Кровь лпнп что это: Анализ: Липидограмма (холестерин, ЛПВП, ЛПНП, триглицериды, коэффициент атерогенности)

Содержание

Биохимический анализ крови ЛПНП. Холестерин ЛПНП в лаборатории CMD

Референсные значения (вариант нормы):

Возраст, годы Мужчины Женщины Единицы измерения
< 1 0,5 — 3,9 0,5 — 3,9 ммоль/л
1 — 5 1,5 — 4,00 1,5 — 4,0
5 — 10 1,63 — 3,34 1,76 — 3,63
10 — 15 1,66 — 3,44 1,76 — 3,52
15 — 20 1,61 — 3,37 1,53 — 3,55
20 — 25 1,53 — 3,81 1,48 — 4,12
25 — 30 1,81 — 4,27 1,84 — 4,25
30 — 35 2,02 — 4,79 1,81 — 4,04
35 — 40 2,1 — 4,9 1,94 — 4,45
40 — 45 2,25 — 4,82 1,92 — 4,51
45 — 50 2,51 — 5,23 2,05 — 4,82
50 — 55 2,31 — 5,1 2,28 — 5,21
55 – 60 2,28 — 5,26 2,31 — 5,44
60 – 65 2,15 — 5,44 2,59 — 5,81
65 – 70 2,54 — 5,44 2,38 — 5,73
> 70 2,28 — 4,82 2,49 — 5,34

В соответствии со следующими международными рекомендациями:

2019 ESC/EAS Guidelines for the management of dyslipidaemias: lipid modification to reduce cardiovascular risk. The Task Force for the management of dyslipidaemias of the European Society of Cardiology (ESC) and European Atherosclerosis Society (EAS).

Expert Panel on Integrated Guidelines for Cardiovascular Health and Risk Reduction in Children and Adolescents, 2012г.

National Cholesterol Education Program. ATP III Guidelines At-A-Glance. Quick Desk Reference, 2002г. Public Health Service National Institutes of Health National Heart, Lung, and Blood Institute.

Представлены комментарии к тесту ЛПНП-холестерин:

Значения для детей и подростков до 19 лет: оптимальные: менее 2,85; пограничные 2,85 – 3,37; высокие — более 3,37 ммоль/л.

Значения для взрослых: оптимальные – менее 2,85; выше оптимального 2,85 – 3,36; пограничные 3,37 – 4,13; высокие 4,14 – 4,91; очень высокие – более 4,92 ммоль/л.

Пример результата:

Параметр Результат Референсные значения Ед.
изм.
ЛПНП-холестерин (LDL) 4,98 См. комментарий ммоль/л
Комментарий к тесту ЛПНП-холестерин:
Целевой уровень ЛПНП-холестерина у пациентов с низким суммарным сердечно-сосудистым риском < 3,0 ммоль/л. Целевые значения ЛПНП-холестерина и уровень индивидуального сердечно-сосудистого риска (очень высокий, высокий, умеренный, низкий) определяется врачом на очной консультации. Референсные значения смотрите на нашем сайте: www.cmd-online.ru
Повышение значений Снижение значений
  • Наследственная гиперлипопротеинемия IIa и IIb типов
  • Курение
  • Ожирение
  • Сахарный диабет 2 типа
  • Нефротический синдром
  • Анемия
  • Прием лекарственных препаратов (статины, секвестранты желчных кислот, никотиновая кислота)
  • Диета, богатая полиненасыщенными жирными кислотами

Обращаем Ваше внимание на то, что интерпретация результатов исследований, установление диагноза, а также назначение лечения, в соответствии с Федеральным законом № 323-ФЗ «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации» от 21 ноября 2011 года, должны производиться врачом соответствующей специализации.

Анализ крови на холестерин липопротеинов низкой плотности сдать в Сургуте. ЛПНП

Липопротеины низкой плотности (ЛПНП) — так называемый «плохой холестерин», липопротеины, которые приналичии повреждения сосудов откладываются в сосудистой стенке, что приводит к развитию атеросклероза.
Данный тест позволяет оценить риск развития атеросклероза.

Холестерин является нерастворимым веществом, транспортироваться по организму он может только в составе белковых соединений (липопротеинов). В зависимости от пропорции компонентов различают липопротеины высокой, низкой и очень низкой плотности. В ходе данного исследования определяется количество в крови ЛПНП. Его переизбыток указывает на высокий риск атеросклероза, развития патологий сердца и сосудов. Такой холестерин способен откладываться в стенке сосудов в виде бляшек, которые ухудшают или полностью перекрывают просвет кровеносного сосуда.


Атеросклеротические изменения обычно наблюдаются у пациентов среднего и пожилого возраста, но они могут также появиться у молодых людей и детей. Заболевание развивается в течение нескольких лет, долгое время может никак не проявляться. Поэтому важно своевременно определить риск развития патологии и при необходимости провести профилактические мероприятия.

Необходимый для организма холестерол продуцируется в печени. Кроме того, это вещество поступает вместе с рядом продуктов питания. Его переизбыток в рационе приводит к повышению показателей, что чревато серьезными проблемами со здоровьем. Полученные в ходе проведения данного теста результаты оценивают с учетом наличия факторов риска появления патологий сердца и сосудов, наличия сопутствующих заболеваний. Повышение и снижение ХС ЛПНП характерно для целого ряда заболеваний. Для установления точного диагноза проводится комплексное обследование, включающее лабораторные тесты и инструментальные исследования.

Программа обследования подбирается врачом в индивидуальном порядке.

Уровень ЛПНП может периодически меняться и при отсутствии патологических изменений в организме. Если результаты теста не согласуются с данными осмотра, других исследований, его через несколько месяцев проводят повторно.

Высокие значения могут быть обусловлены голоданием, курением, приемом ряда препаратов, употреблением в пищу большого количества животных жиров. Снизить количество ЛПНП может физическая нагрузка, специальная диета.

ХОЛЕСТЕРИН ЛИПОПРОТЕИДОВ НИЗКОЙ ПЛОТНОСТИ

Липопротеины низкой плотности (ЛПНП, LDL-С) являются одной из транспортнывх форм переноса липидов.

Их часто называют «плохим» холестерином, поскольку они способствуют отложению его излишков на стенках кровеносных сосудов, что приводит к атеросклерозу и сердечно-сосудистым патологиям. Обратному процессу способствуют липопротеины высокой плотности (ЛПВП, HDL-C), которые транспортируют холестерин в печень, где он перерабатывается. Уровень ЛПНП лучше коррелирует с риском развития атеросклероза, чем уровень общего холестерина.

В каких случаях обычно назначают исследование?

Тест на липопротеины низкой плотности входит в исследования «Липидный профиль, базовый» и «Липидный профиль расширенный». Оба комплексных лабораторных теста используются для скрининга нарушений обмена липидов и определения рисков развития сердечно-сосудистых заболеваний.

Оценка уровня ЛПНП важна у пациентов с нарушениями липидного обмена.

Анализ является обязательным при наличии факторов риска атеросклероза и сердечно-сосудистых заболеваний. К факторам риска относятся: семейная история ишемической болезни сердца (ИБС), гипертония, курение, ожирение, сахарный диабет и низкий уровень холестерина ЛПВП.

Высокий уровень ЛПВП (липопротеинов высокой плотности, HDL-C) считается благоприятным фактором, уменьшающим риск.

Что именно определяется в процессе анализа?

Уровень ЛПНП в сыворотке крови определяется колориметрическим методом. У пациентов с крайне высоким уровнем триглицеридов, а также у пациентов с семейной гиперлипопротеинемией III типа значения ЛПНП могут быть искажены.

Что означают результаты теста?

Нормальный уровень липидов в целом помогает поддерживать здоровье сердечно-сосудистой системы и снижает шансы развития заболеваний. Лечащий врач будет принимать во внимание результаты LDL-C и других компонентов липидного профиля, а также иные факторы риска, чтобы определить общую вероятность развития сердечно-сосудистых заболеваний у пациента, независимо от того, требуется ли лечение и, если нужно, подобрать наиболее эффективную программу терапии.

Согласно NCEP (National Cholesterol Education Program), если у человека нет других факторов риска, содержание LDL-C можно оценить следующим образом:

  • менее 2,6 ммоль/л) – оптимальное значение;
  • 2,6-3,3 ммоль/л – близкое к оптимальному;
  • 3,4-4,1 ммоль/л – пограничное;
  • 4,1-4,90 ммоль/л – высокое;
  • более 4,90 ммоль/л — очень высокое.

Целевые значения для LDL-C могут меняться в зависимости от индивидуальных особенностей пациента. Изменение образа жизни (диета, физические упражнения) рекомендуется в качестве лечения для умеренно повышенного содержания ЛПНП. Определенные комбинации значений LDL-C и отдельных факторов риска требуют лечения статинами для снижения уровня холестерина в сочетании с изменением образа жизни.

Низкая концентрация ЛПНП обычно не вызывает беспокойства у врачей, однако такой результат может наблюдаться у людей с наследственным дефицитом липопротеидов (гипобеталипопротеинемия), гипертиреозом, инфекционно-воспалительными процессами или циррозом печени.

Сроки выполнения теста

Обычно результат можно получить уже на следующий день.

Как подготовиться к анализу?

Кровь надо сдавать натощак.

Оценка сердечно-сосудистого риска: липидный спектр

Липидный спектр (липидограмма/липидный профиль) крови – это анализ крови на холестерин и его различные фракции. Оценка липидного профиля – это обязательный анализ для оценки сердечно-сосудистого риска. Он необходим для определения баланса жирового обмена в организме, риска развития атеросклероза, гипертонии, тромбозов, а также риска развития инфаркта миокарда.

Данное исследование поможет выявить «скрытую» угрозу инфаркта, инсульта, гипертонии и вовремя скорректировать образ жизни без приема дополнительных препаратов. Если заболевание уже выявлено, то анализ поможет осуществлять полноценный контроль проводимой терапии для снижения прогрессирования болезни.

В Централизованной лаборатории Омского клинического диагностического центра проводится оценка липидного профиля. Почему у нас?

  • полноценный липидный спектр (8 показателей): общий холестерин, триглицериды, холестерин липопротеинов высокой плотности, холестерин липопротеинов низкой плотности, холестерин липопротеинов очень низкой плотности, индекс атерогенности, аполипопротеин А1, аполипопротеин В1;
  • комплексное исследование выгоднее, чем все показатели по отдельности;
  • результаты будут готовы в день взятия крови;
  • высокотехнологичное оборудование, которое обеспечивает высокую точность исследований, определение всех показателей прямыми методиками;
  • в работе используются реагенты ведущих мировых производителей.

Липидограмму может сдать по собственному желанию любой человек. Согласно существующим рекомендациям липидный профиль должны сдавать:

  • Все люди после 40 лет для оценки сердечно-сосудистого риска.
  • Лица младше 40 лет при наличии факторов риска сердечно-сосудистых заболеваний: уровень АД выше 140/90 мм рт.ст., курение, избыточный вес или ожирение, малоподвижный образ жизни.
  • Лица с отягощенной наследственностью по сердечно-сосудистым заболеваниям (члены семьи страдают гипертонией, сахарным диабетом, гиперхолестеринемией, перенесли инфаркт или инсульт).
  • Пациенты с ишемической болезнью сердца, после инфаркта, транзиторной ишемической атаки или инсульта, с атеросклеротическим поражением артерий (бляшками в сосудах), аневризмой аорты, после стентирования или шунтирования коронарных артерий, с семейной гиперхолестеринемией, сахарным диабетом, гипотиреозом, хронической болезнью почек, хроническими аутоиммунными заболеваниями, эректильной дисфункцией.
  • Пациенты перед назначением липидснижающей терапии и с целью контроля эффективности лечения.

ЛПНП (β-липопротеиды) (определение уровня в крови)

Артикул: 00031

Стоимость анализа

в лаборатории:

Экспресс

760руб

стоимость указана без учета стоимости забора биологического материала

Добавить в корзину
Холестерин ЛПНП

Липопротеиды низкой плотности или ЛПНП входят в состав липидного профиля, чтобы определить индивидуальный риск развития сердечно-сосудистых заболеваний и необходимость терапии при изменении концентрации липидов в крови, а также мониторинга терапии.

Липопротеиды низкой плотности представляют из себя мицеллы, в состав которых входят фосфолипиды, апо-белки, холестерин и триглицериды. Эта липидная фракция образуется из ЛПНП в результате обменных процессов, и служит для переноски холестерина из печени к клеткам периферических тканей, проходя через каналы между клетками эндотелия капилляров. Холестерин, высвобождаясь внутри клетки, регулирует скорость собственного синтеза путем ингибирования фермента ГМГ-КоА-редуктазы.

ЛПНП могут находиться в циркуляции несколько дней, защищенные от окисления антиоксидантами плазмы, в том числе жирорастворимыми (альфа-токоферол, убихинон). Однако при снижении антиоксидантной активности или задержки в плазме жирные кислоты, находящиеся в составе ЛПНП, подвергаются окислению, после чего окисленные мицеллы захватываются макрофагами.

Готовность результатов анализа

Обычные*: в тот же день (при условии сдачи до 12.00)

Дата сдачи анализа:
Дата готовности:

*не считая дня сдачи.

Экспресс

Подготовка к анализу

Натощак, не менее 12 часов после последнего приема пищи.

Забор биоматериала

Методы выполнения и тесты

Фотометрический метод . Количественный, ммоль/л

Файлы

Скачать образец результата анализа

Этот анализ входит в блоки:

  • Биохимический анализ крови, расширенный
  • Биохимический анализ крови, стандарт при беременности (расширенное обследование)
  • Липидный профиль (ЛПНП, ЛПВП, холестерин, триглицериды)
  • Обследование – стандарт Отделение ТЕРАПИИ: ОАК, ОАМ, Биохимический анализ крови, стандартный набор, Блок маркеров инфекций (антитела к ВИЧ, HBs-Ag, анти-HCV, антитела к Treponema Pallidum)
  • Обследование – экспресс Отделение ГИНЕКОЛОГИИ: ОАК, ОАМ, Биохимия крови, Блок маркеров инфекций (антитела к ВИЧ, HBs-Ag, анти-HCV, антитела к Treponema Pallidum, суммарные), Гинекологический мазок
Срок готовности анализов в экспресс-режиме (Cito)
Время сдачи Готовность
Будни Выходные
08:00-17:00 09:00-17:00 1-2 часа
17:00-20:30 На следующий день, как сданный в 8:00
08:00-12:00 09:00-12:00 3-5 часов
08:00-12:00 09:00-12:00 до 16:00
07:00-09:00 08:00-09:00 до 14:00
09:00-11:00 09:00-11:00 до 16:00

Для чего это нужно

Среди всех форм холестерина ЛПНП считается наиболее важным показателем в определении риска сердечно-сосудистых заболеваний. Эта форма холестерина считается нежелательной и часто называется «плохим холестерином», так как в этой форме холестерин откладывается в стенках кровеносных сосудов и вызывает их затвердение.

Как правило, интерпретация анализа производится комплексно, в составе липидного профиля, с оценкой других рисков развития сердечно-сосудистых заболеваний врачом-клиницистом.

Клиническое применение анализа крови на ЛПНП:
  • диагностика первичных и вторичных нарушений липидного обмена;
  • определение риска развития атеросклероза и связанных с ним осложнений;
  • мониторирование коррекции нарушений липидного обмена.

Значение анализов

Норма ЛПНП в крови

Референсные интервалы ЛПНП зависят от пола и возраста. Так, с возрастом уровень холестерина ЛПНП значительно повышается.

Повышение концентрации ЛПНП

ЛПНП повышены в следующих случаях:

  • атеросклероз;
  • первичная семейная гиперлипидемия;
  • вторичные гиперлипидемии: гипотериоз, заболевания почек, холестаз, заболевания печени, сахарный диабет, синдром Кушинга, анорексия, ожирение.
Снижение концентрации ЛПНП
  • первичная гиперлепидемия I и III типа;
  • хронические анемии, болезни печени, артрит, миелома.
Холестерин при беременности

При беременности уровни всех фракций холестерина возрастают во втором и особенно в третьем триместре и возвращаются в норму в течении четырех недель после родов.

Значительное повышение уровня фракций холестерина наблюдается у женщин, имеющих в анамнезе семейную гиперхолестеринемию.

Также спрашивают:

С этим анализом сдают:

Как сдать анализы в Лабораториях ЦИР?

Для экономии времени оформите заказ на анализ в Интернет-магазине! Оплачивая заказ онлайн, Вы получаете скидку 10% на весь оформленный заказ!

У Вас есть вопросы? Напишите нам или позвоните +7 (495) 514-00-11. По анализам Вы можете задать вопрос на нашем форуме и обратиться на консультацию к специалисту.

Макроглобулинемия Вальденстрема (лимфоплазмоцитарная лимфома): Введение

НА ЭТОЙ СТРАНИЦЕ: Вы найдете некоторую основную информацию о макроглобулинемии Вальденстрема и о частях тела, которые она может поражать. Это первая страница руководства Cancer.Net по макроглобулинемии Вальденстрема (лимфоплазмоцитарной лимфоме). Используйте меню для просмотра других страниц. Думайте об этом меню как о дорожной карте для этого полного руководства.

Макроглобулинемия Вальденстрема — это разновидность неходжкинской лимфомы (НХЛ), поражающая малые лимфоциты, представляющие собой лейкоциты.

О лимфоме и лимфатической системе

НХЛ — это термин, который относится ко многим типам рака лимфатической системы, которые могут иметь различные симптомы и признаки, физические данные и варианты лечения.

Лимфатическая система состоит из тонких трубочек, которые разветвляются во все части тела и помогают бороться с инфекцией. Лимфатическая система несет лимфу, бесцветную жидкость, содержащую лимфоциты. Лимфоциты борются с микробами в организме. В-лимфоциты, также называемые В-клетками, вырабатывают антитела для борьбы с бактериями.Т-лимфоциты, или Т-клетки, убивают вирусы и чужеродные клетки и заставляют В-клетки вырабатывать антитела.

Группы бобовидных органов, называемых лимфатическими узлами, расположены по всему телу в разных местах лимфатической системы. Лимфатические узлы располагаются скоплениями в области живота, паха, таза, подмышек и шеи. Другие части лимфатической системы включают селезенку, которая вырабатывает лимфоциты и фильтрует кровь; вилочковая железа, орган под грудиной; и миндалины, расположенные в горле.

О лимфоплазмоцитарной лимфоме и макроглобулинемии Вальденстрема

Лимфома начинается, когда здоровые клетки в лимфатической системе изменяются и выходят из-под контроля, что может привести к образованию опухоли.

Лимфоплазмоцитарная лимфома — это индолентная или медленно растущая форма НХЛ, которая начинается в В-клетках, и 1% людей с НХЛ имеют этот подтип. Лимфоплазмоцитарная лимфома часто поражает костный мозг, иногда лимфатические узлы и селезенку. У многих людей эта лимфома продуцирует белок, называемый иммуноглобулином М (IgM) или М-белком, который содержится в крови.Если это происходит, состояние называется макроглобулинемией Вальденстрема. Большинство случаев лимфоплазмоцитарной лимфомы составляют макроглобулинемию Вальденстрема. В этом руководстве для обсуждения обоих состояний будет использоваться термин «макроглобулинемия Вальденстрема».

Поскольку лимфатическая ткань находится во многих частях тела, макроглобулинемия Вальденстрема может начаться практически в любом месте и может распространиться почти на любой орган тела. Когда у людей впервые диагностируют заболевание, оно обычно уже распространилось на кровь и костный мозг.В конечном итоге он также может поражать лимфатические узлы, печень или селезенку и редко желудок, кишечник, легкие, кожу или щитовидную железу.

Поскольку макроглобулинемия Вальденстрема похожа на некоторые В-клеточные лимфомы или множественную миелому, лечение этих пациентов часто может быть одинаковым. Вам следует обсудить с лечащим врачом конкретный диагноз и план лечения, который лучше всего подходит для вас.

Узнайте больше о подтипах НХЛ.

Хотите больше информации?

Если вам нужно больше информации, изучите эти связанные предметы.Обратите внимание, что эти ссылки ведут на другие разделы сайта Cancer.Net:

.
  • ASCO. Этот бесплатный информационный бюллетень доступен в формате PDF, поэтому его легко распечатать.

Следующим разделом этого руководства является Статистика . Это помогает объяснить количество людей, у которых диагностирована макроглобулинемия Вальденстрема, и общую выживаемость.Используйте меню, чтобы выбрать другой раздел для чтения в этом руководстве.

Липопротеинлипаза и атеросклероз — PubMed

Липопротеинлипаза (LPL) представляет собой фермент, ограничивающий скорость, который гидролизует циркулирующие липопротеины, богатые триглицеридами, такие как липопротеины очень низкой плотности и хиломикроны. Снижение активности ЛПЛ связано с повышением уровня триглицеридов (ТГ) в плазме и снижением уровня холестерина липопротеинов высокой плотности (ЛПВП).Повышение уровня ТГ в плазме и снижение уровня холестерина ЛПВП являются факторами риска ишемической болезни сердца. Однако остается неясным, способствует ли LPL прямо или косвенно атеросклерозу или защищает от него, поскольку на этот счет существуют две противоположные точки зрения: одна, согласно которой LPL способствует развитию атеросклероза, и другая, согласно которой LPL защищает от атеросклероза. Было проведено множество исследований, чтобы выяснить, является ли LPL антиатерогенным или атерогенным ферментом, с использованием животных с генетическими дефектами или с избытком этого фермента.В результате этих исследований было получено много доказательств того, что ЛПЛ является антиатерогенным ферментом. Мы предположили, что повышение активности ЛПЛ вызовет снижение уровня ТГ в плазме и повышение уровня холестерина ЛПВП, что приведет к защите от развития атеросклероза. Чтобы проверить эту гипотезу, мы изучили действие активатора LPL NO-1886 на животных. Было показано, что NO-1886 увеличивает мРНК ЛПЛ в жировой ткани и миокарде и увеличивает активность ЛПЛ в жировой ткани, миокарде и скелетных мышцах, что приводит к повышению постгепариновой активности ЛПЛ в плазме и массы ЛПЛ у крыс.Также было показано, что NO-1886 снижает уровень ТГ в плазме, что сопровождается сопутствующим повышением уровня холестерина ЛПВП. Длительное введение NO-1886 крысам и кроликам с экспериментальным атеросклерозом тормозило развитие атеросклеротических поражений коронарных артерий и аорты. Результаты множественного регрессионного анализа в этих исследованиях свидетельствуют о том, что повышение уровня холестерина ЛПВП в плазме и снижение уровня ТГ защищают от атеросклероза. В наших исследованиях мы определили, что атерогенный липидный профиль изменяется на антиатерогенный липидный профиль за счет повышения активности ЛПЛ, что приводит к защите от развития атеросклероза.Поэтому мы считаем, что высокая активность ЛПЛ является антиатерогенной, тогда как низкая активность ЛПЛ является атерогенной.

Биохимия, липопротеинлипаза — StatPearls

Введение

Липопротеинлипаза (LPL) представляет собой внеклеточный фермент на поверхности эндотелия сосудов, который расщепляет циркулирующие триглицериды в кровотоке. Эти триглицериды встроены в липопротеины очень низкой плотности (ЛПОНП) и в хиломикроны, которые перемещаются по кровотоку.Роль липопротеинлипазы важна для понимания патофизиологии семейной дислипидемии первого типа или гиперхиломикронемии и ее клинических проявлений. LPL также играет важную роль в понимании сердечной фармакологии фибратов как класса лекарств и в лечении пациентов с высоким уровнем триглицеридов в сыворотке. В этом обзоре мы рассмотрим функцию, патофизиологию и клиническую значимость липопротеинлипазы.[1]

Молекулярный

Структура липопротеинлипазы остается неопределенной.Но он похож на ферменты семейства липаз и состоит из двух отдельных областей. N-концевой домен имеет липолитический активный сайт и С-концевой домен. Эти две области соединяются с помощью пептидной связи.

Функция

Липопротеинлипаза — это фермент, расщепляющий циркулирующие триглицериды в кровотоке. Эти триглицериды встроены в липопротеины очень низкой плотности (ЛПОНП) и в хиломикроны, которые перемещаются по кровотоку. Липопротеинлипаза представляет собой внеклеточный фермент и обнаруживается на поверхности эндотелия сосудов, прикрепленном к стенкам капилляров.Он находится преимущественно в жировой ткани, мышцах и тканях сердца, но не присутствует в печени, поскольку в печени имеется печеночная липаза. Липопротеины превращают триглицериды в жирные кислоты и глицерин. Жирные кислоты, высвобождаемые из триглицеридов, затем используются для хранения в жировой ткани или в качестве топлива в скелетных или сердечных мышцах. Для активации липопротеинлипазы требуется аполипопротеин-CII, кофактор липопротеинлипазы, который переносится хиломикроном, а также липопротеинами очень низкой плотности и липопротеинами промежуточной плотности (IDL). Липопротеинлипаза будет уменьшать хиломикроны, удаляя жирные кислоты из триглицеридов, и жирные кислоты переносятся в адипоциты и скелетные мышцы, в то время как остатки хиломикронов поглощаются печенью посредством рецептор-опосредованного эндоцитоза.[1]

Патофизиология

Патофизиология липопротеинлипазы очевидна при семейных дислипидемиях (особенно первого типа) или гиперхиломикронемии. Гиперхиломикронемия является аутосомно-рецессивным генетически наследуемым заболеванием, при котором наблюдается значительное повышение уровня триглицеридов, >1000, так что плазма этих пациентов имеет молочный вид.Также у этих людей значительно повышен уровень хиломикронов в крови.[2]

Как при семейной дислипидемии первого типа, так и при гиперхиломикронемии наблюдается тяжелая дисфункция LPL; это происходит из-за дефицита LPL и дефицита кофактора LPL или дефицита аполипопротеина C2, который необходим для активации липопротеинлипазы. LPL обычно удаляет триглицериды из хиломикронов, и если этот процесс не работает, первоначальный распад триглицеридов не может произойти. Следовательно, в сыворотке будут накапливаться триглицериды, а хиломикроны станут очень большими, поскольку они заполнены триглицеридами, которые не удаляются.[3]

Пациенты с гиперхиломикронемией имеют рецидивирующий панкреатит, увеличение печени и ксантомы из-за отсутствия удаления триглицеридов из хиломикронов и, как следствие, повышения уровня триглицеридов в сыворотке и увеличения количества хиломикронов. Это накопление в конечном итоге приводит к накоплению триглицеридов в поджелудочной железе, печени и их отложению на коже, вызывая эти клинические проявления.Ксантомы возникают из-за бляшек гистиоцитов, нагруженных липидами, поскольку макрофаги в кровотоке эндоцитируют избыток триглицеридов сыворотки. Клинически ксантомы проявляются в виде бугорков на коже или вдоль век у пациентов с высоким уровнем липидов в сыворотке. Повышенные триглицериды могут вызывать острый панкреатит; это может включать увеличение хиломикронов в плазме. Эти хиломикроны могут закупорить капилляры, что может привести к уменьшению кровотока и, в конечном счете, к ишемии. Когда происходит повреждение сосудов, это может привести к тому, что липазы поджелудочной железы получат доступ к триглицеридам сыворотки.Затем липазы поджелудочной железы могут расщеплять эти триглицериды, что приводит к высвобождению продуктов распада триглицеридов, включая свободные жирные кислоты. Это увеличение количества свободных жирных кислот может повредить ткань поджелудочной железы, что приведет к панкреатиту.[4]

Лечение семейной дислипидемии 1 типа или гиперхиломикронемии заключается в диете с очень низким содержанием жиров. При тщательном контроле за питанием больные часто имеют нормальную продолжительность жизни. Кроме того, при жестком диетическом контроле липидов у пациентов не наблюдается явного повышенного риска развития атеросклероза.Орлистат — это лекарство, которое также можно использовать для улучшения состояния при гиперхиломикронемии за счет снижения риска панкреатита; это ингибитор панкреатической липазы, который вводят перед едой.[5]

Клиническое значение

Липопротеины имеют клиническое значение в сердечной фармакологии, в частности, при контроле уровня холестерина. Фибраты, такие как фенофибрат, безафибрат и гемфиброзил, действуют путем активации альфа-рецептора, активируемого пролифератором пероксисом (PPAR-альфа), и усиливают липопротеинлипазу.Активация PPAR альфа приводит к модификации транскрипции гена. Модифицированная транскрипция генов приводит к повышению активности липопротеинлипазы. Активность PPAR-альфа также увеличивает окисление жирных кислот в печени, что приводит к снижению уровня липопротеинов очень низкой плотности. В конечном итоге это приводит к снижению уровня триглицеридов в сыворотке, так как они усиливают гидролиз ЛПОНП и триглицеридов хиломикронов с помощью липопротеинлипазы. Таким образом, фибраты показаны пациентам с чрезвычайно повышенным уровнем триглицеридов.Фибраты мягко снижают уровень ЛПНП в сыворотке за счет снижения ЛПОНП; однако статины являются терапией первой линии для снижения уровня ЛПНП. Фибраты также индуцируют синтез липопротеинов высокой плотности (ЛПВП), незначительно повышая уровень ЛПВП в сыворотке за счет активации аполипопротеина А1 и аполипопротеина А2, которые будут создавать зарождающиеся ЛПВП. Клинически фибраты в первую очередь показаны для снижения уровня триглицеридов в крови, и они являются наиболее эффективным классом препаратов для этой функции. Побочные эффекты фибратов включают холестериновые камни в желчном пузыре, так как они увеличивают содержание холестерина в желчи.Фибраты также могут вызывать рабдомиолиз, а риск миопатии выше при сочетании со статинами. Фибраты также могут вызывать повышение уровня ферментов печени, таких как аланинтрансаминаза (АЛТ), аспартатаминотрансфераза (АСТ), щелочная фосфатаза (ЩФ) и гамма-глутамилтранспептидаза (ГГТ). Фибраты обычно комбинируют с другими препаратами для снижения уровня холестерина, поскольку они повышают уровень липопротеинов низкой плотности (ЛПНП) [6].

Клинически ЛПЛ играет важную роль в прогрессировании атеросклероза.LPL является компонентом атеросклеротических поражений, происходящих из макрофагов. Кроме того, у пациентов с выраженным атеросклерозом было обнаружено повышенную массу и активность ЛПЛ в постгепариновой плазме. LPL способствует образованию атерогенных липопротеинов. LPL действует на хиломикроны и ЛПОНП, гидролизуя из них триглицериды и образуя остатки ЛПОНП и остатки хиломикронов. Остатки ЛПОНП и остатки хиломикронов состоят из высокой концентрации сложных эфиров холестерина и затем включаются в макрофаги.Свободные жирные кислоты образуются с помощью LPL, и макрофаги затем повторно этерифицируют их, что приводит к накоплению эфиров холестерина в макрофагах, вызывая превращение макрофагов в пенистые клетки. ЛПЛ катализирует превращение ЛПОНП в липопротеины промежуточной плотности (ЛПНП), которые печеночные липазы затем превращают в липопротеины низкой плотности (ЛПНП). Пенистые клетки также образуются, когда макрофаги включают окисленные ЛПНП через свои рецепторы-мусорщики в эндотелии сосудов.[7]

Каталожные номера

1.
Мид Дж. Р., Ирвин С. А., Рэмджи Д. П. Липопротеинлипаза: структура, функция, регуляция и роль в заболевании. J Mol Med (Берл). 2002 г., декабрь; 80 (12): 753-69. [PubMed: 12483461]
2.
Фалько Дж.М. Синдром семейной хиломикронемии: клиническое руководство для эндокринологов. Эндокр Практ. 2018 августа; 24 (8): 756-763. [PubMed: 30183397]
3.
Blom DJ, O’Dea L, Digenio A, Alexander VJ, Karwatowska-Prokopczuk E, Williams KR, Hemphill L, Muñiz-Grijalvo O, Santos RD, Baum S, Witztum JL.Характеристика синдрома семейной хиломикронемии: исходные данные исследования APPROACH. Дж. Клин Липидол. 2018 сент. — окт.; 12(5):1234-1243.e5. [PubMed: 30318066]
4.
Юань Г., Аль-Шали К.З., Хегеле Р.А. Гипертриглицеридемия: этиология, последствия и лечение. CMAJ. 2007 г., 10 апреля; 176(8):1113-20. [Статья бесплатно PMC: PMC1839776] [PubMed: 17420495]
5.
Blackett P, Tryggestad J, Krishnan S, Li S, Xu W, Alaupovic P, Quiroga C, Copeland K. Аномалии липопротеинов при сложном гетерозиготном дефиците липопротеинлипазы после лечения низкожировой диетой и орлистатом.Дж. Клин Липидол. 2013 март-апрель;7(2):132-9. [PubMed: 23415432]
6.
Окопень Б., Булдак Л., Болдис А. Польза и риски лечения фибратами – исчерпывающее резюме. Эксперт преподобный Clin Pharmacol. 2018 ноябрь;11(11):1099-1112. [PubMed: 30328735]
7.
Кобаяши Дж., Мабучи Х. Липопротеиновая липаза и атеросклероз. Энн Клин Биохим. 2015 ноябрь; 52 (часть 6): 632-7. [PubMed: 25995285]

Макроглобулинемия Вальденстрема — Симптомы и причины

Обзор

Макроглобулинемия Вальденстрема (mak-roe-glob-u-lih-NEE-me-uh) — это редкий тип рака, который начинается в лейкоцитах.

Если у вас макроглобулинемия Вальденстрема, ваш костный мозг вырабатывает слишком много аномальных лейкоцитов, которые вытесняют здоровые клетки крови. Аномальные лейкоциты производят белок, который накапливается в крови, нарушает кровообращение и вызывает осложнения.

Макроглобулинемия Вальденстрема считается разновидностью неходжкинской лимфомы. Иногда ее называют лимфоплазмоцитарной лимфомой.

Товары и услуги

Показать больше продуктов Mayo Clinic

Симптомы

Макроглобулинемия Вальденстрема развивается медленно и может не вызывать признаков и симптомов в течение многих лет.

Когда они возникают, признаки и симптомы могут включать:

  • Легкий синяк
  • Кровотечение из носа или десен
  • Усталость
  • Потеря веса
  • Онемение рук или ног
  • Лихорадка
  • Головная боль
  • Одышка
  • Изменения зрения
  • Путаница

Когда обращаться к врачу

Запишитесь на прием к врачу, если у вас есть какие-либо постоянные признаки и симптомы, которые вас беспокоят.

Получите экспертную информацию о раке Клиники Мэйо, доставленную на ваш почтовый ящик.

Подпишитесь бесплатно и получите подробное руководство по преодолению больных раком, а также полезную информацию о том, как получить второе мнение. Вы можете отписаться в любой время.

Я хотел бы узнать больше о

Подписаться

Узнайте больше об использовании данных Mayo Clinic.

Чтобы предоставить вам наиболее актуальную и полезную информацию, а также понять, какие информация полезна, мы можем объединить вашу электронную почту и информацию об использовании веб-сайта с другая информация о вас, которой мы располагаем. Если вы пациент клиники Майо, это может включать защищенную информацию о здоровье. Если мы объединим эту информацию с вашей защищенной медицинской информации, мы будем рассматривать всю эту информацию как информацию и будет использовать или раскрывать эту информацию только так, как указано в нашем уведомлении о практики конфиденциальности. Вы можете отказаться от получения сообщений по электронной почте в любое время, нажав на ссылка для отписки в письме.

Спасибо за подписку

Подробное руководство по борьбе с раком скоро будет в вашем почтовом ящике. Вы также получать электронные письма от Mayo Clinic о последних новостях, исследованиях и лечении рака.

Если вы не получили наше письмо в течение 5 минут, проверьте папку СПАМ и свяжитесь с нами. в информационных бюллетенях@mayoclinic.ком.

Извините, что-то пошло не так с вашей подпиской

Повторите попытку через пару минут

Повторить попытку

Причины

Неясно, что вызывает макроглобулинемию Вальденстрема.

Врачи знают, что болезнь начинается с одного аномального лейкоцита, в генетическом коде которого появляются ошибки (мутации). Ошибки говорят клетке продолжать быстро размножаться.

Поскольку раковые клетки не созревают, а затем умирают, как нормальные клетки, они накапливаются, в конечном итоге подавляя производство здоровых клеток. В костном мозге — мягкой кроветворной ткани, которая заполняет центр большинства ваших костей — клетки макроглобулинемии Вальденстрема вытесняют здоровые клетки крови.

Клетки макроглобулинемии Вальденстрема продолжают пытаться вырабатывать антитела, как это делают здоровые лейкоциты, но вместо этого они производят аномальные белки, которые организм не может использовать. Белок иммуноглобулин М (IgM) накапливается в крови, нарушает кровообращение и вызывает осложнения.

Факторы риска

Факторы, которые могут увеличить риск макроглобулинемии Вальденстрема, включают:

  • Быть старше. Макроглобулинемия Вальденстрема может возникнуть в любом возрасте, но чаще всего ее диагностируют у взрослых в возрасте 65 лет и старше.
  • Быть мужчиной. У мужчин чаще диагностируется макроглобулинемия Вальденстрема.
  • Быть белым. Белые люди более склонны к развитию болезни по сравнению с людьми других рас.
  • Лимфома в семейном анамнезе. Если у вашего родственника была диагностирована макроглобулинемия Вальденстрема или другой тип В-клеточной лимфомы, у вас может быть повышенный риск.

Лечение макроглобулинемии Вальденстрема в клинике Майо

авг.18, 2020

Показать ссылки
  1. AskMayoExpert. Макроглобулинемия Вальденстрема. Рочестер, Миннесота: Фонд медицинского образования и исследований Мэйо; 2017.
  2. Макроглобулинемия Вальденстрема/лимфоплазмоцитарная лимфома. Форт Вашингтон, Пенсильвания: Национальная всесторонняя онкологическая сеть. http://www.nccn.org/professionals/physician_gls/f_guidelines.asp. По состоянию на 26 июня 2017 г.
  3. Хоффман Р. и др. Макроглобулинемия Вальденстрема и лимфоплазмоцитарная лимфома.В: Гематология: основные принципы и практика. 6-е изд. Филадельфия, Пенсильвания: Saunders Elsevier; 2013. https://www.clinicalkey.com. По состоянию на 26 июня 2017 г.
  4. Герц М.А. Макроглобулинемия Вальденстрема: обновленная информация о диагностике, стратификации риска и лечении за 2017 г. Американский журнал гематологии. 2017;92:209.
  5. Уорнер К.Дж. Аллскрипты EPSi. Клиника Мэйо, Рочестер, Миннесота, 14 апреля 2017 г.

Связанные

Товары и услуги

Показать больше продуктов и услуг Mayo Clinic

Макроглобулинемия Вальденстрема

Макроглобулинемия Вальденстрема – обзор

Дифференциальный диагноз

Лимфоплазмоцитарная лимфома однозначно положительна на внутрицитоплазматические и поверхностные моноклональные IgM, что легко диагностируется на парафиновых срезах. Эти поражения обычно отрицательны для CD5, CD10 и CD23. Характерный иммунофенотип, описанный для ЛПЛ/БВ по классификации ВОЗ, то есть CD5 , CD10 , CD23 , наблюдается в 60-80% новообразований, но вариации этого паттерна экспрессии антигена распространен, при этом CD23 выявляется в 40% случаев. Хотя в монографии ВОЗ указано, что t(9;14) присутствует в 50% случаев, транслокации с участием тяжелой цепи иммуноглобулина, включая t(9;14), на самом деле редки при LPL/WM.Делеция 6q21–q23, неспецифическая находка, является наиболее распространенной аберрацией, о которой сообщается у 40–70% пациентов. 139

Отличить ЛПЛ/БВ от других В-клеточных лимфом, особенно В-клеточных лимфом маргинальной зоны, которые имеют общие морфологические признаки, сложно, особенно с учетом традиционной практики отделения ЛПЛ/БВ от других лимфом на произвольном уровне сывороточного IgM больше не считается действительным. 139 Сообщалось об инфильтрации тучными клетками и эпителиоидными гистиоцитами, что приводило к путанице, либо маскируя лимфому, либо имитируя Т-клеточную лимфому. 140 Иммунофенотипирование важно, поскольку другие лимфомы могут иногда иметь лимфоплазмоцитоидные признаки, включая FL (CD10 + ) и MCL (CD5 + ). Кроме того, MCL обычно более однородна, чем лимфоплазмацитоидная лимфома, с неправильными ядрами. Рассеянные плазматические клетки и эпителиоидные гистиоциты также могут присутствовать при HL и Т-клеточных лимфомах, имитирующих LPL/WM; однако плазматические клетки в этих поражениях являются поликлональными.

Плазмоцитомы характеризуются пластами плазматических клеток и обычно являются незрелыми или плеоморфными.В отличие от ЛПЛ цитоплазматический иммуноглобулин обычно представляет собой IgG. Обычно это CD45 (LCA) и CD20 .

Основные признаки лимфоплазмоцитарной лимфомы/макроглобулинемии Вальденстрема

Малые лимфоидные клетки и плазмацитоидные лимфоидные клетки;

CD5 , CD10 В-клетки;

Аберрантная коэкспрессия CD20 и CD43;

Рестриктация легкой цепи; и

Цитоплазматический и поверхностный иммуноглобулин.

Что такое макроглобулинемия Вальденстрема?

Макроглобулинемия Вальденстрема (ВВ) является типом неходжкинской лимфомы (НХЛ). Раковые клетки вырабатывают большое количество аномального белка (называемого макроглобулином ). Другое название WM — лимфоплазмоцитарная лимфома . Это состояние раньше называлось макроглобулинемией Вальденстрема, поэтому некоторые люди называют его болезнью Вальденстрема.

Чтобы понять ВМ, полезно знать о функциях лимфоидной ткани в организме.

Лимфоидная ткань и иммунная система

Лимфоидная ткань состоит из нескольких типов клеток иммунной системы, которые работают вместе, чтобы помочь организму противостоять инфекциям. Лимфоидная ткань встречается во многих местах тела:

  • Лимфатические узлы, представляющие собой скопления клеток иммунной системы размером с горошину по всему телу, в том числе в области подмышек, в паху, по бокам шеи, внутри груди и живота
  • Костный мозг, мягкая внутренняя часть некоторых костей, где образуются новые клетки крови
  • Вилочковая железа, небольшой орган за грудной костью и перед сердцем
  • Селезенка, орган в левой части живота рядом с желудком
  • Миндалины и аденоиды в горле
  • Во всех системах организма, таких как пищеварительная система и дыхательная система

Лимфоциты (лимфоциты) являются основными клетками лимфоидной ткани. Два основных типа лимфоцитов:

  • В-лимфоциты (В-клетки) реагируют на инфекцию, превращаясь в другой тип клеток, называемый плазматической клеткой . Плазматические клетки вырабатывают белки, называемые антителами (также называемые иммуноглобулинами), которые помогают организму атаковать и убивать болезнетворные микробы, такие как бактерии.
  • Т-лимфоциты (Т-клетки) помогают направлять иммунные реакции, но они также могут напрямую убивать проникающие микробы.

Макроглобулинемия Вальденстрема

WM — это рак, который начинается в B-клетках.Раковые клетки у людей с WM аналогичны клеткам двух других типов рака: множественной миеломы и неходжкинской лимфомы. Множественная миелома считается раком плазматических клеток, а неходжкинская лимфома — раком лимфоцитов. Клетки WM имеют признаки как плазматических клеток, так и лимфоцитов и называются лимфоплазмоцитоидными .

Клетки WM вырабатывают большое количество антител определенного типа (иммуноглобулин M или IgM), известный как макроглобулин . Каждое антитело (белок), вырабатываемое клетками WM, одинаково, поэтому его называют моноклональным белком или просто белком M .Накопление этого М-белка в организме может привести ко многим симптомам WM, включая обильное кровотечение, проблемы со зрением и проблемы с нервной системой.

Клетки WM растут в основном в костном мозге, где они могут вытеснять нормальные клетки, из которых образуются различные типы клеток крови. Это может привести к снижению уровня эритроцитов (так называемая анемия), из-за чего люди могут чувствовать усталость и слабость. Это также может привести к низкому количеству лейкоцитов, что затрудняет борьбу организма с инфекцией.Количество тромбоцитов в крови также может снижаться, что приводит к усилению кровотечений и кровоподтеков.

Клетки лимфомы также могут расти в таких органах, как печень и селезенка, вызывая отек этих органов и вызывая боль в животе. (Для получения дополнительной информации о симптомах WM см. «Признаки и симптомы макроглобулинемии Вальденстрема».)

Липопротеинлипаза регулирует поддержание гемопоэтических стволовых клеток-предшественников за счет поступления ДГК ).Плазма человека, используемая для выделения ЛПОНП и ЛПНП, была получена от здоровых добровольцев, давших письменное информированное согласие в соответствии с протоколом, одобренным Программой защиты исследований человека Калифорнийского университета в Сан-Диего (проект № 71402).

Содержание рыбок данио и мышей

Взрослых рыбок данио дикого типа (штамм AB) и мутантов apoc2 и lpl (на фоне AB), содержали при 28 °C, 14 часов света/10 часов -темный цикл и кормление артемией два раза в день. Рацион с низким содержанием жира (LFD) готовили путем экстракции липидов из рациона личинок рыбок данио GP100–200 микрон (Brine Shrimp Direct, Юта) с помощью диэтилового эфира.Эмбрионы рыбок данио или личинки моложе 5 дней после оплодотворения (dpf) хранили при 28,5 ° C в растворе E3 (5 мМ NaCl, 0,17 мМ KCl, 0,33 мМ CaCl 2 , 0,33 мМ MgSO 4 ). Развитие пигмента ранних личинок ингибировали добавлением 0,003% N -фенилтиомочевины (Sigma, кат. 222909) в среду Е3. В нашей лаборатории были созданы мутанты apoc2 16 и lpl мутантов рыбок данио. cd41 :EGFP и ahmc: EGFP трансгенные рыбки данио были любезно предоставлены Дэвидом Травером и Нилом Чи (оба из UCSD) соответственно.Мутантные мыши Apoc2 были созданы в лаборатории Remaley 13 и после отъема получали обычную диету. Все исследования на животных были одобрены Комитетом по уходу и использованию животных Калифорнийского университета в Сан-Диего.

Окрашивание по Райту-Гимзе и о-дианизидин

Клетки периферической крови собирали у умерщвленных рыбок данио путем ампутации хвоста у взрослых особей и путем пункции сердца у эмбрионов или личинок. Мазки крови делали на предметных стеклах superfrost/plus (Fisher, Cat.12-550-15) и фиксировали в 100% метаноле в течение 15 с. Для визуализации морфологии эритроцитов клетки окрашивали с помощью набора Hema3 (Fisher Diagnostics, кат. 123–869, аналог метода Райта–Гимзы). Для окрашивания гемоглобина клетки инкубировали с буфером для окрашивания о-дианизидина (0,6 мг/мл о-дианизидина, 0,01 М ацетата натрия, рН 4,5, 0,65 % H 2 O ​​ 2 и 40 % этанола (об./об.). об.)) в течение 15 мин в темноте. Слайды были визуализированы с помощью микроскопа BZ9000 Keyence. Для полного окрашивания о-дианизидином дехорионированные и умерщвленные эмбрионы или личинки инкубировали с буфером для окрашивания о-дианизидином в течение 15 минут в темноте, а эмбрионы или личинки фотографировали с помощью микроскопа Leica CTR5000.Изображения, показанные на рис. 1 и 2 являются репрезентативными результатами как минимум двух независимых экспериментов, по крайней мере, с тремя эмбрионами или личинками в каждой группе на эксперимент.

Подсчет клеток периферической крови

Для подсчета клеток крови анестезированные эмбрионы или личинки рыбок данио помещали сбоку в 1,0% легкоплавкую агарозу в чашках со стеклянным дном диаметром 50 мм (MatTek, кат. P50G-0-14-F) и видео кровотока записывали с помощью микроскопа BZ9000 Keyence. Из видео были извлечены три кадра и в каждом кадре вручную подсчитывались клетки крови, среднее число использовалось для статистического анализа.Кровь собирали у взрослых самцов рыбок данио путем ампутации хвоста, и клетки периферической крови подсчитывали с использованием гемоцитометра после разведения 1:2000 в PBS.

Синтез гибридизационного зонда in situ

Олигонуклеотиды, меченные дигоксигенином (DIG), были синтезированы с использованием системы транскрипции in vitro (Roche, Cat. 11175025910). Зонды gata1 , cmyb, runx1 и rag1 были синтезированы из линеаризованных плазмид с помощью полимеразы Т7. бета-глобин , п.е.1 и зонда foxn были синтезированы из матриц ПЦР с полимеразой SP6. Матрицы ПЦР амплифицировали из кДНК со специфическими праймерами, которыми были 5′-cgttgctgtcgttctgttta-3′ и 5′- gatttaggtgacactatag ttagtggtactgtcttccca-3′ для бета-глобина (бета-эмбриональный 1. 1), 5′-atctatcgaccaccaatgga. и 5′- gatttaggtgacactatag gcgaaggtgttaatgcaaag-3′ для pu.1 и 5′-agtgtagatggaagtcctgt-3′ и 5′- gatttaggtgacactatag ttctccacct ttctccacct9ctcaaagca-3.3’Последовательность , курсив , кодирует промотор SP6.

Гибридизация in situ на цельном препарате

Гибридизация in situ на цельном препарате (WISH) проводилась, как описано 50 . Вкратце, эмбрионы фиксировали в 4% параформальдегиде (PFA) в течение ночи при 4 °C и последовательно обезвоживали метанолом в PBST (25, 50 и 75%) и хранили в 100% метаноле при –20 °C. В день WISH эмбрионы регидратировали в PBST (0,1% Tween-20 в PBS), обрабатывали протеиназой K и повторно фиксировали в 4% PFA.После промывки в PBST эмбрионы инкубировали с гибридизационным буфером (HB), который содержит 50 % формамида, 5-кратный солевой раствор цитрата натрия (SSC), 500 мкг/мл тРНК дрожжей torula, 50 мкг/мл гепарина, 0,1 % твин- 20 и 9 мМ лимонной кислоты (pH 6,5) в течение 1 часа, а затем с HB, содержащим DIG-меченые зонды, в течение ночи при 68 °C. После этого эмбрионы промывали последовательно 2× SSC в ГБ (25, 50 и 75%) и 0,2× SSC при 68 °C, а затем 0,2× SSC в PBST (75, 50 и 25%) при комнатной температуре. (РТ). После промывки эмбрионы инкубировали в блокирующем буфере (PBST с 2% инактивированной нагреванием козьей сыворотки и 2 мг/мл бычьего сывороточного альбумина) в течение 1 ч при комнатной температуре, а затем в блокирующем буфере, содержащем антиген, конъюгированный со щелочной фосфатазой (AP). -DIG-антитело (Roche, Cat.11093274910, разведение 1:5000) в течение ночи при 4 °C. Для визуализации сигналов эмбрионы промывали шесть раз PBST в течение 15 мин, а затем три раза реакционным буфером AP (100 мМ Трис, pH 9,5, 50 мМ MgCl 2 , 100 мМ NaCl, 0,1% Tween-20) для 5 мин при комнатной температуре. Сигналы проявляли путем инкубации эмбрионов с субстратом BM Purple AP (Roche, кат. 11442074001) или реакционным буфером AP, содержащим субстрат NBT/BCIP (Roche, 11681451001). Реакцию останавливали стоп-буфером (1× PBS, pH 5. 2, 1 мМ ЭДТА, 0,1% Tween-20) и фотографировали эмбрионы с помощью микроскопа Leica CTR5000. Результаты на месте, показанные на рис. 2d, представляют собой репрезентативные данные трех независимых экспериментов. Результаты на других рисунках представляют собой репрезентативные данные двух-пяти независимых экспериментов. Изображения, показанные на рисунках, взяты из одного и того же эксперимента, а количество эмбрионов или личинок (представленный фенотип/всего) в каждой группе указано на панелях.

Визуализация в реальном времени

Эмбрионы рыбок данио под наркозом помещали в 1% агарозу с низкой температурой плавления (Fisher, BP1360-100), содержащую 0.02% трикаина (Sigma, кат. A5040) и изображение с использованием флуоресцентного микроскопа BZ9000 Keyence.

Эмбриональные инъекции

О пептидах-миметиках APOC2 человека C-II-a и C-II-I сообщалось в предыдущей работе 16, 51 . Шесть нл C-II-a или C-II-i (2 мг/мл), 8 нл ЛОНП (2,1 мг/мл) или ЛПНП (2,9 мг/мл), 10 нл DHA (докозагексаеновая кислота): БСА (бычий сывороточный альбумин) (3 мг/мл:100 мг/мл) или OA (олеиновая кислота):БСА (3,3 мг/мл:129 мг/мл), или 10 нл POPC:TG-DHA (2 мг/мл :1,2 мг/мл) или липосомы POPC (2 мг/мл) вводили в 2 эмбриона на стадии dpf через венозный синус с использованием микроинъектора FemtoJet (Eppendorf).

Окрашивание масляным красным О и окрашивание BODIPY

Окрашивание масляным красным О (ORO) проводили в соответствии с опубликованными протоколами 16 . Вкратце, эмбрионы фиксировали в 4% PFA в течение 2 часов, трижды промывали в PBS, инкубировали в 0,3% растворе ORO в течение 2 часов, а затем промывали PBS перед визуализацией. Для окрашивания BODIPY живых личинок погружали в среду E3, содержащую 0,1 мкг/мл BODIPY 505/515 (Invitrogen, кат. D-3921), на 1 ч в темноте, а затем перед визуализацией промывали средой E3. Изображения, показанные на рисунках, являются репрезентативными результатами двух-пяти независимых экспериментов, по крайней мере, с тремя эмбрионами или личинками в каждой группе на эксперимент.

Опосредованный CRISPR-Cas9

Нокаут Lpl у рыбок данио

Плазмиды pT3TS-zCas9 и T7-gRNA были получены из лаборатории Chen 52 через Addgene. Следуя опубликованному протоколу 52 , мРНК nls-zCas9-nls синтезировали с помощью набора mMESSAGE mMACHINE T3 (ThermoFisher, AM1348) и выделяли путем осаждения хлоридом лития. lpl гРНК получали с использованием набора MEGAshortscript T7 (ThermoFisher, AM1354) и очищали с использованием набора для выделения микроРНК mirVana (ThermoFisher, AM1560).Геномная последовательность-мишень lpl рыбки данио представляла собой 5′-ggctgaaattgattatccttGGG-3′, в которой первые 20 нуклеотидов представляли собой матрицу гРНК, а последние 3 нуклеотида представляли собой мотив, прилегающий к протоспейсеру (PAM), необходимый для функции CRISPR/Cas9. 30 мкг lpl гРНК и 150 мкг мРНК nls-zCas9-nls вводили в эмбрионы на стадии 1-2 клеток. Геномную ДНК (гДНК) экстрагировали из целых эмбрионов или из ткани хвоста взрослого человека с использованием набора KAPA Express Extract Kit (KAPA Biosystems, Cat. KR0383). Фрагмент гДНК, содержащий сайт-мишень, амплифицировали с использованием ДНК-полимеразы KOD (EMD Millipore, Cat.71086) и расщеплен эндонуклеазой Т7 (NEB, кат. M0302). Праймерами, использованными для ПЦР-амплификации фрагмента гДНК lp1 , были 5′-aacatcagcctcctacacaa-3′ и 5′-tcactcgtttctcatgcgaa-3′.

Количественная ОТ-ПЦР

РНК выделяли из эмбрионов рыбок данио 5 dpf с использованием набора RNeasy (Qiagen, кат. 74104) и кДНК подвергали обратной транскрипции с использованием EcoRry Premix (Takara-Clontech, кат. 639543). Количественную ПЦР (набор для количественной ПЦР Kapa SYBR FAST, кат. KK4602) проводили с использованием машины для количественной ПЦР Rotor Gene Q (Qiagen).Праймерами, использованными в qRT-PCR, были 5′-ggcttctgctctgtatgg-3′ и 5′-ggctctgaccttgttgat-3′ для рыбок данио β-актин , 5′-atgaacaagatactggctat-3′ и 5′-ttgatggtctctacatatcc-3′ для рыбок данио apoc2

    , 5′-gcacggcagttcattcaa-3′ и 5′-gtcagattctaccattccagtt-3′ для рыбок данио lpl , 5′-cgtcttcacaaaccctcctcaa-3′ и 5′-gctttactgcttcatccggct-3′ для рыбок данио -cagg-cagcag’tac 5′ ‘ и 5′-tggtggtctggtggtctt-3’ для рыбок данио sdf1α .

    Получение эмбрионов парабиотических рыбок данио

    Эксперимент с парабиозом проводился в соответствии с протоколом, опубликованным в исх. 25 . Вкратце, эмбрионы для парабиоза переносили в стеклянную чашку Петри и удаляли щипцами на стадии 256 клеток. Капли 4% метилцеллюлозы укладывали рядами на дно пластиковой чашки Петри и покрывали HCR (116 М NaCl, 2,9 мМ KCl, 10 мМ CaCl 2 и 5 мМ Hepes), содержащим антибиотики (2,5 мкг/мл ампициллина, 0,5 мкг/мл канамицина и 10 ЕД/мл пенициллина-стрептомицина). Поверх капель метилцеллюлозы делали небольшие лунки с помощью кончика стеклянной пипетки.Затем два отдельных зародыша без хориона, которые развились до стадии шара, но не позднее стадии купола, переносили в эти маленькие лунки и осторожно прижимали друг к другу крошечной железной иглой с закругленным концом. В месте прикрепления двух эмбрионов с помощью острой стеклянной микропипетки было удалено несколько клеток. При необходимости два эмбриона снова перемещали, чтобы прижать раны друг к другу. Чтобы избежать какого-либо встряхивания, которое могло бы разделить две бластулы, прикрепленные эмбрионы оставляли под микроскопом на 20–30 мин. Как только прикрепление было закреплено, метилцеллюлоза вокруг эмбрионов была максимально удалена. Наконец, планшеты полностью заполняли HCR, содержащим антибиотики, и переносили в инкубатор при 28,5 °C. На следующий день среду HCR заменяли средой E3, содержащей антибиотики, и удаляли остаточную метилцеллюлозу.

    Медикаментозное лечение

    Порошки ломитапида (Cayman Chem, кат. 10009610) растворяли в ДМСО в концентрации 1 мМ, и эмбрионы обрабатывали 5 мкМ ломитапида от 2 dpf до 3.3  дпф. Обработку ДМСО использовали в качестве контроля.

    Газовая хроматография – масс-спектрометрия (ГХ-МС)

    Объединенные эмбрионы или личинки в куполе, через 26 ч после оплодотворения (HPF) или через 6 стадий dpf гомогенизировали в PBS (10 мкл на эмбрион или личинку). Пятьдесят мкл гомогената использовали для экстракции свободных жирных кислот, и ГХ-МС свободных жирных кислот проводили в Центре липидомики LIPID MAPS в Калифорнийском университете в Сан-Диего 53, 54 .

    Анализ апоптоза

    Эмбрионы рыбок данио (3,3 dpf) фиксировали в 4% PFA в течение ночи при 4 °C.Эмбрионы расщепляли протеиназой К (10 мкг/мл) в течение 30 минут, а затем повторно фиксировали 4% PFA при комнатной температуре в течение 20 минут. После промывания PBST эмбрионы инкубировали с реакционной смесью TUNEL (набор для обнаружения гибели клеток in situ, TMRed, Roche, кат. 12156792910) при 37 °C в течение 1 часа. Эмбрионы положительного контроля расщепляли ДНКазой I в течение 15 мин. Эмбрионы отрицательного контроля инкубировали с раствором Label без терминальной трансферазы. После промывания PBST эмбрионы визуализировали с помощью флуоресцентного микроскопа BZ9000 Keyence.

    Подготовка материалов для инъекций

    C-II-a и C-II-i миметические пептиды 51 растворяли в PBS до концентрации 2 мг/мл; ЛПОНП (2,1 мг/мл) и ЛПНП (2,9 мг/мл) были получены от здоровых доноров и выделены с использованием стандартного протокола ультрацентрифугирования в ядре липидов Калифорнийского университета в Сан-Диего. ДГК:БСА получали путем растворения 12 мг ДГК (Cayman, кат.

    ), предварительно высушенной в атмосфере аргона, в 4 мл раствора БСА с концентрацией 100 мг/мл (Sigma, кат. A8806). Олеиновая кислота: БСА был от Sigma (Cat.О3008). Концентрации жирных кислот измеряли с использованием метода NEFA-HR серии HR (Wako, кат. 999–34691, 991–34891, 993–35191), а BSA измеряли с помощью анализа Лоури (Biorad, кат. 500–0116). Чтобы получить липосомы POPC:TG-DHA и POPC, растворенный в хлороформе POPC (Avanti, кат. 850457) и тридокозагексаеноин (TG-DHA) (Larodan, кат. 33–2260) смешивали в количестве 2 мг POPC с 1,2 мг TG-DHA или 2 мг POPC отдельно. Смеси сушили под аргоном в стеклянных пробирках с круглым дном, затем добавляли 1 мл PBS и инкубировали при комнатной температуре в течение 30 мин.Затем POPC:TG-DHA или POPC в PBS обрабатывали ультразвуком в ультразвуковом аппарате с водяной баней (VWR, модель 75D) три раза в течение 10 мин, пока раствор не становился однородным и полупрозрачным.

    Общий анализ крови мыши

    Образцы крови (~50  мкл) собирали в пробирки с ЭДТА (BD, кат. 365974) из хвоста мыши. Чтобы свести к минимуму свертывание, пробирки встряхивали сразу после сбора крови, а образцы отправлялись в ветеринарную диагностическую лабораторию UCSD для анализа CBC в течение 2 часов.

    FACS-сортировка HSPC и стромальных клеток

    Двойные положительные эмбрионы EGFP и mCherry были получены от потомства скрещивания рыбок данио gata2 :EGFP и sdf1a :mCherry в возрасте 2 лет.5 dpf. Каудальные кроветворные ткани (КГТ) вырезали и промывали PBS. CHT примерно из 200 эмбрионов расщепляли 1 мл трипсина-EDA (Corning, кат. 25-052-CI), содержащего 10 мкг/мл коллагеназы (Worthington Biochem, кат. MOP123) при 35°C. FBS (Omega Science, Cat. FB-01) добавляли до конечной концентрации 5% для остановки реакции. Клетки центрифугировали при 350 ×  г в течение 5 минут, повторно суспендировали в PBS и окрашивали с помощью набора Aqua-LIVE/DEAD (ThermoFisher, Cat. L34965). Клетки центрифугировали, один раз промывали PBS и ресуспендировали в 0. 5 мл буфера для окрашивания (PBS, содержащий 0,5% BSA). После фильтрации через картридж 70 мкм клетки сортировали с помощью машины BD FACSAria II. Живые одиночные положительные клетки EGFP, одиночные положительные клетки mCherry и двойные отрицательные клетки EGFP/mCherry определяли как HSPC, стромальные клетки и стволовые клетки, соответственно.

    Клетки костного мозга были собраны из бедренной и большеберцовой костей мыши и очищены от эритроцитов буфером для лизиса эритроцитов (eBioscience, кат. 00–4333). Клетки центрифугировали при 350 ×  g в течение 5 минут, повторно суспендировали в буфере для окрашивания до 10 миллионов на мл и окрашивали Lin-APC (BD, кат.55807, разведение 1:1000), антитела cKit-PE (eBioscience, кат. 12-1172-82, разведение 1:300) и Sca1-PEcy7 (eBioscience, кат. лед на 15 мин. Клетки центрифугировали и промывали один раз PBS и повторно суспендировали в буфере для окрашивания до 3–5 миллионов на мл. Клетки сортировали с использованием машины BD FACSAria II, а для калибровки порога при сортировке FACS использовали флуоресценцию минус единица (FMO) и контроли с одиночным окрашиванием.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.