Водный прополис применение: Прополиса настойка инструкция по применению: показания, противопоказания, побочное действие – описание Propolis tinctura настойка 10 г/100 мл: фл. 25 мл (30334)

Содержание

Вода прополисная «Проаква», экстракт прополиса водный 25%, 100мл

Звоните нам по телефону +77079134585

Или пишите в Whatsapp 

Рекомендовано при:

  • пародонтозе десен;
  • ОРВИ, грипп, ангина, нарушении слизистой оболочки рта;
  • хроническом бронхите и пневмонии
  • гастрите, язве желудка, желчекаменной болезни;
  • нарушениях функции щитовидной железы ;
  • сахарном диабете;

 

Также следует применять и в профилактике вирусных заболеваний.

 

Вода прополисная «ПроАква» — это комплекс микроэлементов, со свойствами прополиса. Ее можно использовать в различных случаях проблем с организмом.Водный прополис — это жидкость коньячного цвета, с характерным запахом прополиса, обладающая всеми свойствами спиртовой настойки прополиса. Но в отличии от нее, она не содержит спирта и может приниматься любым человеком в любом возрасте.

Прополисная вода обладает многообразными полезными эффектами – противомикробным, противовирусным, противовоспалительным, противолучевым, обезболивающим, кровоостанавливающим, тонизирующим, омолаживающим и др.

Ее применяют внутрь с профилактической целью как укрепляющее и омолаживающее средство, при лечении заболеваний легких и всего желудочно-кишечноготракта, а также наружно — при ожогах, ранах, язвах.

Прополисв профилактических целях применяется еще с давних времен. Вырабатывается пчелами из смолистых веществ растительного происхождения, собираемых ими с почек, молодых веток и листьев деревьев, а также с некоторых травянистых растений. Исходный материал этого удивительного вещества — и органического, и неорганического происхождения. Все компоненты прополиса превращаются пчелами в биологически активный комплекс определенного химического состава и биологического действия. Прополис обладает уникальными целебными свойствами (это природный антисептик) благодаря чему он широко применяется в народной и современной медицине. На основе прополиса готовят большое количество препаратов. Прополис состоит из более чем 280 соединений (из которых изучены только 111).

Способы применения:

  • в виде полосканий при заболеваниях слизистой оболочки полости рта, дёсен, зубов, ангине, хронических тонзиллитах (очаги поражения можно смазывать неразведённым водным экстрактом).
  • в виде примочек и орошений при труднозаживающих ранах и язвах.
  • водный экстракт прополиса используют притрихомонадных, грибковых и бактерийных воспалениях влагалища и эрозии шейки матки, трещины прямой кишки и геморрой в виде спринцеваний, турунд и примочек.
  • наружно его применяют для профилактики доброкачественных и злокачественных опухолей, как дополнение к основному лечению.

Также используется в виде капель при коньюктивитах, промываний – при гайморитах, насморке. Но следует обязательно разбавлять 25% й водный раствор бутилированной минеральной негазированной водой и хранить не более 2 х суток в холодильнике. Наша компания уже производит готовые прополисные растворы для глаз и спрей для носовой полости серии «ПроАква».

Водный экстракт прополиса Прополис Аква-Промед 50мл спрей

Прополис по своей активности превосходит все антибиотики, обладает широким спектром антибактериального, противовирусного, противогрибкового действия, имеет сильное обезболивающее и противовоспалительное действие. Он уничтожает патогенную микрофлору человеческого организма: грамположительные бактерии белого и золотистого стафилококка, бактерии гемолитического стафилококка, возбудителей туберкулёза, паратифа, токсикоинфекций, упорных раневых инфекций, некоторые виды сальмонелл, дизентерийную палочку и другие более 100 видов болезнетворных бактерий и грибов, но при этом оставляет сохранной и укрепляет полезную микрофлору и даже при длительном применении не приводит к дисбактериозу.

Прополис имеет сильное антиоксидантное действие, снижает уровень холестерина в крови, улучшает обмен веществ, трофику и регенерацию, а также благотворно влияет на баланс  гормонов.

КРЕМНИЙ

Также одной из функций кремния является способность структурировать молекулы воды, как питьевой, так и той, что заполняет клетки нашего организма. Кремний создаёт коллоидные системы, которые поглощают вредоносные микроорганизмы и вирусы, таким образом очищая организм. Вода, обогащённая кремнием, полностью обеззараживается и становится безопасной для питья.

Водный раствор прополиса (экстракт) − непрозрачная жидкость кофейного цвета, имеет приятный характерный запах и вкус, не содержит алкоголя, поэтому не оказывает интоксикационного действия, не раздражает слизистую ЖКТ, адаптирован для применения в стоматологической, офтальмологической, ЛОР-практике, рекомендуется для применения при лечении беременных женщин и детей.

Обогащение водного раствора прополиса кремнием усиливает и дополняет его лечебное воздействие, увеличивает срок хранения препарата.

• для очищения и витаминизации глазной оболочки;

• заболевания полости рта: пародонтоз, стоматиты герпетического, грибкового или бактериального происхождения;

• заболевания верхних дыхательных путей: насморк, ринит, аденовирусная инфекция, гайморит, ангина, тонзиллит, ларингит, фарингит и др.

• отит;

• профилактика и лечение гриппа и острых вирусных респираторных заболеваний;

• хронические заболевания различных органов и систем, обусловленные пониженным иммунитетом;

• для профилактики и в составе лечения сердечно-сосудистых заболеваний: кардиодистрофии, ИБС, стенокардии, постинсультных и постинфарктных состояний;

• заболевания ЖКТ: язва желудка и двенадцатиперстной кишки, гастриты, восстановление клеток печени после гепатитов, дисбактериоз;

• в составе лечения кишечных инфекций, вызванных дизентерийной палочкой, золотистым стафилококком, рядом видов сальмонеллы и др.

;

• острые и хронические заболевания бронхов и лёгких, в том числе туберкулёз;

• раны, ожоги, обморожения, герпес, лишай, грибковые поражения кожи;

• гельминтоз;

•последствия воздействия ионизирующего излучения и других вредных экологических факторов;

• для снятия интоксикации при инфекционных заболеваниях;

• для снятия алкогольной интоксикации;

• питает и улучшает рост и структуру волос

СПОСОБЫ ПРИМЕНЕНИЯ:

Глазные заболевания: 

• Для очищения и витаминизации глазной оболочки закапывать по 1-2 капли 2 раза в день. Курс – 3-4 недели, перерыв между курсами 2 недели.

• При усталости глаз закапывать по 1 капле утром и вечером курс в течение 10 дней, потом рекомендуется сделать перерыв 1 неделю и курс снова повторить (или же на ночь делать повязку на глаза  со смоченными средством тампонами).

• При помутнении хрусталика закапывают 2-4 раза в день по 1 капле. Курс длительный, не менее полугода по повторяющейся схеме: месяц закапывать, затем перерыв в 7-10 дней.

• При конъюнктивите закапывать по 2-3 капли не менее 6 раз в день, протирать веки смоченным в растворе ватным тампоном и делать примочки. Если заболевание не сильно выражено, то уже на второй день наступает улучшение – уменьшается отёчность, веки не склеиваются, нет слезоточивости. Также  такое лечение полезно и при ожогах роговицы глаз.

Для лучшего эффекта после закапывания рекомендуется повращать зрачками вверх-вниз, по диагонали и в стороны, в этом случае препарат лучше распространится по глазному яблоку.

Профилактика и лечение простудных, инфекционных и стоматологических заболеваний: 

• При насморке закапывать водный раствор прополиса по 2-5 капели в каждый носовой проход по 5 раз в день. Можно вкладывать в носовые проходы смоченные раствором ватные турундочки.

•  При заболеваниях верхних дыхательных путей: ангине, фарингите, тонзиллите и др., при стоматологических заболеваниях распылять водный экстракт в ротовую полость или  на область миндалин не менее 3-4 раз в день, для этого удобен Прополис «Аква-Промёд» в форме спрея.

• При воспалении гайморовых пазух промывания экстрактом прополиса, разбавленным в 2-х частях воды;

• При отите ввести ватную турунду, смоченную в водном растворе прополиса, в слуховой проход, менять её 2 раза в день.

При острых и хронических заболевания бронхов и лёгких:

Взрослым – 1 чайная ложка 3 раза в день. Курс – 2 недели.  При туберкулёзе курс до 6 месяцев.

Детская доза:

1-3 года – по 1/4 ч. ложки 3 раза в день;

3-8 лет – 1/3 ч. ложки 3 раза в день;

8-14 лет – по 1/2 ч. ложки 3 раза в день.

Внимание! Перед началом применения обязательно необходимо произвести предварительную пробу на переносимость организмом ребёнка продуктов пчеловодства.

При лечении заболеваний ЖКТ:

Взрослым 1 ч. ложку развести в 1/4 стакана тёплой воды и пить натощак за 40 минут до еды, 3 раза в день. Для детей применять детскую дозировку препарата согласно возрасту (см. выше).

Гинекологические заболевания:

• Для лечения женских болезней: эрозия шейки матки, вагинит, кольпит – ввести во влагалище смоченные водным раствором прополиса ватно-марлевые турунды или тампоны на 10-12 часов. Курс – 2 недели. Также показаны спринцевания: 30 мл. (2 ст. ложки) водного прополиса развести в 0,5 литра воды.

Лечение хирургических, кожных заболеваний и травм:

• При лечении геморроя и трещины прямой кишки эффективен водный раствор прополиса в виде примочек к больным местам или орошения их Прополисом «Аква-Промёд» спрей.

• При лечении орошением поражённых мест при ожогах, экземах, ранах, псориазе показано применение Прополиса «Аква-Промёд» спрей, он обеззараживает кожу, убивает вредные микроорганизмы, обезболивает, значительно ускоряет процесс заживления и регенерации тканей.

Токсикология:

• Для снятия интоксикации алкогольной, экологической, во время инфекционных заболеваний растворить 1ст. ложку водного экстракта прополиса в 1 литре воды и пить постоянно в течение дня.

Как употреблять прополис.

        Существуют следующие основные формы употребления прополиса:

   1. Спиртовая настойка.
   2. Водная настойка.
   3. Прополисные мази.
   4. Прополисные свечи.

        Сначала подробно расскажем как при различных заболеваниях их применять. Кому же интересно знать приготовить настойки и мази – спускайтесь сразу вниз статьи.
        Гастриты. Прополис в отличие от антибиотиков, не уничтожает полезную микрофлору ЖКТ. Уничтожается, в первую очередь, патогенные микроорганизмы, поскольку они находятся в экстремальных для себя условиях внутри человеческого организма (в то время как полезные – в привычных, с идеальным pH). После контакта с настойками прополиса, воспалённая слизистая желудка заживает намного быстрее.
        Способ применения: принимайте водную 5 %-ную  настойку прополиса 3 раза в день за 30 минут до еды. Курс лечения – от 1 до 1,5 месяцев. Обязательно через пол-часа чем-то заедайте водный прополис. Из нашей практики, если люди не принимают натощак и ничего потом не едят — в некоторых случаях начинаются спазмы желудка. Если заесть — спазмов не будет.
        Язва желудка и двенадцатиперстной кишки. Прополис ускоряет процесс эпителизации, что ускоряет процессы заживления. Прополис действует угнетающе на бактерию, провоцирующую появление язвы – Helicobacter pylori. При контакте слизистой с прополисом на поверхности образуется альбуминовая плёнка, которая уменьшает кровоточивость, защищает оголённые нервные окончания и снижает тем самым болевые ощущения.
        Способ применения: принимайте 15 %-ную спиртовую настойку прополиса по 1/3 чайной ложки 2-3 раза в день. За 20 минут до еды, в небольшом количестве тёплого молока. Язва рубцуется 18 дней — поэтому 3 недели принимать железно! У нас есть научный консультант — кандидат химических наук. Он рекомендует использовать для приёма спиртовой настойки прополиса молоко максимальной жирности. Чем выше — тем лучше. Шарики жира вбирают в себя настойку и проскальзывают с нею в желудок через пищевод. При этом прополис не прилипает к стенкам пищевода, а целиком попадает в желудок.
        Дисбактериоз. Выше уже писалось про действие пчелиного клея на полезную и патогенную микрофлору. Дополнительно добавим, что угнетение патогенной микрофлоры способствует активному развитию полезной. Антиоксидантное, иммунокоррегирующее и антимикробное действие прополиса восстанавливает нарушенный биоценоз кишечника.
        Способ применения: принимайте водную 5 %-ную настойку прополиса в течение 1 месяца (3 раза в день за 30 минут до еды). Детям до 1 года можно поставить прополисные свечи (по 1/3 части), и по ½ части для детей старше 1 года) – в течение 10 дней.
        Хронический простатит. Благодаря сильному противовоспалительному, антибактериальному и анестезирующему воздействию прополис позволяет повысить эффективность обычной терапии.
        Способ применения: при обострении хронического простатита принимайте внутрь 5 %-ную настойку прополиса 3 раза в день за 30 минут до еды внутрь на протяжении 1,5 месяцев. Во время ремиссии принимайте внутрь 15 %-ную спиртовую настойку  по 30-40 капель по нарастающей схеме за 20 минут до еды на протяжении 1 месяца. Настойка в данном случае разбавляется в трети стакана молока. Одновременно вводить на ночи в прямую кишку прополисные свечи. Прополисными свечами необходимо провести лечение 2-3 курса по 30 дней (с перерывами по 30-60 дней).
        Хронический обструктивный бронхит. Благодаря противовоспалительным, антибактериальным свойствам пчелиный клей является ведущим продуктом пчеловодства, используемым в лечении  воспалительных заболеваний органов дыхания.
        Способ применения: спиртовая настойка прополиса (10 – 30 %) применяется только во время ремиссии, поскольку спирт в сочетании с антибиотиками может оказывать негативное влияние на печень. Принимается на протяжении 45 дней по нарастающей схеме. Водную настойку можно принимать и в период обострения в форме 10-20 процентного раствора – также на протяжении 45 дней. Прополисная мазь втирается в грудную клетку при болях в ней во время обострения болезни. Также можно принимать прополис на животном масле внутрь 30 – 60 дней 3 раза в день 3 р. В день за 1 час до еды, можно с горячим молоком.
        Острый отит. Было поставлено более 20 000 опытов, но так и не были найдены микроорганизмы, устойчивые к прополису. Данный продукт обладает мощным антибактериальным воздействием, поэтому вкладывание турундучек, смоченных в спиртовом растворе прополиса является очень эффективным.
        Cпособ употребления: приготовьте 10 процентный спиртовой экстракт прополиса, добавьте в него оливковое масло в соотношении 1 к 2 и хорошенько взболтайте. Затем сделайте марлевую или ватную турунду, смочите в получившейся эмульсии и положите в ухо на 2 часа. Применять 3 раза в день.
        Острый фарингит. Это острое воспаление слизистой глотки, начинающееся из-за попадания в организм бактерий или вирусов. Поскольку прополис обладает мощным противовирусным и антибактериальным эффектами, он показан при лечении данного заболевания.
        Способ применения: поскольку слизистая повреждена, то спиртовой экстракт пчелиного клея использовать не рекомендуется. Лучше приготовьте прополис на рыбьем жире. Для этого – положите прополис в морозилку, подождите 15 минути пока он твёрдый – натрите на мелкой тёрке 10 – 15 грамм. Затем возьмите 100 грамм рыбьего жира и добавьте туда мелкую прополисную стружку, тщательно взболтайте (можно немного подогреть на водяной бане – не более 5 минут) .  Принимайте по 1 чайной ложке 3 раза в день в течении 2 недель. Также орошайте глотку  5 %-ным водным экстрактом прополиса ежедневно по 4-5 раз в день в течении 14 – 21 дня.

        Теперь распишем рецепты приготовления настоек, мазей и свечей с прополисом.
        Спиртовая настойка. Сейчас в России очень тяжело найти хороший спирт без рецепта. Запомните, Вам не нужен спирт для наружного применения (в нём содержится метиловый спирт, который может вызвать смерть), если Вы будете употреблять настойку внутрь. Поэтому спирт приобретайте только в больнице. Вообще, спирт очень хорошо растворяет прополис, но есть тонкости. Наилучшим будет 95 %-ный медицинский спирт. Он лучше, чем 70 %-ный, поскольку в воде растворяется намного меньше компонентов прополиса, чем в спирту. И чем концентрация спирта выше — тем больше флавоноидов и бальзамических соединений из прополиса в нём растворится. Многие думают, что спирт вступает в химические реакции с прополисом. Это не так. Спирт просто растворяет прополис. Мы консультировались по данному вопросу с нашим экспертом-кандидатом химических наук. 70%ный спирт просто хуже растворяет прополис.
        Затем, положите кусочек прополиса в морозилку минут на 15 (количество можно взвесить в аптеке, чтобы получить нужную концентрацию). Он затвердеет. Натрите его на мелкой тёрке, высыпьте в ёмкость со спиртом, несколько раз встряхните и поставьте в тёмное место. Раз в день взбалтывайте содержимое. Через неделю раствор будет готов.
        Водная настойка. Положите необходимое количество прополиса в морозилку на 15 минут. Он станет твёрдым. После этого натрите его на тёрке. Затем приготовьте водяную баню. Внутренняя чашка должна быть с крышкой. Налейте в неё воды и насыпьте прополис, закройте крышкой и томите на водяной бане 30 минут. Потом отфильтруйте смесь через марлю и залейте в банку из тёмного стекла. Храните раствор в холодильнике (не более 1 месяца).
        Прополисные мази. Положите в холодильник необходимое количество прополиса на 15 минут. Затем достаньте и натрите на мелкой тёрке. Затем поставьте прополис в эмалированную посуду на водяную баню и дождитесь пока прополис не станет вязким. Добавьте в него сливочное масло, чтобы получилась нужная концентрация прополиса (в зависимости от Ваших потребностей) и держите не более 5 минут, постоянно помешивая. Процедите ещё горячую массу через марлю (1-2 слоя) и залейте в посуду. Храните мазь в холодильнике.
        Прополисные свечи. Возьмите масло какао или сливочное масло, а также 10 процентную спиртовую настойку прополиса. Смешайте масло с настойкой в соотношении 4 к 1. Расплавьте смесь на водяной бане при температуре не выше 40 градусов Цельсия.  Дайте остыть и слепите массу в батончики длиной не более 3 сантиметров и диаметром не более 1 см.

        Практика Пасеки Загайновых.

        Один наш клиент поделился как он принимает прополис в нативном виде внутрь. Публикуется с согласия клиента: «Размельчаю до состояния порошка и засыпаю специальной ложечкой в капсулы, которые покупаю на сайте компании iHerb. Капсулы желудкорастворимые, поэтому остальную работу делает желудочный сок и ничего не должно прилипать по идее, как бывает в ротовой полости. Помогает не только при простуде, но и при расстройствах ЖКТ. Из настойки на спирту делаю компрессы при сезонной отите (сейчас кстати уже не беспокоит второй год)  или воспалениях дёсен, также добавляю в горячий чай — очень вкусно получается. «
        До порошка клиент размельчает прополис стандартным образом: замораживает его в морозилке и затем натирает на тёрке.


       Рис. 1. Вот так выглядят капсулы с расфасованным прополисом.


       Рис. 2. Вот так выглядят ложечка для фасовки прополиса.

       Рис. 3. Капсулы с iHerb.

Влияние водных экстрактов прополиса на стимуляцию и ингибирование различных клеток

Цитотехнология. 2007 май; 54(1): 49–56.

, 1 1 , 1 , 1 , , 1 , 2 и , 2 6 и 1

Mohsen Fathi Najafi

1 Отдел ветеринарных исследований и биотехнологий, Razi Vaccine и исследовательского института в сыворотке, Ахмадабад Авес, Машхад , Иран

Фатемех Вахеди

1 Департамент ветеринарных исследований и биотехнологии, Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток Рази, проспект Ахмадабад, Мешхед, Иран

Мохаммад Сейедин

1 900 Научно-исследовательский институт сыворотки, проспект Ахмадабад, Мешхед, Иран

Хамид Реза Джомехзаде

2 Гити Паджохеш Промышленно-научная исследовательская компания, No. 51, Parastar Street, Ahmadabad Ave, Mashhad, Iran

Kazem Bozary

1 Департамент ветеринарных исследований и биотехнологий, Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток Рази, Ahmadabad Ave, Mashhad, Iran

1 Департамент ветеринарных исследований и исследований Биотехнология, Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток Рази, проспект Ахмадабад, Мешхед, Иран

2 Промышленно-научная исследовательская компания Гити Паджохеш, № 51, улица Парастар, проспект Ахмадабад, Мешхед, Иран

Мохсен Фатхи Наджафи, тел.: +98 -511-8431780, факс: +98-511-8420430, электронная почта: мок[email protected] Автор, ответственный за переписку.

Поступила в редакцию 30 августа 2006 г .; Принято 27 февраля 2007 г.

Copyright © Springer Science+Business Media, Inc., 2007 г. Эта статья цитируется в других статьях PMC.

Abstract

Водные экстракты прополиса (WEP) могут ингибировать рост различных клеточных линий, а именно McCoy, HeLa, SP2/0, HEp-2 и BHK21, и стимулировать рост нормальных клеток, таких как лимфоциты человека, почки крысы, печень крысы, и крысиная селезенка. В этих экспериментах 1 и 2 мг WEP добавляли к 1 мл среды RPMI с 5% FCS.Количество клеток и жизнеспособность клеток, обработанных прополисом, и клеток, не содержащих прополис, оценивали с помощью теста исключения красителя трипанового синего и анализа МТТ. Результаты показали, что в случае клеточных линий McCoy, HeLa, SP20, HEp-2 и BHK21 водные экстракты прополиса могут подавлять рост клеток, а также уменьшать их размер. Напротив, такое же количество WEP может стимулировать рост нормальных клеток до 60% при той же концентрации, что и для клеточных линий. Таким образом, наше исследование показывает, что, хотя WEP состоит только из растворимой части прополиса, он позволяет ингибировать различные клеточные линии и увеличивать рост нормальных клеток.Это указывает также на то, что WEP содержит специфические соединения, обладающие биологической активностью в отношении клеточных линий. Хотя прополис содержит различное количество соединений, ясно, что WEP содержит достаточное количество биологических соединений, полезных для лечения некоторых заболеваний, медицинских и связанных с ними применений.

Ключевые слова: Линия клеток, Стимуляция клеток, Тесты МТТ, Нормальные клетки, Прополис, Водные экстракты прополиса (ВЭП) тополя и хвойные деревья.Пчелы используют прополис вместе с пчелиным воском для строительства своих ульев. Он возникает в виде секрета смолы, собранного пчелами с различных растений, и может различаться по цвету в зависимости от вида растения происхождения. Существует ряд обзоров прополиса (Khalil 2006; Ribeiro et al. 2006), и о его соединениях сообщали разные люди. В состав прополиса входит более 250 отдельных соединений. Прополис содержит в основном смолы, бальзамы и фенольные альдегиды (полифенолы), воски и жирные кислоты, эфирные масла, пыльцу, другие органические вещества и минералы.Было показано, что фенольные кислоты, сложные эфиры и флавоноиды составляют наиболее важную часть состава прополиса. Пчелы модифицируют прополис глюкозодиазами, ферментами гортаноглоточных желез, при сборе и переработке. Результатом такой ферментативной модификации является гидролиз фенольных соединений, таких как флавоноидные гетерозиды, до свободных флавоноидных агликонов и сахаров и усиление фармакологического действия полученных продуктов. С химической точки зрения флавоноидные агликоны прополиса представляют собой флавоны, флавонолы, флаваноны, дигидрофлавонолы и халконы.Другими фенольными соединениями являются фенольные альдегиды и полифенольные производные коричной и бензойной кислот, включая сложные эфиры кофейной кислоты, терпены, стероиды, сесквитерпены, производные нафталина и стильбена (Marcucci et al. 2001). Прополис обладает замечательными терапевтическими свойствами и пользуется большим спросом в некоторых странах для лечения ряда заболеваний человека и в косметических целях. Общие лекарственные применения прополиса включают лечение заболеваний сердечно-сосудистой системы и системы крови (анемии), органов дыхания (при различных инфекциях), уход за зубами (Ikeno et al.1991), дерматология (регенерация тканей, язвы, эксема, заживление ран – особенно ожоговых ран, микозов, инфекций и поражений слизистых оболочек), лечение рака (Grunberger et al., 1988; Scheller et al., 1989b; Hausen et al., 1992) , поддержка и улучшение иммунной системы (Scheller et al. 1989a), расстройства пищеварительного тракта (язвы и инфекции), защита и поддержка печени и многие другие. Соединения прополиса, включая флавоноиды, фенольные кислоты и их сложные эфиры, обладают противовоспалительным, антибактериальным, противовирусным, иммуномодулирующим, антиоксидантным и антипролиферативным действием (Hu et al.2005 г.; Ноэлькер и соавт. 2005 г.; Орси и соавт. 2005 г.; Ким и др. 2006). Показано, что прополис ингибирует аморальное деление клеток и синтез белка. Однако точный механизм, лежащий в основе противоопухолевого эффекта, четко не описан. Целью данного исследования было показать влияние водных экстрактов прополиса на различные клеточные линии и нормальные клетки.

Материалы и методы

Извлечение прополиса

Извлечение этанола

Прополис собирали из ульев, расположенных в районе Мешхед в Иране.На первом этапе прополис экстрагировали этанолом, прополис (90 г) добавляли в 400 мл 96% этанола и перемешивали в течение 18 ч при 15°С. Смесь центрифугировали при 7000 об/мин в течение 15 мин при 20°С. Собирали супернатант и повторно экстрагировали осадок 100 мл этанола. После объединения супернатантов обеих стадий их использовали для экспериментов.

Водные экстракты прополиса

Около 200 мл спиртовых экстрактов прополиса с предыдущего этапа заливали в колбу на 500 мл и выдерживали на магнитной мешалке.К этанольному экстракту прополиса добавляли 200 мл 20 мМ фосфатного буфера и перемешивали в течение 20 мин при 20°С. Смесь центрифугировали при 7000 об/мин в течение 15 минут и собирали надосадочную жидкость. Водорастворимые соединения оставались в водной фазе, которая представляла собой раствор светло-желтого цвета. Нижняя часть была темно-коричневой и очень липкой. Водные экстракты прополиса концентрировали методом лиофилизации и использовали на следующем этапе. Поскольку в экстракте прополиса имеется разное количество соединений, был проведен экспресс-анализ количества аминокислот, флавоноидов и сахара на каждой стадии экстракции фотометрическими методами и бумажной хроматографией.

Оценка белков и углеводов

Концентрацию белков измеряли по методу Лоури (Lowry et al. 1951) с использованием бычьего сывороточного альбумина в качестве стандарта. Общий нейтральный сахар определяли методом фенол/серная кислота (Дюбуа и др., 1956) с использованием глюкозы в качестве стандарта. Восстанавливающий сахар, присутствующий в этаноле и водных экстрактах прополиса, измеряли методом ДНКА при 540 нм (Miller, 1959) с использованием глюкозы в качестве стандарта.

Антибактериальная активность

Антибактериальная активность водных экстрактов прополиса из использованного прополиса и китайского прополиса (Zhejiang Jiangshan Hengliang bee products Co., Ltd., Китай) тестировали с использованием двух грамположительных бактерий (Brumfitt et al., 1990). Бактерии ( Bacillus subtils и Staphylococcus aureus ) выращивали на агаризованной среде, затем в каждую лунку добавляли одинаковое количество водных экстрактов прополиса, в качестве контроля использовали буфер и этанол. Планшеты выдерживали при 37 °C в течение 20 ч, а затем контролировали зону задержки роста.

Общий анализ флавоноидов

Общее содержание флавоноидов измеряли с помощью фотометрического анализа хлорида алюминия (Marinova et al.2005). Аликвоту (0,5 мл) экстрактов добавляли в пробирку, содержащую 2 мл деионизированной воды, а затем в пробирку добавляли 0,15 мл 5% NaNO 2 . Через 5 минут добавили 0,15 мл 10% AlCl 3 . После 6 минутной инкубации и перемешивания добавляли 1 мл 1 М NaOH, и общий объем доводили до 5 мл с помощью деионизированной воды. Раствор хорошо перемешали и измеряли оптическую плотность относительно контроля при 510 нм. Образцы анализировали в двух повторностях.

Бумажная хроматография

Углеводы

Равные объемы каждого образца (этанольный и водный экстракты прополиса) подвергали бумажной хроматографии на бумаге Whatmans No.1 с использованием системы растворителей, содержащей н -бутанол, пиридин и воду (6:3:4). Пятна визуализировали путем окрашивания нитратом серебра (Robyt and French, 1963).

Белок и аминокислота

Белок и аминокислоты, присутствующие в этаноле и водных экстрактах прополиса, анализировали и сравнивали с помощью бумажной хроматографии, система растворителей: н -бутанол, кислая кислота и вода (4:1:5). Хроматограмму окрашивали 0,5% раствором нингидрина в ацетоне.

Флавоноиды

Образцы наносили на бумагу Whatmans No.3 и подвергли воздействию системы растворителей, содержащей н -бутанол, уксусную кислоту и воду (4:1:5). Хроматограмму просматривали в ультрафиолетовом свете 260–350 нм для точечного обнаружения (Markham 1982).

Подготовка среды

Водные экстракты прополиса (WEP) стерилизовали шприцевым фильтром Millipore 0,22 мкм, а затем разбавляли до конечной концентрации 1 и 2 мг/мл в культуральной среде. В этом эксперименте использовали среду RPMI 1640 (Sigma) с 5% FCS (среда RPpro). Контроль использовался без WEP в качестве дополнения.

Культура клеток

Различные типы клеток (McCoy, HeLa, SP2/0, HEp-2, BHK21), лимфоциты человека, почки крысы, печень крысы и селезенку крысы культивировали в среде RPMI 1640 с 10% FCS для предварительной инокуляции . Через 72 часа на лунку 24-луночных планшетов получали около 5000–7000 клеток из разных клеток. В каждую лунку добавляли различные концентрации WEP и инкубировали при 37 °C во влажной атмосфере 5% CO 2 в течение 48 часов. Некоторые лунки оставляли необработанными в качестве контроля для целей сравнения.Через разные промежутки времени каждую лунку визуализировали и контролировали под инвертированным микроскопом. Рост и жизнеспособность клеток оценивали с помощью МТТ-теста. Из каждой камеры в разные промежутки времени были сделаны фотографии.

Анализ МТТ

Жизнеспособность клеток оценивали с помощью колориметрического метода МТТ (Mosmann 1983). Вкратце, в каждую лунку добавляли 100 мкл раствора МТТ (Sigma) (5 мг/мл в PBS). Планшеты инкубировали в течение 3 ч при 37 °C, а затем удаляли супернатанты. Для солюбилизации кристаллов МТТ в лунки добавляли 1 мл ДМСО плюс 125 мкл 100 мМ глицина (pH 10,5). Планшеты помещали на шейкер на 15 мин для полного растворения кристаллов, а затем определяли оптическую плотность каждой лунки при 492 нм.

Результаты

Экстракция прополиса

Собирали этанольный экстракт прополиса, который содержал около 35% прополиса. Экстракт имел ярко-красный цвет. Добавление буфера к этанольному экстракту прополиса вызывало осаждение малорастворимых в воде материалов, которые являются очень липкими.После центрифугирования смеси отделяли жидкую фазу, состоящую из около 7 % сухого прополиса, а осадок взвешивали до 28–30 %. Бумажная хроматограмма образцов с разных стадий экстракции показала, что 90% углеводов этанольного экстракта прополиса перешло в водный экстракт прополиса. Помимо колориметрического анализа, бумажная хроматограмма для флавоноидов подтвердила в этом эксперименте, что около 80% общего количества флавоноидов появилось в WEP (рис. ).

Бумажная хроматограмма флавоноидов и сахаров, присутствующих в образцах EEP и WEP. ( A ) Бумажная хроматограмма флавоноидов, EEP = неразбавленный этанольный экстракт прополиса, WEP = неразбавленный водный экстракт прополиса. Оба образца были загружены в одинаковой концентрации в соответствии с исходной концентрацией прополиса. ( B ) бумажная хроматограмма сахаров, G = глюкоза, M = мальтоза, EEP1 = EEP разбавленный 1/10, EEP2 = неразведенный EEP, WEP = неразбавленный водный экстракт

Антибактериальная активность

Как показано на рис.Водные экстракты китайского и иранского прополиса были способны ингибировать рост обеих бактерий ( Bacillus subtilis и Staphylococcus aureus ). Такие же результаты наблюдались для этанольных экстрактов прополиса (ЭЭП) (данные не представлены). Целью данного эксперимента было показать, что водные экстракты прополиса в данном методе не влияют на биологическую активность антибактериальных соединений, присутствующих в прополисе.

Сравнение антибактериальной активности водных экстрактов прополиса китайского с прополисом, использованным в этом исследовании.( A ) Bacillus subtils , (B) Staphylococcus aureus выращивали на агаровой среде и изучали влияние обоих прополисов на ингибирование бактерий. I = 10 мкл 50 мМ фосфатного буфера, II = 10 мкл 10 % водного экстракта прополиса китайского, III = 10 мкл 96 % этанола, IV = 10 мкл 10 % водного экстракта прополиса иранского. Инкубацию проводили при 37 °C в течение 20 ч.

Культура клеток

Результаты культивирования клеток показали, что между ростом разных клеток в WEP были различия по сравнению с контролями.В этом эксперименте количество живых клеток исследовали на рост клеток McCoy, HeLa, SP2/0, HEp-2 и BHK21 (с помощью теста МТТ) в среде RPpro, который показал снижение 1 и 2 мг/мл WEP соответственно, что предполагает ингибирующее действие. Влияние WEP на клеточные линии. Как показано на фиг. , при 1 мг/мл WEP максимальное ингибирование наблюдалось для клеток McCoy с величиной около 70%, а минимальное ингибирование наблюдалось для клеток HeLa с величиной около 30%. При увеличении концентрации WEP (2 мг/мл) максимальное ингибирование наблюдалось для клеток SP2/0 с 80%, а минимальное ингибирование наблюдалось для клеток HeLa с почти 40%.Прямое наблюдение клеток под инвертированным микроскопом показало те же результаты, что и МТТ-тест. Например, в случае BHK21, как показано на фиг. , при 1 и 2 мг/мл WEP отчетливо наблюдались уменьшение числа клеток и изменение морфологии клеток. Аналогичные результаты были достигнуты для других клеточных линий (данные не показаны).

МТТ-тест для различных клеточных линий, выращенных в среде RPMI 1640 и 5% FCS с включением WEP. Клетки выращивали в течение 2 дней при 37 °C.

Клетки BHK21 выращивали в среде RPMI 1640 и 5% FCS с включением различных концентраций WEP.Культивирование клеток проводили в течение 2 дней при 37 °C. 1 = контроль, 2 = 0,2 мг/мл WEP, 3 = 1 мг/мл WEP, 4 = 2 мг/мл WEP

В случае использования нормальных клеток в этом эксперименте (человеческий лимфоцит, крысиная почка, крысиная печень и крысиная селезенка) результаты были другими, чем с клеточными линиями. Как показано в результатах МТТ-теста (рис. ) для нормальных клеток, та же концентрация WEP, используемая для обработки клеточных линий, может стимулировать рост клеток и конечное количество клеток. Согласно МТТ-тесту в 1 мг/мл WEP максимальное увеличение наблюдалось для клеток селезенки крысы на 48%, а минимальное увеличение роста клеток наблюдалось для клеток печени крысы примерно на 18%.Когда концентрацию WEP в среде увеличивали до 2 мг/мл, нормальные клетки демонстрировали более высокую скорость пролиферации и увеличение количества клеток. Эти результаты показывают, что при 2 мг/мл WEP относительное увеличение числа клеток селезенки крысы, лимфоцитов человека, почек крысы и клеток печени крысы составило 65, 55, 35 и 25% соответственно. Прямые наблюдения показали, что все нормальные клетки, выращенные в присутствии WEP, имели большую продолжительность жизни по сравнению с клеточными линиями и контролем. Эти результаты показали, что WEP может действовать как ингибитор роста для клеточных линий и стимулятор роста для нормальных клеток.

МТТ-тест для различных нормальных клеток, выращенных в среде RPMI 1640 и 5% FCS с включением двух различных концентраций WEP в течение 2 дней при 37 °C

Обсуждение

Насколько нам известно, метод экстракции водой работа, представляет собой новый метод извлечения максимально водорастворимых соединений в прополисе. В этом методе большая часть флавоноидов, витаминов, аминокислот и других водорастворимых соединений высвобождается и остается свободной от воска и смолы.Добавление буфера (в холодных условиях) обеспечивает быстрое осаждение парафина и смолы. Этот метод очень прост по сравнению с другими методами, такими как гликолевая экстракция (GEP), водная (водная) экстракция (AEP), масляная экстракция (OEP) и водорастворимые производные (WSD). Таким образом, мы считаем, что с помощью этого метода не только извлекается большая часть водорастворимых частей прополиса, но также удаляется большая часть смолы и воска, присутствующих в прополисе. Результаты могут быть использованы для различных приложений, таких как культивирование клеток, инъекции, косметика и т. д.Что касается наших результатов, поскольку большинство соединений в прополисе представляют собой смолу и воск, высокие концентрации спирта могут быть полезны для высвобождения растворимых соединений из этой липкой части. Об этом опыте также сообщалось ранее (Sawaya et al. 2004). После полной растворимости прополиса добавление воды или буфера для снижения содержания этанола до 50% помогает сохранить растворимые соединения в растворе. Напротив, почти весь воск и смола, присутствующие в прополисе, будут осаждаться при этой концентрации.У этого метода есть преимущества по сравнению с другими методами, солюбилизация прополиса происходит быстрее и на последней стадии появляется больше водорастворимых соединений, чем при других методах. Хотя было обнаружено, что этанольные экстракты прополиса применимы для различных целей, мы считаем, что удаление воска, смолы и спирта было бы очень полезно для других применений, таких как клеточные культуры и медицинские применения.

Существуют различные отчеты, указывающие на то, что биологическая активность прополиса обусловлена ​​комбинацией различных соединений, присутствующих в прополисе. Хотя каждый прополис обладает различной биологической активностью, флавоноиды являются ключевыми соединениями-кандидатами для оценки качества продуктов из прополиса. Удобный колориметрический метод может быть полезен для оценки реального содержания общих флавоноидов (Банкова и др., 2000; Чанг и др., 2002; Салатино и др., 2005).

По результатам, полученным на клеточных культурах, можно предположить, что прополис с различными типами соединений, особенно фенолокислотами и флавоноидами, позволяет контролировать рост клеток и отличать нормальные клетки от раковых.О влиянии прополиса на ингибирование различных клеточных линий сообщалось для разных клеточных линий, таких как клетки K-562 (Aliyazicioglu et al. 2005), клетки HL-60 (Akao et al. 2003; Mishima et al. 2005), клетки MCF-7 человека клетки рака молочной железы (Luo et al. 2001) или некоторые другие клетки лейкемии (Hamblin 2006). Есть ряд сообщений, указывающих на то, что некоторые специфические химические вещества, присутствующие в прополисе, такие как фенетиловый эфир кофейной кислоты (CAPE), могут ингибировать рост мутировавших клеток, не повреждая нормальные клетки (Guarini et al. 1992 год; Рао и соавт. 1993). Также было обнаружено, что прополис оказывает цитотоксическое и цитостатическое действие in vitro на раковые клетки яичников хомяков и опухоли типа саркомы у мышей. Вещество также проявляло цитотоксичность в отношении культур опухолевых клеток человека и животных, включая клеточные линии карциномы молочной железы, меланомы, карциномы толстой кишки и почки (Grunberger et al., 1988). Компонент, вызывающий эти эффекты, был идентифицирован как фенетовый эфир кофейной кислоты. Вещество под названием артепиллин С было выделено из прополиса, и было показано, что оно оказывает цитотоксическое действие на клетки карциномы желудка человека, клетки рака легких человека и клетки карциномы толстой кишки мыши in vitro (Kimoto et al.2001). Кроме того, разные исследователи (Guarini et al. 1992; Rao et al. 1995) показали, что прополис оказывает сильное ингибирующее действие на несколько видов рака. В других сообщениях, связанных с этими соединениями, указывалось, что ингибирующее действие прополиса на раковые клетки было связано с усилением апоптоза (Чиао и др. , 1995; Су и др., 1995). Флавоноиды, присутствующие в прополисе, являются мощными антиоксидантами, и было показано, что они способны улавливать свободные радикалы и тем самым защищать липиды и другие соединения, такие как витамин С, от окисления или разрушения (Popeskovic et al.1980). Вероятно, активные свободные радикалы вместе с другими факторами ответственны за клеточное старение и деградацию при таких состояниях, как сердечно-сосудистые заболевания, артрит, рак, диабет, болезнь Паркинсона и болезнь Альцгеймера. Здесь мы показали, что если экстракт прополиса будет использоваться для лечения рака, а также может действовать как ингибитор раковых клеток, он также может быть полезен в качестве среднего дополнения к нормальным факторам. Поэтому, если две группы клеток (раковые клетки и нормальные клетки) лежат рядом друг с другом, обработка клеток с помощью WEP помогает убить раковые клетки и стимулировать пролиферацию нормальных клеток во время лечения.С помощью этого метода мертвые раковые клетки могут быть заменены нормальными клетками быстрее, чем при других методах лечения.

Хотя имеется ряд сообщений о конкретных соединениях в прополисе, ответственных за биологическую активность прополиса в отношении различных заболеваний, большинство ученых, работающих с прополисом, считают, что прополис содержит ряд неидентифицированных соединений, которые взаимодействуют синергетически, создавая специфичность для ингибирования раковых клеток и пролиферативных процессов. поддержка нормальных клеток.Хотя мы не знаем, какие соединения ответственны за эти явления и как работают эти механизмы, мы можем сделать вывод, что экстракты прополиса позволяют избирательно и логично воздействовать на каждую клетку.

Мы тоже считаем, что у каждого прополиса есть свои свойства, но все они полезны для жизни человека. Если мы посмотрим на историю прополиса, то увидим, что греческий врач Гиппократ (460–377 гг. до н.э.) обнаружил целебные свойства прополиса, и в различных старых медицинских книгах прополис известен как натуральное лекарство и высоко ценился за свои целебные свойства. .Однако только в последние тридцать лет ученые доказали, что прополис является активным и важным лечебным веществом. Есть много открытых вопросов о прополисе, на которые нужно ответить, и нам нужно проделать больше работы, чтобы лучше определить прополис и выяснить, что такое прополис.

Благодарности

Мы благодарим доктора Кианизаде и доктора Тороги за их поддержку и стимулирующую дискуссию. Также выражаем благодарность компании Kohe Dasht за приготовление натурального и качественного прополиса.

Ссылки


  • Akao Y, Maruyama H, Matsumoto K, Ohguchi K, Nishizawa K, Sakamoto T, Araki Y, Mishima S, Nozawa Y (2003) Ингибирующее действие производных коричной кислоты из прополиса на опухолевые клетки человека линии. Biol Pharm Bull 26:1057–1059 [PubMed]

  • Алиязичиоглу Ю., Дегер О., Овали Э., Барлак Ю., Хосвер И., Текелиоглу Ю., Карахан С.К. (2005) Влияние турецкой пыльцы и экстрактов прополиса на респираторный взрыв для K- 562 клеточные линии. Int Immunopharmacol 5:1652–1657 [PubMed]

  • Банкова В.С., Де Кастро С.Л., Маркуччи М.С. (2000)Последние достижения в области химии и растительного происхождения прополиса.Apidologie 31:3–15

  • Brumfitt W, Hamilton-Miller JM, Franklin I (1990) Антибиотическая активность натуральных продуктов: 1. Прополис. Microbios 62:19–22 [PubMed]

  • Chang CC, Yang MH, Wen HM, Chern JC (2002) Оценка общего содержания флавоноидов в прополисе двумя взаимодополняющими колориметрическими методами. J Food Drug Analysis 10:178–182

  • Chiao C, Carothers AM, Grunberger D, Solomon G, Preston GA, Barrett JC (1995)Апоптоз и измененное окислительно-восстановительное состояние, индуцированное фенетиловым эфиром кофейной кислоты (CAPE) в трансформированных крысиных фибробластах клетки.Cancer Res 55:3576–3583 [PubMed]

  • Дюбуа М., Жиль К.А., Гамильтон Дж.К., Робертс Д.А., Смит Ф. (1956) Колориметрические методы определения сахаров и родственных им веществ. Anal Chem 28:350–356

  • Grunberger D, Banerjee R, Eisinger K, Oltz EM, Efros L, Caldwell M, Estevez V, Nakanishi K (1988) Предпочтительная цитотоксичность фенетилового эфира кофейной кислоты, выделенного из прополиса, на опухолевые клетки. Experientia 44:230–232 [PubMed]

  • Guarini L, Su ZZ, Zucker S, Lin J, Grunberger D, Fisher PB (1992) Ингибирование роста и модуляция антигенного фенотипа в клетках меланомы и мультиформной глиобластомы человека с помощью фенетила кофейной кислоты сложный эфир (КАПЕ).Cell Mol Biol 38:513–527 [PubMed]

  • Hamblin T (2006) Натуральные продукты и лечение лейкемии. Leuk Res 30:649–650 [PubMed]

  • Hausen BM, Evers P, Stuwe HT, Konig WA, Wollenweber E (1992) Аллергия на прополис (IV). Исследования с дополнительными сенсибилизаторами из прополиса и компонентов, общих для прополиса, почек тополя и перуанского бальзама. Contact Derm 26:34–44 [PubMed]

  • Hu F, Hepburn HR, Li Y, Chen M, Radloff SE, Daya S (2005) Влияние этанола и водных экстрактов прополиса (пчелиного клея) на модели острого воспаления на животных . J Ethnopharmacol 100:276–283 [PubMed]

  • Ikeno K, Ikeno T, Miyazawa C (1991) Влияние прополиса на кариес зубов у крыс. Caries Res 25:347–351 [PubMed]

  • Халил М.Л. (2006) Биологическая активность пчелиного прополиса в норме и при болезнях. Asian Pac J Cancer Prev 7:22–31 [PubMed]

  • Kim JD, Liu L, Guo W, Meydani M (2006) Химическая структура флавонолов в отношении модуляции ангиогенеза и адгезии иммунно-эндотелиальных клеток. J Nutr Biochem 17:165–176 [PubMed]

  • Kimoto T, Koya-Miyata S, Hino K, Micallef MJ, Hanaya T, Arai S, Ikeda M, Kurimoto M (2001) Легочный канцерогенез, вызванный нитрилотриацетатом железа у мышей и защита от него бразильским прополисом и артепиллином С.Virchows Arch 438:259–270 [PubMed]

  • Lowry OH, Rosebrough NJ, Farr AL, Randall RJ (1951) Измерение белка с помощью фенольного реагента Folin. J Biol Chem 193:265–275 [PubMed]

  • Luo J, Soh JW, Xing WQ, Mao Y, Matsuno T, Weinstein IB (2001) PM-3, производное бензо-гамма-пирана, выделенное из прополиса, ингибирует рост клеток рака молочной железы человека MCF-7. Anticancer Res 21:1665–1671 [PubMed]

  • Marcucci MC, Ferreres F, Garcia-Viguera C, Bankova VS, De Castro SL, Dantas AP, Valente PH, Paulino N (2001) Фенольные соединения бразильского прополиса с фармакологической активностью .J Ethnopharmacol 74:105–112 [PubMed]

  • Маринова Д., Рибарова Ф., Атанасова М. (2005) Общее количество фенолов и общее количество флавоноидов в болгарских фруктах и ​​овощах. J Univ Chem Technol Metall 40:255–260

  • Маркхэм К.Р. (1982) Методы идентификации флавонидов. Academic Press, London

  • Miller GL (1959) Использование реагента динитросалициловой кислоты для определения восстанавливающего сахара. Anal Chem 31:426–428

  • Mishima S, Narita Y, Chikamatsu S, Inoh Y, Ohta S, Yoshida C, Araki Y, Akao Y, Suzuki KM, Nozawa Y (2005) Влияние прополиса на рост клеток и гены экспрессия в клетках HL-60.J Ethnopharmacol 99:5–11 [PubMed]

  • Mosmann T (1983) Быстрый колориметрический анализ клеточного роста и выживания: применение для анализа пролиферации и цитотоксичности. J Immunol Methods 65:55–63 [PubMed]

  • Noelker C, Bacher M, Gocke P, Wei X, Klockgether T, Du Y, Dodel R (2005) Фенетиловый эфир флаваноидной кофейной кислоты блокирует нейротоксичность, вызванную 6-гидроксидофамином . Neurosci Lett 383:39–43 [PubMed]

  • Орси Р.О., Сфорчин Дж.М., Фунари С.Р., Банкова В. (2005)Влияние бразильского и болгарского прополиса на бактерицидную активность макрофагов против Salmonellatyphimurium.Int Immunopharmacol 5:359–368 [PubMed]

  • Попескович Д., Кепция Д., Димитиевич Д., Стоянович Н. (1980) Антиоксидантные свойства прополиса и некоторых его компонентов. Acta veterinaria (Белград) 30:133–136

  • Rao CV, Desai D, Rivenson A, Simi B, Amin S, Reddy BS (1995) Химиопрофилактика канцерогенеза толстой кишки с помощью фенилэтил-3-метилкофеата. Cancer Res 55:2310–2315 [PubMed]

  • Rao CV, Desai D, Simi B, Kulkarni N, Amin S, Reddy BS (1993)Ингибирующее действие эфиров кофейной кислоты на биохимические изменения, вызванные азоксиметаном, и формирование аберрантных очагов крипт в толстой кишке крысы. Cancer Res 53:4182–4188 [PubMed]

  • Рибейро Л.Р., Мантовани М.С., Рибейро Д.А., Сальвадори Д.М. (2006) Бразильские натуральные пищевые компоненты (аннато, прополис и грибы), защищающие от мутаций и рака. Hum Exp Toxicol 25:267–272 [PubMed]

  • Robyt J, French D (1963) Схема действия и специфичность амилазы из Bacillus subtilis. Arch Biochem Biophys 100:451–467 [PubMed]

  • Салатино А., Тейшейра Э.В., Негри Г., Сообщение Д. (2005) Происхождение и химическая вариация бразильского прополиса.Комплемент на основе Evid Alternat Med 2:33–38 [бесплатная статья PMC] [PubMed]

  • Sawaya ACHF, Souza KS, Marcucci MC, Cunha IBS, Shimizu MT (2004) Анализ состава экстрактов бразильского прополиса с помощью хроматографии и оценка их активности in vitro в отношении грамположительных бактерий. Braz J Microbiol 35:104–109

  • Scheller S, Gazda G, Krol W, Czuba Z, Zajusz A, Gabrys J, Shani J (1989a) Способность спиртового экстракта прополиса (EEP) защищать мышей от гамма-облучения . Z Naturforsch [C] 44:1049–1052 [PubMed]

  • Scheller S, Krol W, Swiacik J, Owczarek S, Gabrys J, Shani J (1989b) Противоопухолевые свойства этанольного экстракта прополиса у мышей с карциномой Эрлиха, по сравнению с блеомицином. Z Naturforsch [C] 44:1063–1065 [PubMed]

  • Su ZZ, Lin J, Prewett M, Goldstein NI, Fisher PB (1995) Апоптоз опосредует селективную токсичность фенетилового эфира кофейной кислоты (CAPE) по отношению к трансформированным онкогенам клетки фибробластов эмбриона крысы. Anticancer Res 15:1841–1848 [PubMed]

Влияние водных экстрактов прополиса на стимуляцию и ингибирование различных клеток

Цитотехнология.2007 май; 54(1): 49–56.

, 1 1 , 1 , 1 , , 1 , 2 и , 2 6 и 1

Mohsen Fathi Najafi

1 Отдел ветеринарных исследований и биотехнологий, Razi Vaccine и исследовательского института в сыворотке, Ахмадабад Авес, Машхад , Иран

Фатемех Вахеди

1 Департамент ветеринарных исследований и биотехнологии, Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток Рази, проспект Ахмадабад, Мешхед, Иран

Мохаммад Сейедин

1 900 Научно-исследовательский институт сыворотки, проспект Ахмадабад, Мешхед, Иран

Хамид Реза Джомехзаде

2 Гити Паджохеш Промышленно-научная исследовательская компания, No. 51, Parastar Street, Ahmadabad Ave, Mashhad, Iran

Kazem Bozary

1 Департамент ветеринарных исследований и биотехнологий, Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток Рази, Ahmadabad Ave, Mashhad, Iran

1 Департамент ветеринарных исследований и исследований Биотехнология, Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток Рази, проспект Ахмадабад, Мешхед, Иран

2 Промышленно-научная исследовательская компания Гити Паджохеш, № 51, улица Парастар, проспект Ахмадабад, Мешхед, Иран

Мохсен Фатхи Наджафи, тел.: +98 -511-8431780, факс: +98-511-8420430, электронная почта: мок[email protected] Автор, ответственный за переписку.

Поступила в редакцию 30 августа 2006 г .; Принято 27 февраля 2007 г.

Copyright © Springer Science+Business Media, Inc., 2007 г. Эта статья цитируется в других статьях PMC.

Abstract

Водные экстракты прополиса (WEP) могут ингибировать рост различных клеточных линий, а именно McCoy, HeLa, SP2/0, HEp-2 и BHK21, и стимулировать рост нормальных клеток, таких как лимфоциты человека, почки крысы, печень крысы, и крысиная селезенка. В этих экспериментах 1 и 2 мг WEP добавляли к 1 мл среды RPMI с 5% FCS.Количество клеток и жизнеспособность клеток, обработанных прополисом, и клеток, не содержащих прополис, оценивали с помощью теста исключения красителя трипанового синего и анализа МТТ. Результаты показали, что в случае клеточных линий McCoy, HeLa, SP20, HEp-2 и BHK21 водные экстракты прополиса могут подавлять рост клеток, а также уменьшать их размер. Напротив, такое же количество WEP может стимулировать рост нормальных клеток до 60% при той же концентрации, что и для клеточных линий. Таким образом, наше исследование показывает, что, хотя WEP состоит только из растворимой части прополиса, он позволяет ингибировать различные клеточные линии и увеличивать рост нормальных клеток.Это указывает также на то, что WEP содержит специфические соединения, обладающие биологической активностью в отношении клеточных линий. Хотя прополис содержит различное количество соединений, ясно, что WEP содержит достаточное количество биологических соединений, полезных для лечения некоторых заболеваний, медицинских и связанных с ними применений.

Ключевые слова: Линия клеток, Стимуляция клеток, Тесты МТТ, Нормальные клетки, Прополис, Водные экстракты прополиса (ВЭП) тополя и хвойные деревья.Пчелы используют прополис вместе с пчелиным воском для строительства своих ульев. Он возникает в виде секрета смолы, собранного пчелами с различных растений, и может различаться по цвету в зависимости от вида растения происхождения. Существует ряд обзоров прополиса (Khalil 2006; Ribeiro et al. 2006), и о его соединениях сообщали разные люди. В состав прополиса входит более 250 отдельных соединений. Прополис содержит в основном смолы, бальзамы и фенольные альдегиды (полифенолы), воски и жирные кислоты, эфирные масла, пыльцу, другие органические вещества и минералы.Было показано, что фенольные кислоты, сложные эфиры и флавоноиды составляют наиболее важную часть состава прополиса. Пчелы модифицируют прополис глюкозодиазами, ферментами гортаноглоточных желез, при сборе и переработке. Результатом такой ферментативной модификации является гидролиз фенольных соединений, таких как флавоноидные гетерозиды, до свободных флавоноидных агликонов и сахаров и усиление фармакологического действия полученных продуктов. С химической точки зрения флавоноидные агликоны прополиса представляют собой флавоны, флавонолы, флаваноны, дигидрофлавонолы и халконы.Другими фенольными соединениями являются фенольные альдегиды и полифенольные производные коричной и бензойной кислот, включая сложные эфиры кофейной кислоты, терпены, стероиды, сесквитерпены, производные нафталина и стильбена (Marcucci et al. 2001). Прополис обладает замечательными терапевтическими свойствами и пользуется большим спросом в некоторых странах для лечения ряда заболеваний человека и в косметических целях. Общие лекарственные применения прополиса включают лечение заболеваний сердечно-сосудистой системы и системы крови (анемии), органов дыхания (при различных инфекциях), уход за зубами (Ikeno et al.1991), дерматология (регенерация тканей, язвы, эксема, заживление ран – особенно ожоговых ран, микозов, инфекций и поражений слизистых оболочек), лечение рака (Grunberger et al., 1988; Scheller et al., 1989b; Hausen et al., 1992) , поддержка и улучшение иммунной системы (Scheller et al. 1989a), расстройства пищеварительного тракта (язвы и инфекции), защита и поддержка печени и многие другие. Соединения прополиса, включая флавоноиды, фенольные кислоты и их сложные эфиры, обладают противовоспалительным, антибактериальным, противовирусным, иммуномодулирующим, антиоксидантным и антипролиферативным действием (Hu et al.2005 г.; Ноэлькер и соавт. 2005 г.; Орси и соавт. 2005 г.; Ким и др. 2006). Показано, что прополис ингибирует аморальное деление клеток и синтез белка. Однако точный механизм, лежащий в основе противоопухолевого эффекта, четко не описан. Целью данного исследования было показать влияние водных экстрактов прополиса на различные клеточные линии и нормальные клетки.

Материалы и методы

Извлечение прополиса

Извлечение этанола

Прополис собирали из ульев, расположенных в районе Мешхед в Иране.На первом этапе прополис экстрагировали этанолом, прополис (90 г) добавляли в 400 мл 96% этанола и перемешивали в течение 18 ч при 15°С. Смесь центрифугировали при 7000 об/мин в течение 15 мин при 20°С. Собирали супернатант и повторно экстрагировали осадок 100 мл этанола. После объединения супернатантов обеих стадий их использовали для экспериментов.

Водные экстракты прополиса

Около 200 мл спиртовых экстрактов прополиса с предыдущего этапа заливали в колбу на 500 мл и выдерживали на магнитной мешалке.К этанольному экстракту прополиса добавляли 200 мл 20 мМ фосфатного буфера и перемешивали в течение 20 мин при 20°С. Смесь центрифугировали при 7000 об/мин в течение 15 минут и собирали надосадочную жидкость. Водорастворимые соединения оставались в водной фазе, которая представляла собой раствор светло-желтого цвета. Нижняя часть была темно-коричневой и очень липкой. Водные экстракты прополиса концентрировали методом лиофилизации и использовали на следующем этапе. Поскольку в экстракте прополиса имеется разное количество соединений, был проведен экспресс-анализ количества аминокислот, флавоноидов и сахара на каждой стадии экстракции фотометрическими методами и бумажной хроматографией.

Оценка белков и углеводов

Концентрацию белков измеряли по методу Лоури (Lowry et al. 1951) с использованием бычьего сывороточного альбумина в качестве стандарта. Общий нейтральный сахар определяли методом фенол/серная кислота (Дюбуа и др., 1956) с использованием глюкозы в качестве стандарта. Восстанавливающий сахар, присутствующий в этаноле и водных экстрактах прополиса, измеряли методом ДНКА при 540 нм (Miller, 1959) с использованием глюкозы в качестве стандарта.

Антибактериальная активность

Антибактериальная активность водных экстрактов прополиса из использованного прополиса и китайского прополиса (Zhejiang Jiangshan Hengliang bee products Co., Ltd., Китай) тестировали с использованием двух грамположительных бактерий (Brumfitt et al., 1990). Бактерии ( Bacillus subtils и Staphylococcus aureus ) выращивали на агаризованной среде, затем в каждую лунку добавляли одинаковое количество водных экстрактов прополиса, в качестве контроля использовали буфер и этанол. Планшеты выдерживали при 37 °C в течение 20 ч, а затем контролировали зону задержки роста.

Общий анализ флавоноидов

Общее содержание флавоноидов измеряли с помощью фотометрического анализа хлорида алюминия (Marinova et al.2005). Аликвоту (0,5 мл) экстрактов добавляли в пробирку, содержащую 2 мл деионизированной воды, а затем в пробирку добавляли 0,15 мл 5% NaNO 2 . Через 5 минут добавили 0,15 мл 10% AlCl 3 . После 6 минутной инкубации и перемешивания добавляли 1 мл 1 М NaOH, и общий объем доводили до 5 мл с помощью деионизированной воды. Раствор хорошо перемешали и измеряли оптическую плотность относительно контроля при 510 нм. Образцы анализировали в двух повторностях.

Бумажная хроматография

Углеводы

Равные объемы каждого образца (этанольный и водный экстракты прополиса) подвергали бумажной хроматографии на бумаге Whatmans No.1 с использованием системы растворителей, содержащей н -бутанол, пиридин и воду (6:3:4). Пятна визуализировали путем окрашивания нитратом серебра (Robyt and French, 1963).

Белок и аминокислота

Белок и аминокислоты, присутствующие в этаноле и водных экстрактах прополиса, анализировали и сравнивали с помощью бумажной хроматографии, система растворителей: н -бутанол, кислая кислота и вода (4:1:5). Хроматограмму окрашивали 0,5% раствором нингидрина в ацетоне.

Флавоноиды

Образцы наносили на бумагу Whatmans No.3 и подвергли воздействию системы растворителей, содержащей н -бутанол, уксусную кислоту и воду (4:1:5). Хроматограмму просматривали в ультрафиолетовом свете 260–350 нм для точечного обнаружения (Markham 1982).

Подготовка среды

Водные экстракты прополиса (WEP) стерилизовали шприцевым фильтром Millipore 0,22 мкм, а затем разбавляли до конечной концентрации 1 и 2 мг/мл в культуральной среде. В этом эксперименте использовали среду RPMI 1640 (Sigma) с 5% FCS (среда RPpro). Контроль использовался без WEP в качестве дополнения.

Культура клеток

Различные типы клеток (McCoy, HeLa, SP2/0, HEp-2, BHK21), лимфоциты человека, почки крысы, печень крысы и селезенку крысы культивировали в среде RPMI 1640 с 10% FCS для предварительной инокуляции . Через 72 часа на лунку 24-луночных планшетов получали около 5000–7000 клеток из разных клеток. В каждую лунку добавляли различные концентрации WEP и инкубировали при 37 °C во влажной атмосфере 5% CO 2 в течение 48 часов. Некоторые лунки оставляли необработанными в качестве контроля для целей сравнения.Через разные промежутки времени каждую лунку визуализировали и контролировали под инвертированным микроскопом. Рост и жизнеспособность клеток оценивали с помощью МТТ-теста. Из каждой камеры в разные промежутки времени были сделаны фотографии.

Анализ МТТ

Жизнеспособность клеток оценивали с помощью колориметрического метода МТТ (Mosmann 1983). Вкратце, в каждую лунку добавляли 100 мкл раствора МТТ (Sigma) (5 мг/мл в PBS). Планшеты инкубировали в течение 3 ч при 37 °C, а затем удаляли супернатанты. Для солюбилизации кристаллов МТТ в лунки добавляли 1 мл ДМСО плюс 125 мкл 100 мМ глицина (pH 10,5). Планшеты помещали на шейкер на 15 мин для полного растворения кристаллов, а затем определяли оптическую плотность каждой лунки при 492 нм.

Результаты

Экстракция прополиса

Собирали этанольный экстракт прополиса, который содержал около 35% прополиса. Экстракт имел ярко-красный цвет. Добавление буфера к этанольному экстракту прополиса вызывало осаждение малорастворимых в воде материалов, которые являются очень липкими.После центрифугирования смеси отделяли жидкую фазу, состоящую из около 7 % сухого прополиса, а осадок взвешивали до 28–30 %. Бумажная хроматограмма образцов с разных стадий экстракции показала, что 90% углеводов этанольного экстракта прополиса перешло в водный экстракт прополиса. Помимо колориметрического анализа, бумажная хроматограмма для флавоноидов подтвердила в этом эксперименте, что около 80% общего количества флавоноидов появилось в WEP (рис. ).

Бумажная хроматограмма флавоноидов и сахаров, присутствующих в образцах EEP и WEP. ( A ) Бумажная хроматограмма флавоноидов, EEP = неразбавленный этанольный экстракт прополиса, WEP = неразбавленный водный экстракт прополиса. Оба образца были загружены в одинаковой концентрации в соответствии с исходной концентрацией прополиса. ( B ) бумажная хроматограмма сахаров, G = глюкоза, M = мальтоза, EEP1 = EEP разбавленный 1/10, EEP2 = неразведенный EEP, WEP = неразбавленный водный экстракт

Антибактериальная активность

Как показано на рис.Водные экстракты китайского и иранского прополиса были способны ингибировать рост обеих бактерий ( Bacillus subtilis и Staphylococcus aureus ). Такие же результаты наблюдались для этанольных экстрактов прополиса (ЭЭП) (данные не представлены). Целью данного эксперимента было показать, что водные экстракты прополиса в данном методе не влияют на биологическую активность антибактериальных соединений, присутствующих в прополисе.

Сравнение антибактериальной активности водных экстрактов прополиса китайского с прополисом, использованным в этом исследовании.( A ) Bacillus subtils , (B) Staphylococcus aureus выращивали на агаровой среде и изучали влияние обоих прополисов на ингибирование бактерий. I = 10 мкл 50 мМ фосфатного буфера, II = 10 мкл 10 % водного экстракта прополиса китайского, III = 10 мкл 96 % этанола, IV = 10 мкл 10 % водного экстракта прополиса иранского. Инкубацию проводили при 37 °C в течение 20 ч.

Культура клеток

Результаты культивирования клеток показали, что между ростом разных клеток в WEP были различия по сравнению с контролями.В этом эксперименте количество живых клеток исследовали на рост клеток McCoy, HeLa, SP2/0, HEp-2 и BHK21 (с помощью теста МТТ) в среде RPpro, который показал снижение 1 и 2 мг/мл WEP соответственно, что предполагает ингибирующее действие. Влияние WEP на клеточные линии. Как показано на фиг. , при 1 мг/мл WEP максимальное ингибирование наблюдалось для клеток McCoy с величиной около 70%, а минимальное ингибирование наблюдалось для клеток HeLa с величиной около 30%. При увеличении концентрации WEP (2 мг/мл) максимальное ингибирование наблюдалось для клеток SP2/0 с 80%, а минимальное ингибирование наблюдалось для клеток HeLa с почти 40%.Прямое наблюдение клеток под инвертированным микроскопом показало те же результаты, что и МТТ-тест. Например, в случае BHK21, как показано на фиг. , при 1 и 2 мг/мл WEP отчетливо наблюдались уменьшение числа клеток и изменение морфологии клеток. Аналогичные результаты были достигнуты для других клеточных линий (данные не показаны).

МТТ-тест для различных клеточных линий, выращенных в среде RPMI 1640 и 5% FCS с включением WEP. Клетки выращивали в течение 2 дней при 37 °C.

Клетки BHK21 выращивали в среде RPMI 1640 и 5% FCS с включением различных концентраций WEP.Культивирование клеток проводили в течение 2 дней при 37 °C. 1 = контроль, 2 = 0,2 мг/мл WEP, 3 = 1 мг/мл WEP, 4 = 2 мг/мл WEP

В случае использования нормальных клеток в этом эксперименте (человеческий лимфоцит, крысиная почка, крысиная печень и крысиная селезенка) результаты были другими, чем с клеточными линиями. Как показано в результатах МТТ-теста (рис. ) для нормальных клеток, та же концентрация WEP, используемая для обработки клеточных линий, может стимулировать рост клеток и конечное количество клеток. Согласно МТТ-тесту в 1 мг/мл WEP максимальное увеличение наблюдалось для клеток селезенки крысы на 48%, а минимальное увеличение роста клеток наблюдалось для клеток печени крысы примерно на 18%.Когда концентрацию WEP в среде увеличивали до 2 мг/мл, нормальные клетки демонстрировали более высокую скорость пролиферации и увеличение количества клеток. Эти результаты показывают, что при 2 мг/мл WEP относительное увеличение числа клеток селезенки крысы, лимфоцитов человека, почек крысы и клеток печени крысы составило 65, 55, 35 и 25% соответственно. Прямые наблюдения показали, что все нормальные клетки, выращенные в присутствии WEP, имели большую продолжительность жизни по сравнению с клеточными линиями и контролем. Эти результаты показали, что WEP может действовать как ингибитор роста для клеточных линий и стимулятор роста для нормальных клеток.

МТТ-тест для различных нормальных клеток, выращенных в среде RPMI 1640 и 5% FCS с включением двух различных концентраций WEP в течение 2 дней при 37 °C

Обсуждение

Насколько нам известно, метод экстракции водой работа, представляет собой новый метод извлечения максимально водорастворимых соединений в прополисе. В этом методе большая часть флавоноидов, витаминов, аминокислот и других водорастворимых соединений высвобождается и остается свободной от воска и смолы.Добавление буфера (в холодных условиях) обеспечивает быстрое осаждение парафина и смолы. Этот метод очень прост по сравнению с другими методами, такими как гликолевая экстракция (GEP), водная (водная) экстракция (AEP), масляная экстракция (OEP) и водорастворимые производные (WSD). Таким образом, мы считаем, что с помощью этого метода не только извлекается большая часть водорастворимых частей прополиса, но также удаляется большая часть смолы и воска, присутствующих в прополисе. Результаты могут быть использованы для различных приложений, таких как культивирование клеток, инъекции, косметика и т. д.Что касается наших результатов, поскольку большинство соединений в прополисе представляют собой смолу и воск, высокие концентрации спирта могут быть полезны для высвобождения растворимых соединений из этой липкой части. Об этом опыте также сообщалось ранее (Sawaya et al. 2004). После полной растворимости прополиса добавление воды или буфера для снижения содержания этанола до 50% помогает сохранить растворимые соединения в растворе. Напротив, почти весь воск и смола, присутствующие в прополисе, будут осаждаться при этой концентрации.У этого метода есть преимущества по сравнению с другими методами, солюбилизация прополиса происходит быстрее и на последней стадии появляется больше водорастворимых соединений, чем при других методах. Хотя было обнаружено, что этанольные экстракты прополиса применимы для различных целей, мы считаем, что удаление воска, смолы и спирта было бы очень полезно для других применений, таких как клеточные культуры и медицинские применения.

Существуют различные отчеты, указывающие на то, что биологическая активность прополиса обусловлена ​​комбинацией различных соединений, присутствующих в прополисе. Хотя каждый прополис обладает различной биологической активностью, флавоноиды являются ключевыми соединениями-кандидатами для оценки качества продуктов из прополиса. Удобный колориметрический метод может быть полезен для оценки реального содержания общих флавоноидов (Банкова и др., 2000; Чанг и др., 2002; Салатино и др., 2005).

По результатам, полученным на клеточных культурах, можно предположить, что прополис с различными типами соединений, особенно фенолокислотами и флавоноидами, позволяет контролировать рост клеток и отличать нормальные клетки от раковых.О влиянии прополиса на ингибирование различных клеточных линий сообщалось для разных клеточных линий, таких как клетки K-562 (Aliyazicioglu et al. 2005), клетки HL-60 (Akao et al. 2003; Mishima et al. 2005), клетки MCF-7 человека клетки рака молочной железы (Luo et al. 2001) или некоторые другие клетки лейкемии (Hamblin 2006). Есть ряд сообщений, указывающих на то, что некоторые специфические химические вещества, присутствующие в прополисе, такие как фенетиловый эфир кофейной кислоты (CAPE), могут ингибировать рост мутировавших клеток, не повреждая нормальные клетки (Guarini et al. 1992 год; Рао и соавт. 1993). Также было обнаружено, что прополис оказывает цитотоксическое и цитостатическое действие in vitro на раковые клетки яичников хомяков и опухоли типа саркомы у мышей. Вещество также проявляло цитотоксичность в отношении культур опухолевых клеток человека и животных, включая клеточные линии карциномы молочной железы, меланомы, карциномы толстой кишки и почки (Grunberger et al., 1988). Компонент, вызывающий эти эффекты, был идентифицирован как фенетовый эфир кофейной кислоты. Вещество под названием артепиллин С было выделено из прополиса, и было показано, что оно оказывает цитотоксическое действие на клетки карциномы желудка человека, клетки рака легких человека и клетки карциномы толстой кишки мыши in vitro (Kimoto et al.2001). Кроме того, разные исследователи (Guarini et al. 1992; Rao et al. 1995) показали, что прополис оказывает сильное ингибирующее действие на несколько видов рака. В других сообщениях, связанных с этими соединениями, указывалось, что ингибирующее действие прополиса на раковые клетки было связано с усилением апоптоза (Чиао и др. , 1995; Су и др., 1995). Флавоноиды, присутствующие в прополисе, являются мощными антиоксидантами, и было показано, что они способны улавливать свободные радикалы и тем самым защищать липиды и другие соединения, такие как витамин С, от окисления или разрушения (Popeskovic et al.1980). Вероятно, активные свободные радикалы вместе с другими факторами ответственны за клеточное старение и деградацию при таких состояниях, как сердечно-сосудистые заболевания, артрит, рак, диабет, болезнь Паркинсона и болезнь Альцгеймера. Здесь мы показали, что если экстракт прополиса будет использоваться для лечения рака, а также может действовать как ингибитор раковых клеток, он также может быть полезен в качестве среднего дополнения к нормальным факторам. Поэтому, если две группы клеток (раковые клетки и нормальные клетки) лежат рядом друг с другом, обработка клеток с помощью WEP помогает убить раковые клетки и стимулировать пролиферацию нормальных клеток во время лечения.С помощью этого метода мертвые раковые клетки могут быть заменены нормальными клетками быстрее, чем при других методах лечения.

Хотя имеется ряд сообщений о конкретных соединениях в прополисе, ответственных за биологическую активность прополиса в отношении различных заболеваний, большинство ученых, работающих с прополисом, считают, что прополис содержит ряд неидентифицированных соединений, которые взаимодействуют синергетически, создавая специфичность для ингибирования раковых клеток и пролиферативных процессов. поддержка нормальных клеток.Хотя мы не знаем, какие соединения ответственны за эти явления и как работают эти механизмы, мы можем сделать вывод, что экстракты прополиса позволяют избирательно и логично воздействовать на каждую клетку.

Мы тоже считаем, что у каждого прополиса есть свои свойства, но все они полезны для жизни человека. Если мы посмотрим на историю прополиса, то увидим, что греческий врач Гиппократ (460–377 гг. до н.э.) обнаружил целебные свойства прополиса, и в различных старых медицинских книгах прополис известен как натуральное лекарство и высоко ценился за свои целебные свойства. .Однако только в последние тридцать лет ученые доказали, что прополис является активным и важным лечебным веществом. Есть много открытых вопросов о прополисе, на которые нужно ответить, и нам нужно проделать больше работы, чтобы лучше определить прополис и выяснить, что такое прополис.

Благодарности

Мы благодарим доктора Кианизаде и доктора Тороги за их поддержку и стимулирующую дискуссию. Также выражаем благодарность компании Kohe Dasht за приготовление натурального и качественного прополиса.

Ссылки


  • Akao Y, Maruyama H, Matsumoto K, Ohguchi K, Nishizawa K, Sakamoto T, Araki Y, Mishima S, Nozawa Y (2003) Ингибирующее действие производных коричной кислоты из прополиса на опухолевые клетки человека линии. Biol Pharm Bull 26:1057–1059 [PubMed]

  • Алиязичиоглу Ю., Дегер О., Овали Э., Барлак Ю., Хосвер И., Текелиоглу Ю., Карахан С.К. (2005) Влияние турецкой пыльцы и экстрактов прополиса на респираторный взрыв для K- 562 клеточные линии. Int Immunopharmacol 5:1652–1657 [PubMed]

  • Банкова В.С., Де Кастро С.Л., Маркуччи М.С. (2000)Последние достижения в области химии и растительного происхождения прополиса.Apidologie 31:3–15

  • Brumfitt W, Hamilton-Miller JM, Franklin I (1990) Антибиотическая активность натуральных продуктов: 1. Прополис. Microbios 62:19–22 [PubMed]

  • Chang CC, Yang MH, Wen HM, Chern JC (2002) Оценка общего содержания флавоноидов в прополисе двумя взаимодополняющими колориметрическими методами. J Food Drug Analysis 10:178–182

  • Chiao C, Carothers AM, Grunberger D, Solomon G, Preston GA, Barrett JC (1995)Апоптоз и измененное окислительно-восстановительное состояние, индуцированное фенетиловым эфиром кофейной кислоты (CAPE) в трансформированных крысиных фибробластах клетки.Cancer Res 55:3576–3583 [PubMed]

  • Дюбуа М., Жиль К.А., Гамильтон Дж.К., Робертс Д.А., Смит Ф. (1956) Колориметрические методы определения сахаров и родственных им веществ. Anal Chem 28:350–356

  • Grunberger D, Banerjee R, Eisinger K, Oltz EM, Efros L, Caldwell M, Estevez V, Nakanishi K (1988) Предпочтительная цитотоксичность фенетилового эфира кофейной кислоты, выделенного из прополиса, на опухолевые клетки. Experientia 44:230–232 [PubMed]

  • Guarini L, Su ZZ, Zucker S, Lin J, Grunberger D, Fisher PB (1992) Ингибирование роста и модуляция антигенного фенотипа в клетках меланомы и мультиформной глиобластомы человека с помощью фенетила кофейной кислоты сложный эфир (КАПЕ).Cell Mol Biol 38:513–527 [PubMed]

  • Hamblin T (2006) Натуральные продукты и лечение лейкемии. Leuk Res 30:649–650 [PubMed]

  • Hausen BM, Evers P, Stuwe HT, Konig WA, Wollenweber E (1992) Аллергия на прополис (IV). Исследования с дополнительными сенсибилизаторами из прополиса и компонентов, общих для прополиса, почек тополя и перуанского бальзама. Contact Derm 26:34–44 [PubMed]

  • Hu F, Hepburn HR, Li Y, Chen M, Radloff SE, Daya S (2005) Влияние этанола и водных экстрактов прополиса (пчелиного клея) на модели острого воспаления на животных . J Ethnopharmacol 100:276–283 [PubMed]

  • Ikeno K, Ikeno T, Miyazawa C (1991) Влияние прополиса на кариес зубов у крыс. Caries Res 25:347–351 [PubMed]

  • Халил М.Л. (2006) Биологическая активность пчелиного прополиса в норме и при болезнях. Asian Pac J Cancer Prev 7:22–31 [PubMed]

  • Kim JD, Liu L, Guo W, Meydani M (2006) Химическая структура флавонолов в отношении модуляции ангиогенеза и адгезии иммунно-эндотелиальных клеток. J Nutr Biochem 17:165–176 [PubMed]

  • Kimoto T, Koya-Miyata S, Hino K, Micallef MJ, Hanaya T, Arai S, Ikeda M, Kurimoto M (2001) Легочный канцерогенез, вызванный нитрилотриацетатом железа у мышей и защита от него бразильским прополисом и артепиллином С.Virchows Arch 438:259–270 [PubMed]

  • Lowry OH, Rosebrough NJ, Farr AL, Randall RJ (1951) Измерение белка с помощью фенольного реагента Folin. J Biol Chem 193:265–275 [PubMed]

  • Luo J, Soh JW, Xing WQ, Mao Y, Matsuno T, Weinstein IB (2001) PM-3, производное бензо-гамма-пирана, выделенное из прополиса, ингибирует рост клеток рака молочной железы человека MCF-7. Anticancer Res 21:1665–1671 [PubMed]

  • Marcucci MC, Ferreres F, Garcia-Viguera C, Bankova VS, De Castro SL, Dantas AP, Valente PH, Paulino N (2001) Фенольные соединения бразильского прополиса с фармакологической активностью .J Ethnopharmacol 74:105–112 [PubMed]

  • Маринова Д., Рибарова Ф., Атанасова М. (2005) Общее количество фенолов и общее количество флавоноидов в болгарских фруктах и ​​овощах. J Univ Chem Technol Metall 40:255–260

  • Маркхэм К.Р. (1982) Методы идентификации флавонидов. Academic Press, London

  • Miller GL (1959) Использование реагента динитросалициловой кислоты для определения восстанавливающего сахара. Anal Chem 31:426–428

  • Mishima S, Narita Y, Chikamatsu S, Inoh Y, Ohta S, Yoshida C, Araki Y, Akao Y, Suzuki KM, Nozawa Y (2005) Влияние прополиса на рост клеток и гены экспрессия в клетках HL-60.J Ethnopharmacol 99:5–11 [PubMed]

  • Mosmann T (1983) Быстрый колориметрический анализ клеточного роста и выживания: применение для анализа пролиферации и цитотоксичности. J Immunol Methods 65:55–63 [PubMed]

  • Noelker C, Bacher M, Gocke P, Wei X, Klockgether T, Du Y, Dodel R (2005) Фенетиловый эфир флаваноидной кофейной кислоты блокирует нейротоксичность, вызванную 6-гидроксидофамином . Neurosci Lett 383:39–43 [PubMed]

  • Орси Р.О., Сфорчин Дж.М., Фунари С.Р., Банкова В. (2005)Влияние бразильского и болгарского прополиса на бактерицидную активность макрофагов против Salmonellatyphimurium.Int Immunopharmacol 5:359–368 [PubMed]

  • Попескович Д., Кепция Д., Димитиевич Д., Стоянович Н. (1980) Антиоксидантные свойства прополиса и некоторых его компонентов. Acta veterinaria (Белград) 30:133–136

  • Rao CV, Desai D, Rivenson A, Simi B, Amin S, Reddy BS (1995) Химиопрофилактика канцерогенеза толстой кишки с помощью фенилэтил-3-метилкофеата. Cancer Res 55:2310–2315 [PubMed]

  • Rao CV, Desai D, Simi B, Kulkarni N, Amin S, Reddy BS (1993)Ингибирующее действие эфиров кофейной кислоты на биохимические изменения, вызванные азоксиметаном, и формирование аберрантных очагов крипт в толстой кишке крысы. Cancer Res 53:4182–4188 [PubMed]

  • Рибейро Л.Р., Мантовани М.С., Рибейро Д.А., Сальвадори Д.М. (2006) Бразильские натуральные пищевые компоненты (аннато, прополис и грибы), защищающие от мутаций и рака. Hum Exp Toxicol 25:267–272 [PubMed]

  • Robyt J, French D (1963) Схема действия и специфичность амилазы из Bacillus subtilis. Arch Biochem Biophys 100:451–467 [PubMed]

  • Салатино А., Тейшейра Э.В., Негри Г., Сообщение Д. (2005) Происхождение и химическая вариация бразильского прополиса.Комплемент на основе Evid Alternat Med 2:33–38 [бесплатная статья PMC] [PubMed]

  • Sawaya ACHF, Souza KS, Marcucci MC, Cunha IBS, Shimizu MT (2004) Анализ состава экстрактов бразильского прополиса с помощью хроматографии и оценка их активности in vitro в отношении грамположительных бактерий. Braz J Microbiol 35:104–109

  • Scheller S, Gazda G, Krol W, Czuba Z, Zajusz A, Gabrys J, Shani J (1989a) Способность спиртового экстракта прополиса (EEP) защищать мышей от гамма-облучения . Z Naturforsch [C] 44:1049–1052 [PubMed]

  • Scheller S, Krol W, Swiacik J, Owczarek S, Gabrys J, Shani J (1989b) Противоопухолевые свойства этанольного экстракта прополиса у мышей с карциномой Эрлиха, по сравнению с блеомицином. Z Naturforsch [C] 44:1063–1065 [PubMed]

  • Su ZZ, Lin J, Prewett M, Goldstein NI, Fisher PB (1995) Апоптоз опосредует селективную токсичность фенетилового эфира кофейной кислоты (CAPE) по отношению к трансформированным онкогенам клетки фибробластов эмбриона крысы. Anticancer Res 15:1841–1848 [PubMed]

Влияние водных экстрактов прополиса на стимуляцию и ингибирование различных клеток

Цитотехнология.2007 май; 54(1): 49–56.

, 1 1 , 1 , 1 , , 1 , 2 и , 2 6 и 1

Mohsen Fathi Najafi

1 Отдел ветеринарных исследований и биотехнологий, Razi Vaccine и исследовательского института в сыворотке, Ахмадабад Авес, Машхад , Иран

Фатемех Вахеди

1 Департамент ветеринарных исследований и биотехнологии, Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток Рази, проспект Ахмадабад, Мешхед, Иран

Мохаммад Сейедин

1 900 Научно-исследовательский институт сыворотки, проспект Ахмадабад, Мешхед, Иран

Хамид Реза Джомехзаде

2 Гити Паджохеш Промышленно-научная исследовательская компания, No. 51, Parastar Street, Ahmadabad Ave, Mashhad, Iran

Kazem Bozary

1 Департамент ветеринарных исследований и биотехнологий, Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток Рази, Ahmadabad Ave, Mashhad, Iran

1 Департамент ветеринарных исследований и исследований Биотехнология, Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток Рази, проспект Ахмадабад, Мешхед, Иран

2 Промышленно-научная исследовательская компания Гити Паджохеш, № 51, улица Парастар, проспект Ахмадабад, Мешхед, Иран

Мохсен Фатхи Наджафи, тел.: +98 -511-8431780, факс: +98-511-8420430, электронная почта: мок[email protected] Автор, ответственный за переписку.

Поступила в редакцию 30 августа 2006 г .; Принято 27 февраля 2007 г.

Copyright © Springer Science+Business Media, Inc., 2007 г. Эта статья цитируется в других статьях PMC.

Abstract

Водные экстракты прополиса (WEP) могут ингибировать рост различных клеточных линий, а именно McCoy, HeLa, SP2/0, HEp-2 и BHK21, и стимулировать рост нормальных клеток, таких как лимфоциты человека, почки крысы, печень крысы, и крысиная селезенка. В этих экспериментах 1 и 2 мг WEP добавляли к 1 мл среды RPMI с 5% FCS.Количество клеток и жизнеспособность клеток, обработанных прополисом, и клеток, не содержащих прополис, оценивали с помощью теста исключения красителя трипанового синего и анализа МТТ. Результаты показали, что в случае клеточных линий McCoy, HeLa, SP20, HEp-2 и BHK21 водные экстракты прополиса могут подавлять рост клеток, а также уменьшать их размер. Напротив, такое же количество WEP может стимулировать рост нормальных клеток до 60% при той же концентрации, что и для клеточных линий. Таким образом, наше исследование показывает, что, хотя WEP состоит только из растворимой части прополиса, он позволяет ингибировать различные клеточные линии и увеличивать рост нормальных клеток.Это указывает также на то, что WEP содержит специфические соединения, обладающие биологической активностью в отношении клеточных линий. Хотя прополис содержит различное количество соединений, ясно, что WEP содержит достаточное количество биологических соединений, полезных для лечения некоторых заболеваний, медицинских и связанных с ними применений.

Ключевые слова: Линия клеток, Стимуляция клеток, Тесты МТТ, Нормальные клетки, Прополис, Водные экстракты прополиса (ВЭП) тополя и хвойные деревья.Пчелы используют прополис вместе с пчелиным воском для строительства своих ульев. Он возникает в виде секрета смолы, собранного пчелами с различных растений, и может различаться по цвету в зависимости от вида растения происхождения. Существует ряд обзоров прополиса (Khalil 2006; Ribeiro et al. 2006), и о его соединениях сообщали разные люди. В состав прополиса входит более 250 отдельных соединений. Прополис содержит в основном смолы, бальзамы и фенольные альдегиды (полифенолы), воски и жирные кислоты, эфирные масла, пыльцу, другие органические вещества и минералы.Было показано, что фенольные кислоты, сложные эфиры и флавоноиды составляют наиболее важную часть состава прополиса. Пчелы модифицируют прополис глюкозодиазами, ферментами гортаноглоточных желез, при сборе и переработке. Результатом такой ферментативной модификации является гидролиз фенольных соединений, таких как флавоноидные гетерозиды, до свободных флавоноидных агликонов и сахаров и усиление фармакологического действия полученных продуктов. С химической точки зрения флавоноидные агликоны прополиса представляют собой флавоны, флавонолы, флаваноны, дигидрофлавонолы и халконы.Другими фенольными соединениями являются фенольные альдегиды и полифенольные производные коричной и бензойной кислот, включая сложные эфиры кофейной кислоты, терпены, стероиды, сесквитерпены, производные нафталина и стильбена (Marcucci et al. 2001). Прополис обладает замечательными терапевтическими свойствами и пользуется большим спросом в некоторых странах для лечения ряда заболеваний человека и в косметических целях. Общие лекарственные применения прополиса включают лечение заболеваний сердечно-сосудистой системы и системы крови (анемии), органов дыхания (при различных инфекциях), уход за зубами (Ikeno et al.1991), дерматология (регенерация тканей, язвы, эксема, заживление ран – особенно ожоговых ран, микозов, инфекций и поражений слизистых оболочек), лечение рака (Grunberger et al., 1988; Scheller et al., 1989b; Hausen et al., 1992) , поддержка и улучшение иммунной системы (Scheller et al. 1989a), расстройства пищеварительного тракта (язвы и инфекции), защита и поддержка печени и многие другие. Соединения прополиса, включая флавоноиды, фенольные кислоты и их сложные эфиры, обладают противовоспалительным, антибактериальным, противовирусным, иммуномодулирующим, антиоксидантным и антипролиферативным действием (Hu et al.2005 г.; Ноэлькер и соавт. 2005 г.; Орси и соавт. 2005 г.; Ким и др. 2006). Показано, что прополис ингибирует аморальное деление клеток и синтез белка. Однако точный механизм, лежащий в основе противоопухолевого эффекта, четко не описан. Целью данного исследования было показать влияние водных экстрактов прополиса на различные клеточные линии и нормальные клетки.

Материалы и методы

Извлечение прополиса

Извлечение этанола

Прополис собирали из ульев, расположенных в районе Мешхед в Иране.На первом этапе прополис экстрагировали этанолом, прополис (90 г) добавляли в 400 мл 96% этанола и перемешивали в течение 18 ч при 15°С. Смесь центрифугировали при 7000 об/мин в течение 15 мин при 20°С. Собирали супернатант и повторно экстрагировали осадок 100 мл этанола. После объединения супернатантов обеих стадий их использовали для экспериментов.

Водные экстракты прополиса

Около 200 мл спиртовых экстрактов прополиса с предыдущего этапа заливали в колбу на 500 мл и выдерживали на магнитной мешалке.К этанольному экстракту прополиса добавляли 200 мл 20 мМ фосфатного буфера и перемешивали в течение 20 мин при 20°С. Смесь центрифугировали при 7000 об/мин в течение 15 минут и собирали надосадочную жидкость. Водорастворимые соединения оставались в водной фазе, которая представляла собой раствор светло-желтого цвета. Нижняя часть была темно-коричневой и очень липкой. Водные экстракты прополиса концентрировали методом лиофилизации и использовали на следующем этапе. Поскольку в экстракте прополиса имеется разное количество соединений, был проведен экспресс-анализ количества аминокислот, флавоноидов и сахара на каждой стадии экстракции фотометрическими методами и бумажной хроматографией.

Оценка белков и углеводов

Концентрацию белков измеряли по методу Лоури (Lowry et al. 1951) с использованием бычьего сывороточного альбумина в качестве стандарта. Общий нейтральный сахар определяли методом фенол/серная кислота (Дюбуа и др., 1956) с использованием глюкозы в качестве стандарта. Восстанавливающий сахар, присутствующий в этаноле и водных экстрактах прополиса, измеряли методом ДНКА при 540 нм (Miller, 1959) с использованием глюкозы в качестве стандарта.

Антибактериальная активность

Антибактериальная активность водных экстрактов прополиса из использованного прополиса и китайского прополиса (Zhejiang Jiangshan Hengliang bee products Co., Ltd., Китай) тестировали с использованием двух грамположительных бактерий (Brumfitt et al., 1990). Бактерии ( Bacillus subtils и Staphylococcus aureus ) выращивали на агаризованной среде, затем в каждую лунку добавляли одинаковое количество водных экстрактов прополиса, в качестве контроля использовали буфер и этанол. Планшеты выдерживали при 37 °C в течение 20 ч, а затем контролировали зону задержки роста.

Общий анализ флавоноидов

Общее содержание флавоноидов измеряли с помощью фотометрического анализа хлорида алюминия (Marinova et al.2005). Аликвоту (0,5 мл) экстрактов добавляли в пробирку, содержащую 2 мл деионизированной воды, а затем в пробирку добавляли 0,15 мл 5% NaNO 2 . Через 5 минут добавили 0,15 мл 10% AlCl 3 . После 6 минутной инкубации и перемешивания добавляли 1 мл 1 М NaOH, и общий объем доводили до 5 мл с помощью деионизированной воды. Раствор хорошо перемешали и измеряли оптическую плотность относительно контроля при 510 нм. Образцы анализировали в двух повторностях.

Бумажная хроматография

Углеводы

Равные объемы каждого образца (этанольный и водный экстракты прополиса) подвергали бумажной хроматографии на бумаге Whatmans No.1 с использованием системы растворителей, содержащей н -бутанол, пиридин и воду (6:3:4). Пятна визуализировали путем окрашивания нитратом серебра (Robyt and French, 1963).

Белок и аминокислота

Белок и аминокислоты, присутствующие в этаноле и водных экстрактах прополиса, анализировали и сравнивали с помощью бумажной хроматографии, система растворителей: н -бутанол, кислая кислота и вода (4:1:5). Хроматограмму окрашивали 0,5% раствором нингидрина в ацетоне.

Флавоноиды

Образцы наносили на бумагу Whatmans No.3 и подвергли воздействию системы растворителей, содержащей н -бутанол, уксусную кислоту и воду (4:1:5). Хроматограмму просматривали в ультрафиолетовом свете 260–350 нм для точечного обнаружения (Markham 1982).

Подготовка среды

Водные экстракты прополиса (WEP) стерилизовали шприцевым фильтром Millipore 0,22 мкм, а затем разбавляли до конечной концентрации 1 и 2 мг/мл в культуральной среде. В этом эксперименте использовали среду RPMI 1640 (Sigma) с 5% FCS (среда RPpro). Контроль использовался без WEP в качестве дополнения.

Культура клеток

Различные типы клеток (McCoy, HeLa, SP2/0, HEp-2, BHK21), лимфоциты человека, почки крысы, печень крысы и селезенку крысы культивировали в среде RPMI 1640 с 10% FCS для предварительной инокуляции . Через 72 часа на лунку 24-луночных планшетов получали около 5000–7000 клеток из разных клеток. В каждую лунку добавляли различные концентрации WEP и инкубировали при 37 °C во влажной атмосфере 5% CO 2 в течение 48 часов. Некоторые лунки оставляли необработанными в качестве контроля для целей сравнения.Через разные промежутки времени каждую лунку визуализировали и контролировали под инвертированным микроскопом. Рост и жизнеспособность клеток оценивали с помощью МТТ-теста. Из каждой камеры в разные промежутки времени были сделаны фотографии.

Анализ МТТ

Жизнеспособность клеток оценивали с помощью колориметрического метода МТТ (Mosmann 1983). Вкратце, в каждую лунку добавляли 100 мкл раствора МТТ (Sigma) (5 мг/мл в PBS). Планшеты инкубировали в течение 3 ч при 37 °C, а затем удаляли супернатанты. Для солюбилизации кристаллов МТТ в лунки добавляли 1 мл ДМСО плюс 125 мкл 100 мМ глицина (pH 10,5). Планшеты помещали на шейкер на 15 мин для полного растворения кристаллов, а затем определяли оптическую плотность каждой лунки при 492 нм.

Результаты

Экстракция прополиса

Собирали этанольный экстракт прополиса, который содержал около 35% прополиса. Экстракт имел ярко-красный цвет. Добавление буфера к этанольному экстракту прополиса вызывало осаждение малорастворимых в воде материалов, которые являются очень липкими.После центрифугирования смеси отделяли жидкую фазу, состоящую из около 7 % сухого прополиса, а осадок взвешивали до 28–30 %. Бумажная хроматограмма образцов с разных стадий экстракции показала, что 90% углеводов этанольного экстракта прополиса перешло в водный экстракт прополиса. Помимо колориметрического анализа, бумажная хроматограмма для флавоноидов подтвердила в этом эксперименте, что около 80% общего количества флавоноидов появилось в WEP (рис. ).

Бумажная хроматограмма флавоноидов и сахаров, присутствующих в образцах EEP и WEP. ( A ) Бумажная хроматограмма флавоноидов, EEP = неразбавленный этанольный экстракт прополиса, WEP = неразбавленный водный экстракт прополиса. Оба образца были загружены в одинаковой концентрации в соответствии с исходной концентрацией прополиса. ( B ) бумажная хроматограмма сахаров, G = глюкоза, M = мальтоза, EEP1 = EEP разбавленный 1/10, EEP2 = неразведенный EEP, WEP = неразбавленный водный экстракт

Антибактериальная активность

Как показано на рис.Водные экстракты китайского и иранского прополиса были способны ингибировать рост обеих бактерий ( Bacillus subtilis и Staphylococcus aureus ). Такие же результаты наблюдались для этанольных экстрактов прополиса (ЭЭП) (данные не представлены). Целью данного эксперимента было показать, что водные экстракты прополиса в данном методе не влияют на биологическую активность антибактериальных соединений, присутствующих в прополисе.

Сравнение антибактериальной активности водных экстрактов прополиса китайского с прополисом, использованным в этом исследовании.( A ) Bacillus subtils , (B) Staphylococcus aureus выращивали на агаровой среде и изучали влияние обоих прополисов на ингибирование бактерий. I = 10 мкл 50 мМ фосфатного буфера, II = 10 мкл 10 % водного экстракта прополиса китайского, III = 10 мкл 96 % этанола, IV = 10 мкл 10 % водного экстракта прополиса иранского. Инкубацию проводили при 37 °C в течение 20 ч.

Культура клеток

Результаты культивирования клеток показали, что между ростом разных клеток в WEP были различия по сравнению с контролями.В этом эксперименте количество живых клеток исследовали на рост клеток McCoy, HeLa, SP2/0, HEp-2 и BHK21 (с помощью теста МТТ) в среде RPpro, который показал снижение 1 и 2 мг/мл WEP соответственно, что предполагает ингибирующее действие. Влияние WEP на клеточные линии. Как показано на фиг. , при 1 мг/мл WEP максимальное ингибирование наблюдалось для клеток McCoy с величиной около 70%, а минимальное ингибирование наблюдалось для клеток HeLa с величиной около 30%. При увеличении концентрации WEP (2 мг/мл) максимальное ингибирование наблюдалось для клеток SP2/0 с 80%, а минимальное ингибирование наблюдалось для клеток HeLa с почти 40%.Прямое наблюдение клеток под инвертированным микроскопом показало те же результаты, что и МТТ-тест. Например, в случае BHK21, как показано на фиг. , при 1 и 2 мг/мл WEP отчетливо наблюдались уменьшение числа клеток и изменение морфологии клеток. Аналогичные результаты были достигнуты для других клеточных линий (данные не показаны).

МТТ-тест для различных клеточных линий, выращенных в среде RPMI 1640 и 5% FCS с включением WEP. Клетки выращивали в течение 2 дней при 37 °C.

Клетки BHK21 выращивали в среде RPMI 1640 и 5% FCS с включением различных концентраций WEP.Культивирование клеток проводили в течение 2 дней при 37 °C. 1 = контроль, 2 = 0,2 мг/мл WEP, 3 = 1 мг/мл WEP, 4 = 2 мг/мл WEP

В случае использования нормальных клеток в этом эксперименте (человеческий лимфоцит, крысиная почка, крысиная печень и крысиная селезенка) результаты были другими, чем с клеточными линиями. Как показано в результатах МТТ-теста (рис. ) для нормальных клеток, та же концентрация WEP, используемая для обработки клеточных линий, может стимулировать рост клеток и конечное количество клеток. Согласно МТТ-тесту в 1 мг/мл WEP максимальное увеличение наблюдалось для клеток селезенки крысы на 48%, а минимальное увеличение роста клеток наблюдалось для клеток печени крысы примерно на 18%.Когда концентрацию WEP в среде увеличивали до 2 мг/мл, нормальные клетки демонстрировали более высокую скорость пролиферации и увеличение количества клеток. Эти результаты показывают, что при 2 мг/мл WEP относительное увеличение числа клеток селезенки крысы, лимфоцитов человека, почек крысы и клеток печени крысы составило 65, 55, 35 и 25% соответственно. Прямые наблюдения показали, что все нормальные клетки, выращенные в присутствии WEP, имели большую продолжительность жизни по сравнению с клеточными линиями и контролем. Эти результаты показали, что WEP может действовать как ингибитор роста для клеточных линий и стимулятор роста для нормальных клеток.

МТТ-тест для различных нормальных клеток, выращенных в среде RPMI 1640 и 5% FCS с включением двух различных концентраций WEP в течение 2 дней при 37 °C

Обсуждение

Насколько нам известно, метод экстракции водой работа, представляет собой новый метод извлечения максимально водорастворимых соединений в прополисе. В этом методе большая часть флавоноидов, витаминов, аминокислот и других водорастворимых соединений высвобождается и остается свободной от воска и смолы.Добавление буфера (в холодных условиях) обеспечивает быстрое осаждение парафина и смолы. Этот метод очень прост по сравнению с другими методами, такими как гликолевая экстракция (GEP), водная (водная) экстракция (AEP), масляная экстракция (OEP) и водорастворимые производные (WSD). Таким образом, мы считаем, что с помощью этого метода не только извлекается большая часть водорастворимых частей прополиса, но также удаляется большая часть смолы и воска, присутствующих в прополисе. Результаты могут быть использованы для различных приложений, таких как культивирование клеток, инъекции, косметика и т. д.Что касается наших результатов, поскольку большинство соединений в прополисе представляют собой смолу и воск, высокие концентрации спирта могут быть полезны для высвобождения растворимых соединений из этой липкой части. Об этом опыте также сообщалось ранее (Sawaya et al. 2004). После полной растворимости прополиса добавление воды или буфера для снижения содержания этанола до 50% помогает сохранить растворимые соединения в растворе. Напротив, почти весь воск и смола, присутствующие в прополисе, будут осаждаться при этой концентрации.У этого метода есть преимущества по сравнению с другими методами, солюбилизация прополиса происходит быстрее и на последней стадии появляется больше водорастворимых соединений, чем при других методах. Хотя было обнаружено, что этанольные экстракты прополиса применимы для различных целей, мы считаем, что удаление воска, смолы и спирта было бы очень полезно для других применений, таких как клеточные культуры и медицинские применения.

Существуют различные отчеты, указывающие на то, что биологическая активность прополиса обусловлена ​​комбинацией различных соединений, присутствующих в прополисе. Хотя каждый прополис обладает различной биологической активностью, флавоноиды являются ключевыми соединениями-кандидатами для оценки качества продуктов из прополиса. Удобный колориметрический метод может быть полезен для оценки реального содержания общих флавоноидов (Банкова и др., 2000; Чанг и др., 2002; Салатино и др., 2005).

По результатам, полученным на клеточных культурах, можно предположить, что прополис с различными типами соединений, особенно фенолокислотами и флавоноидами, позволяет контролировать рост клеток и отличать нормальные клетки от раковых.О влиянии прополиса на ингибирование различных клеточных линий сообщалось для разных клеточных линий, таких как клетки K-562 (Aliyazicioglu et al. 2005), клетки HL-60 (Akao et al. 2003; Mishima et al. 2005), клетки MCF-7 человека клетки рака молочной железы (Luo et al. 2001) или некоторые другие клетки лейкемии (Hamblin 2006). Есть ряд сообщений, указывающих на то, что некоторые специфические химические вещества, присутствующие в прополисе, такие как фенетиловый эфир кофейной кислоты (CAPE), могут ингибировать рост мутировавших клеток, не повреждая нормальные клетки (Guarini et al. 1992 год; Рао и соавт. 1993). Также было обнаружено, что прополис оказывает цитотоксическое и цитостатическое действие in vitro на раковые клетки яичников хомяков и опухоли типа саркомы у мышей. Вещество также проявляло цитотоксичность в отношении культур опухолевых клеток человека и животных, включая клеточные линии карциномы молочной железы, меланомы, карциномы толстой кишки и почки (Grunberger et al., 1988). Компонент, вызывающий эти эффекты, был идентифицирован как фенетовый эфир кофейной кислоты. Вещество под названием артепиллин С было выделено из прополиса, и было показано, что оно оказывает цитотоксическое действие на клетки карциномы желудка человека, клетки рака легких человека и клетки карциномы толстой кишки мыши in vitro (Kimoto et al.2001). Кроме того, разные исследователи (Guarini et al. 1992; Rao et al. 1995) показали, что прополис оказывает сильное ингибирующее действие на несколько видов рака. В других сообщениях, связанных с этими соединениями, указывалось, что ингибирующее действие прополиса на раковые клетки было связано с усилением апоптоза (Чиао и др. , 1995; Су и др., 1995). Флавоноиды, присутствующие в прополисе, являются мощными антиоксидантами, и было показано, что они способны улавливать свободные радикалы и тем самым защищать липиды и другие соединения, такие как витамин С, от окисления или разрушения (Popeskovic et al.1980). Вероятно, активные свободные радикалы вместе с другими факторами ответственны за клеточное старение и деградацию при таких состояниях, как сердечно-сосудистые заболевания, артрит, рак, диабет, болезнь Паркинсона и болезнь Альцгеймера. Здесь мы показали, что если экстракт прополиса будет использоваться для лечения рака, а также может действовать как ингибитор раковых клеток, он также может быть полезен в качестве среднего дополнения к нормальным факторам. Поэтому, если две группы клеток (раковые клетки и нормальные клетки) лежат рядом друг с другом, обработка клеток с помощью WEP помогает убить раковые клетки и стимулировать пролиферацию нормальных клеток во время лечения.С помощью этого метода мертвые раковые клетки могут быть заменены нормальными клетками быстрее, чем при других методах лечения.

Хотя имеется ряд сообщений о конкретных соединениях в прополисе, ответственных за биологическую активность прополиса в отношении различных заболеваний, большинство ученых, работающих с прополисом, считают, что прополис содержит ряд неидентифицированных соединений, которые взаимодействуют синергетически, создавая специфичность для ингибирования раковых клеток и пролиферативных процессов. поддержка нормальных клеток.Хотя мы не знаем, какие соединения ответственны за эти явления и как работают эти механизмы, мы можем сделать вывод, что экстракты прополиса позволяют избирательно и логично воздействовать на каждую клетку.

Мы тоже считаем, что у каждого прополиса есть свои свойства, но все они полезны для жизни человека. Если мы посмотрим на историю прополиса, то увидим, что греческий врач Гиппократ (460–377 гг. до н.э.) обнаружил целебные свойства прополиса, и в различных старых медицинских книгах прополис известен как натуральное лекарство и высоко ценился за свои целебные свойства. .Однако только в последние тридцать лет ученые доказали, что прополис является активным и важным лечебным веществом. Есть много открытых вопросов о прополисе, на которые нужно ответить, и нам нужно проделать больше работы, чтобы лучше определить прополис и выяснить, что такое прополис.

Благодарности

Мы благодарим доктора Кианизаде и доктора Тороги за их поддержку и стимулирующую дискуссию. Также выражаем благодарность компании Kohe Dasht за приготовление натурального и качественного прополиса.

Ссылки


  • Akao Y, Maruyama H, Matsumoto K, Ohguchi K, Nishizawa K, Sakamoto T, Araki Y, Mishima S, Nozawa Y (2003) Ингибирующее действие производных коричной кислоты из прополиса на опухолевые клетки человека линии. Biol Pharm Bull 26:1057–1059 [PubMed]

  • Алиязичиоглу Ю., Дегер О., Овали Э., Барлак Ю., Хосвер И., Текелиоглу Ю., Карахан С.К. (2005) Влияние турецкой пыльцы и экстрактов прополиса на респираторный взрыв для K- 562 клеточные линии. Int Immunopharmacol 5:1652–1657 [PubMed]

  • Банкова В.С., Де Кастро С.Л., Маркуччи М.С. (2000)Последние достижения в области химии и растительного происхождения прополиса.Apidologie 31:3–15

  • Brumfitt W, Hamilton-Miller JM, Franklin I (1990) Антибиотическая активность натуральных продуктов: 1. Прополис. Microbios 62:19–22 [PubMed]

  • Chang CC, Yang MH, Wen HM, Chern JC (2002) Оценка общего содержания флавоноидов в прополисе двумя взаимодополняющими колориметрическими методами. J Food Drug Analysis 10:178–182

  • Chiao C, Carothers AM, Grunberger D, Solomon G, Preston GA, Barrett JC (1995)Апоптоз и измененное окислительно-восстановительное состояние, индуцированное фенетиловым эфиром кофейной кислоты (CAPE) в трансформированных крысиных фибробластах клетки.Cancer Res 55:3576–3583 [PubMed]

  • Дюбуа М., Жиль К.А., Гамильтон Дж.К., Робертс Д.А., Смит Ф. (1956) Колориметрические методы определения сахаров и родственных им веществ. Anal Chem 28:350–356

  • Grunberger D, Banerjee R, Eisinger K, Oltz EM, Efros L, Caldwell M, Estevez V, Nakanishi K (1988) Предпочтительная цитотоксичность фенетилового эфира кофейной кислоты, выделенного из прополиса, на опухолевые клетки. Experientia 44:230–232 [PubMed]

  • Guarini L, Su ZZ, Zucker S, Lin J, Grunberger D, Fisher PB (1992) Ингибирование роста и модуляция антигенного фенотипа в клетках меланомы и мультиформной глиобластомы человека с помощью фенетила кофейной кислоты сложный эфир (КАПЕ).Cell Mol Biol 38:513–527 [PubMed]

  • Hamblin T (2006) Натуральные продукты и лечение лейкемии. Leuk Res 30:649–650 [PubMed]

  • Hausen BM, Evers P, Stuwe HT, Konig WA, Wollenweber E (1992) Аллергия на прополис (IV). Исследования с дополнительными сенсибилизаторами из прополиса и компонентов, общих для прополиса, почек тополя и перуанского бальзама. Contact Derm 26:34–44 [PubMed]

  • Hu F, Hepburn HR, Li Y, Chen M, Radloff SE, Daya S (2005) Влияние этанола и водных экстрактов прополиса (пчелиного клея) на модели острого воспаления на животных . J Ethnopharmacol 100:276–283 [PubMed]

  • Ikeno K, Ikeno T, Miyazawa C (1991) Влияние прополиса на кариес зубов у крыс. Caries Res 25:347–351 [PubMed]

  • Халил М.Л. (2006) Биологическая активность пчелиного прополиса в норме и при болезнях. Asian Pac J Cancer Prev 7:22–31 [PubMed]

  • Kim JD, Liu L, Guo W, Meydani M (2006) Химическая структура флавонолов в отношении модуляции ангиогенеза и адгезии иммунно-эндотелиальных клеток. J Nutr Biochem 17:165–176 [PubMed]

  • Kimoto T, Koya-Miyata S, Hino K, Micallef MJ, Hanaya T, Arai S, Ikeda M, Kurimoto M (2001) Легочный канцерогенез, вызванный нитрилотриацетатом железа у мышей и защита от него бразильским прополисом и артепиллином С.Virchows Arch 438:259–270 [PubMed]

  • Lowry OH, Rosebrough NJ, Farr AL, Randall RJ (1951) Измерение белка с помощью фенольного реагента Folin. J Biol Chem 193:265–275 [PubMed]

  • Luo J, Soh JW, Xing WQ, Mao Y, Matsuno T, Weinstein IB (2001) PM-3, производное бензо-гамма-пирана, выделенное из прополиса, ингибирует рост клеток рака молочной железы человека MCF-7. Anticancer Res 21:1665–1671 [PubMed]

  • Marcucci MC, Ferreres F, Garcia-Viguera C, Bankova VS, De Castro SL, Dantas AP, Valente PH, Paulino N (2001) Фенольные соединения бразильского прополиса с фармакологической активностью .J Ethnopharmacol 74:105–112 [PubMed]

  • Маринова Д., Рибарова Ф., Атанасова М. (2005) Общее количество фенолов и общее количество флавоноидов в болгарских фруктах и ​​овощах. J Univ Chem Technol Metall 40:255–260

  • Маркхэм К.Р. (1982) Методы идентификации флавонидов. Academic Press, London

  • Miller GL (1959) Использование реагента динитросалициловой кислоты для определения восстанавливающего сахара. Anal Chem 31:426–428

  • Mishima S, Narita Y, Chikamatsu S, Inoh Y, Ohta S, Yoshida C, Araki Y, Akao Y, Suzuki KM, Nozawa Y (2005) Влияние прополиса на рост клеток и гены экспрессия в клетках HL-60.J Ethnopharmacol 99:5–11 [PubMed]

  • Mosmann T (1983) Быстрый колориметрический анализ клеточного роста и выживания: применение для анализа пролиферации и цитотоксичности. J Immunol Methods 65:55–63 [PubMed]

  • Noelker C, Bacher M, Gocke P, Wei X, Klockgether T, Du Y, Dodel R (2005) Фенетиловый эфир флаваноидной кофейной кислоты блокирует нейротоксичность, вызванную 6-гидроксидофамином . Neurosci Lett 383:39–43 [PubMed]

  • Орси Р.О., Сфорчин Дж.М., Фунари С.Р., Банкова В. (2005)Влияние бразильского и болгарского прополиса на бактерицидную активность макрофагов против Salmonellatyphimurium.Int Immunopharmacol 5:359–368 [PubMed]

  • Попескович Д., Кепция Д., Димитиевич Д., Стоянович Н. (1980) Антиоксидантные свойства прополиса и некоторых его компонентов. Acta veterinaria (Белград) 30:133–136

  • Rao CV, Desai D, Rivenson A, Simi B, Amin S, Reddy BS (1995) Химиопрофилактика канцерогенеза толстой кишки с помощью фенилэтил-3-метилкофеата. Cancer Res 55:2310–2315 [PubMed]

  • Rao CV, Desai D, Simi B, Kulkarni N, Amin S, Reddy BS (1993)Ингибирующее действие эфиров кофейной кислоты на биохимические изменения, вызванные азоксиметаном, и формирование аберрантных очагов крипт в толстой кишке крысы. Cancer Res 53:4182–4188 [PubMed]

  • Рибейро Л.Р., Мантовани М.С., Рибейро Д.А., Сальвадори Д.М. (2006) Бразильские натуральные пищевые компоненты (аннато, прополис и грибы), защищающие от мутаций и рака. Hum Exp Toxicol 25:267–272 [PubMed]

  • Robyt J, French D (1963) Схема действия и специфичность амилазы из Bacillus subtilis. Arch Biochem Biophys 100:451–467 [PubMed]

  • Салатино А., Тейшейра Э.В., Негри Г., Сообщение Д. (2005) Происхождение и химическая вариация бразильского прополиса.Комплемент на основе Evid Alternat Med 2:33–38 [бесплатная статья PMC] [PubMed]

  • Sawaya ACHF, Souza KS, Marcucci MC, Cunha IBS, Shimizu MT (2004) Анализ состава экстрактов бразильского прополиса с помощью хроматографии и оценка их активности in vitro в отношении грамположительных бактерий. Braz J Microbiol 35:104–109

  • Scheller S, Gazda G, Krol W, Czuba Z, Zajusz A, Gabrys J, Shani J (1989a) Способность спиртового экстракта прополиса (EEP) защищать мышей от гамма-облучения . Z Naturforsch [C] 44:1049–1052 [PubMed]

  • Scheller S, Krol W, Swiacik J, Owczarek S, Gabrys J, Shani J (1989b) Противоопухолевые свойства этанольного экстракта прополиса у мышей с карциномой Эрлиха, по сравнению с блеомицином. Z Naturforsch [C] 44:1063–1065 [PubMed]

  • Su ZZ, Lin J, Prewett M, Goldstein NI, Fisher PB (1995) Апоптоз опосредует селективную токсичность фенетилового эфира кофейной кислоты (CAPE) по отношению к трансформированным онкогенам клетки фибробластов эмбриона крысы. Anticancer Res 15:1841–1848 [PubMed]

Прополис на водной основе

1.Состав прополиса
Прополис  ;

Это липкий, твердый и хрупкий материал при 15 oC, мягкий и сгибаемый при 30 oC, цвет которого может меняться от черного до желтого в зависимости от его происхождения.

Хотя структура сырого прополиса значительно различается в зависимости от его источника; 50-55% смолы и бальзама, 20-35% воска растительного происхождения, 10-15% эфирных и эфирных масел, 2-5% пыльцы, небольшое количество органических и неорганических соединений. В другом отчете прополис содержит 46% бальзама, 27% растительного воска и 15% флавона и флавоноидов.

Прополис пчел; Собирают тополей, дубов, буков, эвкалиптов, акаций и хвойных деревьев, особенно из разных деревьев и кустарников и растений. Прополис, переносимый задней лапкой пчелы, можно опорожнить и использовать при необходимости с помощью других пчел.

2. Сбор прополиса из улья Пчелы накапливают прополис в улье за ​​нижней доской, краями рамки и летком. Собранный здесь прополис можно соскоблить. Полученный таким образом соскоб прополиса может быть грязным и содержать различные остатки.

 

Поэтому в техническом сборе прополиса применяют пластиковые пластины, похожие на маточную сетку, размещаемые на рамах или отверстиях в передних и задних бортах корпуса улья. После того, как прополис помещен в сборную тарелку, прополис легко снимается с тарелки и упаковывается вручную, когда тарелка некоторое время хранится в холоде. Из собранного сырого прополиса в лаборатории производится «Мягкий экстракт прополиса».

3. Использование прополиса

Прополис пчелами в ульях; Применяется для замазывания трещин и прорывов в улье, склеивания рамок со стенками улья и друг к другу, предотвращения бальзамирования и смердения вредителей, проникающих в колонию и не подлежащих выбрасыванию из улья, полировки и полировка сотовых ячеек и стерилизация улья..

Содержание прополиса:

Прополис — это смолистое воскоподобное вещество, собираемое пчелами с почек и коры деревьев. Его цвет и физические свойства варьируются в зависимости от источника и используются пчелами в улье для различных целей.

Прополис твердый как камень, когда его вынимают из улья. При этом в нем содержится 40 процентов воска, 15-20 процентов пыли и других остаточных материалов. Подготовка к использованию после выхода из улья может осуществляться двумя способами: Его кристаллизуют, выдерживая в глубокой заморозке, а затем направляют в дробилку для получения порошка.

Экстракт прополиса 2: Первый прополис обрабатывается и перегоняется для удаления воска и других материалов. Кроме того, продолжается процесс очистки на основе активных ингредиентов. Таким образом получают экстракт прополиса. Могут быть получены экстракты различной чистоты от 70% до 96%. Категория качества определяется с учетом соотношения чистоты и действующих веществ в экстракте прополиса. По чистоте и содержанию он может быть в 3-7 раз эффективнее (по сравнению с принимаемым прополисом). Условия использования и условия хранения: Хранить при комнатной температуре. Прополис сохраняет свою питательную ценность и свойства в течение 18 месяцев при комнатной температуре.

Дозы для применения! Для общего применения можно принимать 2 грамма экстракта прополиса в качестве суточной дозы. Для детей суточная доза 250 мг (1-3 чайных ложки) в возрасте от 1 до 3 лет составляет четверть (500 мг) чайной ложки (500 мг) в возрасте от 3 до 6 лет, а суточная доза до 12 лет и взрослых доз старше 12 лет.доступно.Использует: Употребление и использование в воде: Для здоровья полости рта этой жидкостью можно полоскать горло, помещая чайную ложку экстракта в пол-литра воды. По глотку той же жидкости утром и вечером можно выпить еще раз. Эту жидкость можно употреблять, присоединяя напитки, такие как кофе или сок.

Использование экстракта в виде порошка:

По вкусу дозу прополиса можно принимать непосредственно, добавляя мед или йогурт. Прополис можно использовать, смешав 75 ​​граммов меда, 5 граммов экстракта прополиса и 20 граммов теплой воды.Пчелино-пыльно-прополисная смесь: на 1 кг меда 200 грамм маточного молочка, 200 грамм растертой пыльцы, 50 грамм экстракта прополиса можно употреблять, добавляя лето-зиму, можно приготовить. Вкус чистой формы прополиса в виде порошка или экстракта детям не нравится. Мы можем давать нашим детям, смешивая мед, как указано выше, или могут быть другие смеси, которые им понравятся.

Например патока-йогурт-прополис или варенье-прополис-хлеб.
,

Побочные эффекты


Никаких побочных эффектов не наблюдалось, но их использование намного превышает рекомендуемые дозы…  

Прополис – это не лекарство, а пищевая добавка.

Химическая характеристика саудовского прополиса и его противопаразитарные и противораковые свойства

  • 1.

    Банкова В., Попова М. и Трушева Б. Фитохимия медоносной пчелы. Фитохимия 155 , 1–11 (2018).

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google Scholar

  • 2.

    Jerz, G. и др. Препаративное масс-спектрометрическое профилирование биоактивных метаболитов прополиса из Саудовской Аравии, фракционированного с помощью высокоскоростной противоточной хроматографии и автономной масс-спектрометрии с химической ионизацией при атмосферном давлении. Ж. Хроматогр. А 1347 , 17–29 (2014).

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google Scholar

  • 3.

    Алкарни А.С., Ханнан М.А., Овайс, А.А. и Энгель, М.С. Местные медоносные пчелы Саудовской Аравии (Hymenoptera, Apidae, Apis mellifera jemenitica Ruttner): их естественная история и роль в пчеловодстве. ZooKeys 83 , 83–98 (2011).

    Google Scholar

  • 4.

    Wagh, V.D. Прополис: чудодейственный пчелиный продукт и его фармакологический потенциал. Доп. Фармакол. науч. 2013 , 1–11 (2013).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ Google Scholar

  • 5.

    Nicodemo, D., De Jong, D., Couto, R. H. & Malheiros, E. B. Линии медоносных пчел, отобранные для производства большого количества прополиса, также имеют превосходное гигиеническое поведение и увеличенные запасы меда и пыльцы. Жен. Мол. Рез. 12 , 6931–6938 (2013).

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google Scholar

  • 6.

    Попова М.П., ​​Грайкоу К., Чиноу И. и Банкова В.С. Определение профиля дитерпеновых соединений в средиземноморском прополисе из Греции методом ГХ-МС. Дж. Агрик. Пищевая хим. 58 , 3167–3176 (2010).

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google Scholar

  • 7.

    Huang, S. et al. Последние достижения в области химического состава прополиса. Молекулы 19 , 19610–19632 (2014).

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google Scholar

  • 8.

    Fernandes-Silva, C.C., Freitas, JC, Salatino, A. & Salatino, ML. Цитотоксическая активность шести образцов бразильского прополиса на яйцах морского ежа ( Lytechinus variegatus ). Эвид. Дополнение на основе. Альтернативный. Мед. eCAM 2013 , 619361 (2013).

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google Scholar

  • 9.

    Marcucci, M.C. Прополис: Химический состав, биологические свойства и терапевтическая активность. Apidologie 26 , 83–99 (1995).

    КАС Статья Google Scholar

  • 10.

    Siripatrawan, U., Vitchayakitti, W. & Sanguandeekul, R. Антиоксидантные и антимикробные свойства тайского прополиса, экстрагированного с использованием водного раствора этанола. Междунар. Дж. Пищевая наука. Технол. 48 , 22–27 (2013).

    КАС Статья Google Scholar

  • 11.

    Банкова В. Химическое разнообразие прополиса делает его ценным источником новых биологически активных соединений. Дж. Апи Изд. Апи Мед. науч. 1 , 2328 (2009).

    Google Scholar

  • 12.

    Шубхарани Р., Шиварам В. и Кишор Б. Цитотоксичность индийского пчелиного прополиса in vitro на линиях раковых клеток. Междунар. Дж. Фарм. биол. науч. 5 , 698–706 (2014).

    Google Scholar

  • 13.

    Coggshall, WL & Morse, RA Пчелиный воск: производство, сбор, переработка и продукция. Пчелиный воск Изд. Процесс сбора урожая. Произв. (1984).

  • 14.

    Krell, R. Продукты с добавленной стоимостью от пчеловодства, пищевой и сельскохозяйственной организации (1996).

  • 15.

    Неджи, Н. и Лусиф-Айад, В. Антимикробная активность алжирского прополиса в отношении патогенов пищевого происхождения и его количественный химический состав. Азиатский пакет. Дж. Троп. Дис. 4 , 433–437 (2014).

    КАС Статья Google Scholar

  • 16.

    Кампос, Дж. Ф. и др. Антимикробная, антиоксидантная и цитотоксическая активность прополиса из Melipona orbignyi (Hymenoptera, Apidae). Пищевая хим. Токсикол. 65 , 374–380 (2014).

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google Scholar

  • 17.

    Паулино, Н. и др. Противовоспалительное действие биодоступного соединения Артепиллин С в бразильском прополисе. евро. Дж. Фармакол. 587 , 296–301 (2008).

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google Scholar

  • 18.

    Franchi, G.C. и др. Сравнение действия спиртовых экстрактов бразильского прополиса на лейкозные клетки человека, оцененное с помощью анализа МТТ. Эвид.Дополнение на основе. Альтерн. Мед. 2012 , 918956 (2012).

    Артикул Google Scholar

  • 19.

    Utispan, K., Chitkul, B. & Koontongkaew, S. Цитотоксическая активность экстрактов прополиса безжалой пчелы Trigona Sirindhornae в отношении первичных и метастатических клеточных линий рака головы и шеи. Азиатский пакет. J. Рак Prev. 18 , 1051–1055 (2017).

    ПабМед ПабМед Центральный Google Scholar

  • 20.

    Дантас, А.П., Оливьери, Б.П., Гомес, Ф.Х.М. и Де Кастро, С.Л. Лечение мышей, инфицированных Trypanosoma cruzi , прополисом способствует изменению иммунного ответа. Ж. Этнофармакол. 103 , 187–193 (2006).

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google Scholar

  • 21.

    Фишер, Г. и др. Иммуномодуляция, продуцируемая экстрактом зеленого прополиса, на гуморальные и клеточные реакции мышей, иммунизированных SuHV-1. Вакцина 25 , 1250–1256 (2007 г.).

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google Scholar

  • 22.

    Cheung, K.W. et al. Бразильский зеленый прополис и входящий в его состав артепиллин С ингибируют размножение и активацию аллогенных активированных Т-клеток CD4 человека. Ж. Этногр. Фармакол. 138 , 463–471 (2011).

    КАС Google Scholar

  • 23.

    Paviani, L.C. и др. Сверхкритическая экстракция СО 2 сырого прополиса и его сухого спиртового экстракта. Браз. Дж. Хим. англ. 29 , 243–251 (2012).

    КАС Статья Google Scholar

  • 24.

    Cao, J. et al. Ультразвуковая мицеллярная экстракция на основе ионной жидкости в сочетании с микрокристаллической целлюлозой в качестве сорбента в дисперсионной микроэкстракции для определения фенольных соединений в прополисе. Анал. Чим. Acta 963 , 24–32 (2017).

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google Scholar

  • 25.

    Almutairi, S. и др. Выделение дитерпенов и флавоноидов из нового вида прополиса из Саудовской Аравии. Фитохим. лат. 10 , 160–163 (2014).

    КАС Статья Google Scholar

  • 26.

    Yoshioka, T., Inokuchi, T., Fujioka, S. & Kimura, Y. Фенольные соединения и флавоноиды в качестве регуляторов роста растений из плодов и листьев Vitex rotundifolia . З. Нац. C 59 , 509–514 (2004).

    КАС Google Scholar

  • 27.

    Liao, C. R. et al. Исследования цитотоксических компонентов листьев Elaeagnus oldhamii Maxim. в клетках немелкоклеточного рака легкого A549. Молекулы 19 , 9515–9534 (2014).

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google Scholar

  • 28.

    El-Mawla, A.M.A. & Osman, H.E.H. Анализ ВЭЖХ и роль прополиса из Саудовской Аравии в улучшении патологических изменений почек, обработанных глутаматом натрия. J. Дополнение. Препарат Дисков. 1 , 119–127 (2011).

    Google Scholar

  • 29.

    Chang, SW и др. Фитохимические составляющие Bistorta manshuriensis . Нац. Произв. науч. 15 , 234–240 (2009).

    КАС Google Scholar

  • 30.

    Тасдемир, Д. и др. Антитрипаносомная и антилейшманиальная активность флавоноидов и их аналогов: исследования in vitro, in vivo, взаимосвязь структура-активность и количественные исследования взаимосвязи структура-активность. Антимикроб. Агенты Чемотер. 50 , 1352–1364 (2006).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google Scholar

  • 31.

    Чжоу, К., Ху, Х. и Ли, З. Новое понимание молекулярных механизмов митоза и цитокинеза в трипаносомах. Междунар. Рев. ячейка Мол. биол. 308 , 127–166 (2014).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google Scholar

  • 32.

    ВОЗ (отчет). Африканский трипаносомоз человека (2020 г.). https://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/trypanosomasis-human-african-(sleeping-sickness) (по состоянию на 3 октября 2020 г.).

  • 33.

    Халил М.Л. Биологическая активность пчелиного прополиса в норме и при патологии. Азиатский пакет. J. Рак Prev. 7 , 22–31 (2006).

    ПабМед ПабМед Центральный Google Scholar

  • 34.

    Алотаиби А. и др. Европейский прополис высокоактивен против трипаносоматидов, включая Crithidia fasciculata . науч. Респ. 9 , 11364 (2019).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ пабмед ПабМед Центральный Статья КАС Google Scholar

  • 35.

    Омар, Р. и др. Химическая характеристика образцов нигерийского прополиса и их активность против Trypanosoma brucei . науч.Респ. 7 , 923 (2017).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ пабмед ПабМед Центральный Статья КАС Google Scholar

  • 36.

    Елнакади Ю.А. и др. Характеристики, химический состав и биологическая активность прополиса из Аль-Бахаха, Саудовская Аравия. науч. 7 , 41453 (2017).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google Scholar

  • 37.

    Исида, Ю. и др. Противораковая активность прополиса медоносной пчелы: функциональное понимание роли фенетилового эфира кофейной кислоты и его комплекса с γ-циклодекстрином. Интегр. Рак Тер. 17 , 867–873 (2018).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google Scholar

  • 38.

    Саркер, С. Д. и Нахар, Л. Последующее наблюдение за выделением натуральных продуктов. В Natural Products Isolation 3rd edn (ред. Sarker, S.Д. и Нахар, Л.) 473–514 (Humana Press/Springer, 2012).

    Глава Google Scholar

  • 39.

    Сфорцин Дж. М., Орси Р. О. и Банкова В. Влияние прополиса, некоторых выделенных соединений и исходного растения на выработку антител. Ж. Этнофармакол. 98 , 301–305 (2005).

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google Scholar

  • 40.

    Буэно-Сильва, Б. и др. Противовоспалительная и антимикробная оценка неовеститола и веститола, выделенных из бразильского красного прополиса. Дж. Агрик. Пищевая хим. 61 , 4546–4550 (2013).

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google Scholar

  • 41.

    Хефтманн, Э. Хроматография: основы и применение хроматографии и родственных методов дифференциальной миграции — часть B: приложения (Elsevier, 2004).

    Google Scholar

  • 42.

    Salituro, G.M. & Dufresne, C. Выделение с помощью колоночной хроматографии низкого давления. В Natural Products Isolation (изд. Cannell, RJP) (Springer, 1998).

    Google Scholar

  • 43.

    Watson, JT & Sparkman, O. D. Введение в масс-спектрометрию: аппаратура, приложения и стратегии интерпретации данных 4-е изд.(Уайли, 2007).

    Книга Google Scholar

  • 44.

    Янг, К. С. и Долан, Дж. В. Успех с обнаружением рассеяния света испарением. LCGC N. Am. 21 , 120–128 (2003).

    КАС Google Scholar

  • 45.

    Стоянова Р. и Браун Т. Р. Количественное определение спектров ЯМР методом главных компонентов. ЯМР Биомед. 14 , 271–277 (2001).

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google Scholar

  • 46.

    Claridge, TD Методы ЯМР высокого разрешения в органической химии 3-е изд. (Эльзевир, 2016).

    Google Scholar

  • 47.

    Ян, Х. и др. Антиоксидантные соединения прополиса, собранные в провинции Аньхой, Китай. Молекулы 16 , 3444–3455 (2011).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google Scholar

  • 48.

    Raz, B., Iten, M., Grether-Buhler, Y., Kaminsky, R. & Brun, R. Анализ Alamar Blue1 для определения лекарственной чувствительности африканских трипаносом (Tb rhodesiense и Tb gambiense) в пробирке. Acta Trop. 68 , 139–147 (1997).

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google Scholar

  • Пероральное применение водорастворимого производного прополиса (ВДП) и родственных ему полифенольных соединений и их влияние на иммунологическую и противоопухолевую активность | Интернет-исследования в области здравоохранения и окружающей среды (HERO)

    Заголовок

    Пероральное применение водорастворимого производного прополиса (ВДП) и родственных ему полифенольных соединений и их влияние на иммунологическую и противоопухолевую активность

    Авторы)

    Орсолич, Н; Свер, Л; Терзич, С; Басич, я

    Журнал

    Сообщения о ветеринарных исследованиях
    ISSN: 0165-7380
    EISSN: 1573-7446

    Абстрактный

    Полифенольные соединения широко распространены в растительном мире и проявляют разнообразную биологическую активность, включая химиопрофилактику и ингибирование роста опухолей. Прополис содержит конгломерат полифенольных соединений. Мы исследовали влияние прополиса и полифенольных соединений, компонентов прополиса, на рост и метастатический потенциал трансплантируемой карциномы молочной железы (MCa) мыши. Метастазы в легкие вызывали внутривенно (в/в) инъекцией 2 х 10 (5) опухолевых клеток. Водорастворимое производное прополиса (WSDP) и полифенольные соединения (кофеиновая кислота (CA) и фенетиловый эфир кофейной кислоты (CAPE)) вводили мышам перорально до или после инокуляции опухолевых клеток.WSDP, CA и CAPE уменьшали количество метастазов в легких. Это означает, что противоопухолевая активность соединений, используемых в этих исследованиях, в основном связана с иммуномодулирующими свойствами соединений, их цитотоксичностью по отношению к опухолевым клеткам и их способностью индуцировать апоптоз и/или некроз.

    Gourmeturca.com™ | Деликатесы на каждый день.

    Откуда будет отправлен мой заказ?

    Мы закупаем только самые уникальные вкусы со всей Турции. Все доставляется прямо к вашей двери из Турции, и вы можете быть уверены, что открыть коробку с нашей продукцией будет так же, как выйти на улицу в местном турецком городе.

    Сколько потребуется времени, чтобы получить мой заказ?

    Ваше время важно для нас, и мы знаем, что вам не терпится получить ваши любимые турецкие блюда. Наша доставка по всему миру занимает от 2 до 4 рабочих дней. Поскольку мы готовим утром и доставляем днем, мы можем гарантировать, что ожидание того стоит!

    Сколько стоит отправка?

    Мы серьезно относимся к доставке и хотим, чтобы ваши ценные товары были доставлены в целости и сохранности.Обычная экспресс-доставка стоит 9,90 долларов США, но доставка бесплатна для всех заказов на сумму более 150 долларов США, так что запасайтесь!

    Что делать, если моя посылка повреждена при транспортировке?

    Ваш заказ и наша продукция очень важны для нас. Мы успешно упаковали и доставили более 275 000 заказов. Мы очень заботимся о том, чтобы доставить нашу продукцию максимально безопасным способом, потому что все мы знаем, что турецкие ароматы — самые драгоценные сокровища в мире! Однако, если ваш заказ по какой-либо причине был поврежден при транспортировке, свяжитесь с нами по адресу [email protected] com и мы будем рады Вам помочь!

    Нужно ли мне платить какие-либо таможенные сборы с моим заказом?

    Мы обрабатываем все обычные таможенные документы, поэтому вам не нужно. Однако иногда таможня может проводить выборочные и независимые проверки и запрашивать дополнительные сборы после того, как товар покидает Турцию, ответственность за которую несет покупатель.

    Что произойдет, если есть задержка с моим заказом?

    Мы отправляем нашу продукцию экспресс-доставкой, поэтому задержек быть не должно.Однако, в случае каких-либо непредвиденных задержек, мы здесь, чтобы помочь! Мы будем работать напрямую с транспортной компанией от вашего имени и своевременно сообщать вам обо всех обновлениях.

    Какие меры безопасности вы принимаете на своем веб-сайте Gourmeturca.com™?

    Ваша конфиденциальность очень важна для нас. Принимаются все меры предосторожности для защиты вашей личной информации на нашем веб-сайте. Мы используем 256-битный SSL-сертификат и обещаем не передавать информацию о наших клиентах третьим лицам.

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *