–S58. http://doi.org/10.1111/trf.13147

    Последнее обновление: 1 марта 2021 г.

    Бактериальный токсин альфа-гемолизин

    Бактериальный токсин альфа-гемолизин

    test3

    Альфа-гемолизин: самособирающаяся трансмембранная пора

    Альфа-гемолизин, самособирающийся бактериальный токсин.

    В борьбе за ресурсы бактерия Staphylococcus aureus секретирует мономеры альфа-гемолизина, которые связываются с наружной мембраной восприимчивых клеток.При связывании, мономеры олигомеризуются, образуя заполненный водой трансмембранный канал, облегчает неконтролируемое проникновение воды, ионов и мелких органических молекулы. Быстрый выброс жизненно важных молекул, таких как АТФ, диссипация мембранного потенциала и ионных градиентов, необратимое осмотическое набухание, приводящее к разрыву клеточной стенки (лизис), может вызвать гибель клетки-хозяина. Это порообразующее свойство был идентифицирован как основной механизм, с помощью которого белковые токсины могут повреждают клетки. Название альфа-гемолизин происходит от раннего наблюдения, установившие литическую активность токсина на красную кровь клетки. В настоящее время ожидается, что при применении в достаточных дозах альфа-гемолизин может проникать через любую клеточную мембрану млекопитающих. Хотя у большинства людей секреция альфа-гемолизина не представляет серьезной опасности для здоровья, тяжелая стафилококковая инфекция может вызвать гемостаз нарушения, тромбоцитопения и легочная поражения (). Кристаллографическая структура () собранных альфа-гемолизин выявил гептаметрическую организацию канала. Белок имеет грибовидную форму с бета-стволом 50А. выступая из кэп-домена через липидный бислой в интерьер клетки.Шляпка белка скрывает большое преддверие соединен с внешней стороной клетки через большое отверстие в верхней части крышка. Самая узкая (1,4~нм в диаметре) часть канала расположен в основании стебля, где соединяется пора бета-бочонка в вестибюль. Семь боковых каналов ведут из вестибюля в снаружи клетки, выходя вблизи поверхности мембраны. Фигура иллюстрирует 268000-атомную модель альфа-гемолизина в его нативном виде. среда — липидный бислой.

    • Щелкните здесь для фильма (mpeg, [произошла ошибка при обработке этой директивы]) показывающий альфа-гемолизин в сборе с двойным липидным слоем.

    Биотехнологические применения альфа-гемолизина

    Некоторые свойства альфа-гемолизина делают его мембранный канал подходит для различных биотехнологических применений: собранный альфа-гемолизин стабилен в широком диапазоне pH и температуре его трансмембранная пора остается открытой при нормальных условиях, альфа-гемолизин может связываться с различными биологическими или синтетическими липидами. бислоев, связывание происходит самопроизвольно и не требует особые ионные условия.

    Системы доставки.Трансмембранная пора альфа-гемолизина может способствовать контролируемой доставке ионы и небольшие органические соединения, такие как сахара или нуклеотиды через клеточную плазматическую мембрану или через стенки синтетических липидов везикулы. Использование генно-инженерных альфа-гемолизинов, сборка и проводимость которых могут быть запускаться или включаться или выключаться внешними биохимическими или физическими стимулов, включая свет, липидный бислой можно сделать проницаемым для небольшие растворы по желанию (, ).

    Стохастические датчики.Подвешенный в липидном бислое альфа-гемолизиновый канал становится стохастическим. датчик, когда молекулярный адаптер помещается внутрь его генетически реконструированный ствол, влияющий на трансмембранный ионный ток индуцируется приложенным напряжением смещения. Обратимое связывание аналитов с молекулярный адаптер кратковременно уменьшает ионный ток. То величина текущего снижения указывает на тип анализируемого вещества, а частота текущих интервалов сокращения отражает концентрация аналита. Было продемонстрировано, что такие стохастические датчики одновременно измерять с помощью одного чувствительного элемента концентрации нескольких органических аналитов () и концентрации растворов двух или более ионов двухвалентных металлов ().Поры альфа-гемолизина нанометрового размера использовались в стохастическом датчике другого типа для одновременного определения концентраций двух разных белки ().

    секвенирование ДНК. То трансмембранная пора альфа-гемолизина может проводить не только малые растворенные вещества, но и довольно большие (десятки кДа) линейные макромолекулы. Таким образом, за счет трансмембранного потенциала ДНК или РНК нити могут транслоцироваться через поры альфа-гемолизина, производя блокады ионного тока, отражающие химическую структуру отдельные пряди ().Статистический анализ многих таких токи блокировки позволили исследователям различать различные последовательности РНК () и ДНК () гомополимеры, а также сегменты пуриновых и пиримидиновых нуклеотидов в одной молекуле РНК (). Разрешение по одному нуклеотиду было продемонстрировано для ДНК шпильки (, ), повышение перспективы создания нанопорового сенсора, способного считывать последовательность нуклеотидов непосредственно из цепи ДНК или РНК.


  • Нажмите здесь, чтобы посмотреть фильм (мпег, 3.9М) демонстрируя электрофоретически управляемую транслокацию 58-нуклеотида Нить ДНК через трансмембранную пору альфа-гемолизина.
  • Визуализация альфа-гемолизина с помощью молекулярной динамики

    Основные моменты нашей работы

    размер изображения: 112,7 КБ

    В биологической клетке мембранные каналы действуют как миниатюрные клапаны. регулируя поток ионов и других растворенных веществ между внутриклеточными компартменты и через границу клетки. Собран в комплексе схемы, они генерируют, передают и усиливают сигналы, организуя функция клетки.Чтобы исследовать, как работают мембранные каналы, жизнь Ученые с помощью чрезвычайно тонкой пипетки выделяют крошечный участок клеточной мембраны и, в так называемых измерениях пэтч-клэмп, определяют электрические токи в ответ на приложенные электрические потенциалы. Значительное увеличение вычислительной мощности и ее эффективное использование от NAMD позволяет сегодня воспроизвести такие исследования вычислительным путем, рассчитав проницаемость мембранного канала к ионам и воде непосредственно из его атомарного структура. В чем заключается один из крупнейших молекулярно-динамических моделирование на сегодняшний день, описанное в недавнем бумаге, а также на нашем сайте (здесь) один экземпляр мембраны канал альфа-гемолизин, погруженный в липидную мембрану и воду, был подвергается внешнему электрическому полю, которое приводит в движение ионы и воду. через канал.Расчеты дали также изображение электростатический потенциал на канале (см. рисунок).

  • Нажмите здесь, чтобы посмотреть фильм (mpeg, 2,9M), показывающий индуцированный смещением 240 мВ токи ионов К + и Cl через трансмембранная пора альфа-гемолизина.
  • Публикации

    База данных публикаций Визуализация альфа-гемолизина с помощью молекулярной динамики: ионная проводимость, осмотическая проницаемость и карта электростатического потенциала. Алексей Аксиментьев и Клаус Шультен. Биофизический журнал , 88:3745-3761, 2005. База данных публикаций. Дискриминация ориентации одноцепочечной ДНК внутри мембранного канала α-гемолизина. Джером Мате, Алексей Аксиментьев, Дэвид Р. Нельсон, Клаус Шультен и Амит Меллер. Труды Национальной академии наук, США , 102:12377-12382, 2005.

    Следователи

    Связанные проекты TCB Group

    Страница создана и поддерживается Алексеем Аксиментьевым.

    а-гемолизин лиофилизированный порошок, белок 60 Лоури, основное = 10 000 ЕД/мг белка 94716-94-6

    общее описание

    золотистый .Он секретируется в виде водорастворимого мономера и представляет собой небольшой белок β-ствола.

    Заявка

    α-Гемолизин использовали в исследовании для проверки откачивающей помпы и активности гемолизина Escherichia coli молочного происхождения. Его также использовали для проверки его адаптации к хлориду бензалкония и влияния ципрофлоксацина на образование биопленки.

    α-Гемолизин из Staphylococcus aureus был использован:
    • в качестве компонента раствора электролита для тестирования образования пор в липидном бислое с использованием электрофизиологических измерений
    • для проверки его эффектов подавления остеогенеза в стромальных клетках костного мозга (СККМ)
    • при получении полимера с молекулярным отпечатком α-гемолизина (MIP) для Biacore и поверхностного плазмонного резонанса

    Biochem/physiol Actions

    α-гемолизин является селективным гемолитиком, мономерная форма связывается с мембраной, и для привязка. При связывании с биологическими мембранами и/или искусственными мембранами происходит самоолигомеризация, в результате чего образуются кольцевые структуры (гексамерные агрегаты), которые, как полагают, представляют собой трансмембранные поры, проницаемые для ионов и небольших метаболитов. Он отдает предпочтение кроличьим эритроцитам. α-гемолизин стимулирует клеточные фосфолипазы и индуцирует приток Ca 2+  . Это приводит к разрушению мембраны эндотелиального барьера, утечке компонентов цитоплазмы и осмотическому лизису клеток.α-гемолизин участвует в патогенезе сепсиса.

    Упаковка

    Размер упаковки в зависимости от содержания белка

    Определение единицы измерения

    Одна гемолитическая единица вызывает 50% лизис 1% суспензии эритроцитов кролика в фосфатно-солевом буфере, рН 7,0, содержащей 1% бычьего сывороточного альбумина после 30 мин при 37 °C с последующим охлаждением в течение 30 мин при 4 °C.

    Продуцирование гемолизина BL изолятами группы Bacillus cereus молочного происхождения связано с полногеномной филогенетической кладой | BMC Genomics

    Идентификация нескольких новых типов аллелей и последовательностей MLST отражает разнообразие связанных с молочными продуктами

    B. изоляты группы cereus

    Секвенирование полного генома было выполнено для 22 различных изолятов, связанных с молочными продуктами (таблица 1), которые были идентифицированы как члены группы B. cereus на основании данных о последовательности rpoB . Медиана полногеномной последовательности (WGS) для 22 изолятов была 57-кратной (в диапазоне от 33 до 78 раз), среднее число контигов> 1 т.п.н. составляло 128 (в диапазоне от 63 до 846; только одна последовательность, FSL W8 -0767 был на более высоком уровне), а средний размер чернового генома составлял 5.75 Мбит/с.

    Таблица 1 Характеристики и инвентарные номера последовательностей для групповых изолятов, связанных с молочными продуктами B. cereus , секвенированных в этом исследовании Данные

    WGS первоначально использовались для извлечения данных о последовательностях семи генов, используемых в схеме типирования B. cereus PubMLST [35]. Данные MLST позволили дифференцировать 22 изолята в 21 другой тип последовательности MLST (ST), что обеспечило повышенную дискриминационную способность по сравнению с типированием последовательности rpoB , которое идентифицировало 16 различных аллельных типов rpoB (AT).Одиннадцать из этих типов MLST представляли собой новые ST в базе данных PubMLST (таблица 1) [35]. Два из них представляли собой новую комбинацию существующих АТ, а девять из них несли от одного до четырех новых аллельных типов, которые были депонированы в базе данных PubMLST. Эти данные показывают, что отобранные изоляты представляют значительное разнообразие штаммов группы B. cereus , которое до сих пор не наблюдалось среди изолятов, характеризующихся MLST или WGS. Эти данные также демонстрируют важность изучения популяций из разных источников при характеристике геномного разнообразия различных групп бактерий.Эти первоначальные анализы дополнительно подтверждают наше исследование геномного разнообразия среди изолятов группы B. cereus , ассоциированных с молочными продуктами, особенно с учетом того, что предыдущие исследования были сосредоточены на клинических источниках и источниках пищи, наиболее часто связанных со вспышками болезней человека (например, рис, овощи) (например, , [36, 37]).

    Филогения на основе WGS выявляет клады, соответствующие кластеризации изолятов

    rpoB и MLST Б.изоляты группы cereus использовались для построения дерева kSNP основного генома (рис. 1), которое было основано на 2362 SNP основного генома. Полученную филогению сравнивали с кластеризацией 22 изолятов, связанных с молочными продуктами, которая наблюдалась в отдельных филогениях, построенных с использованием данных о последовательностях rpoB или 7 генов MLST. WGS выявил девять групповых клад B. cereus . Эти клады были названы в соответствии с предложенными ранее филогенетическими группами на основе последовательностей panC [33].Там, где филогенетические группы panC могли быть разделены на разные клады WGS, это было прояснено с помощью алфавитного субобозначения (например, panC группа III была разделена на клады WGS III-a, III-b и III-c). Семь кладов WGS (т. е. клады II-VI) включали от двух до семи связанных с молочными продуктами изолятов, секвенированных здесь. В то время как 22 изолята, связанных с молочными продуктами, также сгруппированы в семь клад в дереве MLST, эти изоляты представляли только 6 филогенетических клад в дереве rpoB .В частности, одна из клад в дереве rpoB была разделена на две клады в дереве MLST, включая одну кладу с изолятами FSL M8-0117 и FSL K6-0067 и одну с FSL K6-0069 и FSL W8-0169 (рис. 2). Кластеризация связанных с молочными продуктами изолятов в деревьях rpoB и WGS была очень похожей, но не абсолютно конгруэнтной, поскольку дерево rpoB не разрешало клады II и III-b (рис. 2). Филогения WGS соответствовала филогении MLST и семи филогенетическим группам, определенным на основе сходства последовательностей panC (см.1), которые были предложены Guinebretière et al. [33, 34]. В целом, эти данные свидетельствуют о том, что характеристика rpoB и panC на основе одного локуса позволяет классифицировать, которая, как ожидается, будет в значительной степени соответствовать кладам WGS.

    Рис. 1

    Филогенез основного генома 69 изолятов группы B. cereus . Дерево максимальной вероятности было построено с использованием SNP основного генома, идентифицированных с помощью kSNP, для 22 изолятов, связанных с молочными продуктами, и 47 эталонных изолятов.Филогения была выведена с использованием RaxML в рамках общей обратимой во времени модели с гамма-распределенными сайтами замен и 1000 бутстреп-повторов. Бар представляет 0,2 замены на сайт. WGS выявил девять филогенетических клад группы B. cereus . Эти клады были названы в соответствии с ранее предложенными филогенетическими группами на основе типов последовательностей panC [33]. Там, где филогенетических групп panC можно было разделить на разные клады WGS, это было прояснено с помощью алфавитного подобозначения (например,g., panC группа III была разделена на WGS клады III-a, III-b и III-c). Изоляты, выделенные красным цветом, несли генов hblACD и продуцировали гемолизин BL, изоляты, выделенные оранжевым цветом, несли генов hblACD , но не продуцировали гемолизин BL, а изоляты, выделенные синим цветом, не несли генов hblACD и не продуцировали гемолизин BL. Изоляты, связанные с молочными продуктами, выделены жирным шрифтом

    . Рис. 2

    Филогенетическое дерево максимальной вероятности, построенное на основе ( a ) rpoB и ( b ) 7 MLST локусов.Дерево максимального правдоподобия, построенное в RaxML в соответствии с общей обратимой во времени моделью с гамма-распределенными и инвариантными сайтами замен и 1000 бутстрап-повторов на основе последовательностей ( a ) rpoB и ( b ) 7 локусов MLST для 22 связанных с молочными продуктами изолирует. Бар представляет ( a ) 0,02 и ( b ) 0,0080 замен на сайт. На деревьях

    показаны только значения начальной загрузки ≥ 60. Данные геномной последовательности

    подтверждают, что

    B.cereus включает как монофилетические виды, так и определяемые в настоящее время виды, не соответствующие филогении

    Филогения, построенная на основе WGS, включает данные полногеномной последовательности (WGS) для 47 эталонных геномов изолятов группы B. cereus , которые были ранее секвенированы и идентифицированы на уровне видов другими (например, 90 130 B. cereus, B. anthracis, B. Cytotoxicus, B. thuringiensis, B. weihenstephanensis, B. mycoides, B. pseudomycoides, B.тойоненсис ). Метаданные для этих эталонных изолятов доступны в дополнительном файле 1: таблица S1. Среди девяти ветвей, определенных здесь, все, кроме клады II (представляющей предполагаемый новый вид), включали по крайней мере один эталонный штамм. Три клады WGS (V, VI и VII) включали эталонные штаммы только одного вида, в том числе B. toyonensis (клада V), B. weihenstephanensis (клада VI) и B. Cytotoxicus (клада VII). ). Хотя для каждого 90 130 штаммов B.toyonensis и B. Cytotoxicus, оба B. weihenstephanensis проанализированные эталонные геномы сгруппированы в кладу VI. Клады V и VI также включали изоляты, связанные с молочными продуктами. Все три из этих кладов поддерживаются значениями начальной загрузки 100 %. Эти данные позволяют предположить, что B. toyonensis , B. weihenstephanensis и B.cytotoxicus представляют собой монофилетические виды. В соответствии с нашими выводами, B.cytotoxicus ранее был отнесен к отдельной филогенетической группе [33].

    Клада I включала три генома, ранее идентифицированные как B. mycoides , а также геном штамма типа B. pseudomycoides . Ранее было показано, что изоляты B. mycoides и B. pseudomycoides (идентифицированные на основе морфологии ризоидных колоний) кластеризуются в две клады MLST — одна включает штамм типа B. pseudomycoides , а другая включает B. weihenstephanensis и B. mycoides типа [38].Кластеризация ранее идентифицированных (эталонных) геномов B. mycoides с геномом штамма типа B. pseudomycoides в нашем исследовании предполагает, что эти изолятов B. mycoides были первоначально неправильно классифицированы и должны быть повторно классифицированы как B. pseudomycoides . Морфология ризоидных колоний типична как для B. mycoides , так и для B. pseudomycoides и, следовательно, не является подходящим отличительным признаком. Классификация, основанная на анализе последовательности panC , более надежна, так как B.pseudomycoides кластера в panC группы I и B. mycoides в panC группы VI [33].

    Каждая из оставшихся четырех клад (III-a, III-b, III-c и IV) включала референсные геномы B. cereus и B. thuringiensis . В дополнение к B. cereus и B. thuringiensis клада III-a также включала все 5 эталонных геномов B. anthracis из нашего набора изолятов. Эти результаты согласуются с исследованиями MLST, которые также показали (i), что B.cereus и B. thuringiensis кластеризуются вместе (например, [9]) и (ii) что B. anthracis изолирует кластер с B. cereus (например, [39]). В целом, наши данные подтвердили полифилетическую природу видов B. cereus и B. thuringiensis , продемонстрировав их кластеризацию в несколько «многовидовых» клад, подобно тому, о чем сообщалось ранее на основе анализа WGS [11–14]. ]. Это показывает, что филогения WGS не поддерживает текущую таксономическую классификацию B.cereus, B. thuringiensis и B. anthracis , и предполагает, что филогенетическая кластеризация на основе SNP даже на уровне ядра генома не позволяет идентифицировать эти виды так, как они определены сейчас. Подобно нашим выводам, предыдущие исследования MLST показали, что кластеризация изолятов группы B. cereus не дает клад, которые согласуются с обозначением вида [9, 38, 39]. Таким образом, появляется все больше и больше последовательных доказательств, подтверждающих необходимость повторного выравнивания B.cereus групповой таксономии, чтобы соответствовать филогении WGS. Полученные здесь данные могут стать основой для будущей разработки анализов на основе SNP, которые позволят быстро идентифицировать основные клады и подтипы группы B. cereus .

    Гены инсектицидного кристаллического белка не были обнаружены во всех изолятах, ранее идентифицированных как

    B. thuringiensis , и были обнаружены в изолятах, представляющих другие виды генов (Дополнительный файл 2: Таблица S2 и Дополнительный файл 3: Таблица S3) в полных геномных последовательностях 69 B.cereus группируют геномы с использованием белка BLAST. Наличие 8 из этих 36 генов вирулентности было подтверждено путем проведения ПЦР на 28 изолятах группы B. cereus , которые были физически доступны нам (таблица 2). В то время как стандартный белковый подход BLAST в целом был успешным для определения геномного присутствия генов вирулентности (подробности см. ниже), cry , который кодирует инсектицидный кристаллический белок, обычно связанный с B . thuringiensis , показали значительно более высокую изменчивость аминокислот, чем другие гены, связанные с вирулентностью [40].Поскольку это увеличивает вероятность ложноотрицательных результатов с использованием белка BLAST, мы сначала искали cry , используя скрытую марковскую модель Endotoxin_M (HMM), извлеченную из базы данных Pfam (PF00555). Этот поиск HMM выявил гомологов cry всего в 4 из 14 геномов B. thuringiensis . Таким образом, чтобы улучшить чувствительность поиска HMM, мы построили пользовательскую скрытую марковскую модель, основанную на десяти вариантах cry , представляющих различные домены 1 °, доступные в B.thuringiensis из номенклатурной базы данных [41]. Эта новая модель идентифицировала генов cry в 13 изолятах (дополнительный файл 3: таблица S3), включая те же 4 изолята, которые были положительными для cry при поиске Enterotoxin_M HMM. Эти 13 изолятов представляли собой B. thuringiensis (10/14 эталонных геномов), B. weihenstephanensis (1 эталонный геном) , и два групповых изолята B. cereus , связанных с молочными продуктами. Все геномы также были аннотированы с помощью RAST [42], который идентифицировал генов cry в четырех B.thuringiensis , три изолята, связанных с молочными продуктами, и один изолят B. weihenstephanensis . В целом 90 130 гена cry 90 131 были обнаружены в 16 изолятах по крайней мере с помощью одного из использованных подходов (таблица 3, дополнительный файл 3: таблица S3). Проблемы с обнаружением генов cry согласуются с предыдущими сообщениями о том, что эти гены очень разнообразны (например, [23]), и демонстрируют необходимость дальнейшей разработки улучшенных инструментов для обнаружения генов cry на основе данных WGS.Интересно, что изоляты, идентифицированные как несущие генов cry , были распределены по кладам III-a ( n  = 3), III-b ( n  = 2), III-c ( n  = 1), IV ( n  = 8), V ( n  = 1) и VI ( n  = 1), что указывает на то, что гомологи cry широко распространены в различных кладах изолятов группы B. cereus .

    Таблица 2 Распределение ключевых генов вирулентности среди видов группы B. cereus и ветвей WGS Таблица 3 Наличие гена токсина, продукция гемолизина BL (HBL) и негемолитического энтеротоксина (NHE) и гемолитический потенциал

    гена токсина сибирской язвы были обнаружены в изолятах, ранее идентифицированных как

    B. anthracis, , а также B. cereus

    Белок BLAST идентифицировал гены токсина сибирской язвы cya, lef и pagA в (i) 3 из 5 эталонных геномов B. anthracis (штаммы 2000031021 и 2002013094 не имели этих генов) из 20 эталонных геномов B. cereus (03BB102, CI и 03BB87). Штамм CI ранее был обозначен как B. cereus биовара anthracis из-за наличия генов вирулентности сибирской язвы [15].Полный оперон capABCDE , который кодирует компоненты биосинтеза поли-γ-D-глутаматной капсулы, был обнаружен в (i) 4 из 5 эталонных геномов B. anthracis (штамм A16R не имел этих генов) и, (ii) в 1 из 20 геномов B. cereus ( B. cereus , биовар anthracis, штамм Cl). Следовательно, штамм CI B. cereus несет полный набор из генов вирулентности B. anthracis . Кроме того, в B обнаружен неполный оперон capABCDE , характеризующийся отсутствием capB, .cereus штаммов 03BB102 и F65185, а также в B. thuringiensis BGSC 4AJ1. B. toyonensis BCT-7112 содержал только capE (дополнительный файл 3: таблица S3). Эти результаты согласуются с предыдущими сообщениями о штаммах B. cereus , выделенных от пациентов с симптомами, похожими на сибирскую язву [16–18]. Интересно, что два штамма B. cereus , несущие гены сибирской язвы (изоляты 03BB102, CI), были обнаружены в кладе III-a, которая содержит все B.anthracis эталонных геномов, тогда как B. cereus 03BB87 был обнаружен в сестринской кладе III-b.

    Гены диарейного токсина были идентифицированы у нескольких видов группы

    B. cereus

    Белок BLAST был использован для идентификации генов, ранее описанных как кодирующие (i) метаболические пути выработки цереулида, связанные с рвотой, и (ii) токсины, связанные с диарейная болезнь. Кластер генов цереулидсинтетазы ( cesABCD ) был обнаружен только у одного изолята, B.cereus Ah287 из WGS клады III-c. Гены, кодирующие токсины, связанные с диарейными заболеваниями, были обнаружены в большем количестве геномов. Эти гены включали (i) оперон hblABCD , (ii) оперон nheABC и (iii) cytK .

    1. (я)

      Гены, кодирующие гемолизин BL ( hblABCD )

    Два разных оперона hbl были идентифицированы ранее [43].Один оперон ( hbl -I) состоит из двух генов, кодирующих компонент связывания гемолизина BL ( hblA – 1125 нт и hblB – 1398 нт), одного гена, кодирующего литический компонент L2 ( hblC ), и одного гена кодирующий литический компонент L1 ( hblD ). Второй оперон ( hbl -II) состоит из одного гена, кодирующего компонент связывания ( hblA ), и двух генов, кодирующих литические компоненты ( hblC и hblD ) гемолизина BL.Оба этих оперона были ранее описаны в штамме B. cereus ATCC 10876 [43]. Мы идентифицировали генов hblACD , кодирующих гемолизин BL, в 10/20 изолятов B. cereus (включая один, который не нес hblC ), 12/14 изолятов B. thuringiensis , все 3 изолятов B. mycoides 90 , оба изолята B. weihenstephanensis , единственный изолят B. toyonensis и 13 изолятов, связанных с молочными продуктами (таблица 2). Б.pseudomycoides содержал только hblA . Тридцать семь из 42 изолятов, которые несли ген, кодирующий компонент связывания гемолизина BL hblA , также несли более длинный вариант гена, кодирующего компонент связывания, hblB . Четыре гена, кодирующих Hbl, были обнаружены во всех, кроме клады VII ( B.cytotoxicus ). Для 28 изолятов, скринированных с помощью ПЦР, результаты ПЦР согласовывались с идентификацией 90 130 генов hblACD 90 131 с помощью BLAST (таблица 3). В то время как в одном исследовании сообщается о наличии 90 130 генов hblACD во всех 70 протестированных изолятах из готовых к употреблению овощей в Южной Корее [36], другое исследование обнаружило один или несколько 90 130 генов hbl в 23. 5 – 70,6 % изолятов группы 90 130 B. cereus из пищевых продуктов в Бразилии [44]. hblA был обнаружен во всех 57 изолятах B. cereus из образцов сырых овощей, собранных в Мехико [45]. В то время как hblA и hblD были обнаружены в 72 % изолятов B. cereus ( n  = 88) из розничных специй в США, hblC был обнаружен в 71% из из 2 Высокая распространенность генов в опероне hblACD (до 100 %) также отмечена у риса B.cereus , полученные в Южной Корее [37]. С другой стороны, 90 130 генов hblACD обнаруживались реже (34,5 % из 87) в 90 130 изолятах группы B. cereus из ферментированных корейских соевых продуктов [46]. В то время как по крайней мере один ген hbl был обнаружен в 58,7 % из 63 90 130 изолятов B. cereus из молока и молочных продуктов в Бразилии, все три гена hbl были обнаружены в 36,5 % этих изолятов [47]. Тот факт, что гены, кодирующие все три компонента токсина, не всегда выявляются в данном изоляте, свидетельствует о том, что эти гены либо не всегда сосуществуют, либо имеют место ложноотрицательные реакции ПЦР, т. е.г., из-за несоответствия в областях отжига праймеров. Как и в нашем исследовании, генов hblACD были обнаружены во всех протестированных изолятах B. thuringiensis из риса в Корее [37]. С другой стороны, гены hblA C D были обнаружены только в 67 % изолятов B. thuringiensis из розничных продаж специй в США [28]. Однако эти результаты не всегда напрямую сопоставимы из-за различий в методах ПЦР, используемых в исследованиях.В целом, наши данные подтверждают, что генов hblACD обнаружены в видах группы B. cereus и филогенетических кладах.

    1. (ii)

      Гены, кодирующие негемолитический энтеротоксин ( nheABC )

    генов nheABC , кодирующих негемолитический энтеротоксин, были идентифицированы с помощью BLAST для всех изолятов (таблица 2).Идентификация генов nheABC с помощью ПЦР согласовывалась с результатами BLAST во всех случаях, кроме 2 (FSL H8-0488, BGSC 4AJ1; таблица 3). В этих двух случаях поиск BLAST выявил значительное совпадение, но ПЦР nheB дала отрицательный результат. nheB в этих двух изолятах показал несовпадение 1 нуклеотида с областью прямого отжига праймера nheB , однако это несоответствие было обнаружено также в двух других изолятах с положительной реакцией ПЦР nheB , что позволяет предположить, что расхождение последовательности в этой области маловероятно. быть причиной ложноотрицательных результатов ПЦР.Ранее сообщалось, что распространенность 90 130 генов nheABC среди 90 130 изолятов группы B. cereus в целом была выше (более 97 %) по сравнению с распространенностью 90 130 генов hblACD в большинстве исследований, независимо от источника штамма [28, 36, 44, 46]. Исключением является корейское исследование, в котором сообщалось о более низкой распространенности 90 130 генов nheABC среди 90 130 B. cereus , выделенных из белого риса (83,8–86,5 % из 37) [24].

    1. (iii)

      Гены, кодирующие цитотоксин К ( cytK-1 и cytK-2 )

    Ген, кодирующий цитотоксин К ( cytK ), был обнаружен с помощью BLAST примерно в половине изолятов из ветвей III-a и III-c и в большинстве изолятов из ветвей III-b, II, IV и VII (табл. 2).Вариант cytK-1 , который специфичен для B.cytotoxicus , был обнаружен только в референсном геноме B.cyttotoxicus , в то время как cytK-2 также был обнаружен в других геномах. Результаты, полученные с помощью BLAST, согласовывались с результатами, полученными с помощью ПЦР для 26 из 28 протестированных изолятов. В двух случаях (FSL H7-0926 и FSL K6-0267), где наблюдались несоответствия (таблица 3), ПЦР дала положительный результат, в то время как BLAST не обнаружил значительных совпадений в WGS (дополнительный файл 3: таблица S3).Это может быть связано с неспособностью обнаружить ген, расположенный в области генома, которую не охватывали эти две черновые сборки. В меньшем количестве исследований ранее оценивали присутствие cytK ; в этих исследованиях сообщалось о cytK в 64,7% из 17 молочных изолятов и 76,8% из 155 пищевых изолятов B. cereus из Бразилии [44], 70,4% из 125 B. cereus , выделенных из молока и зерновых продуктов в Таиланде [48] ] и 57,5% 87 изолятов группы B. cereus из корейских ферментированных соевых продуктов [46].

    Ген, кодирующий предполагаемую пептидазу клеточной стенки (

    entFM )

    Ген, кодирующий предполагаемую пептидазу клеточной стенки ( entFM ), был идентифицирован с помощью BLAST во всех изолятах, кроме B. cereus FT9. entFM также был обнаружен во всех 28 изолятах, протестированных с помощью ПЦР (таблица 3). Продукт этого гена является предполагаемым фактором вирулентности, который, как сообщается, участвует в бактериальной форме, подвижности, адгезии к эпителиальным клеткам, образовании биопленок и вакуолизации макрофагов [49].

    Профили генов вирулентности среди изолятов, связанных с молочными продуктами

    22 изолята, связанных с молочными продуктами, не несли ни генов вирулентности, связанных с сибирской язвой, ни генов, кодирующих путь биосинтеза рвотного токсина. Тринадцать из 22 связанных с молочными продуктами штаммов, проверенных с помощью ПЦР, несли все восемь протестированных генов диарейных токсинов, а также entFM (таблица 3). Такой же профиль токсинов чаще всего выявляли среди штаммов группы B. cereus , выделенных из пастеризованного молока и зерновых продуктов в Таиланде [48].Важно отметить, что hblACD , nheABC, cytK и entFM также были обнаружены в двух молочных изолятах, FSL K6-0267 и FSL H7-0926, которые сгруппированы в B. weihenstephanensis клады VI. Гены hblACD , nheABC и entFM также присутствовали в двух эталонных изолятах B. weihenstephanensis , что первоначально предполагало, что этот психротолерантный вид может представлять не только риск порчи пищевых продуктов, но и что некоторые штаммы этого вида могут также представляют опасность для здоровья населения.Однако последующие эксперименты, подробно описанные ниже, показали, что анализ на основе антител не выявил гемолизин BL в этих двух изолятах B. weihenstephanensis , что указывает на необходимость дальнейшей характеристики этих изолятов для полной оценки их патогенности.

    Гены токсина сибирской язвы, гены диарейного токсина и гены, кодирующие кристаллический белок, не связаны исключительно с видами

    B. anthracis, B. cereus и B. thuringiensis соответственно

    Для проверки потенциальной ассоциации различных B .cereus с определенным профилем гена токсина, мы проанализировали данные о наличии/отсутствии гена вирулентности с помощью анализа основных компонентов (PCA). Первые 5 и 10 основных компонентов (ПК) в совокупности описывали 69,9 % и 91,0 % дисперсии данных соответственно. Группирование изолятов на основе наличия/отсутствия гена вирулентности визуализировали путем построения собственных векторов, связанных с ПК 1 (ось x), ПК 4 (ось Y) и ПК 3 (размер точек данных) (рис. 3). PC 2 был опущен, так как он специфически характеризовал один изолят, несущий кластер генов цереулидсинтетазы ( B.цереус Ah287).

    Рис. 3

    Кластеризация PCA изолятов группы B. cereus на основе наличия/отсутствия гена вирулентности. Анализ PCA проводили с использованием данных о наличии/отсутствии 30 генов вирулентности, которые имели вариабельное присутствие у анализируемых 69 изолятов. Эталонные изоляты имеют цветовую кодировку в соответствии с ранее идентифицированными видами, и все 22 изолята, связанных с молочными продуктами, помечены как «группа B. cereus ». На рисунке показано группирование проанализированных изолятов на основе ПК 1 (ось X), ПК 4 (ось Y) и ПК 3 (размер точки).PC 2 был опущен, так как он специфически характеризовал один изолят, несущий гены, которые кодируют путь биосинтеза цереулида. Изоляты B. cereus и B. anthracis и B. cereus , несущие гены токсина сибирской язвы и капсулы поли-γ-D-глутамата, образуют четко обособленную группу в нижней левой части рисунка, в то время как изоляты из окружающей среды и B.cytotoxicus имеет тенденцию к скоплению в верхней правой части. Изоляты, несущие гены, связанные с кластером диарейных болезней пищевого происхождения, внизу справа

    Б. cereus сформировали три кластера PCA (рис. 3), каждый из которых включал изоляты нескольких видов. Первый кластер состоит из изолятов B. anthracis и B. cereus , несущих гены сибирской язвы и/или капсулярного биосинтеза (отрицательный PC1, близкий к нейтральному PC 4), второй кластер состоит из непатогенных изолятов B. mycoides и B. pseudomycoides , а также B.cytotoxicus (положительные РС1 и РС4), тогда как большинство B.cereus , B. thuringiensis и B. weihenstephanensis остались неразрешенными в третьем кластере, связанном с генами диарейных токсинов (близкими к нейтральным PC1 и PC4).

    Первый главный компонент графика (ПК 1) был связан с наличием генов, кодирующих диарейные токсины гемолизина BL ( hblACD ), цереолизинов А и В ( cerAB ), цитотоксина ( cytK ), кристаллического белка ( cry ), фосфатидилхолин-специфическая фосфолипаза C ( plcB ) и энтеротоксический белок ( bceT ). Кроме того, ПК 1 был связан с отсутствием генов, кодирующих токсин сибирской язвы ( cya, lef, pagA ), генов биосинтеза поли-γ-D-глутаматной капсулы ( capABCDE ), глобального регулятора транскрипции ( atxA ), гиалуроновой кислоты. синтазы ( hasA ), гемолизина II ( hlyII ) и регулятора гемолизина II ( hlyIIR ). Второй главный компонент графика (PC 4) был связан с наличием гена энтеротоксического белка ( bceT ) и отсутствием генов, кодирующих ( clo ), цитотоксин К ( cytK ), гемолизин II ( hlyII ) и регулятор гемолизина II ( hlyIIR ), энтеротоксический белок ( bceT ), фосфатидилинозитол-специфическая фосфолипаза C (PI-PLC; plcA ) и кристаллические белки ( cry ).

    Из-за невозможности определить B. cereus , B. thuringiensis и B. weihenstephanensis на основе наличия/отсутствия генов вирулентности, мы дополнительно исследовали продукцию гемолизина BL и негемолитического энтеротоксина и их связь с филогенетическими кладами WGS и полиморфизмом последовательностей на 28 штаммах, которые были физически доступны для фенотипических тестов. Детали этого анализа обсуждаются в следующих разделах.

    Присутствие

    hblACD и nheABC недостаточно для продукции обнаруживаемого гемолизина BL и негемолитического энтеротоксина Nhe

    Для оценки конгруэнтности hblACD и , ответственных за образование, идентификацию полиморфизма с генетикой 90x13ABC и 90x13ABC потенциальных несоответствий, мы изучили 22 связанных с молочными продуктами B.cereus , секвенированных в этом исследовании, пяти эталонных изолятов B. thuringiensis и B. cereus ATCC 14579, для определяемых уровней гемолизина BL и негемолитического энтеротоксина Nhe с использованием набора Duopath Cereus Enterotoxins (таблица 3). Все протестированные изоляты несли 90 130 генов nheABC , и все они также продуцировали токсин Nhe в обнаруживаемых количествах (таблица 3). Напротив, только 18 из 28 изолятов несли генов hblACD . Гемолизин BL был обнаружен только в 13 из 18 изолятов, которые имели генов hblACD , и ни в одном из изолятов, которые не имели генов hblACD . Будущие исследования по оценке транскрипции hblACD и с использованием других фенотипических методов (например, анализы культур тканей; анализы ELISA с другими [например, поликлональными антителами]) потребуются, чтобы объяснить, почему некоторые изоляты, несущие hblACD , не экспрессируют HBL. токсин.

    Предыдущие исследования подтвердили наличие nheABC в 83,8–86,5 % изолятов B. cereus и B. thuringiensis из образцов корейского белого риса, но только в 64.9% из них продуцировали NheA [37]. генов hblACD присутствовали в 83,8–94,6 % этих изолятов белого риса; однако только 78,4 % из них продуцировали HblC [37]. Рейс и др. [47] сообщили о 23 из 63 выделенных штаммов, несущих все три гена hbl , но только 20 из них продуцируют токсин гемолизина BL. Данные этих исследований, а также настоящего исследования предполагают, что присутствие генов hblACD может быть недостаточным для продукции обнаруживаемого гемолизина BL. Токсин гемолизина BL может не быть обнаружен, потому что i) hblC не транскрибируется, ii) транскрибируемая мРНК не транслируется, iii) белок не экспортируется или iv) белок не находится в конфигурации, обнаруживаемой моноклональным антителом от Duopath. Набор энтеротоксинов Cereus.Эти результаты демонстрируют, что наличие генов hblACD само по себе не предсказывает продукцию гемолизина BL, предполагая, что может быть невозможно точно предсказать риск для изолята группы B. cereus вызвать диарею на основе гена присутствие само по себе.

    Изоляты с укороченным вариантом

    hblA или специфическими аминокислотными заменами в генах hblC или hblD не экспрессируют обнаруживаемый гемолизин BL

    Чтобы объяснить расхождения между hblABC изоляты (FSL H7-0926, FSL H8-0482, FSL K6-0267, FSL M8-0117 и B.thuringiensis BGSC 4Y1) мы исследовали генов hbl и изменчивость аминокислотной последовательности отдельных генов. Ген длиной 466 а.о. hblB (характерный для оперона hbl-I [43]) не был идентифицирован у двух связанных с молоком изолятов B. weihenstephanensis (отнесенных к этому виду на основании филогении WGS), несущих hblACD гены, но не продуцировали обнаруживаемый гемолизин BL. Отсутствие hblB и присутствие hblACD также наблюдалось в B.Weihenstephanensis KBAB4, B. Cereus 17256 W и B. mycoides 219298. Еще B. Weihenstephanensiss изолят (WSBC 10204) нести все четыре гена HBL , в том числе HBLA и HBLB . hblB расположен после структуры стебель-петля в опероне hbl , что может регулировать его ко-транскрипцию с остальными генами в опероне hbl [43]. Роль hblB еще недостаточно изучена, однако ранее было показано, что мутант, лишенный оперона hbl-I , менее цитотоксичен по сравнению со штаммом дикого типа, несущим оба оперона [43].Три изолята B. weihenstephanensis , в которых отсутствовал hblB , также имели две уникальные вставки из 2 аминокислот (в положениях 34–35 и 246–247) и делецию из 2 аминокислот (в положениях 234–235) в hblA . Однако четвертый изолят B. weihenstephanensis (WSBC 10204) не имел этих инсерций или делеций в hblA . В целом, эти наблюдения обеспечивают возможное механистическое объяснение (т.е. отсутствие hblB и/или уникальные мутации в hblA ) того, почему некоторые B.weihenstephanensis может не демонстрировать образование гемолизина BL, определяемого набором Duopath. Дальнейшие исследования, включая создание соответствующих мутантных штаммов, потребуются для получения более точных сведений.

    Специфические мутации hblACD , приводящие к заменам аминокислот, наблюдались в молочном изоляте FSL M8-0117 и в B. thuringiensis BGSC 4Y1, которые оба несут гены hblACD , но не продуцируют определяемый гемолизин BL. Для изолята FSL M8-0117 треонин в положении 410 th hblC (литический компонент L2) был заменен аланином.Полярный треонин обычно находится в каталитических центрах; поэтому его замена гидрофобным аланином может повлиять на функциональность белка [50]. Аналогично, треонин в положении 358 th гена B.thuringiensis BGSC 4Y1 hblC был заменен электрически заряженным лизином. Ненейтральная замена была также идентифицирована в hblD (литический компонент L1) B.thuringiensis BGSC 4Y1, где гистидин в положении 27 th был заменен глутамином.Электрически заряженный гистидин плохо заменяет любую другую аминокислоту и часто является частью связывающих или активных центров [50]. Поэтому его замена полярным глутамином может повлиять на сборку и активность токсина. Ни одна из этих замен не наблюдалась в изолятах, продуцирующих обнаруживаемый токсин гемолизина BL. Ранее было показано, что замены отдельных аминокислот устраняют реактивность моноклональных антител с компонентами токсина в других организмах, таких как B. anthracis [51].Было показано, что замены в специфических остатках аспарагина и пролина протективного антигена сибирской язвы снижают цитотоксичность и связывание антител, в то время как специфические остатки лизина, лейцина и тирозина влияют только на связывание антител [51]. Пока неясно, устраняют ли наблюдаемые мутации полностью функционирующую экспрессию токсина или только его обнаружение с помощью моноклональных антител, используемых в наборе Duopath [52]. Для ответа на эти вопросы необходимы дальнейшие исследования, позволяющие прогнозировать токсичность, связанную с различными вариантами гена hbl , на основе последовательности.

    Клада IV WGS связана с продукцией гемолизина BL токсина

    Изоляты, которые были протестированы на продукцию токсина, были распределены между кладами II-VI. Все испытанные изоляты из ветвей III-b, III-c и VI не продуцировали обнаруживаемый токсин гемолизина BL. Все клады II, III-a и V включали изоляты с продукцией гемолизина BL и без нее; 2 из 6, 1 из 2 и 1 из 2 протестированных изолятов соответственно продуцировали гемолизин BL. Все протестированные изоляты из филогенетической клады IV дали положительный результат на продукцию гемолизина BL.Продукция гемолизина BL была значительно ( p  = 0,0001) связана с этой кладой, что согласуется с предыдущим отчетом [34].

    Рекомбинантный гемолизиновый белок Staphylococcus alpha (активный) (ab233724)

    Описание

    • Название продукта

      Рекомбинантный гемолизиновый белок Staphylococcus alpha (активный)

    • Биологическая активность

      ab233724 активен в анализах функционального лизиса эритроцитов кролика.

      ЕС 50 ~0,015 мкг/мл.

    • Чистота

      > 80 % аффинной очистки.
      Очистка колоночной хроматографией.

    • Уровень эндотоксина

      = 5,165 ЕЕ/мг

    • Система экспрессии

      Кишечная палочка

    • Присоединение

    • Длина белка

      Полноразмерный белок

    • Без животных

    • Природа

      Рекомбинантный

    Технические характеристики

    Наша гарантия Abpromise распространяется на использование аб233724 в следующих протестированных приложениях.

    В примечаниях по применению указаны рекомендуемые начальные разведения; оптимальные разведения/концентрации должны определяться конечным пользователем.

    • Приложения

      Вестерн-блот

      Функциональные исследования

      SDS-СТРАНИЦА

      ИФА

    • Форма

      Жидкость

    • Загрузка информации о концентрации…

    Подготовка и хранение

    • Стабильность и хранение

      Поставляется при 4°C. Хранить при температуре -80°C.

      Составляющие: PBS, 20% глицерин (глицерин, глицерин)

      Этот продукт является активным белком и может вызывать биологическую реакцию in vivo, обращаться с ним следует с осторожностью.

    Общая информация

    • Альтернативные названия

      • Альфа-гемолизин
      • Альфа HL
      • Альфа-токсин
      • Хла
      • Хай
      • Стафилококк альфа HL
      • Стафилококковый альфа-токсин

      посмотреть все

    • Актуальность

      Staphylococcus aureus alpha Гемолизин связывается с мембраной эукариотических клеток, что приводит к высвобождению низкомолекулярных молекул и, в конечном итоге, к осмотическому лизису. Токсин самособирается, образуя сначала нелитический олигомерный промежуточный продукт, а затем грибовидную гомогептамерную структуру. Для литической активности необходимы олигомеризация гептамера и образование пор.

    • Сотовая локализация

      Секретно

    Изображения

    • Функциональные исследования — рекомбинантный гемолизиновый белок Staphylococcus alpha (активный) (ab233724)

      Лизис эритроцитов кролика S.золотистый хла.

      Лизис эритроцитов определяли по поглощению при OD 416 нм после 30-минутной инкубации при 37°C с Hla.

    • SDS-PAGE — рекомбинантный гемолизиновый белок Staphylococcus alpha (активный) (ab233724)

      Переулок 1: 5 уг.

      Переулок 2: 1 уг.

    • Вестерн-блот — рекомбинантный гемолизиновый белок Staphylococcus alpha (активный) (ab233724)

      Все дорожки: Моноклональное антитело мыши против альфа-токсина (6C12) в концентрации 1 мкг/мл005 мкг
      Лейн 2: рекомбинантный белок стафилококка альфа-гемолизин (Active) (AB233724) при 0,01 мкг
      Лейн 3: рекомбинантный стафилококк альфа-гемолизиновый белок (активный) (AB233724) при 0,05 мкг

      вторичный
      дорожки: Конъюгат антимышиного IgG-HRP

    Протоколы

    Насколько нам известно, для этого продукта не требуются индивидуальные протоколы. Пожалуйста, попробуйте стандартные протоколы, перечисленные ниже, и сообщите нам, как у вас дела.

    Щелкните здесь для просмотра общих протоколов

    Спецификации и документы

    • скачать паспорт безопасности

      Страна/регионВыберите страну/регион

      ЯзыкВыберите язык

    • Скачать спецификацию

    Каталожные номера (1)

    ab233724 упоминается в 1 публикации.

    • Chu AJ и др. Нусбиарилины ингибируют транскрипцию и нацелены на факторы вирулентности бактериального патогена Staphylococcus aureus. Int J Mol Sci 21: н/д (2020). ПабМед: 32796751

    Отзывы клиентов и ответы на вопросы

    Какую роль играют гемолизины в инфекциях, вызванных стрептококком группы А (GAS)?

    Автор

    Zartash Zafar Khan, MD, FACP  Консультант по инфекционным заболеваниям

    Zartash Zafar Khan, MD, FACP является членом следующих медицинских обществ: Американский колледж врачей, Американское общество инфекционистов, Международное общество инфекционных заболеваний

    Раскрытие информации : Нечего раскрывать.

    Соавтор (ы)

    Мишель Р. Сальваджио, доктор медицинских наук, FACP  доцент кафедры внутренних болезней отделения инфекционных болезней Медицинского колледжа Университета Оклахомы; медицинский директор Института инфекционных заболеваний, директор отдела клинических испытаний, директор программ Райана Уайта, медицинский факультет, Центр медицинских наук Университета Оклахомы; Лечащий врач, Консультационная служба по инфекционным заболеваниям, Институт инфекционных заболеваний, Медицинский центр OU

    Мишель Р. Сальваджио, доктор медицинских наук, FACP является членом следующих медицинских обществ: Американский колледж врачей, Американское общество инфекционных заболеваний

    Раскрытие информации: Получены гонорары от Merck для выступлений и обучения.

    Главный редактор

    Пранатарти Харан Чандрасекар, MBBS, MD Профессор, заведующий отделением инфекционных болезней, отделение внутренних болезней, Медицинский факультет Университета Уэйна

    Пранатарти Харан Чандрасекар, MBBS, MD является членом следующих медицинских обществ: Американский колледж врачей , Американское общество микробиологии, Международное общество принимающих лиц с ослабленным иммунитетом, Американское общество инфекционных заболеваний

    Раскрытие информации: Нечего раскрывать.

    Благодарности

    Джон Л. Браш, MD, FACP Доцент медицины, Гарвардская медицинская школа; Консультант отдела медицины и службы инфекционных заболеваний, Cambridge Health Alliance

    John L Brusch, MD, FACP является членом следующих медицинских обществ: Американский колледж врачей и Американское общество инфекционистов

    Раскрытие информации: Нечего раскрывать.

    Godfrey Harding, MD, FRCP(C) Директор программы медицинской микробиологии, профессор медицинского факультета, отделение инфекционных заболеваний и микробиологии, больница Св. Бонифация, Университет Манитобы, Канада

    Годфри Хардинг, доктор медицинских наук, FRCP(C) является членом следующих медицинских обществ: Американского колледжа врачей, Американского общества микробиологии, Канадского общества инфекционных заболеваний, Канадской медицинской ассоциации, Американского общества инфекционных заболеваний и Королевского колледжа врачей и Хирурги Канады

    Ларри Лютвик, доктор медицины Профессор медицины, Медицинская школа Нижнего штата Нью-Йоркского государственного университета; Директор отдела инфекционных заболеваний по делам ветеранов New York Harbour Health Care System, Brooklyn Campus

    Ларри Лютвик, доктор медицинских наук, является членом следующих медицинских обществ: Американского колледжа врачей и Американского общества инфекционистов

    .

    Раскрытие информации: Нечего раскрывать.

    Хосе Рафаэль Ромеро, MD Директор программы стипендий по детским инфекционным заболеваниям, доцент кафедры педиатрии объединенного отделения детских инфекционных болезней, Медицинский центр Университета Крейтона/Университета Небраски

    Раскрытие информации: Нечего раскрывать.

    Mark R Schleiss, MD Председатель педиатрии Американского легиона, профессор педиатрии, директор отделения инфекционных заболеваний и иммунологии, кафедра педиатрии, Медицинская школа Университета Миннесоты

    Mark R Schleiss, MD, является членом следующих медицинских обществ: Американского педиатрического общества, Американского общества инфекционных заболеваний, Общества детских инфекционных заболеваний и Общества педиатрических исследований

    .

    Раскрытие информации: Нечего раскрывать.

    Сат Шарма, доктор медицинских наук, FRCPC Профессор и заведующий отделением легочной медицины, отделение внутренних болезней, Университет Манитобы; Директор участка, респираторная медицина, больница общего профиля Св. Бонифация

    Сат Шарма, доктор медицинских наук, FRCPC является членом следующих медицинских обществ: Американской академии медицины сна, Американского колледжа врачей-пульмонологов, Американского колледжа врачей-Американского общества внутренних болезней, Американского торакального общества, Канадской медицинской ассоциации, Королевского колледжа Врачи и хирурги Канады, Королевское медицинское общество, Общество медицины критических состояний и Всемирная медицинская ассоциация

    Раскрытие информации: Нечего раскрывать.

    Russell W Steele, MD , заведующий отделением детских инфекционных заболеваний, Детский медицинский центр Окснера; Клинический профессор кафедры педиатрии Медицинской школы Тулейнского университета

    Раскрытие информации: Нечего раскрывать.

    Франсиско Талавера, PharmD, PhD Адъюнкт-профессор, Фармацевтический колледж Медицинского центра Университета Небраски; Главный редактор Medscape Drug Reference

    Раскрытие информации: Заработная плата Medscape

    Мэри Л. Виндл, PharmD Адъюнкт-профессор, Фармацевтический колледж Медицинского центра Университета Небраски; Главный редактор Medscape Drug Reference

    jQuery(document).ready(function($) { $.post('https://osteohondroz24.ru/wp-admin/admin-ajax.php', {action: 'wpt_view_count', id: '23873'}); });

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *