Кандидозов: Кандидоз — причины, признаки, симптомы и лечение кандидоза у мужчин и женщин

Содержание

Кандидоз: лечение, симптомы, причины возникновения

Трихолог, дерматолог, врач высшей категории

Московский проспект, д. 143

Онколог-дерматолог, врач высшей категории

Гражданский проспект, д.107, к.4

Онколог-дерматолог, врач высшей категории

Гражданский проспект, д.107, к.4

Коломяжский проспект, д. 20

Дерматолог, специалист лазерных технологий в онкодерматологии, врач высшей категории

Коломяжский проспект, д. 20

Дерматолог, специалист лазерных технологий в онкодерматологии, врач высшей категории

Московский проспект, д. 143

Дерматолог, специалист лазерных технологий в онкодерматологии

Московский проспект, д. 143

Гражданский проспект, д.107, к.4

Коломяжский проспект, д. 20

Дерматовенеролог, трихолог, косметолог, специалист лазерных технологий

Московский проспект, д. 143

Гражданский проспект, д.107, к.4

Коломяжский проспект, д. 20

Врач дерматовенеролог, трихолог, косметолог. Высшая квалификационная категория.

Московский проспект, д. 143

Дерматолог, косметолог, Специалист лазерных технологий в онкодерматологии

Коломяжский проспект, д. 20

Дерматовенеролог, специалист лазерных технологий в онкодерматологии

Московский проспект, д. 143

Коломяжский проспект, д. 20

дерматолог, косметолог, специалист лазерных технологий

Гражданский проспект, д.107, к.4

Дерматовенеролог, доктор медицинских наук, профессор

Московский проспект, д. 143

Дерматовенеролог, специалист лазерных технологий в онкодерматологии

Гражданский проспект, д.107, к.4

Онколог-дерматолог, кандидат медицинских наук

Московский проспект, д. 143

Гражданский проспект, д.107, к.4

Коломяжский проспект, д. 20

Кандидоз, скрининг и типирование — цена анализа в Ереване в ИНВИТРО

Исследуемый материал Соскоб эпителиальных клеток урогенитального тракта

Метод определения ПЦР с детекцией в режиме реального времени.

Профиль № 3021 «Кандидоз, скрининг и типирование» включает исследование № 3023 «Кандидоз, скрининг» − анализ на суммарное присутствие ДНК микроскопических грибков (тест Fungi) и тест на определение ДНК Candida albicans. При положительном результате теста Fungi проводится исследование № 3024 «Кандидоз, типирование» − типирование грибков Candida (Candida krusei, Candida glabrata, Candida parapsilosis, Candida tropicalis, Candida famata, Candida guillermondii). 

Профили № 3023 «Кандидоз, скрининг» и № 3024 «Кандидоз, типирование» можно использовать по отдельности для решения конкретных клинических задач. Результаты тестов выдаются в полуколичественном формате с указанием уровня обнаруженной бактериальной ДНК возбудителя относительно порогового значения. Пороговое значение выбрано с учетом рекомендаций производителей реагентов и клинических рекомендаций Российского общества дерматовенерологов и косметологов 2012 года. 

Профили рекомендуются для обследования как женщин, так и мужчин.

 

Литература

Литература:

  • Руководство по медицинской микробиологии/ Под ред. А.С. Лабинской, Н.Н. Костюковой, М.: «БИНОМ», 2013, т. 1, к. 3, с. 504−557, с. 601−702. 
  • Лабораторная диагностика бактериального вагиноза: методические рекомендации/ А.М. Савичева, М.А. Башмакова, М.А. Красносельских и др., СПб: «Н-Л», 2011. 
  • Ведение больных с инфекциями, передаваемыми половым путем и урогенитальными инфекциями: клинические рекомендации Российского общества дерматовенерологов и косметологов, М.: Издательский дом «Деловой экспресс», 2012, с. 7−97. 
  • Инструкции к реагентам: материалы фирмы-производителя.
  • http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs110/ru/

Кандидоз перианальной области: диагностика и лечение

Как мы лечим кандидоз перианальной области

Кандидоз прямой кишки и кандидоз перианальной области относятся к разным формам грибковых поражений, которые вызывает Candida albicans в области прямой кишки и ануса. Однако близость анального канала и кожи при определенных условиях способствует переходу патологии с кожи в прямую кишку и в обратном направлении. Кандидоз прямой кишки протекает тяжелее кандидоза перианальной области, лечение которого редко сопряжено с трудностями.

Предрасполагающие факторы перианальных кандидозов

  • Физиологические иммунодефицитные состояния (новорожденные и дети до года, старческий иммунодефицит, иммунная недостаточность беременных, стресс).
  • Наследственно-обусловленные иммунодефициты (синдромы Шедиака-Хигаши, Незелофа, Ди-Джорджи и др.).
  • Онкология — опухолевые и миелолимфопролиферативные болезни (рак, саркома, лейкоз) особенно на фоне массивной химиотерапии.
  • Аутоиммунные и аллергические состояния при ревматоидном артрите, красной волчанке, гломерулонефрите, бронхиальной астме, особенно на фоне гормональной терапии.
  • Трансплантация органов (на фоне приёма иммуносупрессантов- лекарств, подавляющих иммунитет с целью не допустить отторжения имплантированного органа).
  • Эндокринная патология (сахарный диабет, аутоиммунный тиреоидит и др.).
  • Истощающие заболевания (ожоговая, посттравматическая болезнь, анемия, гепатиты, цирроз печени и др.).
  • Длительная антибиотикотерапия.
  • СПИД.
  • Алиментарные гиповитаминозы (зависящие от питания), недостаточность микроэлементов, незаменимых аминокислот и др.

Кандидоз прямой кишки

Прямокишечный кандидоз относится к инвазивным (проникающим) микозам. Он обусловлен внедрением особой нитчатой формы гриба в стенку кишки. Частицы грибка сначала прилипают к эпителиальной клетке кишки, затем проникают в эпителиальные слои и распространяются за них. Кандидозу прямой кишки всегда предшествует системное нарушение иммунитета. Он чаще развивается у гомосексуалистов, при сопутствующем герпетическом поражении кишки, больных СПИДом.

Клинически у пациентов отмечают явления проктита.
Проктологи Медицинского центра «Столица» рекомендуют всем пациентам пройти диагностику на ВИЧ, а диагноз кандидоза прямой кишки устанавливают в соответствии с мировыми стандартами – обнаружение псевдомицелия Candida в повторном мазке-отпечатке со слизистой прямой кишки. После установления факта кандидоза пациенты направляются на всестороннее обследование и консультацию иммунолога центра для выяснения причин снижения иммунитета и его коррекции.
Специфическое лечение кандидоза прямой кишки проводят общими и местными микоцидами (противогрибковыми средствами) после определения чувствительности выделенного штамма к препаратам. Как правило, сразу назначают флюконазол или микоциды резерва: кетоконазол, итраконазол. Местная терапия носит вспомогательный характер и направлена на купирование симптомов воспаления.

Кандидоз перианальной области

Перианальный кандидный дерматит не является инвазивным и протекает легче. Его вызывают обычные формы Candida albicans. Он чаще развивается после раздражения кожи мокрой одеждой и несоблюдения гигиены у новорожденных, энтеробиозе у подростков и при анальных трещинах у взрослых. Вероятность кандидных микозов увеличивается при лечении сопутствующих болезней антибиотиками.
Кандидоз перианальной области проявляется покраснением кожи, мацерацией (разрыхлением, микроповреждениями кожи), на коже появляются расчесы. Характерны явления перианального дерматита и жалобы на зуд.
Проктологи Медицинского центра «Столица» устанавливают диагноз в соответствии с мировыми стандартами – обнаружение псевдомицелия Candida в кожных чешуйках аноректальной области.
Лечение кандидоза перианальной области местное. Препаратом выбора считается крем клотримазола или препараты резерва: экзодерил и низорал. Эффективными оказываются аппликации противогрибковых средств на фоне повышенных требований гигиены. Принимаются меры к ликвидации энтеробиоза (глистное поражение, вызванное острицами) и лечения анальных трещин.

При появлении боли, покраснения, зуда, мокнутия в области прямой кишки и окружающей области немедленно обращайтесь к проктологу медицинского центра «Столица». Вам поставят точный диагноз и проведут эффективное лечение. При необходимости Вас проконсультируют у других специалистов (иммунолога, эндокринолога, гематолога, ревматолога) для уточнения причины снижения иммунитета и подбора восстановительной терапии.

 

заболевание, симптомы, лечение, причины, диагностика

Кандидоз (молочница) — одна из разновидностей грибковой инфекции, вызывается микроскопическими дрожжеподобными грибами рода Candida (Candida albicans). Всех представителей данного рода относят к условно-патогенным.  Род Candida насчитывает более 170 разновидностей. Для того чтобы условно-патогенный Candida вызвал поражение органов и тканей, на организм должны воздействовать факторы, резко снижающее эффективность его защитных механизмов:  тяжелые инфекции, сахарный диабет, иммунодефицитные состояния, злокачественные новообразования, лечение гормонами-кортикостероидами, современными антибиотиками. Детский и пожилой возраст, беременность – состояния с более высокой вероятностью возникновения кандидозов.

Кандидоз может протекать в виде следующих форм: кандидоз гладкой кожи и ее придатков, кандидоз слизистой полости рта, урогенитальный кандидоз, висцеральный кандидоз, хронический генерализованный кандидоз.

При кандидозе кожи и ее придатков чаще всего очаги располагаются в крупных складках: пахово-бедренных, межъягодичных, подмышечных впадинах, под молочными железами.  Очаги в крупных складках выглядят как мелкие 1-2 мм пузырьки, которые вскоре вскрываются с образованием эрозий. Эрозии увеличиваются в размерах, сливаются, образуя большие участки повреждения. Среди всех локализаций кандидоза в желудочно-кишечном тракте, кандидоз слизистой полости рта занимает первое место. При кандидозе половых органов наблюдаются обильные белого цвета творожистые выделения, характерен зуд, боль при половом акте, боль при мочеиспускании.  Для кандидоза влагалища, так же как и для других форм, характерно нарушение баланса нормальной микрофлоры, которая обитает на слизистой оболочке.

Могут поражаться внутренние органы: возникает кандидоз легких, поражение глаз, почек сердца. Как крайняя степень возникает кандидозный сепсис, при котором грибки из первичного очага разносятся током крови по органам, вызывая их поражение. Грибковый сепсис часто заканчивается летальным исходом. Случаи распространения комбинированных кандидозов с поражением внутренних органов и развитием кандидозного сепсиса регистрируются во всех странах.

Обращение к врачу нельзя откладывать в случае распространения очагов кандидоза, появления их в новых местах, повышения температуры, воспаления лимфатических узлов, так как это может свидетельствовать о развитии болезни во внутренних органах.

Преимущества услуги

Удобный график работы

Работаем до позднего вечера, чтобы вам было удобно заняться своим здоровьем после работы

Отсутствие очередей

Система записи пациентов отлажена за много лет работы и действует так, что вас примут точно в выбранное время

Уютный интерьер

Нам важно, чтобы пациенты чувствовали себя комфортно в стенах клиники, и мы сделали все, чтобы окружить вас уютом

Внимание к пациенту

К вашим услугам – внимательный персонал, который ответит на любой вопрос и поможет сориентироваться

Возбудители кандидоза (C.albicans/ C. glabrata/ C. crusei/ C. parapsilosis, tropicalis), количественное определение ДНК (мазок из ротоглотки)

Кандидоз слизистой – это инфекционно-воспалительный процесс, вызываемый дрожжеподобными грибами рода Candida, на слизистых оболочках. Наибольшее клиническое значение имеет кандидоз полости рта и генитальный кандидоз.

Дрожжеподобные грибы рода Candida (Candida spp.) считаются представителями нормальной микробиоты слизистых организма человека. Действительно, они могут быть выявлены примерно у 60 % взрослых здоровых людей в полости рта и у 12 % женщин во влагалище. В норме дрожжевые грибы находятся в равновесии с бактериальными комменсалами слизистых оболочек и не вызывают никаких воспалительных изменений (“здоровое носительство”). В некоторых ситуациях, однако, рост дрожжевых грибов усиливается, что сопровождается локальным инфекционно-воспалительным процессом – кандидозом, который также известен под названием “молочница”.

Существует более 150 видов кандид, некоторые из них являются патогенными для человека: С. albicans, C. tropicalis, C. pseudotropicalis, C. krusei, C. parakrusei, C. parapsilosis, C. guillermondi. Candida albicans – наиболее частый возбудитель заболевания.

Кандидоз слизистых встречается очень часто. Факторами риска кандидоза полости рта являются младенческий и пожилой возраст, наличие тяжелых заболеваний с иммунодефицитом (особенно лейкоза, лимфомы, карциноматоза и ВИЧ), недостаточная гигиена полости рта, синдром Шегрена, сахарный диабет и другие эндокринологические заболевания, ношение зубных протезов, применение ингаляционных и системных глюкокортикоидов. Факторы риска генитального кандидоза (вульвовагинита) менее ясны, однако предполагается значение нарушения баланса эстрогенов и применения антибиотиков.

Клиническая картина кандидоза слизистых достаточна характерна (наличие крошковатых налетов белого цвета на фоне гиперемии при псевдомембранозной форме кандидоза), однако она может напоминать другие заболевания, в первую очередь лейкоплакию и красный плоский лишай. Для дифференциальной диагностики этих заболеваний проводят лабораторные тесты.

С учетом большой распространенности “здорового носительства” грибов рода Candida, у многих людей может быть определен незначительный рост дрожжеподобных грибов. При отсутствии каких-либо клинических признаков кандидоза такой рост не имеет никакого клинического значения. С другой стороны, обилие колоний дрожжевых грибов (более 104 КОЕ/мл) у пациента с минимальными признаками кандидоза или вовсе без них, но с факторами риска этого заболевания, должно насторожить врача и, возможно, потребует назначения антимикотических препаратов.

ПЦР-анализ (полимеразная цепная реакция) – современный метод диагностики, который основан на обнаружении в исследуемом биологическом материале характерных только для определенного возбудителя уникальных последовательностей ДНК. В исследуемом материале находят специфическое ДНК возбудителя молочницы – разновидностей грибка Candidа – C. albicans, C. glabrata, C. krusei, C. parapsilosis / C. tropicalis. Обнаружение кандиды ПЦР-методом является наиболее объективным и точным среди прочих методов исследования. Высокая точность обязательно покажет наличие грибка в организме, однако это не означает, что именно он стал причиной заболевания пациента.

С учетом того, что иногда кандидоз слизистой (в первую очередь, полости рта) является симптомом более серьезного заболевания, в некоторых случаях могут быть рекомендованы дополнительные лабораторные тесты, в том числе анализ на глюкозу в крови, определение гормонов щитовидной, паращитовидной, половых желез и надпочечников, анализ на ВИЧ и иммунологические исследования. Более широкое лабораторное обследование также показано при наличии хронического кандидоза кожи и слизистых. Следует отметить, что генитальный кандидоз не относится к числу инфекций, передающихся половым путем (ИППП), поэтому при выявлении этого заболевания у пациента обследование его половых партнеров не показано.

Для чего используется исследование?

Для диагностики и контроля лечения кандидоза слизистых оболочек.
Когда назначается исследование?

При наличии признаков кандидоза слизистых оболочек: жжение, болезненность, зуд, крошковатый налет белого цвета на фоне гиперемии;
при наличии факторов риска кандидоза полости рта: младенческий и пожилой возраст, тяжелые заболевания с иммунодефицитом (лейкоз, лимфомы, карциноматоз и ВИЧ), недостаточная гигиена полости рта, синдром Шегрена, сахарный диабет и другие эндокринологические заболевания, ношение зубных протезов, применение ингаляционных и системных глюкокортикоидов.

Взятие материала желательно проводить до диагностических и лечебных манипуляций в предполагаемом месте локализации возбудителя.
Взятие биологического материала рекомендуется проводить до начала применения лекарственных препаратов (антибактериальных, противовирусных, противопаразитарных). При проведении исследований в целях контроля лечения целесообразно проводить взятие проб на ПЦР-тесты не ранее, чем через 10-14 дней после окончания применения соответствующих препаратов локального действия и не ранее, чем через один месяц после проведения системной терапии.
При подготовке пациента к процедуре следует учесть:
за 6 часов до исследования не рекомендуется использовать лекарственные средства для орошения ротоглотки и препараты для рассасывания;
перед проведением исследования не чистить зубы, не использовать жевательную резинку/пастилки для освежения дыхания;
перед началом исследования прополоскать полость рта водой комнатной температуры.
Желательно соблюдать все описанные условия, если лечащим врачом не рекомендовано иное.

Референсные значения: не обнаружено.

Положительный результат:

кандидоз слизистых;
“здоровое носительство”.
Отрицательный результат:

норма;
эффективное лечение противогрибковыми препаратами.
Важные замечания

Иногда кандидоз слизистой является симптомом более серьезного заболевания, поэтому могут быть рекомендованы дополнительные лабораторные тесты.

Лечение молочницы (кандидоза) в клинике НЕОМЕД

Лечение

При грамотном профессиональном подходе молочница лечится весьма эффективно.

Внимательный врач клиники НЕОМЕД не только избавит вас от неприятных симптомов и восстановит нормальную женскую микрофлору, но и выявит истинную причину возникновения кандидоза. В случае необходимости пациентка будет направлена к другому узкому специалисту, тем самым купируя проблему.

Наша клиника позволяет чувствовать себя комфортно не только женщине, но и ее половому партнеру, нередко также требующему лечения. Специалисты нашей клиники помогут вам справиться с проблемой, достаточно лишь соблюдать все врачебные рекомендации и не забывать о профилактике.

Грибковая инфекция (молочница), проявляется творожистыми выделениями, жжением и зудом половых органов, сигнализирует о нарушении флоры влагалища. Чаще всего неприятные ощущения возникают за неделю до наступления менструации. Причем женщина может испытывать сразу все характерные признаки болезни, а может жаловаться только на покраснение половых органов или нарушение мочеиспускания.

При этом нарушение здорового баланса бактериальной флоры слизистой свидетельствует о других проблемах со здоровьем. В перечне причин может быть снижение иммунитета, наличие хронических заболеваний или гормональные нарушения. Кандидоз является своеобразным лидером в списке женских заболеваний из-за того, что возникает на фоне практически любой проблемы со здоровьем. Но в этом есть и своеобразный плюс. Грамотная диагностика и определение причины возникновения заболевания позволяют обратить внимание на основную проблему, например, обратиться к гастроэнтерологу из-за дисбактериоза кишечника. Особенно остро симптомы кандидоза ощущают женщины-аллергики. В этом случае молочница может привести к нервному раздражению и отказу в интимной близости партнеру.

Невнимание к своему здоровью, отсутствие должного лечения, часто приводит к хронической форме заболевания с регулярными обострениями симптоматики. В таком случае лечение может занять гораздо больше времени, нежели лечение единичного острого процесса. Вылечить молочницу самостоятельно за один день невозможно! Обратитесь к нашему специалисту вовремя, и получите квалифицированную врачебную помощь.

Симптомы вагинального кандидоза (молочницы) следующие:

  • зуд и сильное жжение в районе половых органов, во влагалище, часто носящие изматывающий и нестерпимый характер;
  • боль, возникающая во время полового контакта, мочеиспускания, а в некоторых случаях и в состоянии покоя;
  • творожистые, лишенные запаха выделения;
  • покраснение влагалища.

Причиной генитального кандидоза (молочницы) являются грибы Кандида. Эти грибы в норме присутствуют на слизистых в небольших количествах. Но при нарушении баланса микроорганизмов слизистой они начинают чрезмерно размножаться, что и приводит к такому заболеванию, как молочница.

К кандидозу может привести практически любой фактор, заставляющий организм испытывать непривычные нагрузки. Это беременность, аборт, гормональная контрацепция, понижение иммунитета, сахарный диабет, несоблюдение правил гигиены и т.д. Нередко развитие болезни провоцирует аллергическая реакция на латексные презервативы или длительное лечение антибиотиками.


× Текст скрыт. Выберите пункт меню для чтения дополнительной информации.

Генитальный кандидоз: диагностика, клиника, лечение

Авторы: Подготовила Наталья Полищук

Грибковые инфекции представляют собой одну из ведущих групп заболеваний в мире. По данным ВОЗ, каждый пятый житель планеты страдает каким-либо микозом. Частота этих инфекций имеет тенденцию к росту, что связано с ухудшением экологической ситуации, широким применением антибиотиков, цитостатиков, иммунодепрессантов, а также с увеличением числа больных с нарушениями иммунной системы. На удельный вес грибковых осложнений в общей структуре инфекционных заболеваний в последние годы влияет также то, что пациенты часто прибегают к самолечению, применяя сильнодействующие химиопрепараты, гормоны в неадекватных дозах и другие средства, что приводит к развитию дисбактериоза, нарушению обмена веществ и снижению иммунитета. Все эти факторы способствуют активации условно-патогенной грибковой флоры на коже, в полости рта, дыхательной и выделительной системах, желудочно-кишечном тракте, гениталиях.

В настоящее время описано и включено в определители более 120 тыс. видов макро- и микроскопических грибов. В основном это сапрофиты, населяющие почву, контаминирующие жилые, производственные и больничные помещения, пищевые продукты. В качестве возбудителей заболеваний кожи и ее придатков, слизистых оболочек, а также внутренних органов описано около 500 видов грибов, из которых 100 наиболее часто выделяемых относят к четырем классам грибов: зигомицетам, аскомицетам, базидиомицетам и дейтеромицетам.

За последние годы особенно возросла распространенность кандидозных инфекций: грибы рода Candida стали четвертыми в ряду наиболее часто встречающихся микроорганизмов, выделяемых из крови госпитализированных пациентов. Тенденции, которые ассоциируются с этим ростом, включают сдвиг в распространенности видов Candida в пользу non-albicans, а также появление возбудителей кандидоза, устойчивых как к амфотерицину, так и к новейшим азолам.

Реальную клиническую значимость приобрела проблема вагинального кандидоза, частота которого составляет 40-45% в структуре инфекционной патологии женских половых путей. Данные мировой литературы говорят о том, что почти 75% женщин детородного возраста, как минимум, один раз в жизни переносят эпизод вагинального кандидоза. Можно предположить, что в Украине почти 7 из 9 миллионов женщин репродуктивного возраста знакомы с проблемой вагинального кандидоза.

Наиболее частым возбудителем заболевания является Candida albicans. Этот вид гриба обнаруживается в 84-95% случаев клинически выраженного генитального кандидоза. Реже причиной заболевания становятся грибы рода Torulopsis в чистой культуре или в ассоциации с Candida albicans.

Грибы кандида — аэробы — относятся к условно-патогенным возбудителям. Это нередко сапрофиты слизистых оболочек полости рта, кишечника, влагалища и кожи. Грибы кандида могут быть обнаружены во влагалище у практически здоровых женщин, не имеющих клинических признаков кольпита и других гинекологических заболеваний. Кандидоносительство наблюдается у 3-5% обследованных женщин.

Дрожжеподобные грибы попадают в половые пути женщины из кишечника, при непосредственном контакте с экзогенными источниками инфекции (больные, носители), через инфицированные предметы. Заражение возможно при половых контактах, но этот путь инфицирования к числу основных не относится. Развитию кандидозного кольпита (цервицита, вульвита и других) способствуют изменения в организме, снижающие его защитные силы. Обычно заболевание развивается на фоне гормонального дисбаланса, нарушения метаболизма белков, углеводов, витаминов, встречается нередко у лиц, страдающих хроническими заболеваниями (сахарный диабет, туберкулез, заболевания органов пищеварения и другие). К предрасполагающим факторам также относят эрозию шейки матки, эндометриоз, сальпингофорит, беременность, железодефицитную анемию.

Кандидоз развивается преимущественно у женщин в репродуктивном возрасте, но возможен и в постменопаузальном, пубертатном и даже в детском возрасте. У беременных кандидоз (включая носительство) выявляется чаще, что связано с изменениями в эндокринной и других системах, возникающими во время беременности.

Генитальному кандидозу нередко сопутствуют бессимптомная кандидоурия, уретрит и другие заболевания мочевых путей.

В патогенезе генитального кандидоза определенную роль играет длительное использование гормональных (пероральных) контрацептивов, влияющих на соотношение гормонов, регулирующих репродуктивную функцию. Существенное значение в патогенезе кандидоза имеет дисбактериоз, развивающийся вследствие применения антибиотиков, кортикостероидных гормонов и иммунодепрессантов.

G. Monif (1985) предлагает выделять следующие виды кандидозного вульвовагинита:

  • первичный;
  • антибиотикозависимый, развившийся на фоне терапии антибиотиками разных заболеваний;
  • связанный с изменениями в разных системах организма (прием эстрогенов, контрацептивных средств, сахарный диабет, изменения в иммунной системе, беременность и другие).

Генитальный кандидоз характеризуется в основном поражением слизистой оболочки влагалища (кольпит), многослойного плоского эпителия влагалищной части шейки матки (цервицит), вульвы (вульвит).

Воспалительный процесс возникает на фоне снижения защитных сил организма, способствующего проявлению патогенных свойств сапрофитной грибковой флоры. Грибы приобретают адгезивные свойства: прикрепляются к поверхностному слою эпителия, внедряются в него, вызывая ответную воспалительную реакцию, десквамацию поверхностных эпителиальных клеток. При высокой патогенности возбудители проникают в интра- и субэпителиальные слои, даже в мышечную оболочку. В крайне тяжелых случаях возможна диссеминация кандидоза. Однако обычно генитальный кандидоз проявляется поражением слизистых оболочек без глубокой инвазии возбудителя и диссеминации процесса.

На поверхности слизистой оболочки влагалища грибы рода Candida взаимодействуют с различными микробами. Лактобациллы тормозят рост грибов, подавление нормальной флоры усиливает их размножение. Возможно сосуществование грибов с трихомонадами и гонококками. Иммунный ответ при генитальном кандидозе изучен недостаточно, сведения о реакциях гуморального и клеточного иммунитета противоречивы. Защитную роль против кандидозной инфекции играют фагоцитирующие клетки, среди которых преобладают нейтрофилы, проникающие в толщу пораженного эпителия.

Клинические проявления генитального кандидоза в основном сводятся к жалобам на зуд и выделения. Они могут быть жидкими, профузными с примесью творожистых включений или густыми, мазеподобными, зеленовато-белого цвета. Отмечается зависимость между степенью распространенности процесса и количеством выделений из влагалища. Выделения при кандидозе имеют кисловатый, неприятный запах.

Частым симптомом кандидоза половых органов является зуд, особенно сильный при поражении вульвы. Зуд бывает постоянным или беспокоящим во второй половине дня, вечером и ночью, усиливается после длительной ходьбы и во время менструации. Сильный зуд приводит к бессоннице и связанным с ней расстройствам нервной системы.

Зуд и жжение при мочеиспускании (вульвит, расчесы) могут вызвать задержку мочи и инфицирование мочевых путей. Иногда зуд — единственная жалоба при кольпите и цервиците, обусловленных кандидамикозом.

Характерный признак заболевания — налеты серовато-белого цвета на пораженной слизистой оболочке влагалища и эктоцервиксе, которые могут быть точечными или несколько крупнее (до 3-5 мм), имеют округлые или неправильные очертания, располагаются изолированно или сливаются друг с другом, состоят из псевдомицелия гриба, слущившихся клеток эпителия и лейкоцитов (обычно сегментоядерных). Слизистая оболочка в острой стадии заболевания гиперемирована, отечна, в хронической стадии имеет обычную окраску.

В острой стадии налеты снимаются с трудом, в состоянии ремиссии — легко. На их месте после удаления остается сильно гиперемированная слизистая оболочка, склонная к кровоточивости. При выраженном кандидозе такие изменения локализуются в области малых и больших половых губ, клитора, вокруг наружного отверстия уретры, в хронической стадии указанные симптомы менее выражены.

Стертые формы заболевания протекают с самого начала малосимптомно: обычно это непостоянный неинтенсивный зуд или выделения, почти не беспокоящие женщину.

Течение кандидоза длительное, заболевание нередко длится месяцы и даже годы. Обострения чаще всего совпадают по времени с менструацией или интеркуррентным заболеванием. Лечение не всегда дает стойкий результат, после курса терапии возможны рецидивы, особенно при наличии других очагов кандидоза в организме (реинфекция).

Распознаванию кандидоза способствуют типичные клинические симптомы (зуд, бели, характерные налеты и другие), выявляемые при опросе, осмотре при помощи зеркал и кольпоскопии. Однако точный диагноз устанавливают при использовании специальных методов исследования. Самым распространенным методом является микроскопия налетов, которые снимают с пораженных слизистых оболочек металлической петлей (исследуют препараты, неокрашенные и окрашенные по Граму, Романовскому). Проводят также посев материала на питательную среду с последующей идентификацией полученной культуры грибов (по морфологическим и другим признакам), используют и серологические методы.

Аллергическая кожная проба имеет диагностическое значение при диаметре папулы и эритемы 0,5-1 см. Наиболее надежна комплексная диагностика, включающая культуральный и серологические методы. Необходимость гистологического исследования возникает лишь при отсутствии точных результатов микроскопического, культурального и других методов исследования.

Лечение вагинального кандидоза должно быть комплексным, направленным на ликвидацию возбудителя, включать терапию сопутствующих заболеваний. Половым партнерам лечение проводят в случаях персистенции или рецидивов инфекции у женщин, даже при отсутствии симптомов заболевания.

Решающее значение в терапии вагинального кандидоза имеют противогрибковые препараты, как применяемые местно, так и системные антифунгиальные средства. Местно назначают свечи, вагинальные таблетки, гели, кремы, спринцевания 2% раствором натрия гидрокарбоната, калия перманганата (1:5000), введения во влагалище тампонов, смоченных 10-20% раствором натрия тетрабората в глицерине. Эффективны мази с противомикозными средствами: нистатином, леворином, клотримазолом, микозолоном, терконазолом, бутоконазолом, тиоконазолом, которые назначают на ночь на протяжении 3–7 дней. Таблетки, свечи вводят один раз в день (на ночь) в задний свод влагалища с помощью специального аппликатора; вульву обрабатывают кремом, мазью или гелем. Клотримазоловый крем (1%) используют также для инстилляции в уретру ежедневно на протяжении 5-6 дней. Во время беременности крем и таблетки, содержащие клотримазол, не используют, а рекомендуют такие препараты, как Пимафуцин, Тержинан, Гино-Певарил.

Для лечения кандидозного вульвовагинита у девочек рекомендуют использование водорастворимых натриевых солей леворина или нистатина (20000 ЕД на 1 мл воды). Растворы вводят во влагалище с помощью тонкого резинового катетера ежедневно (1-2 раза в день) на протяжении 2-3 недель. Область вульвы смазывают фунгицидными кремами или мазями, используют также 1% раствор генцианового фиолетового и метиленового синего.

При длительном течении заболевания местные противомикозные препараты назначают на протяжении 14-28 дней, по показаниям и во время следующего менструального цикла. Как правило, при местном применении препаратов в лечении вагинального кандидоза привычный ритм жизни пациентов нарушается, и многие не соблюдают режим лечения, что приводит к рецидивам заболевания. Кроме того, при местном лечении не охватывается вся поверхность и глубина слизистой, что, напротив, обеспечивают системные антимикотики, проникающие гематогенным путем в очаг воспаления. В случае резистентности к пролонгированной местной терапии необходимо назначение препаратов системного действия.

До недавнего времени парентерально широко назначались противогрибковые антибиотики леворин и нистатин, обладающие рядом нежелательных эффектов, таких как гепатотоксичность, снижение либидо, вкусовой чувствительности, резистентность со стороны возбудителя.

В последние годы разработаны новые антимикотики, лишенные этих побочных действий. Сегодня одним из основных системных препаратов для лечения вагинального кандидоза является производное триазола — флуконазол. Широкое его применение в клинической практике обусловлено выраженной противогрибковой активностью, низкой токсичностью, удобством применения препарата.

Флуконазол угнетает синтез грибковых стеролов, связывает группу гемазависимого от цитохрома Р450 фермента ланостерол-14-деметилазы грибковой клетки, нарушает синтез эргостерола, в результате чего ингибируется рост патогена. Флуконазол обладает высокой биодоступностью, после приема внутрь он хорошо всасывается в желудочно-кишечном тракте, его концентрация в крови составляет более 70% от уровня, достигаемого при внутривенном введении. Прием пищи не влияет на всасываемость, поэтому прием препарата не связан с едой, что выгодно отличает флуконазол от других антимикотических средств. Период полувыведения составляет около 30 часов, что позволяет назначать его один раз в сутки.

Течение грибковых заболеваний нередко сопровождается дефицитом витаминов в организме, поэтому в курс лечения необходимо включать поливитамины и пищевые продукты, богатые ими. По показаниям применяют общеукрепляющие и десенсибилизирующие средства.

Литература
  1. Безнощенко Г. Б. Неоперативная гинекология. М., Медкнига, 2001.
  2. Бурова С.А. Проблема грибковых заболеваний человека// Российский журнал кожных и венерических болезней, 1998, №1, с. 39-41.
  3. Вдовиченко Ю. П., Щербинская Е. С., Максимова В. В. Сравнительные аспекты терапии вагинальных кандидозов//Здоровье женщины, 2001, №4, с. 4-8.
  4. Запорожан В. М. Гінекологія. К., Здоров’я, 2000, с. 38-39.
  5. Коршунов В. М. и др. Микроэкология влагалища. Коррекция микрофлоры при вагинальных дисбактериозах. М., ВУНМЦ МЗ РФ, 1999.
  6. Лещенко В. М. Грибковые заболевания: современное состояние проблемы //Международный медицинский журнал, 1999, т. 5, № 3, с. 51-55.
  7. Прилепская В. Н., Байрамова Г. Р. Современные представления о вагинальном кандидозе //РМЖ, 1998, т. 6, № 5, с. 47-53.
  8. Сергеев А.Ю. Иммунитет при кандидозе //Иммунопатология, аллергология, инфектология, 1999, № 1, с. 81-86.
  9. Сметник В. П., Тумилович Л. Г. Неоперативная гинекология. М., Мед. информационное агентство, 2002, с. 328-334.
  10. Ткачик И. П. Кандидозы: актуальные аспекты проблемы,обоснование этиотропной терапии и профилактики//Клиническая антибиотикотерапия, 2000, № 5-6, с. 47-53.

СТАТТІ ЗА ТЕМОЮ

16.11.2021 Інфекційні захворювання Застосування препарату Аллуна при лікуванні постковідної інсомнії: вивчення ефективності та безпечності

Не менш як 50% населення в розвинених країнах страждають на порушення сну, а для 13% із них проблема є досить тяжкою. Проблем зі сном протягом життя зазнають близько 95% людей, при цьому більшість із них не отримують повноцінного специфічного лікування [1, 2]. За останні 3 роки проблема інсомнії загострилася. Інсомнія як наслідок пандемії коронавірусної хвороби (COVID-19) трапляється в практиці лікарів дедалі частіше. Це зумовлено як ускладненням перенесеного захворювання, так і стресовим станом, у якому перебуває більша частина населення, особливо у великих містах….

16.11.2021 Терапія та сімейна медицина Топ‑5 інфекційних захворювань у практиці сімейного лікаря

11-12 вересня на конференції професіоналів сімейної медицини Pro Family 2021 засновник МЦ Papasim, сімейний лікар, член European Respiratory Society, член української та південно-української академії педіатричних спеціальностей Костянтин Рогач висвітлив найчастіші інфекційні захворювання у практиці сімейного лікаря. Метою доповіді було розмежувати компетенції лікаря первинної ланки та лікаря вузького профілю, навести перелік необхідних кроків і призначень перед тим, як скерувати пацієнта на вторинний рівень медичної допомоги….

16.11.2021 Терапія та сімейна медицина Ключові аспекти ефективного та безпечного лікування офтальмологічних захворювань

1-2 жовтня відбулася офтальмологічна конференція Ophthalmic Hub 2021, під час якої провідні фахівці України обмінювалися досвідом і обговорювали найгостріші проблеми в офтальмології та суміжних медичних напрямах….

16.11.2021 Терапія та сімейна медицина Клінічний випадок диференціальної діагностики синдрому Шегрена в практиці лікаря-офтальмолога

Хвороба Шегрена (або первинний синдром Шегрена) – системне захворювання невідомої етіології, характерною рисою якого є хронічний автоімунний і лімфопроліферативний процес у секретуючих епітеліальних залозах з розвитком паренхіматозного сіаладеніту та сухого кератокон’юнктивіту. Синдром Шегрена (СШ), відомий також як вторинний синдром Шегрена, – ураження слинних і слізних залоз; розвивається в 5-25% хворих із системними захворюваннями сполучної тканини, частіше спостерігається в тих, хто має ревматоїдний артрит, а також у 50-75% хворих із хронічними автоімунними ураженнями печінки та щитоподібної залози (хронічний/активний гепатит, первинний біліарний цироз печінки, автоімунний тиреоїдит Хашимото тощо), рідше – за інших автоімунних захворювань [1]. Ця хвороба переважно уражає жінок середнього віку, але також може спостерігатися в дітей, чоловіків і літніх людей [7]….

Candida (кандидоз, молочница, молочница)

Автор: Hon A / Prof Amanda Oakley, дерматолог, Гамильтон, Новая Зеландия, 2003 г.


Что такое Candida?

Кандида — это название группы дрожжей (дрожжи — это разновидность грибка), которые обычно поражают кожу. Название «кандида» относится к белому цвету организмов в культуре. Кандидозная инфекция известна как «кандидоз», «кандидоз» или «монилиоз» (монилии также являются родом грибов-аскомицетов).

Кто заболевает кандидой?

Выживание Candida зависит от живого хозяина. Это нормальный обитатель пищеварительного тракта человека с раннего детства, где он живет, большую часть времени не вызывая никаких заболеваний. Однако, если защита хозяина снижена, организм может вызвать инфекцию слизистой оболочки (слизистой оболочки рта, ануса и гениталий), кожи и, в редких случаях, глубокую инфекцию.

Как классифицируется кандидоз?

Наиболее распространенным видом Candida (C), вызывающим кандидоз, является C.Альбиканс . Другие виды Candida, отличные от albicans:

  • C. tropicalis
  • C. парапсилоз
  • C. glabrata
  • C. guilliermondii

Кандидозные кожные инфекции включают:

Кандидозные кожные проблемы

См. Другие изображения кандидозной инфекции.

Факторы, предрасполагающие к кандидозной инфекции

Кожный кандидоз более вероятен при следующих обстоятельствах:

Инвазивный кандидоз

Инвазивный кандидоз означает распространение кандидоза через кровоток (кандидемия) и инфекция сердца, мозга, глаз, костей и др. ткани.Это происходит у пациентов, которые очень плохо себя чувствуют или у которых подавлен иммунитет. Обычные виды Candida обычно обнаруживаются в культуре, но иногда обнаруживается один из примерно 15 других видов, например:

См. Инфекции Candida Non-albicans.

Как диагностируется кандидоз?

Микроскопия и посев мазков с кожи и соскобов помогают в диагностике кандидозных инфекций. Однако кандиды могут совершенно безвредно жить на поверхности слизистой оболочки. Он также может вторично инфицировать основное кожное заболевание, такое как псориаз.Результаты лабораторных исследований должны быть соотнесены с клинической картиной.

Об инвазивном кандидозе (IC) — Министерство здравоохранения Миннесоты

На этой странице:
О IC
Отслеживание инфекций IC
Передача
Люди, подвергающиеся наибольшему риску
Подробнее о IC и устойчивости к противомикробным препаратам

Об инвазивном кандидозе (IC)

  • Candida — это тип дрожжей, который обычно встречается в желудочно-кишечном тракте и на коже людей.
  • У людей с определенными основными заболеваниями Candida может вызывать серьезную инфекцию, называемую инвазивным кандидозом (IC).
  • Большинство случаев ИЦ связаны с инфекциями, связанными с оказанием медицинской помощи (ИСМП). По оценкам, ежегодно в США происходит 46 000 случаев ИЦ.
  • Инфекции могут возникать в кровотоке (инфекция, называемая кандидемия), в сердце, мозге, глазах, костях и других глубоких тканях и органах тела.
  • Кандидемия — наиболее распространенная форма ИЦ и одна из самых распространенных инфекций кровотока HAI.
  • Противогрибковые препараты необходимы для лечения IC.
    • Устойчивость к противогрибковым препаратам Candida представляет собой растущую угрозу.
    • В 2013 году Центры по контролю и профилактике заболеваний описали устойчивый к флуконазолу Candida как серьезную опасность в своем списке угроз, устойчивых к противомикробным препаратам, с наибольшим воздействием на здоровье человека.

Отслеживание заражения ИС

  • MDH начал наблюдение за IC 1 января 2017 г. в районе метро с 7 округами (округа Анока, Карвер, Дакота, Хеннепин, Рэмси, Скотт и Вашингтон).
  • Эпиднадзор за ИЦ включает только кандидемию; другие инвазивные инфекции Candida в настоящее время не регистрируются.

Трансмиссия

  • Большинство инфекций ИЦ возникает, когда Candida , обычно обнаруживаемая у пациента, вводится в обычно стерильное место через повреждение кожи или слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта.Некоторые нарушения кожи или желудочно-кишечного тракта, которые могут быть связаны с ИЦ, включают наличие инвазивных устройств, операций на брюшной полости и вызванное химиотерапией повреждение слизистого барьера.
  • IC обычно не передается от человека к человеку, но иногда Candida может передаваться через руки медицинских работников или через зараженные медицинские устройства. Некоторые виды грибка Candida передаются таким образом с большей вероятностью, чем другие.

Люди, подвергающиеся наибольшему риску

  • IC чаще всего встречается у людей, которые:
    • Подавленная иммунная система
    • Частое или продолжительное пребывание в медицинских учреждениях, особенно в отделениях интенсивной терапии
    • Инвазивные медицинские устройства, такие как внутривенные катетеры
    • Длительный прием некоторых антибиотиков в анамнезе
    • Поступила в обширную абдоминальную операцию
  • Здоровые люди обычно не болеют инвазивными инфекциями, вызванными Candida.

Подробнее об IC и устойчивости к противомикробным препаратам

Информация о кандидозе | Гора Синай

Абдельмонем А.М., Рашид С.М., Мохамед АШ. Пчелиный мед и йогурт: новая смесь для лечения пациенток с кандидозным вульвовагинитом во время беременности. Арочный гинекологический акушерский аппарат . 2012; 286 (1): 109-14.

Джаннини П., Шетти К. Диагностика и лечение кандидоза полости рта. Отоларингологические клиники Северной Америки .Филадельфия, Пенсильвания: W.B. Компания Сондерс. 2011; 44 (1).

Хронек М., Вахтлова Д., Кудлацкова З., Йилек П. Противогрибковое действие некоторых природных соединений и пробиотиков и их возможное использование для профилактики вульвовагинита. Ceska Gynekol . 2005 сентябрь; 70 (5): 395-9.

Hatakka K, Ahola AJ, Yli-Knuuttila H, Richardson M, Poussa T., Meurman JH, Korpela R. Пробиотики снижают распространенность кандидоза полости рта у пожилых людей — рандомизированное контролируемое исследование. J Dent Res .2007 февраль; 86 (2): 125-30.

Ходаванди А., Ализаде Ф., Аала Ф., Секави З., Чонг П.П. Исследование in vitro противогрибковой активности аллицина в отдельности и в комбинации с азолами против видов Candida. Микопатология . 2009 19 ноября. [Epub перед печатью]

Макфи Р.А., Хаммелен Р., Бисанц Дж. Э., Миллер В. Л., Рид Г. Стратегии пробиотиков для лечения и профилактики бактериального вагиноза. Экспертное мнение Фармаколог . 2010 декабрь; 11 (18): 2985-95. Рассмотрение.

Мартинс Н., Феррейра IC, Баррос Л., Силва С., Энрикес М.Кандидоз: предрасполагающие факторы, профилактика, диагностика и народное лечение. Микопатология . 2014; 177 (5-6): 223-40.

Ньирджеси П., Робинсон Дж., Мэтью Л., Лев-Саги А., Рейес И., Калхейн Дж. Ф. Альтернативные методы лечения женщин с хроническим вагинитом. Акушерский гинекол . 2011 Апрель; 117 (4): 856-61.

Пеллати Д., Фиоре С., Арманини Д., Рассу М., Бертолони Г. Эффекты глицирретиновой кислоты in vitro на рост клинических изолятов Candida albicans. Phytother Res .2009 Апрель; 23 (4): 572-4.

Пиччиани Б.Л., Михальски-Сантос Б., Карнейро С. и др. Кандидоз полости рта у пациентов с псориазом: корреляция осмотра полости рта и цитопатологической оценки с тяжестью псориаза и лечением. Дж. Ам Акад Дерматол . 2013; 68 (6): 986-91.

Пиротта М., Ганн Дж., Хондрос П. и др. Влияние лактобацилл на предотвращение постантибиотического вульвовагинального кандидоза: рандомизированное контролируемое исследование. BMJ . 2004; 329: 548.

Santos VR, Gomes RT, de Mesquita RA, de Moura MD, França EC, de Aguiar EG, Naves MD, Abreu JA, Abreu SR.Эффективность бразильского геля прополиса для лечения стоматита зубных протезов: пилотное исследование. Фитосанитарная лаборатория . 2008 ноя; 22 (11): 1544-7.

Santos VR, Pimenta FJ, Aguiar MC, do Carmo MA, Naves MD, Mesquita RA. Лечение кандидоза полости рта экстрактом бразильского этанола и прополиса. Фитосанитарная лаборатория . 2005 июл; 19 (7): 652-4.

Vasconcelos LC, Sampaio MC, Sampaio FC, Higino JS. Применение Punica granatum в качестве противогрибкового средства против кандидоза, связанного с зубным стоматитом. Микозы . 2003; 46: 192-6.

van Boven JF, de Jong-van den Berg LT, Vegter S. Вдыхаемые кортикостероиды и возникновение кандидоза полости рта: анализ симметрии последовательности назначения. Сейф с наркотиками . 2013; 36 (4): 231-6.

Уотсон К., Калабретто Х. Всесторонний обзор традиционных и нетрадиционных методов лечения рецидивирующего кандидозного вульвовагинита. Aust N Z J Obstet Gynaecol . 2007 август; 47 (4): 262-72. Рассмотрение.

Watson CJ, Pirotta M, Myers SP, Myers P.Использование дополнительной и альтернативной медицины при рецидивирующем кандидозном вульвовагините — результаты опроса практикующего врача. Дополнение Ther Med . 2012; 20 (4): 218-21.

Витт А., Кауфманн У., Битшнау М., Темпфер С., Озбал А., Хайтоуглу Э, Грегор Х., Кисс Х. Ежемесячный итраконазол в сравнении с классической гомеопатией для лечения рецидивирующего кандидозного вульвовагинита: рандомизированное исследование. БЖОГ . 2009 Октябрь; 116 (11): 1499-505.

Паспортов безопасности патогенов: Инфекционные вещества — Candida albicans

РАЗДЕЛ I — ИНФЕКЦИОННЫЙ АГЕНТ

НАИМЕНОВАНИЕ: Candida albicans

СИНОНИМ ИЛИ ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА: Кандидоз, молочница, Candida claussenii , Candida langeronii 1Сноска 2 .

ХАРАКТЕРИСТИКИ: Candida albicans , из семейства Candidaceae Сноска 1 , инкапсулированный и диплоидный Сноска 1 . Это полиморфный гриб, поскольку он может встречаться в дрожжевых или псевдогифальных формах в зависимости от температуры, pH и питательных веществ. Footnote 3 . Форма дрожжей с отрастанием бластоконидий является наиболее распространенной, а формы псевдогиф не имеют надлежащих структурных форм, таких как параллельные стенки и перегородка настоящих гиф, которые похожи на ростки и могут образовывать толстостенные хламидоспоры Footnote 3 .Бесполое размножение происходит путем почкования с образованием бластоконидий Footnote 1Footnote 3 . Колонии появляются в течение 48-72 часов при культивировании на грибковой среде, такой как глюкозный агар Сабуро, при 37 ° C. Footnote 1 . Исходные колонии имеют морщинистую форму, которые при пересеве превращаются в гладкие колонии. Footnote 1 .

РАЗДЕЛ II — ИДЕНТИФИКАЦИЯ ОПАСНОСТИ

ПАТОГЕННОСТЬ / ТОКСИЧНОСТЬ: C. albicans является комменсальным патогеном, поскольку он входит в состав флоры желудочно-кишечного тракта, ротоглотки и женских половых органов. Footnote 3 .Однако он также является условно-патогенным микроорганизмом у людей. Footnote 4 , поскольку он может вызывать заболевания у иммунодефицитных и иммунокомпетентных людей, которые могут быть опасными для жизни. Footnote 5 . Наиболее частой клинической формой является кандидоз молочницы / полости рта, при котором инфекция может наблюдаться на языке, небе или других слизистых оболочках и характеризуется одиночными или множественными рваными белыми пятнами. Footnote 2Footnote 3 . Инфекция влагалища, вагинальный кандидоз, встречается в основном у беременных матерей, женщин с внутриматочными спиралями или у женщин, использующих оральные контрацептивы Сноска 2 и характеризуется густыми творожистыми выделениями (лейкорея), высыпаниями и зудом вульвы Сноска 2 Сноска 3 .Предшествующий прием антибиотиков и диабет также являются факторами риска развития кандидоза. Кандидоз пищевода проявляется воспалительными пятнами, которые развиваются на пищеводе, вызывая болезненное глотание и боль в груди за грудиной. Footnote 3 . У пациентов с ослабленным иммунитетом (например, с ВИЧ-инфекцией) подобные поражения также могут возникать в тонком кишечнике и желудке. Footnote 3Footnote 5 . Хронический кожно-слизистый кандидоз — редкое генетическое заболевание, которое возникает у людей с дефектами иммунного ответа против Candida .Он включает хронические инфекции кожи, волос, лица, волосистой части головы и рук и может распространяться в более глубокие ткани и основные органы тела, такие как почки, сердце и мозг. кровью) и смерть Сноска 2 Сноска 3 . Инфекции ногтя (паронихиальный и онихомикотический кандидоз), поверхностная инвазия слизистых оболочек, кожные инфекции мацерированной кожи (в складках бедра, области подгузников у младенцев), глазные инфекции, такие как эндофтальмит, являются примерами других инфекций, вызванных C.albicans Сноска 2 Сноска 3 Сноска 5 .

ЭПИДЕМИОЛОГИЯ : C. albicansis распространена во всем мире. Он был изолирован от почвы, животных, больниц, неодушевленных предметов и продуктов питания Footnote 7Footnote 8 . Хотя слизисто-кишечные инфекции, вызванные C. albicans, могут возникать как у иммунокомпетентных, так и у иммуносупрессивных лиц, инвазивный кандидоз, такой как кандидемия / системное заболевание, наблюдается только у лиц с тяжелым иммунодефицитом Footnote 7Footnote 9 .Факторы риска, связанные с развитием инвазивного кандидоза, включают: терапию антибиотиками; введение стероидов, иммунодепрессантов или химиотерапии; предшествующая операция; трансплантаты твердых органов или гемопоэтических стволовых клеток; такие заболевания, как СПИД, лейкемия, диабет и лимфома; а также пациенты с травмами и ожогами Сноска 2 Сноска 7 Сноска 9 . После введения ВААРТ (высокоактивная антиретровирусная терапия) снизилась частота кандидоза полости рта у ВИЧ-инфицированных Footnote 7 .C. albicans является наиболее распространенным грибковым патогеном, ответственным за внутрибольничные системные инфекции Footnote 7 , а также наиболее часто выделяемый патоген из клинических образцов, полученных из слизистых оболочек, таких как ротовая полость, желудочно-кишечный тракт и влагалище Footnote 7 .

ДИАПАЗОН ХОЗЯЙСТВА: Люди.

ИНФЕКЦИОННАЯ ДОЗА: Неизвестно.

СПОСОБ ПЕРЕДАЧИ: Большинство инфекций возникает в результате собственной флоры пациента, а не перекрестной инфекции. Footnote 3 .Сообщается, что внутрибольничная передача, хотя и редко, происходит от неодушевленной поверхности, от рук медицинских работников или между пациентами. Footnote 4Footnote 10 .

ПЕРИОД ИНКУБАЦИИ: Неизвестно.

СВЯЗЬ: Передача от человека к человеку может происходить между членами семьи или между пациентами, хотя и редко. Footnote 4Footnote 10 .

РАЗДЕЛ III — РАСПРОСТРАНЕНИЕ

РЕЗЕРВУАР: Candida albicans является частью нормальной флоры желудочно-кишечного тракта, влагалища и ротоглотки человека Footnote 5 .

ЗООНОЗ: Нет.

ВЕКТОР: Нет.

РАЗДЕЛ IV — УСТОЙЧИВОСТЬ И ЖЕСТКОСТЬ

ЛЕКАРСТВЕННАЯ УСТОЙЧИВОСТЬ: Показана восприимчивость к амфотерицину B, нистатину, флуцитозину, азолам, эхинокандинам и комбинированным лекарственным препаратам. Footnote 3 . Местные и пероральные азолы, такие как бутоконазол, клотримазол, триазол и липогель эконазол, могут использоваться против вагинального кандидоза. Системные противогрибковые препараты, такие как флуконазол или итраконазол, можно использовать для лечения кандидозных инфекций слизистых оболочек.Вориконазол и эхинокандины могут быть эффективными против кожного кандидоза Footnote 2 , хотя азол является предпочтительным, а инвазивный кандидоз можно лечить каспофунгином или липидными препаратами амфотерицина B Footnote 2Footnote 3 . Позаконазол используется для лечения орального, но не системного кандидоза Footnote 11 .

ЛЕКАРСТВЕННАЯ УСТОЙЧИВОСТЬ : Устойчивость C. albicans к флуконазолу была связана с повторным использованием этого препарата, особенно у пациентов с ослабленным иммунитетом, которые постоянно принимают это лекарство для профилактики. Footnote 7Footnote 11 .Также сообщается о резистентности к эхинокандинам. Footnote 11 .

УСТОЙЧИВОСТЬ К ДЕЗИНФЕКЦИОННЫМ СРЕДСТВАМ: Штаммы Candida albicans могут быть эффективно уничтожены гипохлоритом натрия (5% и 0,5%), йодом (2%) и йодидом калия (4%) в течение 30 секунд Footnote 12 . Хлоргексидина ацетат (0,5%) способен полностью убить штаммов C. albicans в течение 5 минут Footnote 12 . Штаммы C. albicans устойчивы к гидроксиду кальция Footnote 12 . Изоляты C. albicans также чувствительны к 70% этанолу, 0,5% экодиолу и комбинации 1,2% гипохлорита натрия и 0,5% экодиола. Footnote 13 .

ФИЗИЧЕСКАЯ НЕАКТИВАЦИЯ: Было показано, что УФ-свет снижает грибковую нагрузку, но неэффективен для полного уничтожения дрожжей. Footnote 13 . Большинство микроорганизмов также инактивируются влажным теплом (121 ° C в течение 15–30 минут). Footnote 14 .

ВЫЖИВАНИЕ ВНЕ ДОМА: C.albicans может выживать на неодушевленных поверхностях от 24 часов до 120 дней, а на ладонях — около 45 минут. Footnote 10 . C. albicans был выделен из простыней, детских кроваток и умывальников детских садов; также было обнаружено, что он способен выживать и расти в дистиллированной воде при комнатной температуре. Footnote 15 . Грибок может выжить при сушке в темноте в течение 5 часов и 1 час, если также подвергаться воздействию света.

РАЗДЕЛ V — ПЕРВАЯ ПОМОЩЬ / МЕДИЦИНСКАЯ

НАБЛЮДЕНИЕ: Наблюдать за симптомами.Прямое исследование гриба или грибка в культуре в клиническом образце может подтвердить наличие инфекции, если наблюдаются ключевые характеристики (размер и форма дрожжей, наличие псевдофипахов, бластоконидий, хламидоспор, а также отсутствие артроконидий и капсулы) Сноска 1 . Другие методы включают биохимические тесты, серологические методы, такие как RIA и ELISA, и методы молекулярной биологии, такие как REA (анализ рестрикционных ферментов), ПЦР и PGFE (гель-электрофорез в импульсном поле) Footnote 1Footnote 2 .

Примечание. Не все методы диагностики доступны во всех странах.

ПЕРВАЯ ПОМОЩЬ / ЛЕЧЕНИЕ: Проведите надлежащую медикаментозную терапию. Устранение предрасполагающих факторов, таких как прием антибиотиков, стероидов и иммунодепрессантов; влажность, местная мацерация, pH влагалища, удаление инфицированного катетера могут помочь в лечении инфекций Footnote 2Footnote 3 .

ИММУНИЗАЦИЯ: Нет.

ПРОФИЛАКТИКА: Хотя флуконазол использовался для профилактики C.albicans у ВИЧ-инфицированных пациентов, его длительное воздействие было связано с появлением устойчивых к флуконазолу штаммов. Footnote 7 .

РАЗДЕЛ VI — ЛАБОРАТОРНЫЕ ОПАСНОСТИ

ИНФЕКЦИИ, ПОЛУЧЕННЫЕ В ЛАБОРАТОРИИ: Низкий риск заражения лабораторного работника Footnote 5 . Сообщается, что у студента-медика появилась сыпь и фолликулит через 2 дня после того, как она пролила тяжелую суспензию C. albicans на ногу во время проведения лабораторного эксперимента. Footnote 5 .

ИСТОЧНИК / ОБРАЗЦЫ: Соскоб эпителия или экссудаты из поражений; мокрота; бронхоальвеолярный лаваж; кровь Сноска 3 .

ОСНОВНЫЕ ОПАСНОСТИ: Случайная парентеральная инокуляция, прямое воздействие патогена на кожу.

ОСОБЫЕ ОПАСНОСТИ: Нет.

РАЗДЕЛ VII — КОНТРОЛЬ ВОЗДЕЙСТВИЯ / ЛИЧНАЯ ЗАЩИТА

КЛАССИФИКАЦИЯ ГРУПП РИСКА: Группа риска 2 Сноска 16 .

ТРЕБОВАНИЯ К СРЕДЕ : Помещения, оборудование и операционные методы уровня 2 для работы с инфекционными или потенциально инфекционными материалами, животными или культурами.

ЗАЩИТНАЯ ОДЕЖДА : Лабораторный халат. Перчатки при неизбежном прямом контакте кожи с инфицированными материалами или животными. Защита глаз должна использоваться там, где существует известный или потенциальный риск воздействия брызг. Footnote 17 .

ДРУГИЕ МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ : Все процедуры, которые могут привести к образованию аэрозолей, или связаны с высокими концентрациями или большими объемами, должны проводиться в шкафу биологической безопасности ( BSC ). Использование игл, шприцев и других острых предметов должно быть строго ограничено.Дополнительные меры предосторожности следует учитывать при работе с животными или крупномасштабной деятельности. Footnote 17 .

РАЗДЕЛ VIII — ОБРАЩЕНИЕ И ХРАНЕНИЕ

РАЗЛИВЫ: ​​ Дайте аэрозолям осесть и, надев защитную одежду, аккуратно накройте разлив бумажными полотенцами и нанесите соответствующее дезинфицирующее средство, начиная с периметра и двигаясь к центру. Прежде чем приступить к очистке, дайте достаточно времени для контакта. Сноска 17 .

УТИЛИЗАЦИЯ: Перед утилизацией обеззаразите все отходы, которые содержат инфекционный организм или контактировали с ним, с помощью автоклава, химической дезинфекции, гамма-облучения или сжигания. Footnote 17 .

ХРАНЕНИЕ: Инфекционный агент следует хранить в герметичных контейнерах, имеющих соответствующую маркировку Footnote 17 .

РАЗДЕЛ IX — НОРМАТИВНАЯ И ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ

НОРМАТИВНАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Импорт, транспортировка и использование патогенных микроорганизмов в Канаде регулируется многими регулирующими органами, в том числе Агентством общественного здравоохранения Канады, Министерством здравоохранения Канады, Канадским агентством по инспекции пищевых продуктов, окружающей средой Канады и Министерством транспорта Канады.Пользователи несут ответственность за соблюдение всех соответствующих законов, постановлений, руководств и стандартов.

ОБНОВЛЕНО: Ноябрь 2011

ПОДГОТОВЛЕНО: Управление по регулированию патогенов, Агентство общественного здравоохранения Канады. Хотя информация, мнения и рекомендации, содержащиеся в этом паспорте безопасности патогенов, собраны из источников, которые считаются надежными, мы не несем ответственности за точность, достаточность или надежность, а также за любые убытки или травмы, возникшие в результате использования информации.Часто обнаруживаются новые опасности, и эта информация может быть не полностью актуальной.

Авторские права © Агентство общественного здравоохранения Канады, 2011 г. Канада

границ | Доклиническая визуализация инвазивного кандидоза с использованием ImmunoPET / MR

Введение

Инфекционные болезни являются ведущей причиной смерти во всем мире, при этом грибки ежегодно вызывают около двух миллионов опасных для жизни инфекций (Brown et al., 2012). В настоящее время отсутствуют диагностические тесты, которые могут точно обнаруживать и дифференцировать инфекционные организмы, что приводит к неправильному использованию противомикробных препаратов и возникновению устойчивости к антибиотикам и противогрибковым препаратам.Неинвазивная молекулярная визуализация имеет огромный потенциал для отслеживания инфекционных заболеваний (Santangelo et al., 2015; Rolle et al., 2016; Wiehr et al., 2016; Davies et al., 2017), но традиционные методы радиологической визуализации, такие как компьютерные томография (КТ) и магнитно-резонансная томография (МРТ), производя высококонтрастные изображения всех структур внутри человеческого тела, полагаются на структурные аномалии в тканях и органах, чтобы различать инфекционные и неинфекционные патологии (Thornton, 2018).Напротив, молекулярная визуализация может обеспечить высокоспецифичную и чувствительную визуализацию под контролем антител вирусных (Santangelo et al., 2015), бактериальных (Wiehr et al., 2016) и грибковых заболеваний (Rolle et al., 2016; Davies et al., 2017) на животных моделях болезни с реальным потенциалом для применения в клинических условиях (Davies et al., 2017).

Инвазивный кандидоз (ИК) — опасное для жизни заболевание, вызываемое родом Candida . Заболевание, которое включает в себя как кандидемию (дрожжевую инфекцию кровотока), так и глубоко укоренившийся кандидоз (инфицирование тканей под слизистыми оболочками) (Clancy and Nguyen, 2013), может возникнуть после хирургического вмешательства на желудочно-кишечном тракте, которое позволяет грибку проникать в слизистую оболочку (Vincent и другие., 2014), в то время как нейтропения, вызванная химиотерапией или иммуносупрессией у пациентов с трансплантацией солидных органов или гематологических стволовых клеток, ухудшает распознавание иммунной системой и клиренс клеток Candida , что приводит к диссеминированным инфекциям (Safdar and Armstrong, 2011). По оценкам, ежегодно во всем мире происходит около 400000 случаев инфицирования кровотоком Candida (Brown et al., 2012), что составляет около 3% всех нозокомиальных инфекций в Европе и около 12% в США (Schmiedel and Zimmerli, 2016). .В настоящее время ИЦ является четвертой по распространенности инфекцией кровотока после стафилококковой и энтерококковой инфекций, хотя ИЦ несет гораздо более высокие показатели смертности (Wisplinghoff et al., 2004; Lewis, 2009).

В то время как не albicans Candida видов появились в качестве патогенов лиц с ослабленным иммунитетом за последние годы (Chi et al., 2011; Papon et al., 2013; Pfaller et al., 2014), Candida albicans остается наиболее частой причиной инфекций слизистых оболочек и системных инфекций и является причиной до 70% случаев во всем мире (Diekema et al., 2012; Гвинея, 2014 г.). Раннее обнаружение возбудителя имеет решающее значение для быстрого и эффективного лечения противогрибковыми препаратами. Текущий «золотой стандарт» для обнаружения основан на посеве грибка из крови, но посев крови положительный только в 50–70% случаев, медленный и редко дает положительный результат у пациентов с глубоко укоренившимся кандидозом (Clancy и Нгуен, 2013). В то время как анализы, не основанные на культуре, которые обнаруживают нуклеиновых кислот Candida , грибковый β- D -глюкан и Candida маннановый антиген (Mn) и антиманнановые антитела (A-Mn) в сыворотках пациентов, обладают потенциальными преимуществами по сравнению с культурой. (Эллис и др., 2009; Avni et al., 2011; Jaijakul et al., 2012), им присущи собственные слабые стороны в специфичности и чувствительности, и они не могут идентифицировать метастатические очаги при глубоко расположенных инфекциях Candida ( Candida ) (Clancy and Nguyen, 2013).

Позитронно-эмиссионная томография и магнитно-резонансная томография (ПЭТ / МРТ) — чрезвычайно мощный инструмент для диагностики рака, но его использование для обнаружения микробных инфекций все еще находится в зачаточном состоянии. Несмотря на это, недавно мы продемонстрировали огромный потенциал иммунной ПЭТ / МРТ для визуализации инвазивного легочного аспергиллеза (IPA), заболевания легких людей с ослабленным иммунитетом, вызываемого повсеместно распространенной воздушно-капельной плесенью Aspergillus fumigatus (Rolle et al., 2016; Davies et al., 2017; Торнтон, 2018). В настоящем исследовании мы решили определить, действительно ли недавно разработанное Candida -специфическое моноклональное антитело (mAb) (MC3) при конъюгировании с [ 64 Cu] с использованием хелатора 2,2 ‘- (7- (1 -карбокси-4 — ((2,5-диоксопирролидин-1-ил) окси) -4-оксобутил) -1,4,7-триазонан-1,4-диил) диуксусная кислота (NODAGA), может быть использована в качестве специфичный для болезни индикатор в иммуноПЭТ / МРТ для выявления глубоко укоренившихся инфекций C. albicans in vivo после инфицирования кровотока.Мы демонстрируем, используя модель внутривенного (iv) заражения IC, которая точно имитирует диссеминированную инфекцию C. albicans у людей (MacCallum and Odds, 2005; Conti et al., 2014), точность [ 64 Cu] Индикатор NODAGA-MC3 при обнаружении инфекций глубоких органов и демонстрирует, что иммунный ПЭТ на основе антител может успешно использоваться для неинвазивной идентификации этого проблемного заболевания in vivo .

Материалы и методы

Заявление об этике

Работа с гибридомой

, описанная в этом исследовании, проводилась в соответствии с лицензией на проект Министерства внутренних дел Великобритании и была рассмотрена Советом по этике благополучия животных (AWERB) для утверждения.Работа проводилась в соответствии с Директивой 2010/63 / EU Закона 1986 года о животных (научные процедуры) и следовала всем Кодексам практики, усиливающим этот закон, включая все элементы содержания, ухода и эвтаназии животных. Все работы по молекулярной визуализации животных выполнялись в отделении доклинической визуализации и радиофармации (Центр визуализации Вернера Сименса, Университет Эберхарда Карлса в Тюбингене, Германия) и выполнялись в соответствии с протоколами, утвержденными Regierungspräsidium Tübingen (номер разрешения: R9 / 16). в соответствии с руководящими принципами Европейского закона о здравоохранении Федерации ассоциаций лабораторных животных (FELASA).

Грибковые культуры

Грибы, используемые для тестов на специфичность антител, выращивали на склонах декстрозного агара Сабуро [SDA; Бульон SD (S3306, Sigma), агар (MC006, Neogen) 20 г / л], агар с глюкозо-пептонно-дрожжевым экстрактом {GPYA; Среда GPY [глюкоза 40 г / л, бактериологический пептон (LP0037, Oxoid) 5 г / л, дрожжевой экстракт 5 г / л}, содержащий агар 15 г / л] или картофельный агар с декстрозой [PDA; картофельный бульон с декстрозой (P6685, Sigma), агар 20 г / л]. Все среды автоклавировали при 121 ° C в течение 15 минут перед использованием, а грибы выращивали при 26 ° C в 16-часовом режиме флуоресцентного света.

Подготовка иммуногена и режима иммунизации

Candida albicans штамм SC5314 был выбран для разработки гибридомы, поскольку он принадлежит к преобладающей кладе близкородственных штаммов C. albicans , что составляет почти 40% всех изолятов во всем мире, как было определено с помощью ДНК-фингерпринта и многолокусного типирования последовательностей ( Soll and Pujol, 2003). Трехдневные культуры чашек Петри GPYA C. albicans SC5314, выращенные при 26 ° C, заливали 20 мл стерильной воды Milli-Q (MQ-H 2 O) и суспендированные клетки быстро замораживали в жидкости N 2 , лиофилизированный и помещенный при -20 ° C для длительного хранения.Иммуноген получали путем повторного суспендирования лиофилизированных клеток в стерильном отфильтрованном фосфатно-солевом буфере (PBS; 137 мМ NaCl, 2,7 мМ KCl, 8 мМ Na 2 HPO 4 и 1,5 мМ KH 2 PO 4 , pH 7,2) и суспензии с концентрацией 2 мг / мл инактивировали нагреванием путем помещения при 55 ° C на 45 мин. Иммуноген хранили при -20 ° C перед иммунизацией животных. Для иммунизации каждой из четырех 6-недельных белых самок мышей BALB / c (Charles River) сделали четыре внутрибрюшинных инъекции (300 мкл на инъекцию) иммуногена с 2-недельными интервалами, а за 5 дней до этого сделали одну бустерную инъекцию. слияние.

Производство и скрининг гибридом и определение специфичности антител

Клетки гибридомы

получали способом, описанным в другом месте (Thornton, 2001), и клоны-продуценты mAb, идентифицированные в тестах ELISA, с использованием растворимых антигенов из иммуногена C. albicans SC5314, иммобилизованного в лунках микротитровальных планшетов Nunc F96 Maxisorp (442402, Thermo Fisher Scientific) по 50 мкл / лунку. Положительные клеточные линии тестировали на специфичность mAb против смывной поверхности из репликатов SDA наклонных культур дрожжей, дрожжеподобных и нитчатых грибов (дополнительная таблица S1), приготовленных, как описано в другом месте (Thornton, 2001).Затем специфичность Candida -специфических моноклональных антител были дополнительно протестированы с использованием растворов антигенов, приготовленных из чашек для культивирования SDA в чашках Петри, инокулированных суспензиями клеток патогенных дрожжей человека C. albicans (SC5314), Candida glabrata (CBS4962), Trichosporon. asahii var. asahii (CBS5286) или Cryptococcus neoformans (CBS7779), либо как культуры одного вида, либо как культуры смешанных видов (дополнительный рисунок S1).После 24 ч инкубации при 26 ° C растворы антигенов были приготовлены путем заливки планшетов 10 мл PBS, суспендирования клеток с использованием стерильных L-образных разбрасывателей и осаждения клеток центрифугированием при 14 500 об / мин в течение 5 минут. Концентрации белка, определенные спектрофотометрически при 280 нм (Nanodrop; Agilent Technologies), были доведены до 60 мкг / мл, и объемы 50 мкл были использованы для покрытия лунок планшетов для микротитрования, которые инкубировали в течение ночи при 4 ° C. Лунки промывали трижды PBST (PBS, содержащий 0.05% (об. / Об.) Tween-20), один раз с PBS и один раз с dH 2 O перед сушкой на воздухе при 23 ° C в вытяжном шкафу с ламинарным потоком. Планшеты запечатывали в пластиковые пакеты и хранили при 4 ° C для подготовки к анализу с помощью ELISA.

Иммуноферментный анализ, связанный с ферментом

Лунки, содержащие иммобилизованные антигены, инкубировали в течение 15 мин с 200 мкл PBS, содержащего 1,0% (мас. / Об.) Бычьего сывороточного альбумина (BSA; A7906, Sigma) в качестве блокатора. После 5-минутной промывки PBS лунки инкубировали с 50 мкл супернатанта культуры ткани гибридомы (TCS) mAb в течение 1 часа, после чего лунки промывали три раза по 5 минут каждая с PBST.Конъюгат козьего антимышиного поливалентного иммуноглобулина (G, A, M) с пероксидазой (A0412, Sigma), разбавленный 1: 1000 в PBST, содержащем 0,5% (мас. / Об.) BSA, добавляли в лунки и инкубировали еще в течение часа. Планшеты промывали PBST, как описано, подвергали заключительной 5-минутной промывке PBS и связанное антитело визуализировали путем инкубации лунок с 3,3 ‘, 5,5’ раствором субстрата тетраметилбензидина (T2885, Sigma) (Thornton, 2001) в течение 30 минут. мин, после чего реакции останавливали добавлением 3 MH 2 SO 4 .Значения поглощения определяли при 450 нм с использованием считывающего устройства для микропланшетов (Tecan GENios, Tecan Austria GmbH). Контрольные лунки инкубировали только со средой для культивирования тканей (TCM), содержащей 10% (об. / Об.) Фетальной бычьей сыворотки (FBS; FCS-SA, Labtech). Все этапы инкубации проводили при 23 ° C в герметичных пластиковых пакетах. Порог обнаружения антигена в ELISA определяли с помощью контрольных значений (значения абсорбции 2 × TCM) (Sutula et al., 1986). Эти значения постоянно находились в диапазоне 0,050–0,100.Следовательно, значения оптической плотности> 0,100 считались положительными для обнаружения антигена.

Определение класса Ig и процедура субклонирования

Класс mAb Ig определяли с помощью антиген-опосредованного ELISA (Thornton, 2001). Лунки микротитрационных планшетов, покрытые водорастворимыми антигенами после промывки поверхности C. albicans SC5134, инкубировали последовательно с гибридомным TCS в течение 1 ч, затем козьими антимышиными IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3, IgM или IgA-специфичными. антисыворотка (ISO-2, Sigma), разведенная 1: 3000 в PBST в течение 30 минут, и конъюгат кроличьей анти-козьей пероксидазы (A5420, Sigma), разведенный 1: 1000 в течение следующих 30 минут.Связанное антитело визуализировали с помощью субстрата TMB, как описано. Клеточные линии гибридомы были субклонированы три раза путем ограничивающего разведения, и клеточные линии выращивали в массе в неселективной среде, консервировали путем медленного замораживания в FBS / диметилсульфоксиде (92: 8 об. / Об.) И хранили в жидком N 2 .

Характеристика эпитопа термической, химической и ферментативной модификацией

Термостабильность антигенов исследовали, помещая смывы C. albicans SC5134 в кипящую водяную баню.С 10-минутными интервалами в течение 60-минутного периода образцы объемом 1 мл удаляли, охлаждали и центрифугировали при 14 500 об / мин в течение 5 минут. Пятьдесят микролитров супернатантов иммобилизовали в лунках микротитровальных планшетов для анализа с помощью ELISA, как описано. Для окисления периодатом микротитровальные лунки, покрытые растворимыми антигенами в смывах поверхности, инкубировали с 50 мкл раствора мета-периодата натрия (20 мМ NaIO 4 в 50 мМ натрий-ацетатном буфере, pH 4,5) или только ацетатным буфером (контроль) в течение 24 дней. , 4, 3, 2, 1 или 0 ч при 4 ° C в герметичных пластиковых пакетах.Перед обработкой с помощью ELISA, как описано, планшеты четыре раза промывали 3-минутным PBS. Для протеазного переваривания микротитровальные лунки, содержащие иммобилизованные антигены, инкубировали с 50 мкл раствора проназы (протеаза XIV; P5147, Sigma) с концентрацией 0,9 мг / мл, раствором трипсина (1 мг / мл в MQ-H 2 O) или Только PBS и MQ-H 2 O (контроли) в течение 4 часов при 37 или 4 ° C. Планшеты промывали четыре раза по 3 мин PBS, а затем анализировали с помощью ELISA, как описано.

Очищенный

Candida albicans Маннан клеточной стенки

Candida albicans маннаны клеточной стенки, очищенные методом Longbottom et al.(1976), были получены из Национального института биологических стандартов и контроля (каталог 76/515). Лиофилизированный материал ресуспендировали в MQ-H 2 O для создания маточного раствора 1 мг / мл, который хранили при -20 ° C перед использованием. Образец исходного раствора маннана разбавляли 1: 2 (об: об) PBS, а затем дважды разбавляли в PBS по лункам микротитровальных планшетов по 50 мкл на лунку. Затем проводили ELISA, как описано. Для исследований вестерн-блоттинга исходный маннан разбавляли в буфере Лэммли (Laemmli, 1970) и денатурировали нагреванием при 95 ° C в течение 10 минут.

Candida albicans Мутанты маннана

Candida albicans штаммы дикого типа SC5134 и NGY152, и маннановые мутанты NGY152 [Δ pmr1 , Δ och2 , Δ mnn4 и Δ mnt1,2 , 2013), Hall and Gow. выращивали на склонах SDA в течение 3 дней и смывки поверхностей, содержащие водорастворимые антигены, получали с использованием стерильного MQ-H 2 O, как описано. Промывные воды центрифугировали в течение 5 минут при 14 500 об / мин, и концентрации белка в супернатанте, определенные спектрофотометрически при 280 нм, доводили до 60 мкг / мл с использованием PBS.Объемы пятьдесят мкл использовали для покрытия лунок планшетов для микротитрования, которые анализировали с помощью ELISA, как описано. Для вестерн-блоттинга смывные поверхности разбавляли буфером Лэммли и денатурировали нагреванием при 95 ° C в течение 10 минут.

Для исследования выделения внеклеточного антигена (дополнительная фигура S2) штаммы дикого типа и мутантные штаммы C. albicans выращивали в виде наклонных культур SDA в течение 3 дней и суспензии дрожжевых клеток получали, как описано. После промывания стерильным MQ-H 2 O суспензии клеток доводили до 10 3 клеток / мл перед добавлением объемов 1 мл в реплицируемые колбы, содержащие 100 мл автоклавированной среды GPY.Культуры встряхивали (125 об / мин) при 26 ° C, и через 3 дня жидкости удаляли и центрифугировали при 14 500 об / мин. Пятьдесят мкл образцов супернатантов, содержащих 60 мкг белка / мл, использовали для покрытия лунок микротитровальных планшетов, которые анализировали с помощью ELISA, как описано. Для вестерн-блоттинга культуральные жидкости разбавляли буфером Лэммли и денатурировали нагреванием при 95 ° C в течение 10 минут.

Электрофорез в полиакриламидном геле и вестерн-блоттинг

Электрофорез в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS-PAGE) проводили с использованием полиакриламидных гелей с градиентом 4–20% (161-1159, Bio-Rad) в денатурирующих условиях.Белки разделяли электрофоретически при 165 В и предварительно окрашенные маркеры (161-0318, Bio-Rad) использовали для определения молекулярной массы. Для вестерн-блоттинга разделенные белки электрофоретически переносили на PVDF-мембрану (162-0175, Bio-Rad) в течение 2 часов при 75 В, и мембрану блокировали в течение 16 часов при 4 ° C с помощью PBS, содержащего 1% (мас. / Об. ) BSA. Блокированные мембраны инкубировали с гибридомной TCS, разведенной 1: 2 (об. / Об.) С PBS, содержащим 0,5% (мас. / Об.) BSA (PBSA), в течение 2 часов при 23 ° C. После трехкратной промывки PBS мембраны инкубировали в течение 1 ч с конъюгатом щелочной фосфатазы козьего антимышиного IgG (цельная молекула) (A3562, Sigma), разведенным 1: 15 000 в PBSA.Мембраны трижды промывали PBS, один раз PBST и связанное антитело визуализировали путем инкубации в растворе субстрата (Thornton, 2008). Реакции останавливали погружением мембран в dH 2 O, а затем мембраны сушили на воздухе между листами фильтровальной бумаги Whatman.

Иммунофлуоресценция

Предметные стекла

стерилизовали автоклавированием и покрывали промытыми клетками SC5314, суспендированными в 1% (мас.: Об.) Растворе глюкозы для образования бластоспор или в 20% (об: об) FBS для индукции образования гиф.Срезы инкубировали во влажной камере при 26 ° C в течение 16 часов (образование бластоспор) или при 37 ° C в течение 5 часов (индукция гиф). После сушки на воздухе клетки фиксировали в соответствии с методом, описанным в другом месте (Thornton, 2001). Фиксированные клетки инкубировали с гибридомой TCS в течение 1 часа с последующими тремя 5-минутными промывками в PBS. Затем образцы инкубировали с конъюгатом козьего антимышиного поливалентного флуоресцеинизотиоцианата (FITC) (F1010, Sigma), разведенного 1:40 в PBS, в течение 30 минут. Им дали три 5-минутных промывки PBS и поместили в монтажную среду PBS-глицерин (F4680, Sigma) перед наложением покровных стекол.Все этапы инкубации выполнялись при 23 ° C во влажной среде, чтобы предотвратить испарение, и предметные стекла хранили в темноте при 4 ° C перед исследованием с использованием эпифлуоресцентного микроскопа (Olympus IX81), оснащенного 495 нм (возбуждение) и 518 нм (эмиссионные) фильтры для FITC.

Очистка mAb MC3

Hybridoma TCS собирали центрифугированием при 2147 g в течение 40 минут при 4 ° C с последующей фильтрацией через фильтр из ацетата целлюлозы 0,8 мкм (10462240, GE Healthcare Life Sciences, Великобритания).Супернатант культуры загружали в колонку HiTrap Protein A (17-0402-01, GE Healthcare Life Sciences) с помощью перистальтического насоса P-1 (18-1110-91, GE Healthcare Life Sciences) с низкой пульсацией потока 1 мл / мл. мин. Колонки уравновешивали 10 мл PBS, и связанное с колонкой антитело элюировали 5 мл 0,1 М глицин-HCl буфера (pH 2,5) со скоростью потока 0,5 мл / мин. Буфер очищенного антитела заменяли на PBS с использованием одноразовой обессоливающей колонки PD-10 (17-0851-01, GE Healthcare Life Sciences).После очистки антитело стерильно фильтровали с помощью шприцевого фильтра 0,24 мкм (85037-574-44, Sartorius UK Ltd., Великобритания) и хранили при 4 ° C. Концентрацию белка определяли с помощью спектрофотометра, а чистоту подтверждали с помощью SDS-PAGE и окрашивания геля с использованием красителя Coomassie Brilliant Blue R-250 (Thermo Fisher Scientific).

Конъюгация mAb MC3

mAb MC3, очищенное белком A, забуферивали 0,1 М карбонатом натрия (pH 9, обработанное Chelex) с использованием фильтрующего устройства Amicon Ultra-15 (MWCO 30 кДа, Merck Millipore, Дармштадт, Германия).Двадцать молярных эквивалентов хелатора p-NCS-Bz-NODAGA (Chematech, Dijon, France) реагировали с антителом в течение 60 мин при комнатной температуре с последующей очисткой антитела через фильтр Amicon Ultra-15 с использованием 0,25 М ацетата натрия, обработанного Chelex. (pH 6). Этот протокол обычно дает 1–3 хелаторов на одно антитело. Профиль элюции в эксклюзионной хроматографии высокого давления (HPSEC, Phenomenex BioSep SEC-s3000 300 × 4,6 мм, 1,5 мл / мин PBS с 50 мМ ЭДТА) не отличался от неконъюгированного антитела.

Производство ПЭТ-индикаторов и радиоактивное мечение конъюгата NODAGA-MC3

64 Cu была произведена в собственной радиофармации Отделения доклинической визуализации и радиофармации в Тюбингене с использованием циклотрона PETtrace (General Electric Medical Systems). 64 Cu генерировалась протонным облучением с энергией 12,5 МэВ обогащенного металлического никеля 64 (35–75 мг; Isoflex, обогащение> 98%), нанесенного гальваническим способом на платино-иридиевый диск через 64 Ni (p, n) 64 Cu ядерная реакция, как описано ранее (Alt et al., 2010). Вкратце, 64 Cu отделяли от основной никелевой мишени и других металлических примесей растворением в кислоте с последующей анионообменной хроматографией (AG1 × 8, Bio-Rad) в водной солянокислой среде (Trace Select, Sigma-Aldrich). Фракции, содержащие продукт 64 Cu, сушили в атмосфере аргона при 120 ° C.

Для маркировки антител сухой 64 CuCl 2 повторно растворяли в 0,1 М HCl и доводили pH до 5–6, используя 0.5 М ацетат аммония. Добавляли 1,3 мкг конъюгированного с p-NCS-бензил-NODAGA антитела MC3 на 1 МБк 64 Cu и инкубировали при 42 ° C в течение 60 мин. Для контроля качества меченных радиоактивными изотопами антител [радиохимическая чистота не менее 95% (ТСХ), профиль элюции HPSEC, соответствующий немодифицированному антителу].

Стабильность сыворотки [

64 Cu] NODAGA-MC3 Tracer

Для тестов на стабильность сыворотки меченное радиоактивным изотопом антитело MC3 инкубировали с трехкратным объемом сыворотки C57BL / 6 при 37 ° C.Образцы отбирали через 0, 1, 24 и 48 ч и сразу же анализировали с помощью Instant Thin Layer Chromatography-Silica Gel (iTLC-SG, Macherey-Nagel, Düren, Германия, подвижная фаза: 0,1 М цитрат натрия, pH 5,0) и радио -HPSEC (как описано выше).

Молекулярная визуализация

Mouse Strain и i.v. Инъекции
Candida и [ 64 Cu] NODAGA-MC3 Tracer

Работа по визуализации животных проводилась с использованием мышей того же возраста и пола, которым вводили одинаковые дозы патогена и индикатора для минимизации систематической ошибки.Самок мышей C57BL / 6 OlaHsd в возрасте от восьми до 14 недель были приобретены у Harlan Laboratories GmbH (Venray, Нидерланды). Животных содержали в стандартизированных и стерильных условиях окружающей среды (комнатная температура 20 ± 1 ° C, относительная влажность 50 ± 10%, 12-часовой цикл свет-темнота) и получали пищу и воду ad libitum . Для приготовления инокулята штамм C. albicans SC5314 и C. auris CBS10913 выращивали на GPYA, как описано, и бластоспоры собирали через 3 дня инкубации при 37 ° C путем промывания культур стерильным PBS.Споры дважды промывали центрифугированием при 400 г и повторно суспендировали в свежем стерильном PBS. Протокол заражения животных и визуализации (дополнительный рисунок S3A) включал одновременную ПЭТ / МР-визуализацию инфицированных Candida и неинфицированных контрольных мышей (только PBS) в трех последовательных временных точках [3, 24 и 48 ч после инфицирования ( Пи)]. Для введения инокулята и индикатора животных кратковременно анестезировали 1,5% изофлураном и 0,8 л / мин 100% кислорода, а в их боковые хвостовые вены вводили 20 мкг [ 64 Cu] NODAGA-меченого антитела MC3 (соответствует 12– 14 МБк для иммуно-ПЭТ-визуализации) и 100 мкл суспензии бластоспор (или только PBS), при этом каждая мышь получала всего 1 × 10 6 бластоспор.

Серьезность модели инфекции низкая, поскольку эксперименты по визуализации проводились на здоровых иммунокомпетентных мышах. Здоровье и общее самочувствие мышей оценивали ежедневно, а вес тела измеряли каждые 24 часа. Согласно протоколу ухода за животными, состояние здоровья животных оценивалось ежедневно и оценивалось с помощью оценочного листа. Категории для оценочного листа включали подвижность животных, реакцию в полете, уход за шерстью, состояние шерсти и потерю веса в%.Состояние здоровья мышей в ходе экспериментов не показало потери веса, превышающей 20%, или других признаков, которые могли бы привести к умерщвлению мышей. В течение 2 дней после инфицирования побочных эффектов не наблюдалось, а у мышей не наблюдалось или не наблюдалось незначительной потери веса из-за инфекции и / или анестезии.

Одновременная ПЭТ / МРТ и

ex vivo Биораспределение

In vivo биораспределений индикаторов ПЭТ на основе антител оценивали с использованием вставки ПЭТ для мелких животных (Bruker BioSpin GmbH, Эттлинген, Германия), что дало пространственное разрешение приблизительно 1.3 мм на реконструированных изображениях (Wehrl et al., 2013). Статические ПЭТ-сканирование (10 мин) получали через 3, 24 и 48 ч после инъекции инокулята Candida и индикатора. Во время ПЭТ и МРТ животных анестезировали 1,5% изофлураном, смешанным со 100% кислородом. Данные ПЭТ были получены в режиме списка, гистограммы за один 10-минутный интервал времени и восстановлены с использованием двумерного итеративного алгоритма максимизации ожидания упорядоченного подмножества (OSEM2D). МР-томографию выполняли на МР-томографе мелких животных 7 Тл, 300 МГц (Bruker Biospin GmbH) для сбора анатомической информации.Изображения были получены с использованием трехмерной последовательности T2, насыщенной жиром, с TE / TR 90,51 / 1800,000 мс. Кроме того, была выполнена последовательность T1 3D быстрой съемки под малым углом (FLASH) с TE / TR 6.000 / 30.000 мс. Изображения ПЭТ были нормализованы относительно друг друга, впоследствии слиты с соответствующими изображениями МРТ и проанализированы с использованием программного обеспечения Inveon Research Workplace (Siemens Preclinical Solutions, Ноксвилл, Теннесси, США). Области интереса (ROI) были нарисованы вокруг соответствующих тканей на основе анатомической информации из МРТ изображений.Данные изображений были проанализированы вслепую и перепроверены двумя опытными исследователями. Абсолютная количественная оценка данных ПЭТ выражается в процентах от введенной дозы на кубический сантиметр (% ID / cc). После заключительного сканирования ПЭТ через 48 часов все животные были умерщвлены путем смещения шейных позвонков под глубокой анестезией и препарированы. Органы были удалены, и радиоактивность была определена количественно с помощью аликвоты введенного радиоактивного индикатора в γ-счетчике (Wallac 2480 WIZARD 3 ″, PerkinElmer, Waltham, MA, США) с использованием энергетического окна между 350 и 650 кэВ.Результаты выражаются в% введенной дозы на грамм (% ID / г) ткани.

Статистический анализ

Количество мышей, использованных в каждой группе ( N = 4–5), было определено с помощью анализа мощности, чтобы обеспечить статистическую значимость при пороге 5% и мощности 90%, при этом средние значения отличаются на 2 SD. Для экспериментов с более чем двумя исследованными группами статистические значения были рассчитаны с использованием одностороннего дисперсионного анализа (ANOVA) с последующим тестом множественного сравнения Тьюки, проведенным с помощью программного обеспечения Origin 8 (OriginLab Corporation, Нортгемптон, Массачусетс, США).Данные считались статистически значимыми при * p <0,05. Если не указано иное, все количественные данные представлены как среднее ± 1 стандартное отклонение (SD).

Результаты

Получение гибридом, изотипирование и специфичность mAb

Было выполнено единичное слияние, и 418 линий гибридомных клеток были протестированы на распознавание иммуногена. Клеточная линия MC3 была выбрана для дальнейшего тестирования на основании силы ее реакции в ELISA и была субклонирована три раза.Изотипирование показало, что MC3 принадлежит к классу иммуноглобулинов G3 (IgG3). Специфичность MC3 определяли в тестах ELISA с использованием антигенов из широкого ряда клинически значимых дрожжей, дрожжеподобных грибов и плесневых грибов (дополнительная таблица S1). Он прореагировал с антигенами нескольких видов Candida , большинство из которых принадлежит к кладе CTG ( C. albicans , C. dubliniensis , C. famata , C. guilliermondii , C. lusitaniae . , с.tropicalis ), а также C. auris , C. pseudotropicalis и C. palmioleophila . Он не реагировал с другими протестированными видами Candida , с широким спектром родственных и неродственных дрожжей, дрожжеподобных грибов или плесневых грибов, имеющих клиническое значение (Рисунок 1), или с человеческими комменсальными дрожжами Saccharomyces cerevisiae . Не было обнаружено перекрестной реактивности с антигенами, полученными из одно- или смешанных культур C. glabrata , T.asahii или C. neoformans (дополнительный рисунок S1), дополнительно демонстрируя его специфичность в отношении C. albicans в полимикробных культурах.

РИСУНОК 1. Специфичность mAb MC3, определенная с помощью тестов иммуноферментного анализа смывных поверхностей, содержащих водорастворимые антигены из видов Candida и родственных и неродственных дрожжей и плесневых грибов. Значения поглощения ELISA при 450 нм для растворимых антигенов из видов Candida в CTG clade и Saccharomycetaceae, нового патогена человека Candida auris (вставка) и других родственных и неродственных дрожжей, дрожжеподобных грибов и плесневых грибов, имеющих клиническое значение.Лунки покрывали буфером 60 мкг белка / мл. Столбцы представляют собой средние значения трех биологических повторностей ± стандартные ошибки, а значение пороговой абсорбции для обнаружения антигена составляет ≥0,1 (обозначено линией на графике).

Распознавание очищенного

Candida albicans Маннан

Маннан, основной углевод клеточной стенки Candida , состоящий из структур α-1-6, α-1-2, α-1-3 и β-1-2 (Netea et al., 2008; Hall и Gow, 2013), был исследован как предполагаемый антиген, связанный с MC3.В тестах ELISA MC3 распознал очищенный маннан клеточной стенки C. albicans в концентрациях от ≥1,3 мкг / мл (рис. 2A). MAb также распознало очищенные маннаны с молекулярной массой> 200 кДа (фиг. 2B). Этот паттерн связывания согласуется с mAb, которое, как было показано ранее, связывается со структурами β-1,2-маннана (Jouault et al., 1998; Poulain et al., 2002). Паттерны связывания вестерн-блоттинга с растворимыми антигенами, экстрагированными из иммуногена C. albicans SC5314, показали сильную реакцию MC3 с гликозилированными антигенами с молекулярной массой от ~ 100 до> 200 кДа и менее сильную реакцию с антигенами с более низкой молекулярной массой, между ~ 50 и ~ 100 кДа (рис. 2В).Этот образец окрашивания согласуется с mAb, которые, как было показано, связываются с маннан-содержащими антигенами C. albicans (Torosantucci et al., 1991). MAb MC3 также реагировало с антигеном с молекулярной массой ~ 12 кДа (рис. 2B), что согласуется с распознаванием гликолипидного антигена фосфолипоманнана клеточной стенки (PLM) (Trinel et al., 1993; Jouault et al., 1998; Poulain et al., 2002; Mille et al., 2012). PLM содержит исключительно β-1,2-маннаны, которые также украшают структуры маннопротеинов в C.albicans (Trinel et al., 1999; Mille et al., 2004; Fradin et al., 2008). Взятые вместе, эти результаты предполагают, что эпитоп MC3 содержит структуры β-1,2-маннана.

РИСУНОК 2. Характеристика антигена MC3, его эпитопа и пространственного распределения в дрожжевых и псевдогифальных клетках. (A) Значения поглощения ELISA при 450 нм для очищенного маннана клеточной стенки C. albicans . Каждая точка представляет собой среднее значение трех повторов ± стандартные ошибки. (B) Вестерн-иммуноблоттинг с MC3 с использованием очищенного маннана клеточной стенки C. albicans (маннан) и растворимых антигенов, экстрагированных из иммуногена C. albicans SC5314 (SC5314). В лунки загружали 1,6 мкг белка. M r обозначает молекулярную массу в кДа. (C) Вестерн-иммуноблоттинг с MC3 с использованием растворимых антигенов в смывах поверхности штамма C. albicans дикого типа NGY152 и мутантных штаммов маннана. В лунки загружали 1,6 мкг белка.Звездочка ( * ) указывает низкомолекулярную полосу ∼12 кДа, предположительно PLM, которая отсутствует в экстрактах мутанта Δpmr1. (D) Значения поглощения ELISA при 450 нм для культуральных жидкостей из штаммов SC5314 и NGY152 дикого типа C. albicans и мутантных штаммов маннана. Лунки покрывали буфером 60 мкг белка / мл. Каждая полоса представляет собой среднее значение трех биологических повторов ± стандартные ошибки, а столбцы с одной и той же буквой существенно не различаются при p <0.001. (E) Соответствующий вестерн-иммуноблот с MC3 с использованием культуральных жидкостей из штаммов SC5134 и NGY152 дикого типа C. albicans и мутантных штаммов маннана. В лунки загружали 1,6 мкг белка. Звездочка ( * ) указывает низкомолекулярную полосу ~ 12 кДа, которая присутствует только в культуральных жидкостях мутанта Δmnt1,2. (F) Значения поглощения ELISA при 450 нм для термообработанных антигенов из C. albicans SC5314. Лунки покрывали буфером 60 мкг белка / мл.Каждая полоса представляет собой среднее значение трех биологических повторов ± стандартные ошибки, а столбцы с одной и той же буквой существенно не различаются при p <0,001. Не наблюдалось значительного влияния нагревания на распознавание MC3, что указывает на то, что его антиген термостабилен. (G) Значения поглощения ELISA при 450 нм для обработанных периодатом антигенов (белые столбцы) и антигенов, обработанных контролем (серые столбцы), экстрагированных из лиофилизированных клеток C. albicans SC5134. Лунки покрывали буфером 60 мкг белка / мл.Каждая полоса представляет собой среднее значение трех биологических повторов ± стандартные ошибки, а столбцы с разными буквами значительно отличаются друг от друга при p <0,001. Значительное снижение с течением времени распознавания MC3 обработанных периодатом антигенов показывает, что эпитоп антитела является углеводным и содержит вицинилгидроксильные группы. (H – M) Микрофотографии бластоспор C. albicans SC5314 и гиф, иммуноокрашенных MC3 (I, K) или только контролем TCM (M) с последующим введением конъюгата антимышиного поливалентного Ig-флуоресцеина изотиоцианата.Яркие изображения бластоспор C. albicans SC5134 (H) и бластоспор и гиф (J, L) . (I – M) Те же поля зрения, что и (H – L) , но исследованы методом эпифлуоресценции. Масштабные линейки = 4 мкм. Обратите внимание на интенсивное окрашивание клеточных стенок бластоспор и гиф MC3 (I, K) , но отсутствие окрашивания только TCM (M) , демонстрируя специфическое распознавание антителом дрожжевых и гифальных клеток C. albicans . .

Candida albicans Мутанты маннана

Характеристики мутантов маннана C. albicans были опубликованы в других источниках (Bates et al., 2005; Munro et al., 2005; Hall and Gow, 2013; Shahana et al., 2013) и показывают, что мутант Δ och2 не имеет структур N-маннана с разветвленной внешней цепью, мутант Δ mnn4 не имеет фосфоманнана на N-разветвленных цепях, а мутант Δ mnt1,2 имеет укороченный O-маннан. Мутант Δ pmr1 отличается от этих других мутантов тем, что нарушение гена PMR1 приводит к усечению всех разветвленных структур N-маннана, O-маннана и PLM (Bates et al., 2005; Манро и др., 2005; Холл и Гоу, 2013). В исследованиях вестерн-блоттинга с использованием растворимых антигенов в поверхностных смывах (рис. 2C) MC3 реагировал с высокомолекулярными маннан-содержащими антигенами с профилем связывания, аналогичным профилю связывания иммуногена SC5314 (рис. 2B). Этот паттерн связывания с высокой молекулярной массой был сходным для всех протестированных штаммов (рис. 2С). MC3 также реагировал с антигеном ∼12 кДа, предположительно PLM, во всех штаммах, кроме Δ pmr1 (отмечен звездочкой на фиг. 2C).

Выделение антигенов штаммами C. albicans SC5134 и NGY152 достигает пика через 3 дня роста в жидких культурах (дополнительная фигура S2). Следовательно, образцы 3-дневных культуральных жидкостей из штаммов дикого типа и мутантных штаммов C. albicans были протестированы на распознавание внеклеточных антигенов MC3 в тестах ELISA (рис. 2D). Не было значительных различий в обнаружении MC3 внеклеточных антигенов из штаммов дикого типа SC5134 и NGY152 и мутантов Δ och2 , Δ mnn4 и Δ mnt1,2 .Однако наблюдалось значительное снижение связывания MC3 с внеклеточными антигенами из Δ pmr1 по сравнению с другими мутантами и штаммами дикого типа. Исследования вестерн-блоттинга, проведенные с теми же образцами (рис. 2E), показали, что MC3 сильно реагировал с внеклеточными антигенами с высокой молекулярной массой, но картина окрашивания Δ pmr1 заметно отличалась от других штаммов. Кроме того, антиген ∼12 кДа, присутствующий в смывах поверхности NGY152, Δ och2 , Δ mnn4 и Δ mnt1,2 (рис. 2C), присутствовал только в культуральных жидкостях с мутантом Δ mnt1,2 ( отмечены звездочкой на рисунке 2E).

Характеристика эпитопа термической, химической и ферментативной модификацией

Candida albicans Антигены SC5314 были подвергнуты нагреванию (фиг. 2F), периодату (фиг. 2G) и ферментативной обработке (дополнительная таблица S2) для дальнейшего выяснения эпитопа, связанного MC3. Уменьшение связывания mAb в ELISA после тепловой обработки может указывать на то, что его эпитоп является термолабильным. Однако значительного снижения связывания MC3 за 60 мин нагревания не наблюдалось, что свидетельствует о том, что его эпитоп является термостабильным (рис. 2F).Уменьшение связывания mAb после химического переваривания периодатом показывает, что его эпитоп является углеводным и содержит вицинальные гидроксильные группы. Значительное снижение связывания MC3 наблюдалось через 1 час обработки периодатом (рис. 2G), показывая, что его эпитоп состоит из углеводных фрагментов. Уменьшение связывания mAb после обработки проназой показывает, что его эпитоп состоит из белка, тогда как уменьшение с помощью трипсина указывает на белковый эпитоп, содержащий положительно заряженные боковые цепи лизина и аргинина.Следовательно, отсутствие снижения связывания MC3 после переваривания иммобилизованного антигена проназой или трипсином подтвердило, что антитело не связывается с белковым эпитопом (дополнительная таблица S2).

Иммунофлуоресценция

Исследования иммунофлуоресценции

показали, что антиген MC3 присутствует на поверхности клеточной стенки бластоспор C. albicans (Рисунки 2H – K) и гиф (Рисунки 2J, K) C. albicans . Отсутствие флуоресценции контрольных образцов (рисунки 2L, M) дополнительно демонстрирует специфичность mAb MC3 к различным морфотипам патогена.

ПЭТ / МРТ инвазивного кандидоза с использованием [

64 Cu] NODAGA-MC3

Для визуализации с помощью иммунного PET MC3 конъюгировали с хелатирующим агентом NODAGA. Затем конъюгированное антитело было помечено радионуклидом 64 Cu, что позволило проводить последовательную визуализацию в течение до 3 дней. Удельная активность индикатора [ 64 Cu] NODAGA-MC3, используемого в исследованиях биораспределения in vivo , была определена в диапазоне 620-770 МБк / мг в момент инъекции.Радиохимическая чистота (ТСХ) составила 95,4%. Стабильность сыворотки индикатора [ 64 Cu] NODAGA-MC3 была определена с помощью iTLC и радио-HPSEC, при этом анализ не показал никаких признаков протеолитической деградации, агрегации белков или трансхелляции меди в белки сыворотки в течение 48 часов. (Дополнительный рисунок S4).

Мышам делали инъекции в хвостовую вену с бластоспорами C. albicans или C. auris и трассером [ 64 Cu] NODAGA-MC3, а также оценивали биораспределение с помощью одновременной ПЭТ / МРТ через 3, 24 и 48 часов после заражения.Репрезентативные изображения показаны на дополнительных рисунках S5A (3 часа), S5B (24 часа) и рисунке 3A (48 часов), где в каждый момент времени изображены одни и те же мыши. Контрольным мышам вводили PBS вместо бластоспор, но в остальном лечили аналогичным образом. ПЭТ-изображение показало поглощение индикатора в левой и правой почках животных, инфицированных C. albicans , через 24 часа (дополнительный рисунок S5B) и 48 часов (рисунок 3A) пи, что отсутствовало в почках контрольных животных с PBS и животным, которым вводили C.auris . Хотя между животными наблюдалась значительная вариабельность, количественная оценка in vivo , выраженная в% ID / куб. по сравнению с контрольными PBS и мышами, инфицированными C. auris . Через 24 ч p.i. значимо более высокий% ID / cc индикатора [ 64 Cu] NODAGA-MC3 наблюдался в левой и правой почке мышей, инфицированных C. albicans (10.5 ± 0,8 и 10,8 ± 0,9% ID / куб. См, соответственно) по сравнению с контролями PBS (левая почка: 6,5 ± 0,7% ID / куб. См, правая почка: 7,5 ± 0,7% ID / куб. См) и , обработанные C. auris животные (левая почка: 7,4 ± 0,3% ID / куб. см, правая почка: 7,7 ± 0,8% ID / куб. см). Поглощение [ 64 Cu] NODAGA-MC3 оказалось самым высоким в левой и правой почке животных, инфицированных C. albicans , через 48 часов в день. с 12,7 ± 6,3 и 12,3 ± 4,9% ID / см, соответственно, по сравнению со значительно меньшим поглощением метки почками после обработки PBS (левая почка: 5.7 ± 1,1% ID / куб.см, правая почка: 6,2 ± 0,8% ID / куб.см) и , инфицированных C. auris (левая почка: 6,1 ± 0,8% ID / куб. мышей. Повышенное поглощение индикатора также было обнаружено в селезенке (дополнительная фигура S6A) и головном мозге (дополнительная фигура S6B), но не в печени (дополнительная фигура S6C) мышей, инфицированных C. albicans . Поглощение [ 64 Cu] NODAGA-MC3 было значительно выше в мозге мышей, инфицированных C. albicans , через 24 и 48 ч.я. с 2,1 ± 0,1 и 1,8 ± 0,2% ID / куб. -инфицированные животные (24 ч пи: 1,6 ± 0,1% ID / см, 48 ч пи: 1,4 ± 0,1% ID / куб). Во всех трех органах тенденция в% ID / cc со временем постепенно снижалась. Повышенное поглощение индикатора также было обнаружено в мышечных тканях мышей , инфицированных C. albicans , через 24 часа, но это увеличение не сохранялось через 48 часов (дополнительный рисунок S6D).Результаты изображений in vivo ПЭТ были подтверждены данными биораспределения ex vivo (% ID / г) через 48 часов p.i. (Рисунок 3C), демонстрирующий значительно более высокое поглощение [ 64 Cu] NODAGA-MC3 в левой и правой почке мышей, инфицированных C. albicans (левая почка: 31,8 ± 13,3% ID / г, правая почка: 38,4 ± 17,8% ID / г) по сравнению с контролями PBS (левая почка: 15,5 ± 1,6% ID / г, правая почка: 16,1 ± 2,7% ID / г) и животных, инфицированных C. auris (левая почка: 16 .1 ± 1,6% ID / г, правая почка: 15,9 ± 1,8% ID / г). Значительное увеличение поглощения индикатора также наблюдалось в головном мозге ( C. albicans : 3,0 ± 0,7% ID / г, C. auris : 1,5 ± 0,2% ID / г, PBS: 1,5 ± 0,2% ID / г) , мышцы ( C. albicans : 4,6 ± 0,5% ID / г, C. auris : 3,2 ± 0,1% ID / г, PBS: 3,2 ± 0,3% ID / г) и толстой кишки ( C. albicans : 8,4 ± 2,1% ID / г, C. auris : 5,7 ± 0,7% ID / г, PBS: 5,2 ± 0,6% ID / г) мышей, инфицированных C. albicans , по сравнению с контрольными PBS и C.auris -инфицированных мышей, в то время как наблюдалось значительное увеличение поглощения индикатора в селезенке инфицированных C. albicans мышей (22,2 ± 5,7% ID / г) по сравнению с мышами C. auris (13,4 ± 2,2% ID / г). Наблюдалось значительное снижение содержания индикатора в крови C. albicans -инфицированных животных (32,3 ± 3,1% ID / г) по сравнению с контрольными животными PBS (41,0 ± 5,9% ID / г).

РИСУНОК 3. (A) Биораспределение in vivo [ 64 Cu] NODAGA-MC3 в ПЭТ / МР-визуализации через 48 ч.я. Проекция максимальной интенсивности коронарной артерии (MIP), МРТ и объединенные изображения ПЭТ / МРТ мышей, получавших PBS (контрольные), и мышей, инфицированных C. albicans и мышей, инфицированных C. auris , которым инъецировали индикатор. Полученные изображения показывают специфический захват индикатора в левой и правой почках мышей , инфицированных C. albicans , но не в почках мышей, получавших PBS (контроль). Специфичность индикатора была дополнительно продемонстрирована с использованием штамма C. auris , который, хотя и реагировал с MC3 in vitro с использованием ELISA (рис. 1), был неинфекционным в i.v. модель вызова. Здесь захват индикатора в почках был аналогичен захвату, обнаруженному у контрольных мышей PBS. (B) Количественная оценка изображений ПЭТ для левой и правой почек трех разных групп мышей через 3, 24 и 48 часов p.i. Значительно более высокое поглощение индикатора [ 64 Cu] NODAGA-MC3 наблюдается в левой и правой почках мышей, инфицированных C. albicans , по сравнению с животными, получавшими PBS (контроль), и животными, инфицированными C. 24 и 48 л. С.я. Данные выражены в виде среднего значения ± SD% ID / куб. Групповые различия были исследованы с использованием однофакторного дисперсионного анализа, за которым следовали post hoc Тьюки – Крамера со значительными различиями при * p <0,05. (C) Биораспределение Ex vivo через 48 ч p.i. Значительно более высокое поглощение индикатора [ 64 Cu] NODAGA-MC3 в левой и правой почках мышей, инфицированных C. albicans , по сравнению с почками соответствующих обработанных PBS (контроль) и C.auris -инфицированных животных, подтверждают данные ПЭТ / МРТ и данные о биораспределении in vivo при 48 ч p.i. Помимо повышенного поглощения индикатора почками, значительно более высокое поглощение было также показано в толстой кишке, мышцах и головном мозге мышей, инфицированных C. albicans , по сравнению с мышами, инфицированными C. auris и обработанными PBS. значительно более высокое поглощение в селезенках мышей, инфицированных C. albicans , по сравнению с мышами, инфицированных C. auris , но значительно сниженное поглощение в крови C.albicans -инфицированных мышей по сравнению с контрольными животными, получавшими PBS. Данные представляют собой результаты для N = 4–5 животных на группу и выражены как среднее значение ± SD% ID / г.

Значительное снижение массы тела после в / в. заражение было обнаружено у мышей, которым инъецировали C. albicans , но не наблюдалось значительного снижения массы тела контрольных мышей PBS и мышей, инфицированных C. auris , в течение периода исследования (дополнительная фигура S7).

Обсуждение

Грибковые инфекции человека являются причиной по меньшей мере такого же количества смертей, как туберкулез или малярия, с наиболее распространенными грибковыми патогенами ( Aspergillus , Candida , Cryptococcus и Pneumocystis ), заражая примерно два миллиона человек во всем мире ( Brown et al., 2012). Большинство этих инфекций встречается у пациентов с ослабленным иммунитетом или у пациентов в критическом состоянии, причем C. albicans является наиболее частой причиной (до 70%) ИЦ у пациентов в отделении интенсивной терапии и у реципиентов трансплантированных органов брюшной полости (Calandra et al., 2016), с средний уровень смертности 40%.

Как и в случае со всеми инвазивными грибковыми заболеваниями, диагностика ИЦ является серьезной проблемой, но быстрое и точное обнаружение имеет решающее значение, чтобы можно было быстро начать соответствующее лечение противогрибковыми препаратами. При диагностике ИЦ необходимо учитывать три состояния: (1) кандидемия без глубоко укоренившегося кандидоза; (2) кандидемия с глубоко укоренившимся кандидозом; и (3) глубоко укоренившийся кандидоз без кандидемии.Культура Candida из образцов крови, считающаяся золотым стандартным диагностическим тестом для IC, является положительной только в 50–70% случаев, медленная и редко бывает положительной у пациентов с глубоко укоренившимся кандидозом (Clancy and Nguyen, 2013) . Комбинированное определение маннановых (Mn) и анти-Mn (A-Mn) антител Candida с использованием ELISA-форматов Platelia Candida (Ellis et al., 2009) является полезным подспорьем в мониторинге пациентов с высоким риском ИЦ, но полагается на на наличие циркулирующего антигена при взятии образца крови.«Пан-грибковый» (1 → 3) -β- D -глюкановый тест рекомендуется в качестве индикатора инвазивной грибковой инфекции (Alexander et al., 2010; Lamoth et al., 2012), но тест не обладает специфичностью к Candida , перекрестно реагирующий с рядом других дрожжей и плесневых грибов, включая виды Trichosporon и Aspergillus , поэтому его использование для обнаружения IC ограничено (Pickering et al., 2005; Karageorgopoulos et al., 2011) . Были предприняты попытки отследить инфекций Candida in vivo с помощью Jacobsen et al.(2014) недавно сообщили о визуализации биолюминесценции для мониторинга ИК у мышей в реальном времени. Несмотря на то, что это мощный метод, он основан на биолюминесцентных репортерных штаммах C. albicans , экспрессирующих люциферазу светлячков, что означает, что оптическая (биолюминесцентная) визуализация может быть выполнена только с использованием одного генетически модифицированного штамма гриба и в целом ограничена низкой тканью. проникновение света. В клинических условиях [ 18 F] FDG PET / CT использовался для визуализации IC и Candida абсцессов легких (Bleeker-Rovers et al., 2005; Avet et al., 2009), но его точность в идентификации IC или инвазивных грибковых инфекций в целом еще предстоит полностью доказать, поскольку радиофармпрепарат не может различать инфекционные и неинфекционные патологии или различать бактериальные и грибковые инфекции и воспаление. (Rolle et al., 2016). Тем не менее, недавнее ретроспективное сравнение ПЭТ / КТ [ 18 F] FDG с обычной компьютерной томографией показало полезность ПЭТ / КТ [ 18 F] FDG в качестве неинвазивной процедуры для мониторинга реакции Candida и плесневые инфекции на противогрибковые препараты после того, как идентичность инфекционных организмов была установлена ​​с помощью обычных диагностических процедур (Douglas et al., 2018).

В этой статье мы стремимся повысить диагностическую точность изображений на основе ПЭТ для инвазивного кандидоза C. albicans путем создания и тестирования индикатора на основе mAb для отслеживания глубоко укоренившихся инфекций C. albicans in vivo . С этой целью мы сообщаем о разработке и характеристике маннан-специфических mAb IgG3, MC3, и его использовании в управляемой антителами позитронно-эмиссионной томографии и магнитном резонансе (иммуноПЕТ / MR) IC на доклинической модели заболевания на мышах.Недавно мы сообщили об использовании иммуноПЕТ / МРТ для изображения IPA, вызванного повсеместной экологической плесенью A. fumigatus (Rolle et al., 2016; Davies et al., 2017; Thornton, 2018), но это впервые Насколько нам известно, был продемонстрирован потенциал иммуноПЭТ / МРТ для отслеживания глубинных инфекций C. albicans in vivo , с возможностью применения этой технологии в клинических условиях и для выявления заболеваний человека.

Моноклональное антитело MC3 было индуцировано против термостабильного углеводного эпитопа на маннанах клеточной стенки C.albicans морфотипы дрожжей и гиф. Это важно с диагностической точки зрения, поскольку C. albicans — плеоморфные дрожжи, которые регулярно меняют морфологию во время инфекции (Calderone and Fonzi, 2001). Отсутствие иммунореактивного антигена ∼12 кДа в мутанте Δ pmr1 , который имеет значительно сниженный PLM, очень мало O-маннана и дефект гликозилирования N , предполагает, что эпитоп MC3 состоит из β-1,2- остатки маннана (Trinel et al., 1999; Mille et al., 2004; Fradin et al., 2008). Это согласуется с иммунодоминантными структурами (1 → 2) -β-маннана в PLM C. albicans , связанными с защитным β-маннан-специфическим mAb IgG3, C3.1 (Han et al., 2000; Johnson et al., 2012).

Тесты на специфичность показывают, что MC3 взаимодействует с маннанами нескольких клинически важных видов Candida , но не с широким спектром родственных и неродственных патогенных дрожжей и плесневых грибов человека, имеющих клиническое значение. MAb было способно различать C.albicans из человеческих дрожжей C. glabrata , C. neoformans и T. asahii в полимикробных культурах, что является важным свойством, учитывая возникающую проблему смешанной фунгемии у пациентов в критическом состоянии (Jensen et al., 2007; Miceli et al., 2011; Badiye et al., 2012; Davies, Thornton, 2014; Yang et al., 2014). Сообщается, что Candida видов, распознаваемых MC3, вызывают IC (Morgan et al., 1984; Leung et al., 2002; Hawkins and Baddour, 2003; Pfaller et al., 2006, 2014; Дженсен и Арендруп, 2011 г .; Хан и др., 2012; Бейда и др., 2013; Борман и др., 2016). C. albicans является наиболее распространенной причиной ИЦ во всем мире и, следовательно, имеет наивысшее клиническое значение (Diekema et al., 2012; Гвинея, 2014), но все другие MC3-реактивные виды ( C. auris , C. dubliniensis , C. famata , C. guilliermondii , C. lusitaniae , C. palmioleophila , C. pseudotropicalis , C.tropicalis ) превратились в серьезные патогены человека (Morgan et al., 1984; Leung et al., 2002; Hawkins, Baddour, 2003; Pfaller et al., 2006, 2014; Jensen and Arendrup, 2011; Khan et al., 2012; Бейда и др., 2013; Борман и др., 2016). Слабым местом mAb является его неспособность обнаруживать C. glabrata , C. krusei или C. parapsilosis , которые также являются важными причинами IC, особенно C. glabrata (Chi et al., 2011 ; Papon et al., 2013; Pfaller et al., 2014). Следовательно, хотя MC3 реагирует с рядом клинически значимых видов Candida , особенно с C. albicans , наиболее частой причиной ИЦ у людей, его неспособность обнаруживать все патогенные виды означает, что его необходимо использовать наряду с другими диагностическими методами. процедуры в первую очередь.

Несмотря на проблему специфичности, мы показали, что анти-маннановые mAb, MC3, можно использовать в зонде, специфичном для заболевания ([ 64 Cu] NODAGA-MC3) для обнаружения глубоко укоренившихся C.albicans инфекций in vivo , и продемонстрировали точность подхода, основанного на антителах, к молекулярной визуализации ИК в наиболее часто используемой, хорошо охарактеризованной и надежной экспериментальной модели заболевания, модели заражения (iv) (MacCallum and Odds, 2005; Conti et al., 2014). Мы использовали клинический изолят C. albicans SC5314 (до которого было повышено mAb MC3) для доклинических исследований иммуноПЕТ / МРТ, поскольку он принадлежит к преобладающей кладе близкородственных C.albicans , что составляет почти 40% всех изолятов в мире (Soll and Pujol, 2003). В дополнение к контрольной группе PBS мы использовали в качестве контроля Candida штамм возникающего патогена человека Candida auris , поскольку этот патоген реагирует с MC3 в тестах ELISA in vitro , но не является инфекционным в iv модель вызова. Причины отсутствия патогенности неясны, но документально подтверждены штамм-специфические различия в патогенности этого патогена (Borman et al., 2016).

Детальные исследования i.v. Модель заражения с использованием C. albicans SC5314 (MacCallum and Odds, 2005; Conti et al., 2014) показала, что общим течением инфекции у мышей является элиминация грибка из крови в течение 5-10 часов с последующим внезапным быстрый рост грибка в почках и головном мозге и постепенное удаление грибка из печени, легких, сердца и селезенки. Потеря веса животных после заражения (кахексия) является предиктором смертности при в / в. модель заражения (MacCallum and Odds, 2005), поэтому мы использовали ее в качестве косвенного индикатора развития заболевания у инфицированных мышей в нашем исследовании.Только мыши, инфицированные C. albicans , показали кумулятивную и значительную потерю веса после инъекции патогена и индикатора в кровоток, что свидетельствует об установлении и прогрессировании IC у этих животных. Используя два штамма Candida и контрольную группу PBS, мы показали, что индикатор [ 64 Cu] NODAGA-MC3 очень точен при обнаружении глубоко укоренившихся инфекций, вызванных C. albicans SC5314. ПЭТ-изображение показало устойчивое поглощение индикатора [ 64 Cu] NODAGA-MC3 почками C.albicans -инфицированных животных через 24 и 48 часов, что совпадает с экспоненциальным ростом грибка в почках на модели болезни (MacCallum and Odds, 2005; Conti et al., 2014). In vivo и ex vivo Биораспределение индикатора следовало тенденции, аналогичной тенденции известного прогрессирования заболевания, с устойчивым поглощением индикатора в почках мышей, инфицированных C. albicans , через 24 и 48 часов после инфицирования. , а также повышенное поглощение в головном мозге. Поглощение [ 64 Cu] NODAGA-MC3 наблюдалось в печени во всех группах лечения, но оно снижалось в ходе исследования, совпадающее с прогрессивным снижением грибковой нагрузки в i.v. модель вызова (MacCallum and Odds, 2005). Данные in vivo о биораспределении показали устойчивое накопление индикатора в селезенке животных, инфицированных C. albicans , в течение 48 часов экспериментального периода, тогда как данные ex vivo показали значительное увеличение поглощения через 48 часов. по сравнению с контрольными PBS и животными, инфицированными C. auris . Это согласуется с инфекцией селезенки, поскольку селезенка является хорошо задокументированным местом инфицирования C. albicans во время IC (Vazquez and Sobel, 2011).Данные о биораспределении ex vivo аналогичным образом показали значительное увеличение поглощения индикатора в толстой кишке и мышцах животных, инфицированных C. albicans , хотя и на значительно более низких уровнях, чем в почках. Предыдущие исследования с использованием мышиной модели IC продемонстрировали in vivo мышечную инфекцию, вызванную C. albicans (Oblack et al., 1980), в то время как инфекция толстой кишки C. albicans во время IC была показана как у мышей. на моделях инфекции и у людей (Cole et al., 1996; Праниенарарат, 2014). Не было значительных различий в поглощении индикатора в сердце, легких и желудке трех экспериментальных групп. Известно, что эти органы не инфицированы C. albicans при в / в. модель вызова (MacCallum and Odds, 2005). Сообщалось о повторном обнаружении патогена в крови (кандидемия) через 24 часа после инфицирования высокой дозой инфекции C. albicans при внутривенном введении. модель вызова (MacCallum and Odds, 2005). Здесь мы обнаружили более низкое поглощение [ 64 Cu] NODAGA-MC3 в крови C.albicans -инфицировали мышей через 48 ч p.i. по сравнению с контролем PBS и мышами , инфицированными C. auris . Этот феномен, вероятно, является результатом значительно более высокого поглощения индикатора в почках, селезенке, головном мозге, толстой кишке и мышцах мышей, инфицированных C. albicans , , тем самым уменьшая количество несвязанного индикатора в кровотоке.

Заключение

Мы показали, что молекулярная визуализация под контролем антител (иммуноПЕТ / МРТ) может использоваться для обнаружения диссеминированной инфекции, вызванной C.albicans , наиболее важной причиной ИЦ у людей. Используя хорошо зарекомендовавшую себя модель инфекции на животных, которая точно имитирует заболевание у людей, мы показали, что индикатор [ 64 Cu] NODAGA-MC3 обеспечивает высокоточные средства обнаружения инфекций почек, мозга и селезенки in vivo. . Как основные очаги инфицирования глубоких органов человека (Vazquez and Sobel, 2011), чувствительное и специфическое обнаружение C. albicans в этих органах имеет первостепенное значение для своевременной диагностики и лечения.Ограничением нашей работы является короткий период времени, в течение которого может быть установлен последовательный мониторинг распределения патогенов после инъекции трассера [ 64 Cu] NODAGA-MC3 (до 48 часов после инъекции), а также использование иммунокомпетентного препарата. мышиная модель кандидоза. Это может объяснить, почему мы не обнаружили инфекционный эндокардит Candida или гепатоспленочный кандидоз (хотя значительно более высокое поглощение индикатора было обнаружено в селезенках мышей, инфицированных C. albicans ), что, хотя и относительно редко (Halkin and Ksontini, 2007 ; Yuan, 2016), тем не менее, являются важными клиническими проявлениями диссеминированного заболевания Candida у людей с сопутствующими высокими показателями смертности.Поскольку кандидоз печени и селезенки чаще всего встречается у пациентов с ослабленным иммунитетом (Halkin and Ksontini, 2007), необходимо использовать альтернативную модель кандидоза на животных, которая имитирует эти заболевания у людей с истощенным иммунитетом (Conti et al., 2014). Адаптация i.v. Используемая здесь модель заражения может позволить определить точность индикатора при обнаружении ранее установленной инфекции. Такая стратегия показана на дополнительном рисунке S3B, где вместо одновременной инъекции бластоспор и индикатора, грибковый инокулят вводится за 24 часа до инъекции индикатора, чтобы позволить сначала установить системную инфекцию.Тем не менее, мы решили вводить патоген и индикатор одновременно, так как мы полагали, что это минимизирует стресс для животных, в то же время позволяя исследовать потенциал антител-ориентированной визуализации IC.

Чтобы разработать управляемый антителами индикатор, который специфически обнаруживает все виды Candida , имеющие клиническое значение, необходимо разработать mAb, которое связывается с антигенной детерминантой, общей для всех видов Candida , но которая не сохраняется у других видов патогенные дрожжи и плесень.Кроме того, такой эпитоп должен отсутствовать у человека, чтобы предотвратить нецелевое связывание mAb с человеческими структурами. Наш подход к обнаружению IC по существу можно применить в клинических условиях, поскольку mAb, MC3, связывается с грибковым углеводом (маннаном) и эпитопом (предполагаемый β-1,2-маннан), которые не обнаруживаются у людей (Barreto-Bertger и Figueirredo, 2014), тем самым существенно снижая вероятность нежелательных явлений при использовании гуманизированной версии индикатора антител. Таким образом, антитело и его маннановая мишень представляют собой отличные кандидаты для неинвазивного обнаружения IC у людей, вызываемого C.albicans , наиболее частой причиной ИЦ у людей. Трансляция индикатора на основе mAb в клинические условия потребует гуманизации мышиного антитела с использованием технологии трансплантации CDR, аналогичной той, что недавно использовалась нашей группой для гуманизации антитела JF5, специфичного к Aspergillus , для диагностики IPA (Davies et al. , 2017).

Авторские взносы

HM, GD, A-MW, BP, SW и CT разработали и разработали исследование и написали рукопись. HM, GD, A-MW, BP, SW, AM и CT разработали методологию.

Финансирование

Эта работа была частично поддержана Седьмой рамочной программой Европейского Союза FP7 / 2007-2013 в рамках гранта 602820.

Заявление о конфликте интересов

BP получает грант / исследовательскую поддержку от компаний Bayer Healthcare, Boehringer-Ingelheim и Siemens; однако ни один из грантов не имеет прямого отношения к этой работе. КТ является директором ISCA Diagnostics Ltd.

.

Остальные авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Рецензент DM и управляющий редактор заявили о своей общей принадлежности во время рецензирования.

Благодарности

Мы благодарны Вальтеру Эрлихманну за производство 64 Cu, Рамоне Штум и Натали Муха за экспертную техническую помощь и С. Бейтсу за поставку мутантов маннозилирования C. albicans , использованных в этом исследовании.

Дополнительные материалы

Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https: // www.frontiersin.org/articles/10.3389/fmicb.2018.01996/full#supplementary-material

Список литературы

Александр, Б. Д., Смит, П. Б., Дэвис, Р. Д., Перфект, Дж. Р., и Реллер, Р. Б. (2010). Тест (1,3) β-D-глюкана как помощь в ранней диагностике инвазивных грибковых инфекций после трансплантации легких. J. Clin. Microbiol. 48, 4083–4088. DOI: 10.1128 / JCM.01183-10

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Альт, К., Вир, С., Эрлихманн, В., Reischl, G., Wolf, P., Pichler, B.J., et al. (2010). ПЭТ-визуализация ксенотрансплантатов рака простаты на животных с высоким разрешением с использованием трех различных антител, меченных 64Cu, против нативного клеточно-адгезивного PSMA. Простата 70, 1413–1421. DOI: 10.1002 / pros.21176

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Avet, J., Granjon, D., Prevot-Bitot, N., Isnardi, V., Berger, C., Stephan, J. L., et al. (2009). Мониторинг системного кандидоза с помощью ПЭТ / КТ 18F-FDG. Eur.J. Nucl. Med. Мол. Imaging 36: 1900. DOI: 10.1007 / s00259-009-1255-1

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Авни Т., Лейбовичи Л. и Пол М. (2011). ПЦР-диагностика инвазивного кандидоза: систематический обзор и метаанализ. J. Clin. Microbiol. 49, 665–670. DOI: 10.1128 / JCM.01602-10

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бадие, А., Патнаик, М., Дешпанде, А., Раджендран, К., и Чандрашекара, К.В. (2012). Думайте, что грибок — это НЕ просто криптоменингит при СПИДе! J. Assoc. Врачи Индия 60, 21–24.

Google Scholar

Баррето-Бертгер, Э., Фигейрредо, Р. Т. (2014). Грибковые гликаны и распознавание врожденного иммунитета. Перед. Клетка. Заразить. Microbiol. 4: 145. DOI: 10.3389 / fcimb.2014.00145

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бейтс, С., МакКаллум, Д. М., Бертрам, Г., Манро, К. А., Хьюз, Х. Б., Буурман, Э. Т. и др.(2005). Candida albicans Pmr1p, секреторный путь Ca 2+ / Mn 2+ -АТФаза, необходим для гликозилирования и вирулентности. J. Biol. Chem. 2280, 23408–23415. DOI: 10.1074 / jbc.M502162200

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бейда, Н. Д., Чуанг, С. Х., Алам, М. Дж., Шах, Д. Н., Нг, Т. М., Маккаски, Л. и др. (2013). Лечение Candida famata инфекции кровотока: серия случаев и обзор литературы. J. Antimicrob. Chemother. 68, 438–443. DOI: 10.1093 / jac / dks388

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бликер-Роверс, К. П., Уоррис, А., Дрент, Дж. П. Х., Корстенс, Ф. Х. М., Ойен, В. Дж. Г., и Куллберг, Б.-Дж. (2005). Диагностика Candida абсцессов легкого с помощью позитронно-эмиссионной томографии с 18F-фтордезоксиглюкозой. Clin. Microbiol. Заразить. 11, 493–495. DOI: 10.1111 / j.1469-0691.2005.01155.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Борман, А.М., Секели А. и Джонсон Э. М. (2016). Сравнительная патогенность изолятов Соединенного Королевства развивающегося патогена Candida auris и других основных патогенных видов Candida . мСфера 1: e00189-16. DOI: 10.1128 / mSphere.00189-16

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Браун, Г. Д., Деннинг, Д. В., Гоу, Н. А. Р., Левитц, С. М., Нетеа, М. Г., и Уайт, Т. К. (2012). Скрытые убийцы: грибковые инфекции человека. Sci.Пер. Med. 4: 165rv13. DOI: 10.1126 / scitranslmed.3004404

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Каландра, Т., Робертс, Дж. А., Антонелли, М., Бассетти, М., и Винсент, Дж. Л. (2016). Диагностика и лечение инвазивного кандидоза в отделении интенсивной терапии: новый подход к старому врагу. Crit. Уход 20: 125. DOI: 10.1186 / s13054-016-1313-6

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кальдероне, Р. А., Фонци, В.А. (2001). Факторы вирулентности Candida albicans . Trends Microbiol. 9, 327–335. DOI: 10.1016 / S0966-842X (01) 02094-7

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Chi, H.-W., Yang, Y.-S., Shang, S.-T., Chen, K.-H., Yeh, K.-M., Chang, F.-Y., et al. (2011). Candida albicans по сравнению с инфекциями кровотока, не относящимися к альбикансу: сравнение факторов риска и исходов. J. Microbiol. Иммунол. Заразить. 44, 369–375. DOI: 10.1016 / j.jmii.2010.08.010

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Клэнси, К. Дж., И Нгуен, М. Х. (2013). Нахождение «недостающих 50%» инвазивного кандидоза: как некультуральная диагностика улучшит понимание спектра заболеваний и изменит уход за пациентами. Clin. Заразить. Дис. 56, 1284–1292. DOI: 10.1093 / cid / cit006

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Коул, Г. Т., Халава, А. А., и Анаисси, Э. Дж. (1996). Роль желудочно-кишечного тракта при гематогенном кандидозе: от лаборатории до постели больного. Clin. Заразить. Дис. 22, S73 – S88. DOI: 10.1093 / Clinids / 22.Supplement_2.S73

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Дэвис Г., Ролл А.-М., Маурер А., Спайчер П. Р., Шиллингер К., Солоук-Саран Д. и др. (2017). На пути к трансляционной иммуно-ПЭТ / МР-визуализации инвазивного легочного аспергиллеза: гуманизированное моноклональное антитело JF5 выявляет легочные инфекции Aspergillus in vivo. Theranostics 7, 3398–3414. DOI: 10.7150 / шт.20919

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Дэвис, Г. Э., и Торнтон, К. Р. (2014). Дифференциация новых патогенов человека Trichosporon asahii и Trichosporon asteroides от других патогенных дрожжей и плесени с помощью видоспецифичных моноклональных антител. PLoS One 9: e84789. DOI: 10.1371 / journal.pone.0084789

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Дикема, Д., Арбефевиль, С., Бойкен, Л., Крегер, Дж., И Пфаллер, М. (2012). Изменяющаяся эпидемиология кандидемии, связанной со здравоохранением, за три десятилетия. Диагн. Microbiol. Заразить. Дис. 73, 45–48. DOI: 10.1016 / j.diagmicrobio.2012.02.001

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Дуглас, А. П., Терски, К. А., Уорт, Л. Дж., Драммонд, Э., Хогг, А., Хикс, Р. Дж. И др. (2018). ФДГ-ПЭТ / КТ-визуализация в выявлении и управлении инвазивными грибковыми инфекциями: ретроспективное сравнение с традиционной компьютерной томографией. Eur. J. Nucl. Med. Мол. Imaging doi: 10.1007 / s00259-018-4062-8 [Epub перед печатью].

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Эллис, М., Аль-Рамади, Б., Бернсен, Р., Кристенсен, Дж., Ализаде, Х., и Хедстрем, У. (2009). Проспективная оценка маннановых и антиманнановых антител для диагностики инвазивных инфекций Candida у пациентов с нейтропенической лихорадкой. J. Med. Microbiol. 58, 606–615. DOI: 10.1099 / jmm.0.006452-0

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Фраден, К., Сломянни, М.С., Милле, К., Массет, А., Роберт, Р., Сендид, Б. и др. (2008). Эпитопы адгезина бета-1,2-олигоманнозы широко распределены по различным семействам маннопротеинов клеточной стенки Candida albicans и связаны посредством процессов как N-, так и O-гликозилирования. Заражение. Иммун. 76, 4509–4517. DOI: 10.1128 / IAI.00368-08

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хан Й., Рисельман М. Х. и Катлер Дж. Э. (2000).Защита от кандидоза с помощью моноклонального антитела иммуноглобулина G3 (IgG3), специфичного к той же маннотриозе, что и защитное антитело IgM. Заражение. Иммун. 68, 1649–1654. DOI: 10.1128 / IAI.68.3.1649-1654.2000

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Якобсен, И. Д., Люттих, А., Курзай, О., Хубе, Б., и Брок, М. (2014). In vivo визуализация диссеминированной мыши Candida albicans инфекция выявляет неожиданные участки-хозяева персистенции грибов во время противогрибковой терапии. J. Antimicrob. Chemother. 69, 2785–2796. DOI: 10.1093 / jac / dku198

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Jaijakul, S., Vazquez, J. A., Swanson, R. N., and Ostrosky-Zeichner, L. (2012). (1,3) -β-D-глюкан как прогностический маркер ответа на лечение при инвазивном кандидозе. Clin. Заразить. Дис. 55, 521–526. DOI: 10.1093 / cid / cis456

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Дженсен, Дж., Муньос, П., Гвинея, Дж., Родригес-Крейксемс, М., Пелаес, Т., и Боуза, Э. (2007). Смешанная фунгемия: заболеваемость, факторы риска и смертность в больнице общего профиля. Clin. Заразить. Дис. 64, e109 – e114. DOI: 10.1086 / 518175

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Дженсен Р. Х. и Арендруп М. К. (2011). Candida palmioleophila : характеристика ранее упущенного патогена и его уникальный профиль восприимчивости в сравнении с пятью родственными видами. J. Clin. Microbiol. 49, 549–556. DOI: 10.1128 / JCM.02071-10

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Джонсон М., Картмелл Дж. И Вайссер Н. (2012). Молекулярное распознавание олигосахаридов Candida albicans (1 → 2) -β-маннана защитным моноклональным антителом выявляет иммунодоминирование внутренних сахаридных остатков. J. Biol. Chem. 287, 18078–18090. DOI: 10.1074 / jbc.M112.355578

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Жуо, Т., Fradin, C., Trinel, P.A., Bernigaud, A., and Poulain, D. (1998). Ранняя передача сигнала, индуцированная Candida albicans в макрофагах посредством выделения гликолипида. J. Infect. Дис. 178, 792–802. DOI: 10.1086 / 515361

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Карагеоргопулос, Д. Э., Вулуману, Э. К., Нциора, Ф., Михалопулос, А., Рафаилидис, П. И., и Фалагас, М. Е. (2011). Тест β-D-глюкана для диагностики инвазивных грибковых инфекций: метаанализ. Clin. Заразить. Дис. 52, 750–770. DOI: 10.1093 / cid / ciq206

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хан З., Ахмад С., Джозеф Л. и Чанди Р. (2012). Candida dubliniensis : оценка его клинического значения как возбудителя кровотока. PLoS One 7: e32952. DOI: 10.1371 / journal.pone.0032952

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Лэммли, У.К. (1970). Расщепление структурных белков при сборке головки бактериофага Т4. Природа 227, 680–695. DOI: 10.1038 / 227680a0

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ламот, Ф., Круциани, М., Менголи, К., Кастаньола, Э., Лортолари, О., Ричардсон, М., и др. (2012). Анализ антигенемии β-глюкана для диагностики инвазивных грибковых инфекций у пациентов с гематологическими злокачественными новообразованиями: систематический обзор и метаанализ когортных исследований Третьей европейской конференции по инфекциям при лейкемии (ECIL-3). Clin. Заразить. Дис. 54, 633–643.DOI: 10.1093 / cid / cir897

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Леунг, А. Ю. Х., Чим, К. С., Хо, П. Л., Ченг, В. К. С., Юэн, К. Ю., Ли, А. К. В. и др. (2002). Candida tropicalis фунгемия у взрослых пациентов с гематологическими злокачественными новообразованиями: клинические особенности и факторы риска. J. Hosp. Заразить. 50, 316–319. DOI: 10.1053 / jhin.2002.1194

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Лонгботтом, Дж.Л., Брайтон, У. Д., Эдж, Г., и Пепис, Дж. (1976). Антитела, опосредующие реакции кожных проб I типа на полисахаридные и белковые антигены Candida albicans . Clin. Аллергия 6, 41–49. DOI: 10.1111 / j.1365-2222.1976.tb01410.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

MacCallum, D., and Odds, F. C. (2005). Временные события в модели внутривенного заражения для экспериментальных инфекций Candida albicans у самок мышей. Микозы 48, 151–161. DOI: 10.1111 / j.1439-0507.2005.01121.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Мичели, М. Х., Диас, Дж. А., и Ли, С. А. (2011). Возникающие оппортунистические дрожжевые инфекции. Lancet Infect. Дис. 11, 142–151. DOI: 10.1016 / S1473-3099 (10) 70218-8

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Милль, К., Фраден, К., Делплас, Ф., Тринель, П. А., Массет, А., Франсуа, Н. и др. (2012). Члены 5 и 6 семейства Candida albicans BMT кодируют ферменты, специфически действующие на β-маннозилирование фосфолипоманнанового гликосфинголипида клеточной стенки. Гликобиология 22, 1332–1342. DOI: 10.1093 / glycob / cws097

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Mille, C., Janbon, G., Delplace, F., Ibata-Ombetta, S., Gaillardin, C., Strecker, G., et al. (2004). Инактивация CaMIT1 ингибирует Candida albicans бета-маннозилирование фосфолипоманнана, снижает вирулентность и изменяет бета-маннозилирование белков клеточной стенки. J. Biol. Chem. 279, 47952–47960. DOI: 10.1074 / jbc.M405534200

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Морган, М.А., Вилковске, К. Дж., И Робертс, Г. Д. (1984). Candida pseudotropicalis фунгемия и инвазивное заболевание у пациента с ослабленным иммунитетом. J. Clin. Microbiol. 20, 1006–1007.

PubMed Аннотация | Google Scholar

Манро, К. А., Бейтс, С., Буурман, Э. Т., Хьюз, Х. Б., МакКаллум, Д. М., Бертрам, Г. и др. (2005). Mnt1p и Mnt2p из Candida albicans являются частично дублирующими альфа-1,2-маннозилтрансферазами, которые участвуют в O-связанном маннозилировании и необходимы для адгезии и вирулентности. J. Biol. Chem. 280, 1051–1060. DOI: 10.1074 / jbc.M411413200

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Нетеа, М. Г., Браун, Г. Д., Куллберг, Б. Дж., И Гоу, Н. А. Р. (2008). Интегрированная модель распознавания Candida albicans системой врожденного иммунитета. Nat. Rev. Microbiol. 6, 67–78. DOI: 10.1038 / nrmicro1815

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Папон, Н., Курдаво, В., Кластр, М., и Беннет, Р. Дж. (2013). Возникающие и появившиеся патогенные виды Candida : за пределами парадигмы Candida albicans . PLoS Pathog. 9: e1003550. DOI: 10.1371 / journal.ppat.1003550

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Пфаллер М. А., Андес Д. Р., Дикема Д. Дж., Хорн Д. Л., Реболи А. С., Ротштейн К. и др. (2014). Эпидемиология и исходы инвазивного кандидоза, вызванного не-albicans видами Candida у 2496 пациентов: данные реестра проспективной противогрибковой терапии (PATH) 2004-2008 гг. PLoS One 9: e101510. DOI: 10.1371 / journal.pone.0101510

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Pfaller, M. A., Diekema, D. J., Mendez, M., Kibbler, C., Erzsebet, P., Chang, S.-C., et al. (2006). Candida guilliermondii , условно-патогенный грибковый патоген со сниженной восприимчивостью к флуконазолу: географические и временные тенденции из программы наблюдения за противогрибковыми препаратами ARTEMIS DISK. J. Clin. Microbiol. 44, 3551–3556.DOI: 10.1128 / JCM.00865-06

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Пикеринг, Дж. У., Сант, Х. У., Боулз, К. А. П., Робертс, В. Л., и Вудс, Г. Л. (2005). Оценка анализа (1 (3) -бета-D-глюкана для диагностики инвазивных грибковых инфекций. J. Clin. Microbiol. 43, 5957-5962. Doi: 10.1128 / JCM.43.12.5957-5962.2005

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Poulain, D., Slomianny, C., Jouault, T., Gomez, J.М., и Тринел П. А. (2002). Вклад фосфолипоманнана в поверхностную экспрессию бета-1,2-олигоманнозидов в Candida albicans и его присутствие в экстрактах клеточных стенок. Заражение. Иммун. 70, 4323–4328. DOI: 10.1128 / IAI.70.8.4323-4328.2002

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Rolle, A.-M., Hasenberg, M., Thornton, C.R., Solouk-Saran, D., Männ, L., Weski, J., et al. (2016). ImmunoPET / MR визуализация позволяет специфически обнаруживать легочную инфекцию Aspergillus fumigatus in vivo. Proc. Nat. Акад. Sci. США 113, 1026–1033. DOI: 10.1073 / pnas.1518836113

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Сафдар, А., Армстронг, Д. (2011). Инфекции у пациентов с гематологическими новообразованиями и трансплантацией гемопоэтических стволовых клеток: нейтропения, гуморальные и селезеночные дефекты. Clin. Заразить. Дис. 53, 798–806. DOI: 10.1093 / cid / cir492

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Сантанджело, П.Дж., Роджерс, К. А., Зурла, К., Бланшар, Э. Л., Гамбер, С., Стрейт, К. и др. (2015). ИммуноПЭТ всего тела выявляет активную динамику ВИО у макак, получавших виремическую и антивирусную терапию. Nat. Методы 12, 427–432. DOI: 10.1038 / nmeth.3320

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Шмидель Ю., Циммерли С. (2016). Распространенные инвазивные грибковые заболевания: обзор инвазивного кандидоза, аспергиллеза, критококкоза и Pneumocystis пневмонии. Swiss Med. Wkly. 146, w14281. DOI: 10.4414 / smw.2016.14281

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Шахана С., Мора-Монтес, Х. М., Кастильо, Л., Бохович, И., Шет, К. К., Оддс, Ф. С. и др. (2013). Репортеры для анализа N-гликозилирования в Candida albicans . Fungal Genet. Биол. 56, 107–115. DOI: 10.1016 / j.fgb.2013.03.009

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Солл, Д.Р., и Пуйоль, К. (2003). Candida albicans клад. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 39, 1–7. DOI: 10.1016 / S0928-8244 (03) 00242-6

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Сутула, К. Л., Джиллет, Дж. М., Морриси, С. М. и Рамсделл, Д. К. (1986). Интерпретация данных ELISA и установление положительного-отрицательного порога. Завод Dis. 70, 722–726. DOI: 10.1094 / PD-70-722

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Торнтон, К.Р. (2001). «Иммунологические методы для грибов», в Молекулярная и клеточная биология нитчатых грибов, Практический подход , изд. Н. Дж. Талбот (Oxford: University Press), 227–257.

Google Scholar

Торнтон, К. Р. (2008). Разработка иммунохроматографического аппарата с боковым потоком для быстрой серодиагностики инвазивного аспергиллеза. Clin. Vacc. Иммунол. 15, 1095–1105. DOI: 10.1128 / CVI.00068-08

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Торосантуччи, А., Гомес, М. Дж., Бромуро, К., Касалинуово, И., и Кассоне, А. (1991). Биохимическая и антигенная характеристика составляющих маннопротеина, высвобождаемых дрожжами, и мицелиальных форм Candida albicans . Med. Mycol. 29, 361–372. DOI: 10.1080 / 026812100591

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Тринель, П. А., Борг-фон-Цепелин, М., Лепаж, Г., Жуо, Т., Маккензи, Д., и Пулен, Д. (1993). Выделение и предварительная характеристика 14-18-килодальтонного антигена Candida albicans как фосфолипоманнана, содержащего бета-1,2-связанные олигоманнозиды. Заражение. Иммун. 61,4398–4405.

PubMed Аннотация | Google Scholar

Trinel, P.A., Plancke, Y., Gerold, P., Jouault, T., Delplace, F., Schwarz, R.T., et al. (1999). Фосфолипоманнан Candida albicans представляет собой семейство гликолипидов, представляющих фосфоинозитолманнозиды с длинными линейными цепями бета-1,2-связанных остатков маннозы. J. Biol. Chem. 274, 30520–30526. DOI: 10.1074 / jbc.274.43.30520

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Васкес, Дж.А., Собель Дж. Д. (2011). «Кандидоз», в Essentials of Clinical Mycology , eds C. A. Kauffman, P. G. Pappas, J. D. Sobel и W. E. Dismukes (New York, NY: Springer), 167–197. DOI: 10.1007 / 978-1-4419-6640-7_11

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Винсент, Дж. Л., Анаисси, Э., Брюнинг, Х., Демахо, В., Эль-Эбиари, М., Хабер, Дж. И др. (2014). Эпидемиология, диагностика и лечение системной инфекции Candida у хирургических пациентов, находящихся в отделении интенсивной терапии. Intensive Care Med. 24, 206–216. DOI: 10.1007 / s001340050552

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Верл, Х. Ф., Хоссейн, М., Ланкес, К., Лю, К. К., Безруков, И., Мартиросян, П. и др. (2013). Одновременная работа мозга с помощью ПЭТ-МРТ в активированном состоянии и состоянии покоя по метаболическим, гемодинамическим и множественным временным шкалам. Nat. Med. 19, 1184–1189. DOI: 10,1038 / нм 3290

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Wiehr, S., Warnke, P., Rolle, A.-M., Schütz, M., Oberhettinger, P., Kohlhofer, U., et al. (2016). Новый патоген-специфический индикатор иммуноПЭТ / МРТ для молекулярной визуализации системной бактериальной инфекции. Oncotarget 7, 10990–11001. DOI: 10.18632 / oncotarget.7770

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Висплингхофф, Х., Бишофф, Т., Таллент, С. М., Зайферт, Х., Венцель, Р. П., и Эдмонд, М. Б. (2004). Нозокомиальные инфекции кровотока в больницах США: анализ 24 179 случаев из проспективного общенационального эпиднадзора. Clin. Заразить. Дис. 39, 309–317. DOI: 10.1086 / 421946

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Yang, Y.-L., Chu, W.-L., Lin, C.-C., Tsai, S.-H., Chang, T.-P., and Lo, H.-J. (2014). Возникающая проблема смешанных дрожжевых культур. J. Microbiol. Иммунол. Заразить. 47, 339–344. DOI: 10.1016 / j.jmii.2013.01.001

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кандидоз (дрожжевая инфекция) у детей

Кандидоз, иногда называемый монилиозом или дрожжевой инфекцией, — это инфекция, вызываемая дрожжами на коже и / или слизистых оболочках.Хотя дрожжи обычно безвредны для пищеварительной системы, области подгузников и влагалища, они могут вызывать инфекцию при повреждении кожи, в теплых и влажных условиях, или когда у ребенка подавлена ​​иммунная система. У некоторых очень больных детей он может инфицировать более глубокие ткани или попасть в кровоток и вызвать серьезное заболевание. Антибиотики и кортикостероиды также могут вызывать рост дрожжей, потому что нормальные бактерии в тканях погибают, позволяя дрожжам беспрепятственно расти.

Симптомы кандидоза различаются в зависимости от локализации инфекции. Ниже приведены наиболее распространенные симптомы дрожжевой инфекции. Однако каждый ребенок может испытывать симптомы по-разному. Симптомы могут включать:

Расположение

Симптомы / признаки

Кожные складки или пупок

Вагина

Пенис

Рот (молочница)

Уголки рта (perlèche)

Ногтевое ложе (паронихия)

Симптомы кандидоза могут напоминать другие кожные заболевания.Всегда консультируйтесь с врачом вашего ребенка для постановки диагноза.

В дополнение к истории болезни и физическому осмотру вашего ребенка врач вашего ребенка может соскоблить образец кожи, чтобы подтвердить диагноз с помощью микроскопа или посева.

Кандидоз хорошо поддается лечению лечебными мазями. Дрожжевые инфекции влагалища или ануса можно лечить с помощью лечебных суппозиториев. Молочницу можно лечить лекарственным средством для полоскания рта или леденцами, которые растворяются во рту. Тяжелую инфекцию или инфекции у ребенка с ослабленным иммунитетом можно лечить пероральными противодрожжевыми препаратами.

Кандидоз (дрожжевая инфекция) — кожные заболевания

  • Противогрибковые препараты, наносимые на кожу или принимаемые внутрь

  • Меры по сохранению сухости участка

Инфекции кожных складок лечат противогрибковыми кремами, порошками, растворы или другие продукты, которые наносятся непосредственно на кожу (актуальные). Примеры включают миконазол, клотримазол, оксиконазол, кетоконазол, эконазол, циклопирокс и нистатин.У здоровых людей инфекции кожных складок обычно легко излечиваются. Сохранение кожи сухой помогает избавиться от инфекции и предотвратить ее повторное появление. Растворы, которые сушат кожу (например, раствор Бурова), или антиперспиранты для местного применения помогают сохранить поверхность сухой. Сохранение места в сухом состоянии также может помочь предотвратить повторение. Людям, у которых много инфицированных кожных складок, можно принимать внутрь лекарства (например, флуконазол).

Вагинальный кандидоз лечится противогрибковыми препаратами, которые можно наносить в виде крема на пораженный участок, вводить во влагалище в виде суппозитория или принимать внутрь (например, флуконазол).

Сыпь от подгузников лечится с помощью более частой смены подгузников, использования супервпитывающих или ультраабсорбирующих одноразовых подгузников и крема, содержащего противогрибковые препараты (например, бутоконазол, клотримазол, флуконазол, кетоконазол или миконазол) .

Кандидозная паронихия лечится путем защиты участка от влаги. Врачи назначают противогрибковые препараты, которые принимают внутрь или наносят на кожу.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *